專(zhuān)利名稱(chēng)：一種霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體外診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒 及其檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
霍亂是一類(lèi)以腹瀉為主要癥狀的烈性傳染病，至今已發(fā)生7次世界大流行，1961 年開(kāi)始由埃爾托霍亂弧菌引起的霍亂第7次世界大流行，波及140個(gè)國(guó)家和地區(qū)，報(bào)告病例 400萬(wàn)以上。據(jù)WHO專(zhuān)家會(huì)議估計(jì)，全球每年約發(fā)生550萬(wàn)例，其中以亞洲、非洲和拉丁美洲 較為嚴(yán)重，引起亞洲10萬(wàn)和非洲2萬(wàn)人死亡。時(shí)至今日，霍亂仍然是最危險(xiǎn)的烈性傳染病 之一。因此，早期迅速和正確的診斷對(duì)治療和預(yù)防本病的蔓延有重大意義。目前霍亂弧菌已被分為200多個(gè)血清群，但只有01血清群和0139血清群能夠引 起流行?；魜y毒素(cholera toxin, CTX)是由致病的霍亂弧菌分泌的一種蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu) 基因位于染色體上大小為7 9. 7kb的CTX遺傳單元上，它由A、B兩個(gè)亞單位構(gòu)成，其中A 亞單位是霍亂毒素的產(chǎn)毒亞單位，可進(jìn)入人體小腸細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)致人體水分和電解質(zhì)的大量丟 失，嚴(yán)重時(shí)危害人生命。傳統(tǒng)霍亂弧菌檢測(cè)方法，由于其檢測(cè)周期長(zhǎng)、程序復(fù)雜、所需試劑繁多等缺點(diǎn)已遠(yuǎn) 遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足現(xiàn)代檢測(cè)要求。以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)為代表的病原核酸檢測(cè)技術(shù)在 實(shí)際應(yīng)用中存在一些問(wèn)題，如普通聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)需要專(zhuān)門(mén)的儀器，而且存在 容易交叉污染和操作過(guò)程煩瑣的缺點(diǎn)。而熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real time PCR) 技術(shù)雖然較好地解決了交叉污染的問(wèn)題，并簡(jiǎn)化了操作過(guò)程，但卻需要更復(fù)雜的定量測(cè)定 儀器，因此不適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。而且實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR技術(shù)中熒光探針的 成本較高，加大了推廣應(yīng)用的難度。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)快速簡(jiǎn)便成本低廉，但要求高質(zhì)量高穩(wěn) 定性的單克隆抗體，否則因準(zhǔn)確性不夠，目前只能是輔助檢測(cè)手段。所以及時(shí)運(yùn)用生物技 術(shù)發(fā)展的最新成果對(duì)滿(mǎn)足病原微生物檢測(cè)要求的不斷提高具有重要意義。其中恒溫?cái)U(kuò)增 (IsothermalAmplification)核酸快速檢測(cè)技術(shù)是病原核酸檢測(cè)技術(shù)上的長(zhǎng)足進(jìn)步，現(xiàn)已 建立起來(lái)的環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)具有很多的優(yōu)越性。因此，需要一種檢測(cè)效果更全面、特異性更高、漏檢率更低的霍亂弧菌毒力基因檢 測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法以解決上述問(wèn)題?；诃h(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplication of DNA，簡(jiǎn) 稱(chēng)LAMP)是利用Bst DNA聚合酶和根據(jù)靶基因序列設(shè)計(jì)的三對(duì)特殊的引物(即內(nèi)引物FIP/ BIP、外引物F3/B3以及環(huán)引物L(fēng)F/LB)，特異性識(shí)別靶序列上的六個(gè)獨(dú)立區(qū)域，啟動(dòng)循環(huán)鏈 置換反應(yīng)，在靶標(biāo)DNA區(qū)啟動(dòng)互補(bǔ)鏈合成，結(jié)果在同一鏈上互補(bǔ)序列周而復(fù)始形成有很多 環(huán)的花椰菜結(jié)構(gòu)的莖環(huán)DNA混合物。LAMP反應(yīng)過(guò)程中，從dNTP析出的焦磷酸根離子與反應(yīng) 溶液中的Mg2+結(jié)合，產(chǎn)生副產(chǎn)物——焦磷酸鎂乳白色沉淀，即可通過(guò)肉眼觀察判定結(jié)果。加 入顯色試劑后，結(jié)果判定更加方便容易。LAMP反應(yīng)是在恒溫(63 65°C )條件下45 90 分鐘內(nèi)完成。這種比較溫和的溫度條件以及沒(méi)有溫度循環(huán)使所需儀器簡(jiǎn)單化，克服了傳統(tǒng)PCR固有的檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、容易污染及檢測(cè)成本高等缺點(diǎn)。此外，這種檢測(cè)方法對(duì)檢測(cè)人員的 技術(shù)素質(zhì)要求較低，實(shí)際操作極為簡(jiǎn)便，不需要特殊的試劑和儀器設(shè)備，有利于建立成本低 廉的快速篩選體系。LAMP法是一種簡(jiǎn)便、快速、高度特異性的基因擴(kuò)增法。將恒溫基因擴(kuò)增 技術(shù)與PCR技術(shù)(包括熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù))進(jìn)行比較，可以發(fā)現(xiàn)該技術(shù)在靈敏度、特異 性和檢測(cè)范圍等方法學(xué)指標(biāo)上相當(dāng)于或優(yōu)于PCR技術(shù)，且不依賴(lài)任何專(zhuān)門(mén)的儀器設(shè)備即可 實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)高通量快速檢測(cè)，而且檢測(cè)成本遠(yuǎn)低于熒光定量PCR技術(shù)。目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中以微 生物分離培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)鑒定為主、結(jié)合生化分析和血清學(xué)分型鑒定的通行方法，初步鑒定 需2 3天，完成鑒定報(bào)告需10 15天。申請(qǐng)?zhí)枮?00810157500. 0的在先申請(qǐng)已經(jīng)公開(kāi)了產(chǎn)霍亂毒素霍亂弧菌環(huán)介導(dǎo)等 溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)方法，與此在先申請(qǐng)相比較，本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒與檢測(cè)方法采用了三對(duì) 引物(內(nèi)引物FIP/BIP、外引物F3/B3以及環(huán)引物L(fēng)F/LB)，使得本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒與方法 具有更好的擴(kuò)增效率、特異性及靈敏性。并且，本發(fā)明的反應(yīng)體系中加入了羥基萘酚藍(lán)顯色 液，鑒定結(jié)果更為直觀清晰。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題之一是克服現(xiàn)有技術(shù)中耗時(shí)長(zhǎng)，漏檢率高，實(shí)驗(yàn)設(shè)備 要求較高的不足，提供一種檢測(cè)效果更全面、特異性高、靈敏性好，漏檢率低，方便簡(jiǎn)單易操 作的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明所提供的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒包括下列組成以霍亂弧菌CtxA 基因?yàn)榘谢?、基于環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)設(shè)計(jì)的各三對(duì)引物內(nèi)引物FIP/BIP、外引物F3/ B3、環(huán)引物L(fēng)F/LB，以及Bst DNA聚合酶、反應(yīng)液、樣品預(yù)處理液、顯色液、穩(wěn)定液和陽(yáng)性對(duì)
照，所述的三對(duì)引物序列分別為內(nèi)引物FIP 5‘-CCAAAATGAACTCGATACCATCCATAAGAAGTTTCTGCTTTAGGTG-3‘ (SEQ ID NO 1)內(nèi)引物 BIP :5，-GGTGCTTGATGAACAATTACATCGTCTGCTGCTGGAGCAATA-3，(SEQ ID NO 2)外弓丨物F3 :5，-AGTCCTCATCCAGATGAAC-3，(SEQ ID NO 3)外弓丨物B3 :5，-CCTGCCAATCCATAACCA-3，(SEQ ID NO 4)環(huán)引物L(fēng)F :5，-ATATTTGGGAGTATGGAATCC-3，(SEQ ID NO 5)環(huán)引物L(fēng)B :5，-TAATAGGGGCTACAGAGATAGATA-3，(SEQ ID NO 6)所述的內(nèi)引物FIP/BIP、環(huán)引物L(fēng)F/LB各為1. 2 2. 0 μ mol/L，外引物F3/B3的濃 度各為0. 2 0. 25 μ mol/L ；優(yōu)選內(nèi)引物FIP/BIP、環(huán)LF/LB的濃度為1. 6 μ mol/L，外引物 F3/B3 的濃度為 0. 2 μ mol/L。所述的Bst DNA聚合酶酶濃度4-10U/μ L，優(yōu)選酶濃度為8U/y L。所述的反應(yīng)液含1.4 2mmol/L dNTPs,20 25mmol/L Tris-HClUO 12. 5mmol/L KCl、10 12. 5mmol/L (NH4)2SO4,8 10mmol/L MgS04、0. 1 0. 125 體積 % TritonX-100,0. 8 lmol/L 甜菜堿；優(yōu)選L4mmol/L dNTPs、20mmol/L Tris-HClU0mmol/L KCl、1 Ommo 1/L(NH4)2S04、8mmol/LMgS04、0. 1% TritonX_100、0· 8mol/L 甜菜堿。 所述的顯色液為HNB (羥基萘酚藍(lán))或STOR Green I，優(yōu)選HNB (羥基萘酚藍(lán))。所述穩(wěn)定液為礦物油。所述的陽(yáng)性對(duì)照為霍亂弧菌01群或0139群基因組DNA。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題是提供一種霍亂毒素毒力基因檢測(cè)方法，包括如 下步驟(1)將待測(cè)樣品離心，去上清，得到沉淀；(2)將步驟(1)的沉淀加入本發(fā)明檢測(cè)試劑盒中的樣品預(yù)處理液，混合均勻，沸水 浴滅活后冰上冷卻，高速離心，上清即為樣品模板DNA ；(3)在反應(yīng)容器中加入本發(fā)明試劑盒中的Bst DNA聚合酶0.9 1.8體積份數(shù)、反 應(yīng)液38 40體積份數(shù)、穩(wěn)定液52 54. 5體積份數(shù)、樣品模板DNA 4. 5 9體積份數(shù)、內(nèi) 引物FIP/BIP、環(huán)引物L(fēng)F/LB各2體積份數(shù)、外引物F3/B3各4體積份數(shù)，恒溫反應(yīng)；(4)反應(yīng)結(jié)束后，樣品組顯色與對(duì)照組相同則為陽(yáng)性，否則為陰性；步驟(3)中所述的恒溫反應(yīng)的反應(yīng)條件為溫度63 65°C，反應(yīng)時(shí)間45 90min。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果1.本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒只需一個(gè)恒 定溫度就能擴(kuò)增反應(yīng)，不需要特殊試劑與設(shè)備，檢測(cè)成本低；2.由于選擇了霍亂毒素(CTX) 毒力基因的核酸序列的特異性保守區(qū)進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，應(yīng)用六個(gè)區(qū)段，六條引物，使得本發(fā)明 的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)霍亂弧菌毒力基因的準(zhǔn)確率更高。3.本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒擴(kuò)增快速且 高效，在不到1小時(shí)即可完成擴(kuò)增，且產(chǎn)率更高；4.本發(fā)明的基因快速診斷試劑盒，根據(jù)是 否擴(kuò)增就能判斷靶標(biāo)物質(zhì)的存在與否，因此具有高特異性；5.本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒靈敏度 高，擴(kuò)增模板僅需10拷貝或更少；6.本發(fā)明的基因快速診斷試劑盒鑒定簡(jiǎn)便，可通過(guò)肉眼 觀察鑒定，顯色試劑(HNB)羥基萘酚藍(lán)使得陰陽(yáng)性結(jié)果顯色差異顯著，驗(yàn)證率高，更加明顯 可靠。


圖1為實(shí)施例2霍亂弧菌01群LAMP靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖2為實(shí)施例2霍亂弧菌01群LAMP靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果電泳圖。圖3為實(shí)施例2霍亂弧菌01群PCR靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果電泳圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定 的范圍。實(shí)施例1霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒的制備(1)按以下序列經(jīng)DNA合成儀合成寡聚脫氧核酸引物內(nèi)引物FIP 5‘-CCAAAATGAACTCGATACCATCCATAAGAAGTTTCTGCTTTAGGTG-3‘ (SEQ ID NO 1)內(nèi)引物 BIP :5，-GGTGCTTGATGAACAATTACATCGTCTGCTGCTGGAGCAATA-3，(SEQ ID NO2)外弓丨物F3 :5，-AGTCCTCATCCAGATGAAC-3，(SEQ ID NO 3)外弓丨物B3 :5，-CCTGCCAATCCATAACCA-3，(SEQ ID NO 4)環(huán)引物L(fēng)F :5，-ATATTTGGGAGTATGGAATCC-3，(SEQ ID NO 5)環(huán)引物L(fēng)B :5，-TAATAGGGGCTACAGAGATAGATA-3，(SEQ ID NO 6)(2)購(gòu)置DNA聚合酶Bst DNA聚合酶置于容器；(3)配制反應(yīng)液和引物反應(yīng)液含有 1.4mmol/L dNTPs,20mmol/L Tris-HCl, 10mmol/LKCl, 10mmol/L (NH4) 2S04,8mmol/L MgS04、0. 1% ΗοηΧ-100、0· 8mol/L 甜菜堿、內(nèi) 引物FIP/BIP、環(huán)引物L(fēng)F/LB各1· 6 μ mol/L和外引物F3/B3各0. 2 μ mol/L,置于容器；(4)配制樣品預(yù)處理液樣品預(yù)處理液含有20mmol/L Tris-HCl (pH 8. 0)、2mmol/ LEDTA 和 1. 2%體積 Triton X-100，置于容器；(5)購(gòu)置穩(wěn)定液礦物油，置于容器；(6)購(gòu)置顯色液HNB (羥基萘酚藍(lán))，置于容器；(7)提取陽(yáng)性對(duì)照提取霍亂弧菌01群基因組DNA，置于容器；(8)將上述7個(gè)容器裝成試劑盒，封裝。制備工藝簡(jiǎn)述如下1、將內(nèi)引物FIP/BIP、外引物F3/B3以及環(huán)LF/LB合成純化后，定量配制，濃度檢 測(cè)，抽樣質(zhì)檢；2、將上述(2) (4)步驟配制的液體無(wú)菌分裝，并按照實(shí)驗(yàn)用進(jìn)行濃度確定，抽樣 質(zhì)檢；3、將穩(wěn)定液分裝，抽樣質(zhì)檢；4、將陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本制備，分裝，抽樣質(zhì)檢；5、組裝試劑盒。實(shí)施例2霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用1材料與方法1. 1 材料1. 1. 1 菌株本發(fā)明采用菌株有14株，主要來(lái)源于中國(guó)疾病預(yù)防控制中心、上海市疾病預(yù)防控 制中心、浦東新區(qū)疾病預(yù)防控制中心。詳見(jiàn)表1。表1菌株名稱(chēng)及來(lái)源
權(quán)利要求
1.一種霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒，包括Bst DNA聚合酶，反應(yīng)液，樣品預(yù)處理液， 顯色液，穩(wěn)定液和陽(yáng)性對(duì)照，其特征在于還包括以霍亂弧菌CtxA基因?yàn)榘谢?、基于環(huán)介 導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)設(shè)計(jì)的各三對(duì)引物內(nèi)引物FIP/BIP、外引物F3/B3以及環(huán)引物L(fēng)F/LB，所述 的三對(duì)引物分別為內(nèi)引物 FIP :5，-CCMMTGMCTCGATACCATCCATMGMGTTTCTGCTTTAGGTG-3，SEQ ID NO 1內(nèi)引物 BIP :5’ -GGTGCTTGATGAACAATTACATCGTCTGCTGCTGGAGCAATA-3’ SEQ ID NO 2外弓丨物 F3 :5，-AGTCCTCATCCAGATGAAC-3，SEQ ID NO 3夕卜弓丨物 B3 :5，-CCTGCCAATCCATAACCA-3，SEQ ID NO 4環(huán)引物 LF:5’ -ATATTTGGGAGTATGGAATCC-3，SEQ ID NO 5環(huán)引物 LB :5’ -TAATAGGGGCTACAGAGATAGATA-3’ SEQ ID NO 6
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的內(nèi) 引物FIP/BIP、環(huán)引物L(fēng)F/LB均為1. 2 2. Ομπιο /L，外引物F3/B3的濃度均為0. 2 0.25 μmol/L0
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于內(nèi)引物FIP/ BIP、環(huán)引物L(fēng)F/LB的濃度均1. 6ymol/L，外引物F3/B3的濃度為0. 2ymol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的BstDNA 聚合酶酶濃度4-10υ/μ 1，所述的顯色液為羥基萘酚藍(lán)或SYBR Green I。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的酶濃度 為8U/μ L，所述的顯色液為羥基萘酚藍(lán)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的反 應(yīng)液含1.4 2mmol/L dNTPs、20 25mmol/L Tris-HCl、10 12. 5mmol/L KC1、10 12. 5mmol/L (NH4) 2S04、8 lOmmol/L MgS04、0. 1 0. 125 體積％ TritonX_100、0· 8 lmol/ L甜菜堿。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的反應(yīng) 液含1.4mmol/L dNTPs、20mmol/L Tris-HClU0mmol/L KCl、1 Ommo 1/L(NH4)2S04、8mmol/L MgS04、0. 1% TritonX-100,0. 8mol/L 甜菜堿。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述穩(wěn)定液為 礦物油；所述的陽(yáng)性對(duì)照為霍亂弧菌01群或0139群基因組DNA ；所述的樣品預(yù)處理液含 20mmol/L ρΗ8· 0 的 Tris-HCl、2mmol/L EDTA 禾口 1. 2%體積 Triton X-100。
9.一種根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒進(jìn)行的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)方法，其特征在于包 括如下步驟(1)將待測(cè)樣品離心，去上清，得到沉淀；(2)將步驟(1)的沉淀加入權(quán)利要求1檢測(cè)試劑盒中的樣品預(yù)處理液，混合均勻，沸水 浴滅活后冰上冷卻，高速離心，上清即為樣品模板DNA ；(3)在反應(yīng)容器中加入權(quán)利要求1檢測(cè)試劑盒中的BstDNA聚合酶0. 9 1. 8體積份 數(shù)、反應(yīng)液38 40體積份數(shù)、穩(wěn)定液52 54. 5體積份數(shù)、樣品模板DNA 4. 5 9體積份 數(shù)、內(nèi)引物FIP/BIP、環(huán)引物L(fēng)F/LB各2體積份數(shù)、外引物F3/B3各4體積份數(shù)，恒溫反應(yīng)； 其中所述的內(nèi)引物FIP/BIP、外引物F3/B3以及環(huán)引物L(fēng)F/LB為以霍亂弧菌ctxA基因?yàn)榘?基因、基于環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)設(shè)計(jì)的各三對(duì)引物，其序列分別為內(nèi)引物 FIP :5，-CCMMTGMCTCGATACCATCCATMGMGTTTCTGCTTTAGGTG-3，SEQ ID NO 1 內(nèi)引物 BIP :5’ -GGTGCTTGATGAACAATTACATCGTCTGCTGCTGGAGCAATA-3’ SEQ ID NO 2 夕卜弓丨物 F3 :5，-AGTCCTCATCCAGATGAAC-3，SEQ ID NO 3 夕卜弓丨物 B3 :5，-CCTGCCAATCCATAACCA-3，SEQ ID NO 4 環(huán)引物 LF:5’ -ATATTTGGGAGTATGGAATCC-3，SEQ ID NO 5 環(huán)引物 LB :5’ -TAATAGGGGCTACAGAGATAGATA-3’ SEQ ID NO 6 (4)反應(yīng)結(jié)束后，樣品組顯色與對(duì)照組相同則為陽(yáng)性，否則為陰性。 、
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)方法，其特征在于步驟(3)中所述 的恒溫反應(yīng)的反應(yīng)條件為溫度63 65°C，反應(yīng)時(shí)間45 90min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法，本發(fā)明的試劑盒包括以霍亂弧菌ctxA基因?yàn)榘谢?、基于環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)設(shè)計(jì)的三對(duì)引物內(nèi)引物FIP/BIP、外引物F3/B3、環(huán)引物L(fēng)F/LB，以及Bst DNA聚合酶、反應(yīng)液、樣品預(yù)處理液、顯色液、穩(wěn)定液和陽(yáng)性對(duì)照；檢測(cè)霍亂毒素毒力基因的方法包括細(xì)菌DNA的提取、霍亂毒素毒力基因的環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增和顯色檢測(cè)。本發(fā)明的霍亂毒素毒力基因檢測(cè)試劑盒擴(kuò)增效率高、特異性強(qiáng)、靈敏度高、漏檢率低，顯色效果明顯，適用于產(chǎn)毒霍亂弧菌的快速檢測(cè)。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102094090SQ201010584749
公開(kāi)日2011年6月15日 申請(qǐng)日期2010年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月13日
發(fā)明者張勝萍, 杜正平, 王傳貴, 王婷, 田楨干, 陸曄 申請(qǐng)人:中華人民共和國(guó)上海出入境檢驗(yàn)檢疫局, 華東師范大學(xué)