專利名稱：微波輔助酶解制備豬血活性肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬快速制備豬血活性肽的一種方法，屬于畜禽副產(chǎn)品深加工及綜合利用的 技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
我國豬血資源豐富，但豬血在我國浪費(fèi)現(xiàn)象嚴(yán)重。目前粗加工成血粉或者血豆腐， 精深加工主要集中在生產(chǎn)血紅素、SOD和補(bǔ)鐵產(chǎn)品等。豬血中蛋白含量高，可生產(chǎn)加工活 性肽產(chǎn)品。活性肽不僅具有營養(yǎng)功能和生物活性，而且還具有被腸道快速吸收的特點(diǎn)。目 前工業(yè)生產(chǎn)的蛋白粉主要是采用酸堿法或酶解法，但是使用酸堿法會使氨基酸營養(yǎng)價值降 低，而采用酶解法，酶解過程需要十多小時甚至更長時間。微波在焙烤、干燥、燙漂、解凍方 面都有應(yīng)用，在輔助酶解上的研究也越來越多。微波輔助酶解可大大縮短酶解時間，提高生 產(chǎn)效率，便于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種微波輔助酶解豬血蛋白，生產(chǎn)活性肽的方法。該方法工藝 簡單，酶解反應(yīng)時間短。所述方法包括豬血抗凝，離心分離，超聲波破壁，微波輔助酶解，二 次酶解，滅酶，膜過濾，噴霧干燥。1)檢疫合格的新鮮豬血液加入0. 3% -0. 5%檸檬酸三鈉抗凝；2)豬血離心分離離心使用高速冷凍離心機(jī)，離心溫度1°C -4°C，離心轉(zhuǎn)速 2500rpm-4000rpm，離心時間15min-20min，離心后，血細(xì)胞加入同體積0. 9%生理鹽水沖洗 1-3 次；3)超聲波破胞超聲波功率為200w-400w，時間為10min-20min，間歇比采用 2 1、1 1、1 2，操作在常溫下進(jìn)行；4)微波輔助酶解微波輔助第一次酶解，微波功率在500w-700w，溫度在 45°C-60°C，酶解的時間為10min-20min，底物濃度為7%-10%，用IM的NaOH調(diào)節(jié)pH至 8. 0-10. 0，再加入pH為8. 0-10. 0的磷酸鹽緩沖液，加入酶活力為2. 4AU-A/g的Alcalase 內(nèi)切酶，酶的添加量為底物的2% -7% ；5) 二次酶解在第一次酶解結(jié)束后，再加入酶活力為200000U/g食品級風(fēng)味蛋白 酶進(jìn)行第二次酶解，加酶量為底物的2%，酶解lmin-3min，微波功率和溫度與第一次酶解 相同，脫去苦味；6)滅酶在90°C -100°C水浴鍋內(nèi)滅酶，滅酶時間為5min-10m ；7)膜過濾采用孔徑為3000Da-10000Da的膜，對酶解液進(jìn)行過濾，濾除大分子物 質(zhì)；8)噴霧干燥噴霧干燥料液流量6L/h-8L/h，料液溫度75°C -85°C，進(jìn)風(fēng)口溫度在 1200C -1400C，出口風(fēng)溫度在70°C -85°C，噴霧干燥得到豬血活性肽粉末。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1血細(xì)胞的分離檢疫合格的新鮮豬血加入0. 33%檸檬酸三鈉抗凝，緩慢攪拌。使用高速冷凍離心 機(jī)分離血液，在4°C條件下，用3000rpm的轉(zhuǎn)速離心15min，倒出上清液，加入等體積0. 9%生 理鹽水再次離心，上述清洗步驟重復(fù)兩次，得到較純凈的血細(xì)胞。2超聲波破壁用超聲波破除血細(xì)胞的細(xì)胞壁，調(diào)整功率為400w，間歇比2 1，加兩倍體積去離 子水，超聲波處理20min。破壁操作在常溫下進(jìn)行。用紫外-可見分光光度計(jì)測量上述溶 液，吸光度從0. 102上升到0. 408，破壁效果顯著。3微波輔助酶解微波輔助酶解采用分步酶解的方法。超聲波破壁后的底物加入蒸餾水調(diào)成濃度 7 %的溶液，用IM的NaOH調(diào)節(jié)底物pH至9. 0，再加入pH為9. 0的磷酸鹽緩沖液，添加酶活力 為2. 4AU-A/g的Alcalase內(nèi)切酶，加酶量為底物的6%。將配好的酶解反應(yīng)溶液倒入到微波 反應(yīng)儀，設(shè)定微波功率為500w，控制溫度在50°C，酶解Ilmin后，酶解效率能達(dá)到29. 74%。 再加入2%酶活力為200000U/g的食品級風(fēng)味蛋白酶進(jìn)行二次酶解，酶解2min，脫去苦味。 在酶解反應(yīng)完成后，用90°C水浴鍋恒溫IOmin滅酶。最后將酶解液用3000Da膜過濾，濾除 大分子物質(zhì)。用高效液相色譜分析濾液，80%以上是小于IOOODa的活性肽。4噴霧干燥膜過濾后的酶解液進(jìn)行噴霧干燥，料液流量為6. 5L/h，料液溫度為80°C，進(jìn)風(fēng)口 溫度為130°C，出風(fēng)口溫度為75°C，噴霧干燥得到豬血活性肽粉末。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及一種微波輔助酶解制備豬血活性肽的方法，其特征在于所述方法包括下 述步驟a)超聲波破壁超聲波破裂血細(xì)胞壁功率為200w-400w，時間為10min_20min，間歇比 采用2 1、1 1、1 2，操作在常溫下進(jìn)行；b)微波輔助酶解微波輔助酶解分兩步進(jìn)行，兩次酶解微波功率和溫度相同，微波功 率在500w-700w，溫度在45°C -60°C，在第一次酶解結(jié)束后再進(jìn)行第二次酶解；c)膜過濾采用孔徑為3000Da-10000Da的膜，對酶解液進(jìn)行過濾，濾除大分子物質(zhì)；d)噴霧干燥豬血活性肽的噴霧干燥，料液流量在6L/h-8L/h，料液溫度在70°C-85°C， 進(jìn)風(fēng)口溫度在120°C _140°C，出風(fēng)口溫度在70°C _85°C，噴霧干燥得到豬血活性肽粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求Ia所述的超聲波破壁，其特征在于超聲波所破裂的血細(xì)胞是在離心 分離后，加入同體積0. 9%生理鹽水洗滌1-3次。
3.根據(jù)權(quán)利要求Ib所述的第一次酶解，其特征在于底物蛋白質(zhì)濃度為7%-10%, 用IMNaOH調(diào)節(jié)底物pH至8. 0-10. 0，再添加pH8. 0-10. 0磷酸鹽緩沖液，加入酶活力為 2. 4AU-A/g的Alcalase內(nèi)切酶，酶的添加量為底物的2% -7%，酶解時間為9min_Hmin。
4.根據(jù)權(quán)利要求Ib所述的第二次酶解，其特征在于所加入的酶是活力為200000U/g食 品級風(fēng)味蛋白酶，加酶量為底物的2%，酶解時間為lmin-3min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種微波輔助酶解制備豬血活性肽的方法，屬于畜禽副產(chǎn)品精深加工及綜合利用領(lǐng)域。方法包括豬血抗凝，離心分離，超聲波破壁，微波輔助酶解，二次酶解，滅酶，膜過濾，噴霧干燥。產(chǎn)品可作為各種食品原料或添加劑。與傳統(tǒng)方法相比，微波輔助酶解，使蛋白質(zhì)分子劇烈運(yùn)動，可顯著提高酶解速率，縮短酶解時間。本方法工藝簡單，成本低，環(huán)保，適合豬血深加工的工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C12P21/06GK102146427SQ201010613258
公開日2011年8月10日 申請日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者劉靜波, 吳涵, 方珍, 李洪山, 潘風(fēng)光, 秦亞楠, 趙婭婭 申請人:吉林大學(xué)