專利名稱：一種陰道炎聯(lián)合檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種陰道炎的聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，特別用于輔助診斷女性細(xì)菌性陰道病。
背景技術(shù)：
細(xì)菌性陰道病(bacterial vaginosis，簡(jiǎn)稱BV)是指一類在細(xì)菌學(xué)上表現(xiàn)為生殖道正常菌群(產(chǎn)過(guò)氧化氫的乳酸桿菌)數(shù)量減少，而由多種致病性厭氧菌感染(主要是陰道加德納菌)引起的無(wú)明顯黏膜炎癥的一種疾病。細(xì)菌性陰道病與滴蟲感染密切相關(guān)， 80%的滴蟲患者同時(shí)伴有BV感染；是導(dǎo)致霉菌性陰道炎的主要原因，易造成輸卵管炎、盆腔炎、泌尿系統(tǒng)感染、術(shù)后感染，與不孕癥、宮外孕、婦科腫瘤有關(guān)。妊娠期因內(nèi)分泌變化易發(fā)生BV，平均感染率為16-37%，妊娠期患BV易發(fā)生早產(chǎn)或分娩低體重兒，比正常的婦女高 3-4倍。陰道致病菌可上行至羊膜，絨毛膜羊膜或羊水，導(dǎo)致這些部位的感染和炎癥。目前臨床診斷BV公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)是Amsel標(biāo)準(zhǔn)，Amsel法包括①分泌物增加(均勻白色的粘性分泌物)；②PH > 4. 5 ；③陰道液與等量10% KOH混合釋放魚腥味；④線索細(xì)胞超過(guò)20% (上皮細(xì)胞變成線索細(xì)胞的比例)，以上四種體征中的三種陽(yáng)性可診斷為BV。此方法簡(jiǎn)單易行，但是此方法易受人為因素的影響(如檢驗(yàn)者的經(jīng)驗(yàn)，顯微設(shè)備的質(zhì)量、樣本的采集以及操作者對(duì)氣味的識(shí)別能力等)，及與BV感染無(wú)關(guān)的因素(如近期性交、陰道灌洗、 處于月經(jīng)期或絕經(jīng)后)諸多因素的影響，主觀性強(qiáng)。而且細(xì)菌性陰道病是一個(gè)逐步發(fā)生的過(guò)程，對(duì)于Amsel法一分為二的診斷標(biāo)準(zhǔn)局限了它對(duì)BV的檢測(cè)。細(xì)菌性陰道病主要是患者陰道內(nèi)乳酸桿菌減少而其它致病細(xì)菌大量繁殖，致使陰道內(nèi)過(guò)氧化氫濃度減少，PH值升高；另一方面致病菌(加德納菌、各種厭氧菌及人體支原體等)產(chǎn)生大量唾液酸苷酶(細(xì)菌性陰道病致病菌的標(biāo)志性產(chǎn)物)，較正常人高出100-1000 倍。當(dāng)患者陰道內(nèi)發(fā)生炎癥反應(yīng)時(shí)，多核白細(xì)胞在炎性病灶聚集而大量釋放白細(xì)胞酯酶。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種操作簡(jiǎn)便，快速，靈敏，不需要高端儀器設(shè)備，價(jià)格低廉的細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，通過(guò)檢測(cè)陰道分泌物中過(guò)氧化氫、唾液酸苷酶、白細(xì)胞酯酶及PH值等指標(biāo)聯(lián)合初篩細(xì)菌性陰道病，作為細(xì)菌性陰道病感染的輔助診斷。本發(fā)明的技術(shù)方案為提供一種陰道炎聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，包括設(shè)置有四個(gè)干化學(xué)反應(yīng)盲孔的孔式卡狀反應(yīng)裝置和稀釋液、顯色液，所述四個(gè)盲孔設(shè)置有過(guò)氧化氫濃度測(cè)定檢測(cè)試劑墊、唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑墊、白細(xì)胞酯酶活性測(cè)定檢測(cè)試劑墊、PH檢測(cè)裝置。所述稀釋液為生理鹽水和MES緩沖液組成的pH = 6. 5的溶液，所述稀釋液中的氯化鈉質(zhì)量百分濃度為0. 9 %，所述MES緩沖液在稀釋液中的濃度為2mmol/L ；所述顯色液為質(zhì)量百分濃度0. 1-0. 5%的固紫B溶液。優(yōu)選的，所述的過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑墊為將墊載體在過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑中浸泡之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊，所述的過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑由以下物質(zhì)組成
色原質(zhì)量濃度為8. 0-25. Og/L,所述色原為N-乙基_N_ (2_羥基_3_磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽或3，5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉；過(guò)氧化氫顯色劑質(zhì)量濃度為0. 02-0. 68g/L ；所述過(guò)氧化氫顯色劑為1、3_甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物；過(guò)氧化物酶200-1000KU/L。優(yōu)選的，所述的白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑墊為將墊載體在由白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑中經(jīng)浸泡之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊，所述的白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑由以下物質(zhì)組成酶底物A 質(zhì)量濃度為0. 5-3. 5g/L，所述的酶底物A為5_溴_4氯_3吲哚乙酸鹽；糖類質(zhì)量濃度為35_55g/L，所述糖類為蔗糖或海藻糖。優(yōu)選的，所述的唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊為將墊載體在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑中經(jīng)浸泡之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊，所述唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑由以下物質(zhì)組成酶底物B 質(zhì)量濃度為0. 5_5g/L，所述的酶底物B為5_溴_4氯_3_吲哚-N乙酰-α -唾液酸苷、硝基苯-N-乙酰-α -唾液酸苷、萘酚-N-乙酰-α -唾液酸苷或5_溴_4 氯-3-吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鹽；糖類質(zhì)量濃度為35_65g/L，所述糖類為蔗糖或海藻糖。優(yōu)選的，所述墊載體為濾紙玻璃纖維膜或?qū)游黾?。?yōu)選的，所述pH檢測(cè)裝置為pH試紙。本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明的細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測(cè)試劑盒通過(guò)四個(gè)干式化學(xué)反應(yīng)盲孔的反應(yīng)結(jié)果聯(lián)合判斷陰道內(nèi)的情況。通過(guò)以上四個(gè)指標(biāo)判定陰道微生態(tài)環(huán)境，陰道正常菌群和致病菌群狀況的細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測(cè)試劑盒。其對(duì)細(xì)菌性陰道病的診斷具有較高的敏感性和特異性，與傳統(tǒng)的Amsel診斷法和臨床鏡檢相比較具有較高的符合率。 且本發(fā)明對(duì)陰道分泌物的檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)便、可重復(fù)、客觀、快速和價(jià)廉，以及不需要特殊儀器等特點(diǎn)，可為臨床檢驗(yàn)帶來(lái)許多便利。它可對(duì)可疑似的陰道感染進(jìn)行確診、在無(wú)癥狀個(gè)體中發(fā)現(xiàn)感染、調(diào)查對(duì)常規(guī)治療產(chǎn)生耐藥的病例、幫助臨床選擇治療方案、判斷愈合后以及開展陰道感染的患病率調(diào)查等，是一類極有前途的婦科診斷技術(shù)，應(yīng)在婦科診斷領(lǐng)域大力推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明聯(lián)合檢測(cè)試劑盒的制備在孔式卡狀反應(yīng)裝置四個(gè)孔內(nèi)分別裝有孔徑4. 5mm的whatman玻璃微纖維濾紙 23SL做載體的過(guò)氧化氫濃度試劑墊，白細(xì)胞酯酶測(cè)定試劑墊，唾液酸苷酶測(cè)定試劑墊，脯氨酸氨基肽酶測(cè)定試劑墊。過(guò)氧化氫試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液(過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑)中浸泡之后進(jìn)行干燥處理，所述浸泡液為8. Og/L的N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS)。白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液(白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑) 中浸泡，所述浸泡液為5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽0. 5g/L ；蔗糖35g/L。唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液中浸泡之后進(jìn)行干燥處理，所述浸泡液為之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊。所述唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑由以下物質(zhì)組成硝基苯-N-乙酰- α -唾液酸苷0. 5g/L ；蔗糖35g/L ；0. 固紫B溶液，之后進(jìn)行干燥處理。市場(chǎng)購(gòu)得pH檢測(cè)試紙。稀釋液配制由生理鹽水和MES緩沖液組成的pH = 6. 5的溶液，所述生理鹽水在稀釋液中的質(zhì)量百分濃度為0.9%，所述MES緩沖液在稀釋液中的濃度為2mmol/L。顯色液為質(zhì)量百分濃度0. 的固紫B溶液。實(shí)施例2本發(fā)明聯(lián)合檢測(cè)試劑盒的另一實(shí)施例過(guò)氧化氫試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液中浸泡之后進(jìn)行干燥處理，所述浸泡液為15g/L的3，5- 二氯-2-羥基苯磺酸鈉(DHBQ，之后進(jìn)行干燥處理。白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液中浸泡，所述浸泡液為 5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽2g/L ；蔗糖40g/L。唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊的制作將墊載體在檢測(cè)試劑下述浸泡液(唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑)中浸泡之后進(jìn)行干燥處理，所述浸泡液為之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊。所述唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑由以下物質(zhì)組成硝基苯-N-乙酰-α -唾液酸苷0. 5-5g/L ；蔗糖40g/L;0. 1-1.0%固紫B溶液，之后進(jìn)行干燥處理。市場(chǎng)購(gòu)得pH檢測(cè)試紙。稀釋液配制由生理鹽水和MES緩沖液組成的pH = 6. 5的溶液，所述生理鹽水在稀釋液中的質(zhì)量百分濃度為0.9%，所述MES緩沖液在稀釋液中的濃度為2mmol/L，顯色液為質(zhì)量百分濃度0. 2%的固紫B溶液。實(shí)施例3本發(fā)明聯(lián)合檢測(cè)試劑盒的又一實(shí)施例過(guò)氧化氫試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液中浸泡之后進(jìn)行干燥處理，所述浸泡液為25g/L的3，5- 二氯-2-羥基苯磺酸鈉(DHBQ，之后進(jìn)行干燥處理。白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液中浸泡，所述浸泡液為 5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽2g/L ；蔗糖60g/L。唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊的制作將墊載體在檢測(cè)試劑下述浸泡液中浸泡之后進(jìn)行干燥處理，所述浸泡液為之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊。所述唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑由以下物質(zhì)組成硝基苯-N-乙酰- α -唾液酸苷5g/L ；蔗糖60g/L ；0. 5%固紫B溶液，之后進(jìn)行干燥處理。 市場(chǎng)購(gòu)得pH檢測(cè)試紙。稀釋液配制由生理鹽水和MES緩沖液組成的pH = 6. 5的溶液，所述生理鹽水在稀釋液中的質(zhì)量百分濃度為0.9%，所述MES緩沖液在稀釋液中的濃度為2mmol/L，顯色液為質(zhì)量百分濃度0. 2%的固紫B溶液。實(shí)施例4本發(fā)明試劑盒的使用A.過(guò)氧化氫濃度檢測(cè)過(guò)氧化氫墊上1，5- 二甲基-2-苯基-4-氨基_3_吡唑酮在過(guò)氧化氫的作用下與顯色劑DHBS發(fā)生反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。當(dāng)標(biāo)本中含有一定量的過(guò)氧化氫時(shí)，反應(yīng)結(jié)果顯紅色或紫紅色，顏色深度與過(guò)氧化氫濃度成正比，當(dāng)標(biāo)本中過(guò)氧化氫濃度低于一定量時(shí)，反應(yīng)墊不變色。B.唾液酸苷酶活性檢測(cè)唾液酸苷酶墊上底物一5-溴-4-氯-3-吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鈉鹽經(jīng)陰道內(nèi)唾液酸苷酶水解后，其產(chǎn)物之一與顯色指示劑起反應(yīng)后顯示紅色或紅紫色，呈色深度與唾液酸苷酶活性成正比。C.白細(xì)胞酯酶活性檢測(cè)白細(xì)胞酯酶墊上底物一5-溴-4-氯-3-吲哚基乙酸酯經(jīng)陰道內(nèi)白細(xì)胞酯酶水解，其產(chǎn)物之一在空氣中氧作用下發(fā)生自我聚合后呈藍(lán)綠色或藍(lán)色， 呈色深度與白細(xì)胞酯酶活性成正比。D. pH值檢測(cè)pH值墊上指示劑底物在不同酸堿值，顯示對(duì)應(yīng)顏色變化。細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測(cè)試劑盒操作如下1.用無(wú)菌棉拭子在陰道后穹窿或陰道深處旋轉(zhuǎn)2-10周，停留10-20秒，盡可能多的采集患者陰道分泌物，以清晰見(jiàn)到棉拭子上有分泌物附著為準(zhǔn)。取樣后的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)測(cè)定，否則應(yīng)保存在2-8°C，M小時(shí)內(nèi)完成測(cè)定。2.取一無(wú)菌加樣試管，滴加稀釋液12-15滴，將一已經(jīng)取樣的試子置于該試管中， 反復(fù)擠壓試子，使陰道分泌物充分釋出，得到樣本液。3.用吸管吸取樣本液，在檢測(cè)卡的四個(gè)孔中各加1滴樣本液(約30yL)，然后在設(shè)有唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊的孔中加入顯色液一滴。4.將檢測(cè)卡置37°C溫育15分鐘，判讀結(jié)果。根據(jù)試劑盒提供的比色卡進(jìn)行判讀結(jié)果細(xì)菌性陰道病主要是患者陰道內(nèi)乳酸桿菌減少而其它致病細(xì)菌大量繁殖，致使陰道內(nèi)過(guò)氧化氫濃度減少，PH值升高；另一方面致病菌(加德納菌、各種厭氧菌及人體支原體等)產(chǎn)生大量唾液酸苷酶(細(xì)菌性陰道病致病菌的標(biāo)志性產(chǎn)物)，較正常人高出100-1000 倍。當(dāng)患者陰道內(nèi)發(fā)生炎癥反應(yīng)時(shí)，多核白細(xì)胞在炎性病灶聚集而大量釋放白細(xì)胞酯酶。過(guò)氧化氫指標(biāo)正常顯紅色或紫色，不正常無(wú)色或微紅色；唾液酸苷酶指標(biāo)正常不顯色，顯紅色或紫色為陽(yáng)性；白細(xì)胞酯酶指標(biāo)正常不顯色，顯藍(lán)色或綠色為陽(yáng)性；pH值檢測(cè)pH值墊上指示劑底物在不同酸堿值，顯示對(duì)應(yīng)顏色變化。以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說(shuō)明書及內(nèi)所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種陰道炎聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括設(shè)置有四個(gè)干化學(xué)反應(yīng)盲孔的孔式卡狀反應(yīng)裝置和稀釋液、顯色液，所述四個(gè)盲孔設(shè)置有過(guò)氧化氫濃度測(cè)定檢測(cè)試劑墊、唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑墊、白細(xì)胞酯酶活性測(cè)定檢測(cè)試劑墊、PH檢測(cè)裝置，所述稀釋液為生理鹽水和MES緩沖液組成的pH = 6. 5的溶液，所述稀釋液中的氯化鈉質(zhì)量百分濃度為0. 9 %，所述MES緩沖液在稀釋液中的濃度為2mmol/L ；所述顯色液為質(zhì)量百分濃度0. 1-0. 5%的固紫B溶液。
2.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑墊為將墊載體在過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑中浸泡之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊，所述的過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑由以下物質(zhì)組成色原質(zhì)量濃度為8. 0-25. Og/L,所述色原為N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽或3，5- 二氯-2-羥基苯磺酸鈉；過(guò)氧化氫顯色劑質(zhì)量濃度為0. 02-0. 68g/L ；所述過(guò)氧化氫顯色劑為1、3_甲基_2_苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物；過(guò)氧化物酶200-1000KU/L。
3.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑墊為將墊載體在由白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑中經(jīng)浸泡之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊，所述的白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑由以下物質(zhì)組成酶底物A 質(zhì)量濃度為0. 5-3. 5g/L，所述的酶底物A為5-溴-4氯-3吲哚乙酸鹽；糖類質(zhì)量濃度為35-55g/L，所述糖類為蔗糖或海藻糖。
4.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的唾液酸苷酶檢測(cè)試劑墊為將墊載體在唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑中經(jīng)浸泡之后進(jìn)行干燥處理的試劑墊，所述唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑由以下物質(zhì)組成酶底物B 質(zhì)量濃度為0. 5-5g/L，所述的酶底物B為5-溴-4氯-3-吲哚-N乙酰-α -唾液酸苷、硝基苯-N-乙酰-α -唾液酸苷、萘酚-N-乙酰-α -唾液酸苷或5_溴_4氯_3_吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鹽；糖類質(zhì)量濃度為35-65g/L，所述糖類為蔗糖或海藻糖。
5.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述墊載體為濾紙玻璃纖維膜或?qū)游黾垺?br> 6.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述PH檢測(cè)裝置為pH試紙。
全文摘要
本發(fā)明目的在于提供一種操作簡(jiǎn)便，快速，靈敏，不需要高端儀器設(shè)備，價(jià)格低廉的陰道炎聯(lián)合檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明的技術(shù)方案為提供一種陰道炎聯(lián)合檢測(cè)試劑盒，包括設(shè)置有四個(gè)干化學(xué)反應(yīng)盲孔的孔式卡狀反應(yīng)裝置和稀釋液、顯色液，所述四個(gè)盲孔設(shè)置有過(guò)氧化氫濃度測(cè)定檢測(cè)試劑墊、唾液酸苷酶活性檢測(cè)試劑墊、白細(xì)胞酯酶活性測(cè)定檢測(cè)試劑墊、陰道液pH檢測(cè)試劑墊。可同時(shí)檢測(cè)陰道分泌物的pH值、過(guò)氧化氫、唾液酸苷酶、白細(xì)胞酯酶四個(gè)指標(biāo)。通過(guò)以上四個(gè)指標(biāo)判定陰道微生態(tài)環(huán)境，陰道正常菌群和致病菌群狀況的細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測(cè)試劑盒。
文檔編號(hào)C12Q1/34GK102321730SQ201110172859
公開日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月23日
發(fā)明者周曉強(qiáng), 姚銘鋒, 崔天星, 林德增, 羅娜, 胡守旺, 謝佐福, 陽(yáng)衛(wèi)超, 陳寧 申請(qǐng)人:泰普生物科學(xué)(中國(guó))有限公司