專利名稱：兩種抗氧化功能性肽-Fe-α29肽-卟啉鐵和β13肽-卟啉鐵的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
以血紅蛋白為原料通過(guò)真空定向酶解技術(shù)和絮凝回收技術(shù)，得到兩種抗氧化功能 性肽_Fe : a 29肽-卟啉鐵和|3 13肽-卟啉鐵。
背景技術(shù)：
鐵在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中是最主要的微量元素之一，在體內(nèi)主要以兩種狀態(tài)存在一類是 離子中鐵或稱非血紅素鐵，另一類是血紅素鐵。鐵在人體內(nèi)含量雖然很少，其在生物體內(nèi)具 有重要的功能。缺鐵可引起缺鐵性貧血。營(yíng)養(yǎng)學(xué)的研究資料表明，導(dǎo)致鐵補(bǔ)充不足的主要 原因不是食物中鐵的含量不足，而是鐵的吸收問題。非血紅素鐵，主要是以Fe(0H^絡(luò)合物 的形式存在于植物性食物之中，這種鐵一般是和有機(jī)物(脂肪酸、氨基酸等)相結(jié)合；人體 吸收這類鐵必須首先將鐵和有機(jī)物拆開，再將三價(jià)鐵還原成二價(jià)鐵而吸收。這類鐵在食品 中盡管含量較高，但難以吸收。血紅素鐵的吸收不受食物中的植酸及磷酸的影響，可直接吸 收進(jìn)入腸黏膜細(xì)胞，在腸黏膜細(xì)胞內(nèi)卟啉環(huán)和鐵離子分開，鐵離子直接吸收入體內(nèi)。
缺鐵而引起的貧血屬最常見的疾病之，口服補(bǔ)鐵制劑是糾正缺鐵的最方便的辦 法，目前補(bǔ)鐵制劑種類繁多，但效果并不十分理想。 蛋白質(zhì)在胃腸道消化酶的作用下，最終分解成寡肽和游離氨基酸。寡肽在吸收 上比游離氨基酸具有更多的優(yōu)越性，可被完整吸收進(jìn)入血液(Fol in和Berglund, 1922 ; London和Kotschneff ， 1934)(韓興泰，1999)。從理論上推測(cè)，鐵與肽的結(jié)合物肽-Fe用作 補(bǔ)鐵劑將有非常強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)。 目前，多肽-口卜啉Fe (polyp印tide-Fe)是由動(dòng)物血液高度純化后得到的血紅蛋 白，經(jīng)物理和化學(xué)方法處理得到的；它是由一條長(zhǎng)度不等的肽鏈連接一個(gè)血紅素而形成的 活性物質(zhì)。研究表明，多肽-卟啉Fe在體內(nèi)易于吸收。用作鐵強(qiáng)化劑，其吸收率比一般補(bǔ) 鐵劑高約3倍；而且含有血紅素的多肽_卟啉Fe不僅具有較強(qiáng)的補(bǔ)鐵功效，還具有很強(qiáng)的 抗氧化能力和保健作用。 本課題組以動(dòng)物血液為原料，開發(fā)的功能多肽-卟啉Fe產(chǎn)品具有抗衰老、抗氧化、 消除自由基、預(yù)防和治療貧血等功能。它可用于制備治療貧血的藥品或具有特定功能的保 健品，以及各種特定功能的食品與飲料的添加劑。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供兩種S0D樣抗氧化功能性肽 卟啉Fe產(chǎn)品a 29
肽-卟啉鐵和e 13肽-口卜啉鐵。它是式(I)和式(II)化合物<formula>formula see original document page 4</formula> 本發(fā)明a 29肽-嚇啉鐵和13 13肽-卟啉鐵的制備方法包括下述歩驟 1)向新鮮的血液中加入抗凝劑，離心分離出紅細(xì)胞。 2)紅細(xì)胞破碎，血紅蛋白等電點(diǎn)沉淀，離心分離出血紅蛋白。 3)將限制性內(nèi)切酶與血紅蛋白混合，攪勻后，將體系放入真空環(huán)境中反應(yīng)。 4)將反應(yīng)到設(shè)定時(shí)間的體系從真空環(huán)境中取出，加入絮凝劑，離心得沉淀。 5)將離心得到的沉淀溶解后，向其中加入沉淀劑，先分離出0 13肽-卟啉鐵，洗
滌、干燥。得產(chǎn)品。 6)將提取過(guò)13 13肽-卟啉鐵的溶液進(jìn)行脫離子處理,干燥，得a 29肽-卟啉鐵產(chǎn) n
叫0 a 29肽-卟啉鐵和13 13肽-卟啉鐵分別是由一條長(zhǎng)29個(gè)氨基酸的肽和13個(gè)氨 基酸的肽通過(guò)組氨酸將卟啉環(huán)與肽鏈連接而成。a 29肽-卟啉鐵和13 13肽 卟啉鐵的水 溶性好、穩(wěn)定性強(qiáng)，具有補(bǔ)鐵與抗氧化雙重功效。a 29肽-卟啉鐵和13 13肽-卟啉鐵的制 備成功，可以為國(guó)民補(bǔ)鐵提供優(yōu)質(zhì)的有機(jī)鐵原料，為解決我國(guó)龐大的動(dòng)物血液資源的高附 加值利用提供有效途徑，為開發(fā)新的抗氧化物質(zhì)提供指導(dǎo)。
具體實(shí)施例方式
多肽-卟啉Fe的制備 A)向新鮮的豬血中加入抗凝劑，攪勻后倒入離心管中，以3000r/min轉(zhuǎn)速離心，傾 出上層清液，收集下層紅細(xì)胞沉淀。
B)將紅細(xì)胞加入到其二倍質(zhì)量的去離子水中，磁力攪拌20min后，超聲10min， 3000r/min轉(zhuǎn)速離心，得上清液。 C)將上清液放入37. 5"C培養(yǎng)箱中，恒溫5h后，向其中加入1%限制性內(nèi)切酶，攪 勻。再加入() lraol/LNa()H溶液調(diào)PH至8. 0,攪勻。
D)將體系放入37. 5t:真空環(huán)境中恒溫反應(yīng)。 E)將反應(yīng)到設(shè)定時(shí)間的體系從真空環(huán)境中取出，加入絮凝劑，離心得沉淀。
F)將離心得到的沉淀用二次蒸餾水溶解后，向其中加入沉淀劑，過(guò)濾，得固體,洗 滌、干燥,得產(chǎn)品I (IH3肽-口卜啉鐵)。 G)將濾液進(jìn)行脫離子處理，干燥，得II ( a 29肽_卟啉鐵產(chǎn)品)。
權(quán)利要求
兩種抗氧化功能性肽-Feα29肽-卟啉鐵和β13肽-卟啉鐵，其特征在于，具有如下結(jié)構(gòu)式的化合物F2008101539663C0000011.tif
2. 權(quán)利要求1所述的a 29肽-卟啉鐵和13 13肽-卟啉鐵分別是由一條長(zhǎng)29水《 酸的肽和一條長(zhǎng)13個(gè)氨基酸的肽通過(guò)組氨酸將卟啉環(huán)與肽鏈連接而成。
3. 權(quán)利要求l所述的a29肽-卟啉鐵和fU3肽-卟啉鐵是由血紅蛋白經(jīng)真空向降解，絮凝沉淀產(chǎn)生。
4. 權(quán)利要求l所述的a29肽-卟啉鐵和P 13肽-卟啉鐵的水溶性好、穩(wěn)定性強(qiáng)，具有補(bǔ)鐵(預(yù)防和治療缺鐵性貧血)與抗氧化雙重功效可以用于制備預(yù)防衰老和各種心腦血 管疾病的藥物、用于制備性能優(yōu)越的補(bǔ)鐵劑、幫助解決動(dòng)物血液資源高附加值利用問題、可 用于開發(fā)新的抗氧化食品。
全文摘要
本發(fā)明涉及以血紅素為原料，經(jīng)真空-酶定向降解技術(shù)，得到的兩種具有抗氧化功能性肽-Feα29肽-卟啉鐵和β13肽-卟啉鐵。在α29肽-卟啉鐵和β13肽卟啉鐵分子中，卟啉鐵通過(guò)二價(jià)鐵離子與肽鏈上的His相連。α29肽-卟啉鐵和β13肽-卟啉鐵的水溶性好、穩(wěn)定性強(qiáng)，具有補(bǔ)鐵(預(yù)防和治療缺鐵性貧血)與抗氧化雙重功效。
文檔編號(hào)C07K7/08GK101747430SQ20081015396
公開日2010年6月23日 申請(qǐng)日期2008年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月11日
發(fā)明者劉安軍, 胡祥正 申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)