專利名稱：一種米蛋白抗氧化肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗氧化肽的制備方法，尤其是涉及一種以米渣為原料制取高抗氧
化活性的米蛋白抗氧化肽的制備方法。
背景技術(shù)：
許多研究表明，脂質(zhì)氧化與人體的衰老和諸多疾病，如癌癥、動(dòng)脈硬化有關(guān)。人體 通過攝入適量的抗氧化物質(zhì)能夠明顯降低體內(nèi)自由基的水平，防止脂質(zhì)過氧化，預(yù)防疾病 的發(fā)生。 隨著現(xiàn)代食品工業(yè)的發(fā)展，加工中的油脂氧化問題亟待解決。通過添加抗氧化物 的方法可以抑制油脂氧化，增加食品體系的穩(wěn)定性。 生物活性肽作為一種天然的抗氧化物質(zhì)，除了具有高的抗氧化活性之外，還具有 很高的食用安全性。這些肽類在天然原料中的含量較低，尋找更廣泛來源的抗氧化肽引起 了國內(nèi)外許多食品研究學(xué)者的普遍關(guān)注。近年來，以酶水解蛋白質(zhì)獲得抗氧化肽的方法得 到了很大的發(fā)展，各種不同來源的蛋白質(zhì)在專一酶的作用下，得到了許多具有高抗氧化活 性的肽段。 現(xiàn)有制備抗氧化肽方法的主要缺陷是一是原料比較貴，一般是用大豆蛋白制造； 二是工藝路線較復(fù)雜，生產(chǎn)成本相對(duì)較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種原料來源廣，制造成本低，抗氧化活性高，食用安全性 高的米蛋白抗氧化肽的制備方法。 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，其包括以下步驟
(1) 米渣原料預(yù)處理將米渣過50-200目篩，按照1:6-12的料水重量比加水浸泡 10-15分鐘；
(2) 膠體磨處理將米渣料液倒入膠體磨中，研磨^ 2min，將料液中的米渣顆粒磨碎， 以利于堿性蛋白酶水解；
(3) 堿性蛋白酶水解將碾磨均質(zhì)后的料液調(diào)pH8.0-9.5，加入磷酸緩沖液 10ml-20ml/100g米渣，以維持pH值穩(wěn)定不變，加入堿性蛋白酶200U/g-600U/g米渣，在 40°C _651:下攪拌水解1-3小時(shí)，控制水解度為10wt%至15wt% ;
(4) 滅酶、離心分離將水解液于84-86。C滅酶，以轉(zhuǎn)速為3000r/min-4000r/min離心10-15min，取上清液；
(5)真空濃縮、冷凍干燥將上清液在真空度0. 07-0. 09MPa，溫度40°C -S(TC進(jìn)行真空 濃縮至固形物濃度為45-55wt%，而后進(jìn)行冷凍干燥，凍干溫度為_30°C，凍干至粉末狀，水 分低于5%，產(chǎn)品即為米蛋白抗氧化肽。 本發(fā)明方法使用的原料米渣是大米制作淀粉糖或生產(chǎn)味精后的下腳料，其蛋白質(zhì) 含量高達(dá)60%以上(干基)，有良好的氨基酸組成配比，且來源廣泛，價(jià)格低廉；以米渣為原 料制備抗氧化肽，使米渣得到了綜合利用，為利用米渣開發(fā)功能食品、生物制品等具有高附 加值的生物制品奠定了基礎(chǔ)。 利用本發(fā)明方法制備的米蛋白抗氧化肽，品質(zhì)好，顏色微黃；水溶性較好，抗氧化 活性高，能夠有效清除自由基，對(duì)超氧陰離子自由基清除率為> 60%，對(duì)羥基自由基的清除 率為> 65%，表現(xiàn)了其在抗氧化活性保健方面的優(yōu)越性；食用安全性高。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例l
(1)將米渣原料過60目篩，稱取100g過篩后的米渣，加lkg飲用自來水，攪勻，浸泡 12分鐘；(2)將米渣料液倒入膠體磨中，碾磨2min ; (3)將碾磨均質(zhì)后的料液調(diào)pH至9. 0， 加入磷酸緩沖液15ml，保持pH值不變，加入堿性蛋白酶水解，加酶量300U/g，水解時(shí)間為 2小時(shí)，溫度50°C ，控制水解度為12wt% ; (4)將水解液在85t:下滅酶，待水解液冷卻至室 溫，以轉(zhuǎn)速3000r/min進(jìn)行離心分離，取上清液；(5)將上清液置于真空濃縮裝置中，在真空 度0. 09Mpa，溫度45t:下進(jìn)行真空濃縮，待固形物濃度為50wt%時(shí)，對(duì)其進(jìn)行預(yù)凍；凍干溫 度-30°C ，凍干至粉末狀，水分含量低于5%，產(chǎn)品即為米蛋白抗氧化多肽。
經(jīng)超氧陰離子自由基清除率測(cè)定、羥基自由基清除率測(cè)定，本實(shí)施例制得之米蛋 白抗氧化肽對(duì)超氧陰離子自由基清除率為65. 35%，對(duì)羥基自由基的清除率為68. 43%。
相關(guān)測(cè)定方法(下同)介紹如下
"水解度"測(cè)定方法D&AN/TNX10(F。[式中DH為氨基酸態(tài)氮生成率(%) ;AN為氨基酸 態(tài)氮含量(g/g)，用甲醛電位滴定法測(cè)定；TN為總氮含量(g/g)，用微量凱氏定氮法測(cè)定]。
"超氧陰離子自由基清除率"的測(cè)定方法取3ml50mmol/LTris-Hcl緩沖溶液 (pH=8. 2)于試管中，25t:水浴中預(yù)熱20min，取出后立即加入2ml不同濃度的待測(cè)樣品和 0. 4ml5mmol/L鄰苯三酚，混勻后25。C水浴保溫4min，立即加入8mol/LHc10. lmol終止反 應(yīng)，在420nm處測(cè)定吸光度A樣品值，對(duì)照組用蒸餾水2ml代替樣品。A空自用0. 4ml蒸餾 水代替鄰苯三酚，另用3mlTris-Hcl緩沖溶液加2. 5ml水調(diào)零。 根據(jù)所測(cè)吸光度值，計(jì)算各種不同濃度的米蛋白抗氧化肽及對(duì)照抗氧化劑的抑制率。 超氧陰離子自由基清除率^A對(duì)照-A樣品)/(A對(duì)照-A空白)X100%
"羥基自由基清除率"的測(cè)定方法取lmlO. 75mmol/L鄰二氮菲無水乙醇溶液于試管 中，依次加入2ml0. 2mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS， pH=7. 40)和lml蒸餾水，充分混勻，加入lml新配制的0. 75mmoL/L硫酸亞鐵溶液(FeS04)，混勻后，再加入1ml新配制的0. 01%H202 ，于37t:水浴加熱60min后510nm處測(cè)吸光值，所測(cè)得數(shù)據(jù)為損傷管的吸光值4。未損傷管 以lml蒸餾水代替損傷管中l(wèi)mlO. 01%H202，操作方法同損傷管，可測(cè)得510nm未損傷管的吸 光值A(chǔ)。樣品管以lml樣品代替損傷管中的lml蒸餾水，操作方法同損傷管，可測(cè)得510nm 樣品管的吸光值~。 羥基自由基清除率=(A3_A2) / (A「A2) X 100%。
實(shí)施例2
(1)將米渣原料過80目篩，稱取100g過篩后的米渣，加800g飲用自來水，攪勻，浸泡8 分鐘；(2)將米渣料液倒入膠體磨中，碾磨3min ; (3)將碾磨均質(zhì)后的料液調(diào)pH至8. 5，加 入磷酸緩沖液10ml，保持pH值不變，加入堿性蛋白酶水解，加酶量300U/g，水解時(shí)間為2小 時(shí)，溫度50°C ，控制水解度為15wt% ; (4)將水解液在85t:下滅酶，待水解液冷卻至室溫， 以轉(zhuǎn)速3000r/min進(jìn)行離心分離，取上清液；(5)將上清液置于真空濃縮裝置中，在真空度 0. 09Mpa，溫度45t:下進(jìn)行真空濃縮，待固形物濃度為50wt%時(shí)，對(duì)其進(jìn)行預(yù)凍；而后在真空 度為O. 15MPa，凍干溫度_301:下，凍干至粉末狀，水分含量低于5%，產(chǎn)品即為米蛋白抗氧化 多肽。 經(jīng)超氧陰離子自由基清除率測(cè)定、羥基自由基清除率測(cè)定，本實(shí)施例制得之米蛋 白抗氧化肽對(duì)超氧陰離子自由基清除率為65. 10%，對(duì)羥基自由基的清除率為67. 18%。
權(quán)利要求
一種米蛋白抗氧化肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)米渣原料預(yù)處理將米渣過50-200目篩，按照1:6 -12的料水重量比加水浸泡10-15分鐘；(2)膠體磨處理將米渣料液倒入膠體磨中，研磨≥2min，將料液中的米渣顆粒磨碎；(3)堿性蛋白酶水解將碾磨均質(zhì)后的料液調(diào)pH8.0-9.5，加入磷酸緩沖液10ml-20ml/100g米渣，以維持pH值穩(wěn)定不變，加入堿性蛋白酶200U/g-600U/g米渣，在40℃-65℃下攪拌水解1-3小時(shí)，控制水解度為10wt%至15wt%；(4)滅酶、離心分離將水解液于84-86℃滅酶，以轉(zhuǎn)速為3000r/min-4000r/min離心10-15min，取上清液；(5)真空濃縮、冷凍干燥將上清液在真空度0.07-0.09MPa，溫度40℃-50℃進(jìn)行真空濃縮至固形物濃度為45-55wt%，而后進(jìn)行冷凍干燥，凍干溫度為-30℃，凍干至粉末狀，水分低于5%，產(chǎn)品即為米蛋白抗氧化肽。
全文摘要
一種米蛋白抗氧化肽的制備方法，其包括以下步驟(1)將米渣過50-200目篩，按照1:6-12的料水重量比加水浸泡10-15分鐘；(2)將米渣料液倒入膠體磨中，研磨≥2min，將料液中的米渣顆粒磨碎；(3)將碾磨均質(zhì)后的料液調(diào)pH8.0-9.5，加入磷酸緩沖液，加入堿性蛋白酶200U/g-600U/g米渣,在40℃-65℃下攪拌酶解1-3小時(shí)，控制水解度為10wt%至15wt%；(4)滅酶、離心分離；(5)真空濃縮、冷凍干燥。采用本發(fā)明制備米蛋白抗氧化肽，原料來源廣，制造成本低；所得米蛋白抗氧化肽，抗氧化活性高，食用安全性高。
文檔編號(hào)C12P21/06GK101748182SQ201010119999
公開日2010年6月23日 申請(qǐng)日期2010年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月9日
發(fā)明者付湘晉, 彭清輝, 林親錄, 田蔚 申請(qǐng)人:中南林業(yè)科技大學(xué)