專利名稱：一種米蛋白多肽及其制備方法
一種米蛋白多肽及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于大米蛋白多肽制備領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及一種米蛋白多肽，以及利用復(fù)合酶法制備所述米蛋白多肽的方法。
背景技術(shù)：
大米蛋白在大米中的含量約7%，它主要由清蛋白、球蛋白、醇溶性蛋白和谷蛋白四種蛋白組成。大米蛋白是優(yōu)質(zhì)植物蛋白，具有很高的營養(yǎng)價(jià)值。它的氨基酸組成配比合理，與FA0/WH0推薦的蛋白質(zhì)氨基酸最佳配比模式相近。另外，大米蛋白的生物價(jià)(BV)和蛋白質(zhì)效用比(PER)在植物蛋白中幾乎是最好的。此外，大米蛋白富含各類氨基酸，尤其是賴氨酸含量居谷物類食物第一位。因此，大米蛋白是人們膳食中重要的蛋白來源，其營養(yǎng)價(jià)值遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于大豆、玉米、小麥等植物蛋白質(zhì)，可以與雞蛋、牛奶等優(yōu)質(zhì)動(dòng)物蛋白相媲美。而且， 大米蛋白是一種低抗原性蛋白，不會(huì)產(chǎn)生過敏反應(yīng)，是唯一一種免于過敏試驗(yàn)的谷物蛋白， 美國臨床研究表明，在700個(gè)遺傳性過敏癥的病例中，不到的高度過敏性病人對(duì)大米過敏，兒科也很少報(bào)道對(duì)大米蛋白過敏。因此，大米蛋白可以在諸如嬰兒食品、老年人食品中安全使用。但由于大米蛋白其主要組成是水不溶性蛋白，分子量較大，溶解性較差，進(jìn)而影響其乳化性、起泡性等性能，限制了其在食品工業(yè)中的應(yīng)用。將大米蛋白水解成多肽，溶解性大大提高，而且除了具有大米蛋白的營養(yǎng)作用外， 在消化吸收和保健功能方面有顯著的功能。從消化過程來看，小肽在人體內(nèi)消化吸收比蛋白質(zhì)、游離氨基酸均要好，特別是消化功能受損時(shí)，蛋白質(zhì)的吸收受到嚴(yán)重限制和影響，此時(shí)服用多肽來補(bǔ)充體內(nèi)蛋白質(zhì)，維持代謝平衡顯得非常重要。在保健功能方面，將分子量段在100-1000之間的小分子活性多肽統(tǒng)稱為“生物活性肽”，具有極強(qiáng)的活性和多樣性，如高F寡肽、降血壓肽、抗氧化肽等，當(dāng)人體補(bǔ)充這些活性肽時(shí)，可調(diào)整人體免疫功能、改善微循環(huán)，促進(jìn)體質(zhì)提高，降低血脂、調(diào)整血壓，促進(jìn)睡眠，增強(qiáng)記憶，延緩衰老等，在食品保健方面，具有深遠(yuǎn)的意義。但是天然存在的多肽很少，目前很多多肽的生產(chǎn)都是通過水解蛋白得到的。水解蛋白的方法主要是酸水解法、堿水解法和酶水解法，其中酸法和堿法都有收率低、成本高、 工藝復(fù)雜、水解程度不易控制，對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重等缺點(diǎn)，而且在高堿或高酸的情況下，蛋白與糖和油脂等雜質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生褐色物質(zhì)，甚至有害物質(zhì)，會(huì)影響最終多肽產(chǎn)品的品質(zhì)。 酶法水解蛋白反應(yīng)較溫和，無不良副反應(yīng)發(fā)生，但酶作用的單一性使得通過一種酶很難達(dá)到理想的水解效果。CN02153853. 0公開了一種從米糟中提取大米蛋白的方法，將米糟由復(fù)合酶(淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶和蛋白酶)進(jìn)行酶解用一步法得到大米蛋白，得到含量75%以上的大米蛋白。CN200410006119. 6公開了一種大米蛋白肽的制備方法及其用途，本發(fā)明利用味精生產(chǎn)中的廢料和α-淀粉酶和中性蛋白酶雙酶水解，生產(chǎn)出大米蛋白肽含量為80%的產(chǎn)品。
CN200610010960. 1提出了一種復(fù)合酶法生產(chǎn)米淀粉和米蛋白多肽粉的方法，其中使用了堿性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶四種蛋白酶，經(jīng)過水解反應(yīng)得到的上清液在處理后得到米蛋白多肽粉。該方法的米蛋白多肽粉產(chǎn)品得率85 %，該米蛋白多肽粉含有80%蛋白，可溶性肽占蛋白總量50%以上，生物活性肽占蛋白總量20%以上。CN200610086357. 1公開了一種大米淀粉和大米蛋白的制備方法，以碎米、陳米、秈米、粳米或糯米為原料，經(jīng)粉碎、超微粉碎、堿性蛋白酶酶解反應(yīng)、離心分離，上清液加熱滅酶，濃縮、噴霧干燥制得大米蛋白，其純度65 %。CN200810163917. 8公開了一種以米渣蛋白為原料生產(chǎn)米蛋白多肽粉的方法。本發(fā)明以淀粉糖廠的副產(chǎn)品米渣蛋白為原料，經(jīng)過洗滌、二次蛋白酶水解、脫鹽、干燥等一系列工序制得食品級(jí)的米蛋白多肽粉。所制得的米蛋白多肽粉中蛋白重量百分含量為> 77%, 其中分子量在1000左右的小肽占蛋白總量的67%。米蛋白多肽粉不但保持了米蛋白本身低過敏性，高生物價(jià)等優(yōu)勢，而且由于其中含有了大量的小肽，在消化吸收和保健功能方面有顯著的功能。上述生產(chǎn)米蛋白多肽粉的現(xiàn)有技術(shù)，或者采用了多種酶或蛋白酶，或者僅采用了一種酶，都取得了比較好的結(jié)果，獲得了實(shí)際應(yīng)用。但是，本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有技術(shù)中的酶解反應(yīng)及其效果還存在一些缺陷，還遠(yuǎn)未達(dá)到一種比較理想的結(jié)果，因此，還需要人們對(duì)這項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行研究與改進(jìn)。為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不利之處，本發(fā)明人經(jīng)過多次試驗(yàn)，研究完成了本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容[要解決的技術(shù)問題]本發(fā)明的目的是提供一種米蛋白多肽。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述米蛋白多肽的制備方法。[技術(shù)方案]本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明涉及一種米蛋白多肽，其特征在于以所述米蛋白多肽總重量計(jì)，它的蛋白重量百分含量為80%以上，其中分子量IOO-IOOODa的多肽為所述蛋白總量的90%以上，它的脂肪重量百分含量小于1%。本發(fā)明還涉及所述米蛋白多肽的制備方法。該方法的步驟如下(1)調(diào)漿按照水與米渣重量比1-4 6-10，將蛋白重量百分含量70-90%和脂肪重量百分含量2-3%的米渣與水?dāng)嚢杌旌暇鶆虻玫揭环N料液，然后進(jìn)行加熱；(2)脫脂用Ca(OH)2水溶液將步驟⑴得到的料液的pH值調(diào)節(jié)到9. 5-10. 0，攪拌均勻，再浸泡脫脂20-40分鐘；(3)離心步驟( 得到的料液以2500-3500轉(zhuǎn)/分速度進(jìn)行離心分離10_20分鐘，然后棄去液相，得到離心沉淀物；(4)調(diào)質(zhì)
往步驟(3)得到的離心沉淀物中加入水，使所述沉淀物濃度為16-17% ；(5)酶解反應(yīng)往步驟(4)得到的所述沉淀物溶液中加入以其蛋白質(zhì)量計(jì)0.4-0. 6%堿性蛋白酶，再在溫度50-55°C下進(jìn)行酶解反應(yīng)1-1.證，然后加入以其蛋白質(zhì)量計(jì)0. 4-0. 6%木瓜蛋白酶，在溫度50-55°C下進(jìn)行酶解反應(yīng)4-5h，從而得到酶解液；(6)滅菌滅酶步驟( 得到的酶解液煮沸20-40分鐘進(jìn)行滅菌滅酶，然后快速冷卻至室溫；(7)離心分離經(jīng)過步驟(6)滅菌滅酶處理后的酶解液以2500-3500轉(zhuǎn)/分速度進(jìn)行離心分離 10-20分鐘，取上清液；(8)濃縮并干燥步驟(7)得到的上清液進(jìn)行濃縮，得到的濃縮物然后進(jìn)行噴霧干燥，得到所述的米蛋白多肽。根據(jù)本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述米渣粒度是100-200篩目。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方式，在步驟(1)中，所述料液加熱溫度是 70-75 O。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方式，在步驟O)中，所述料液在溫度70-75°C下進(jìn)行浸泡脫脂。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方式，在步驟O)中，Ca(OH)2水溶液的濃度是飽和 Ca(OH)2 溶液。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方式，所述的堿性蛋白酶的酶活是20萬IU/g;木瓜蛋白酶的酶活是20萬IU/g。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方式，在步驟(8)中，步驟(7)得到的上清液在溫度 75°C與真空度0. 09MPa的條件下進(jìn)行濃縮，濃縮達(dá)到以濃縮物總重量計(jì)可溶性固形物含量為 17-20% ο根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方式，在步驟(8)中，噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為 165-180°C，出風(fēng)溫度為 75-85°C。下面將更詳細(xì)地描述本發(fā)明。本發(fā)明涉及一種米蛋白多肽，以所述米蛋白多肽總重量計(jì)，它的蛋白重量百分含量為80%以上，其中分子量IOO-IOOODa的多肽為所述蛋白總量的90%以上，它的脂肪重量百分含量小于1%。本發(fā)明還涉及所述米蛋白多肽的復(fù)合酶法制備方法。該方法的步驟如下(1)調(diào)漿按照水與米渣重量比1-4 6-10，將蛋白重量百分含量70-90%和脂肪重量百分含量2-3%的米渣與水?dāng)嚢杌旌暇鶆虻玫揭环N料液，然后進(jìn)行加熱。在本發(fā)明中，所述的米渣應(yīng)該理解是大米磨漿通過α -淀粉酶液化后過濾，除去液化液的殘?jiān)?，采用除雜法分離純化，使米渣中的蛋白重量百分含量>70%。凡是以大米為生產(chǎn)原料的味精廠、飴糖廠、葡萄糖廠、藥廠均有大量這種米渣。這種米渣常常被視為廢渣作為飼料，未能得到充分利用。為了盡可能地提取米渣中的米蛋白多肽并且方便制備，適宜的米渣粒度是 100-200篩目?？刹捎媚壳笆袌錾箱N售的本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員常用的篩進(jìn)行篩選。(2)脫脂用Ca(OH)2水溶液將步驟⑴得到的料液的pH值調(diào)節(jié)到9. 5-10. 0，攪拌均勻，再浸泡脫脂20-40分鐘。其中所述料液在溫度70_75°C下進(jìn)行浸泡脫脂。Ca (OH) 2的濃度是飽和Ca (OH) 2溶液。當(dāng)Ca (OH) 2的濃度小于飽和Ca (OH) 2溶液濃度時(shí)，會(huì)造成加水量太大，加重脫溶負(fù)擔(dān)。。由于料液的pH值將會(huì)影響蛋白酶解效果，因此適宜將步驟⑴得到的料液的pH 值調(diào)節(jié)到9. 5-10. 0。如果料液的pH值小于9. 5，則會(huì)造成堿性蛋白酶酶活下降；如果料液的PH值大于10. 0，則會(huì)造成蛋白及脂肪等產(chǎn)生副反應(yīng)，產(chǎn)生有害物質(zhì)。(3)離心步驟( 得到的料液以2500-3500轉(zhuǎn)/分速度進(jìn)行離心分離10_20分鐘，然后棄去液相，得到離心沉淀物。優(yōu)選地，以3000轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行離心。本發(fā)明使用的離心機(jī)是目前市場上銷售的人們普遍使用的離心機(jī)。例如是上海醫(yī)用分析儀器廠生產(chǎn)的離心機(jī)。(4)調(diào)質(zhì)往步驟(3)得到的離心沉淀物中加入水，使所述沉淀物濃度為16-17%。(5)酶解反應(yīng)往步驟(4)得到的所述沉淀物溶液中加入以其蛋白質(zhì)量計(jì)0.4-0. 6%堿性蛋白酶，再在溫度50-55°C下進(jìn)行酶解反應(yīng)1-1.證，然后加入以其蛋白質(zhì)量計(jì)0. 4-0. 6%木瓜蛋白酶，在溫度50-55°C下進(jìn)行酶解反應(yīng)4-5h，從而得到酶解液。堿性蛋白酶是經(jīng)細(xì)菌原生質(zhì)體誘變方法造育的2709枯草桿微生物通過深層發(fā)酵、提取及精制而成的一種蛋白水解酶，屬于一種絲氨酸脆外高堿性蛋白酶，它能水解蛋白質(zhì)分子肽鏈生成多肽或氨基酸，具有較強(qiáng)的分解蛋白質(zhì)的能力。它適宜于在40-55°C、 PH9-11的堿性條件下使用，超出以上范圍酶的活力下降。酶活力定義為1克酶粉或Iml酶液于40°C與pH4. 6的條件下，1小時(shí)分解可溶性淀粉產(chǎn)生Img葡萄糖的酶量為1個(gè)酶活單位。在本發(fā)明中使用的堿性蛋白酶的酶活是5萬 150萬IU/g，優(yōu)選地是20萬IU/g。 其添加量是以料液的重量計(jì)0. 4 0. 6%。本發(fā)明使用的堿性蛋白酶例如是諾維信公司生產(chǎn)的堿性蛋白酶。在本發(fā)明中，往步驟(4)得到的所述沉淀物溶液中加入以其蛋白質(zhì)量計(jì) 0. 4-0. 6%堿性蛋白酶，當(dāng)堿性蛋白酶的添加量低于這一范圍時(shí)，會(huì)降低蛋白肽的提取率或延長反應(yīng)時(shí)間；當(dāng)堿性蛋白酶的添加量高于這一范圍時(shí)，會(huì)提高生產(chǎn)成本。加入所述堿性蛋白酶后，在溫度50-55 °C下進(jìn)行酶解反應(yīng)。酶解反應(yīng)的溫度條件至關(guān)重要，如果低于這一溫度范圍，會(huì)降低酶活力；如果高于這一溫度范圍，則會(huì)使酶變性，喪失酶活。
木瓜蛋白酶(Papain)簡稱木瓜酶，又稱為木瓜酵素。是利用未成熟的番木瓜 (Carica papaya)果實(shí)中的乳汁，采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)提煉而成的純天然生物酶制品。 它是一種含疏基(-SH)肽鏈內(nèi)切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有較廣泛的特異性，對(duì)動(dòng)植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有較強(qiáng)的水解能力，同時(shí)，還具有合成功能，能把蛋白水解物合成為類蛋白質(zhì)。最適合？11值5.7(—般3-9.5皆可)，最適合溫度55-601(—般10_85°C皆可)。在本發(fā)明中使用的木瓜蛋白酶的酶活是5萬 350萬IU/g，優(yōu)選地是20萬IU/g。 其添加量是以料液的重量計(jì)0. 4-0. 6%。本發(fā)明使用的木瓜蛋白酶例如是諾維信公司生產(chǎn)的木瓜蛋白酶。在本發(fā)明中，往所述沉淀物溶液中加入以其蛋白質(zhì)量計(jì)0.4-0. 6%木瓜蛋白酶，當(dāng)木瓜蛋白酶的添加量低于這一范圍時(shí)，會(huì)降低蛋白肽的提取率或延長反應(yīng)時(shí)間；當(dāng)木瓜蛋白酶的添加量高于這一范圍時(shí)，會(huì)提高生產(chǎn)成本。加入所述木瓜蛋白酶后，在溫度50-55 °C下進(jìn)行酶解反應(yīng)。酶解反應(yīng)的溫度條件至關(guān)重要，如果低于這一溫度范圍，會(huì)降低酶活力；如果高于這一溫度范圍，則會(huì)使酶變性，喪失酶活力。(6)滅菌滅酶步驟( 得到的酶解液煮沸20-40分鐘進(jìn)行滅菌滅酶，然后快速冷卻至室溫。(7)離心分離以2500-3500轉(zhuǎn)/分速度進(jìn)行離心分離10_20分鐘，取上清液。優(yōu)選地，以3000轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行離心。(8)濃縮并干燥步驟(7)得到的上清液進(jìn)行濃縮，得到的濃縮物然后進(jìn)行噴霧干燥，得到所述的米蛋白多肽。其中，步驟(7)得到的上清液在溫度75°C與真空度0. 09MI^的條件下進(jìn)行濃縮，濃縮達(dá)到以濃縮物總重量計(jì)可溶性固形物含量為17-20%。通過噴霧干燥機(jī)，控制其進(jìn)口溫度為165_180°C，出口溫度為75_85°C。所述的噴霧干燥機(jī)例如是上海世遠(yuǎn)生物設(shè)備工程有限公司、常州市統(tǒng)一干燥設(shè)備有限公司、上海達(dá)程實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)的噴霧干燥機(jī)。在本發(fā)明中，蛋白質(zhì)含量是采用GB 5009. 5-2008方法測定的。脂肪重量百分含量是采用GB/T14772-2008方法測定的。多肽含量是采用GB 5009. 5-2008和GB/T 5009. 124-2003方法測定的。采用常規(guī)的高效凝膠過濾色譜法分析法鑒定了本發(fā)明的米蛋白多肽，分析結(jié)果見附圖2。根據(jù)本發(fā)明方法制備得到的米蛋白多肽具有非常廣泛的用途，可以用于食品、化妝品、藥品、大米精加工與飼料行業(yè)。[有益效果]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明通過雙酶分步水解及酶反應(yīng)參數(shù)的調(diào)節(jié)，控制蛋白質(zhì)的水解程度，堿性蛋白酶水解蛋白的能力較強(qiáng)，在堿性條件下能夠快速地從不溶性的大米蛋白中水解出水溶性的、具有一定鏈長的肽鏈，木瓜蛋白酶的水解作用條件較寬泛，可以在中性到偏酸性的條件下進(jìn)一步水解肽鏈。根據(jù)本發(fā)明方法可以得到蛋白重量百分含量80%以上、脂肪重量百分含量以下，分子量分布于IOO-IOOODa的肽占蛋白總量90%以上的米蛋白多肽，這種多肽生物活性高，產(chǎn)品全溶于水。所得產(chǎn)品無過敏性，除了具有一般大米蛋白的營養(yǎng)作用外，在消化吸收和保健功能等方面有顯著的功能。根據(jù)本發(fā)明方法制備的產(chǎn)品具有很好的發(fā)展前景，可廣泛應(yīng)用于食品和化妝品等行業(yè)，對(duì)實(shí)現(xiàn)大米精深加工和提高其附加值具有重要意義。

附圖1是本發(fā)明的制備米蛋白多肽方法的流程圖。附圖2是根據(jù)本發(fā)明方法制備的米蛋白多肽的分子量分布圖。
具體實(shí)施方式實(shí)施例1 本發(fā)明復(fù)合酶法制備米蛋白多肽方法該方法的步驟如下(1)調(diào)漿使用150目篩事先對(duì)云南普洱永吉生物技術(shù)有限公司銷售的米渣進(jìn)行篩選，得到粒度150篩目篩目米渣。然后稱量2kg蛋白重量百分含量90%和脂肪重量百分含量3%米渣，按照米渣與水重量比1 7，將米渣與14kg水?dāng)嚢杌旌暇鶆虻玫揭环N料液，再在70°C溫度下進(jìn)行加熱。(2)脫脂用飽和Ca(OH)2水溶液將步驟⑴得到的料液的pH值調(diào)節(jié)到9. 5，攪拌均勻，再在溫度75 °C下浸泡脫脂30分鐘。(3)離心使用湘潭離心機(jī)有限公司生產(chǎn)的離心機(jī)，將步驟(2)得到的料液以2500轉(zhuǎn)/分速度進(jìn)行離心分離20分鐘，然后棄去液相，得到3. 9kg離心沉淀物。(4)調(diào)質(zhì)往步驟(3)得到的3. 9kg離心沉淀物中加入水，使所述沉淀物濃度為17%。(5)酶解反應(yīng)往步驟(4)得到的所述沉淀物溶液中加入IOg以其蛋白質(zhì)量計(jì)0. 5%堿性蛋白酶， 所述堿性蛋白酶是諾維信公司生產(chǎn)的堿性蛋白酶，其酶活是20萬IU/g，在溫度50°C下進(jìn)行酶解反應(yīng)1.池，然后加入12g以其蛋白質(zhì)量計(jì)0.6%木瓜蛋白酶，所述木瓜蛋白酶是諾維信公司生產(chǎn)的木瓜蛋白酶，其酶活是20萬IU/g，在溫度52°C下進(jìn)行酶解反應(yīng)4h，從而得到 11.51酶解液。(6)滅菌滅酶步驟( 得到的11. 5升酶解液煮沸30分鐘進(jìn)行滅菌滅酶，然后快速冷卻至室溫。(7)離心分離以3500轉(zhuǎn)/分速度進(jìn)行離心分離15分鐘，得到11. 3升上清液。(8)濃縮并干燥步驟(7)得到的11.3升上清液在溫度751與真空度0.0910^的條件下進(jìn)行濃縮，達(dá)到以濃縮物總重量計(jì)可溶性固形物含量為17%。然后通過上海世遠(yuǎn)生物設(shè)備工程有限公司生產(chǎn)的噴霧干燥機(jī)，控制其進(jìn)口溫度為178°C，出口溫度為85°C，將得到的濃縮物進(jìn)行噴霧干燥，得到0. 92kg米蛋白多肽粉。所述米蛋白多肽的分子量分布圖見附圖2。。采用本說明書中提到的分析方法對(duì)得到的米蛋白多肽粉進(jìn)行分析，結(jié)果列在表1 中。由表1可見，在得到的米蛋白多肽粉中，分子量IOO-IOOODa的米蛋白多肽是以所述米蛋白多肽粉總重量計(jì)96. 55%。表1本發(fā)明制備的米蛋白多肽的分子量分布
權(quán)利要求
1.一種米蛋白多肽，其特征在于以所述米蛋白多肽總重量計(jì)，它的蛋白重量百分含量為80%以上，其中分子量IOO-IOOODa的多肽為所述蛋白總量的90%以上，它的脂肪重量百分含量小于1%。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述米蛋白多肽的制備方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)調(diào)漿按照水與米渣重量比1-4 6-10，將蛋白重量百分含量70-90%和脂肪重量百分含量 2-3%的米渣與水?dāng)嚢杌旌暇鶆虻玫揭环N料液，然后進(jìn)行加熱；(2)脫脂用Ca(OH)2水溶液將步驟(1)得到的料液的pH值調(diào)節(jié)到9. 5-10. 0，攪拌均勻，再浸泡脫脂20-40分鐘；(3)離心步驟(2)得到的料液以2500-3500轉(zhuǎn)/分速度進(jìn)行離心分離10-20分鐘，然后棄去液相，得到離心沉淀物；(4)調(diào)質(zhì)往步驟(3)得到的離心沉淀物中加入水，使所述沉淀物濃度為16-17% ；(5)酶解反應(yīng)往步驟(4)得到的所述沉淀物溶液中加入以其蛋白質(zhì)量計(jì)0. 4-0. 6%堿性蛋白酶，再在溫度50-55°C下進(jìn)行酶解反應(yīng)1-1.證，然后加入以其蛋白質(zhì)量計(jì)0. 4-0. 6%木瓜蛋白酶， 在溫度50-55°C下進(jìn)行酶解反應(yīng)4-5h，從而得到酶解液；(6)滅菌滅酶步驟( 得到的酶解液煮沸20-40分鐘進(jìn)行滅菌滅酶，然后快速冷卻至室溫；(7)離心分離經(jīng)過步驟(6)滅菌滅酶處理后的酶解液以2500-3500轉(zhuǎn)/分速度進(jìn)行離心分離10-20 分鐘，取上清液；(8)濃縮并干燥步驟(7)得到的上清液進(jìn)行濃縮，得到的濃縮物然后進(jìn)行噴霧干燥，得到所述的米蛋白多肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述米渣粒度是100-200篩目。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于在步驟(1)中，所述料液加熱溫度是 70-75 O。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于在步驟( 中，所述料液在溫度70-75°C下進(jìn)行浸泡脫脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于在步驟O)中，Ca(OH)2水溶液的濃度是飽和Ca(OH)2溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的堿性蛋白酶的酶活是20萬IU/g；木瓜蛋白酶的酶活是20萬IU/g。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于在步驟(8)中，步驟(7)得到的上清液在溫度75°C與真空度0. 09MPa的條件下進(jìn)行濃縮，濃縮達(dá)到以濃縮物總重量計(jì)可溶性固形物含量為 17-20% ο
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于在步驟(8)中，噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為 165-180°C，出風(fēng)溫度為 75-85°C。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種米蛋白多肽，還涉及所述米蛋白多肽的復(fù)合酶法制備方法，該方法包括調(diào)漿、脫脂、離心、調(diào)質(zhì)、酶解反應(yīng)、滅菌滅酶、離心分離和濃縮并干燥等步驟。采用本發(fā)明方法制備的米蛋白多肽的蛋白重量百分含量80％以上、脂肪重量百分含量1％以下，分子量分布于100-1000Da的肽占蛋白總量90％以上，這種多肽生物活性高，產(chǎn)品全溶于水。
文檔編號(hào)C12P21/06GK102212107SQ20111009057
公開日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2011年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月12日
發(fā)明者于秋生 申請(qǐng)人:江南大學(xué)