專利名稱：間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)療器具，特別是涉及一種從人體或動物胎盤、羊膜、臍帶等組織中消化、分離、收集間充質(zhì)干細(xì)胞的裝置及其使用方法。
背景技術(shù)：
隨著干細(xì)胞與組織工程技術(shù)研究、應(yīng)用的深入發(fā)展，干細(xì)胞的分離制備作為該領(lǐng)域關(guān)鍵技術(shù)之一而日益受到重視。迄今用于醫(yī)療領(lǐng)域的白細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞的分離裝置發(fā)展較快，但間充質(zhì)干細(xì)胞的分離設(shè)備很少，目前應(yīng)用最多的間充質(zhì)干細(xì)胞分離裝置是細(xì)胞篩網(wǎng)，一般選用的是100目 300目的不銹鋼篩網(wǎng)，通過搖晃、攪拌和震蕩來達(dá)到細(xì)胞與消化后的組織塊分離的目的，比如人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分離，就是先用膠原酶消化新鮮人胎盤組織，再用這種不銹鋼篩網(wǎng)篩選消化下來的單個細(xì)胞或細(xì)胞簇。這種間充質(zhì)干細(xì)胞分離方法的缺陷是①費(fèi)時費(fèi)力；②分離效率低；③干細(xì)胞成活率低；④干細(xì)胞收獲量少；⑤由于長時間暴露操作，干細(xì)胞污染機(jī)會大大增加。因而，現(xiàn)有間充質(zhì)干細(xì)胞分離制備技術(shù)需要改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服以上間充質(zhì)干細(xì)胞分離制備方法的缺陷。實(shí)現(xiàn)上述目的的本發(fā)明的技術(shù)方案為干細(xì)胞分離制備器由打氣球1、除菌過濾器(內(nèi)置0.22μπι濾膜)2、可高壓滅菌的橡膠塞3、空氣壓縮室4、圓錐形不銹鋼篩網(wǎng)(100 目 300目)5、除菌過濾器(內(nèi)置0.22 μ m濾膜)6、干細(xì)胞收集瓶7和穩(wěn)壓口 8組成。打氣球通過自身的橡膠導(dǎo)管與除菌過濾器連接，除菌過濾器的另一端穿過并密封固定在開孔的可高壓滅菌的橡膠塞上。橡膠塞密封安裝在空氣壓縮室內(nèi)，空氣壓縮室的另一端通過螺絲與干細(xì)胞收集瓶連接。圓錐形不銹鋼篩網(wǎng)置于干細(xì)胞收集瓶內(nèi)，環(huán)篩網(wǎng)網(wǎng)口并與之無縫連接的為一圈不銹鋼片，其上下各有一圈密封墊。當(dāng)空氣壓縮室與干細(xì)胞收集瓶擰緊后，不銹鋼篩網(wǎng)可固定在干細(xì)胞收集瓶內(nèi)。干細(xì)胞收集瓶由硼硅酸鹽玻璃制成，可進(jìn)行高壓蒸氣滅菌。不銹鋼篩網(wǎng)和干細(xì)胞收集瓶可方便地進(jìn)行拆卸清洗。干細(xì)胞收集瓶的側(cè)面有一個穩(wěn)壓口，通過可高壓的硅膠管與另一除菌過濾器連接，用于干細(xì)胞分離制備器工作時平衡容器內(nèi)外氣壓。本發(fā)明的技術(shù)方案具有的優(yōu)點(diǎn)包括①各個部件都能方便地進(jìn)行拆卸、洗滌和滅菌；②獨(dú)特的圓錐形的細(xì)胞篩網(wǎng)設(shè)計(jì)，既減小了其上流體的表面張力，又增大了承載液體的表面積、體積和液體下層壓強(qiáng)，更有利于液體流下，顯著提高了間充質(zhì)干細(xì)胞的過濾效率； ③間充質(zhì)干細(xì)胞分離制備操作的時間大大縮短，減少了污染發(fā)生的機(jī)會，提高了間充質(zhì)干細(xì)胞成活率；④處理量大，且分離制備的間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量多、質(zhì)量好；⑤操作方便，價格低廉，便于推廣應(yīng)用。


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附圖是本發(fā)明的剖視圖。圖中1.打氣球；2.除菌過濾器(內(nèi)置0.22 μ m濾膜)；3.可高壓滅菌的橡膠塞； 4.空氣壓縮室；5.圓錐形不銹鋼篩網(wǎng)(100目 300目)；6.除菌過濾器(內(nèi)置0.22 μ m濾膜)；7.干細(xì)胞收集瓶；8.穩(wěn)壓口。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 本發(fā)明的安裝與使用。間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器由打氣球1、除菌過濾器(內(nèi)置0.22μπι濾膜)2、可高壓滅菌的橡膠塞3、空氣壓縮室4、圓錐形不銹鋼篩網(wǎng)(100目 300目)5、除菌過濾器(內(nèi)置0. 22 μ m濾膜)6、干細(xì)胞收集瓶7和穩(wěn)壓口 8組成。使用前，可將整個裝置分為3部分 ①手捏打氣球1 ；②連接好的除菌過濾器2和橡膠塞3 ；③連接好的除①和②以外的部分， 包括空氣壓縮室4、圓錐形不銹鋼篩網(wǎng)(100目 300目)5、除菌過濾器(內(nèi)置0.22μπι濾膜)6、干細(xì)胞收集瓶7和穩(wěn)壓口 8。將②和③部分進(jìn)行高壓蒸氣滅菌(12rC，30min)。在無菌條件下，通過無菌操作，將經(jīng)過酶解消化后的用于提取間充質(zhì)干細(xì)胞的原代細(xì)胞與組織的混合物加入圓錐形不銹鋼篩網(wǎng)5內(nèi)(注意加入的細(xì)胞與組織的混合物不能溢出篩網(wǎng))， 然后將②和③兩部分進(jìn)行連接，再將打氣球1和除菌過濾器(內(nèi)置0. 22 μ m濾膜)2進(jìn)行連接。使用打氣球1打氣，細(xì)胞與組織的混合物便在自身質(zhì)量和外界壓力作用下進(jìn)行過濾分離。待過濾分離完后，擰開空氣壓縮室4和干細(xì)胞收集瓶7之間的螺絲，取出圓錐形不銹鋼篩網(wǎng)5，將干細(xì)胞收集瓶7內(nèi)的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)或利用其他手段進(jìn)一步純化。上述技術(shù)方案僅體現(xiàn)了本發(fā)明技術(shù)方案的優(yōu)選技術(shù)方案，本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員對其中某些部分所可能作出的一些變動均體現(xiàn)了本發(fā)明的原理，屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)施例2:人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞分離制備。本發(fā)明的間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121°C，30min)后備用。無菌條件下取足月剖宮產(chǎn)胎盤，鈍性剝離羊膜，使分離的羊膜盡可能的薄。取胎兒面胎盤組織， PBS反復(fù)沖洗，用眼科剪剪成直徑約2mm的碎片，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)0. 膠原酶II，于37°C消化50min，然后在超凈工作臺內(nèi)，通過無菌操作加入間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器的錐形不銹鋼篩網(wǎng)內(nèi)，安裝好間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器，并用打氣球打氣，于干細(xì)胞收集瓶內(nèi)收集過濾液，然后通過培養(yǎng)、換液、傳代，獲得純化的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明公開了一種間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器及其使用，其特征是由打氣球、除菌過濾器、橡膠塞、空氣壓縮室、不銹鋼篩網(wǎng)、干細(xì)胞收集瓶和穩(wěn)壓口組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器，其特征在于除菌過濾器內(nèi)置的濾膜為 0. 22 μ mo
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器，其特征在于圓錐形不銹鋼篩網(wǎng)的規(guī)格為100目 300目。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器，其特征在于不銹鋼篩網(wǎng)的形狀為圓錐形。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器，其特征在于篩網(wǎng)的制作材料為不銹鋼。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器，其特征在于干細(xì)胞收集瓶的制作材料為硼硅酸鹽玻璃。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器，其特征在于除打氣球外，所有部件均可進(jìn)行常規(guī)的高壓蒸氣滅菌。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器，其特征在于可從人體或動物胎盤、羊膜、臍帶等組織中消化、分離、收集間充質(zhì)干細(xì)胞用于臨床治療或?qū)嶒?yàn)室研究。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)療器具，是一種間充質(zhì)干細(xì)胞過濾分離器及其應(yīng)用，由打氣球、除菌過濾器、橡膠塞、空氣壓縮室、圓錐形不銹鋼篩網(wǎng)、干細(xì)胞收集瓶和穩(wěn)壓口組成。其主要特征和優(yōu)點(diǎn)是①各個部件都能方便地進(jìn)行拆卸、洗滌和滅菌；②獨(dú)特的圓錐形的細(xì)胞篩網(wǎng)設(shè)計(jì)，減小了其上流體的表面張力，增大了承載液體的表面積、體積和下層壓強(qiáng)，有利于液體流下，顯著提高了間充質(zhì)干細(xì)胞的過濾效率；③間充質(zhì)干細(xì)胞分離制備操作時間縮短，減少了污染發(fā)生的機(jī)會，提高了間充質(zhì)干細(xì)胞成活率；④處理量大，且分離制備的間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量多、質(zhì)量好；⑤操作方便，價格低廉?？捎糜趶娜梭w或動物胎盤、羊膜、臍帶等組織中分離制備間充質(zhì)干細(xì)胞供臨床治療或?qū)嶒?yàn)室研究。
文檔編號C12M1/00GK102212461SQ20111011497
公開日2011年10月12日 申請日期2011年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月5日
發(fā)明者孫晉偉, 張艷梅, 王佃亮 申請人:中國人民解放軍第二炮兵總醫(yī)院