專利名稱：甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及反芻動物青貯詞料復(fù)合菌添加劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
甜菜渣是甜菜塊根經(jīng)過浸泡，壓榨制糖后的殘渣，是甜菜制糖后的副產(chǎn)品。 其產(chǎn)量高、營養(yǎng)豐富。甜菜渣除富含大量碳水化合物外，還含有果膠、生物堿、 粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、鈣、磷以及多種氨基酸，是牛、羊、鹿等反芻動物 的優(yōu)質(zhì)飼料來源。目前國內(nèi)外甜菜渣利用方式主婆是青貯和制粒，制粒后生產(chǎn) 的顆粒粕營養(yǎng)價值很高，但價格昂貴，主要用于出口。相比而言，青貯處理方 法簡單且成本較低，便于直接面向養(yǎng)殖戶推廣。目前限制甜菜渣青貯的主要問 題有兩個方面， 一是含水量過高，通常在90%左右，在發(fā)酵過程中易引起霉?fàn)€； 二是甜菜渣中乳酸菌數(shù)量不足，使得青貯后甜菜渣酸度下降緩慢，對有害微生 物如霉菌和酵母菌抑制作用降低，引起青貯甜菜渣品質(zhì)不高。甜菜渣水分含量 高可以通過烘干或添加秸稈等含水量低的原料的方法加以解決，而乳酸菌數(shù)量 不足是甜菜渣青貯急需解決的關(guān)鍵問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決現(xiàn)有甜菜渣青貯生產(chǎn)中乳酸菌數(shù)量不足引起青貯甜菜渣 品質(zhì)不高的問題，而提供的一種甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑及其制備方法和應(yīng) 用。
甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑是由從甜菜渣制作的發(fā)酵液中分離得到的乳酸
鏈球菌和乳酸桿菌各1株組成，具體是將乳酸鏈球菌和乳酸桿菌分別在MRS 液體培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)后，把活化的乳酸鏈球菌和乳酸桿菌按40-60%:40-60% 的重量百分比混合，制成甜菜渣青貯微生物添加劑。其中，每mlMRS液體培養(yǎng) 基中至少含有乳酸鏈球菌2. 5X 107cfu和乳酸桿菌3. OX 107cfu。
甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑按以下步驟制備:步驟一、甜菜渣發(fā)酵液的制備 取新鮮甜菜渣，按新鮮甜菜渣和蒸餾水的重量比為2: 1比例充分混合，靜置 1-1. 5h，經(jīng)雙層紗布過濾后，過濾液加入按重量比為甜菜渣葡萄糖二10: 1比例的葡萄糖后混合，充分?jǐn)嚢韬笾糜?0'C發(fā)酵48h，制成發(fā)酵液；步驟二、 乳酸鏈球菌和乳酸桿菌的分離、純化將甜菜渣發(fā)酵液稀釋50-100倍，置于 分離固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基pH值為5. 7-6. 1，溫度在37-4(TC下培養(yǎng)48h，挑 選溶鈣圈大、培養(yǎng)基變黃的菌落2個，分別放置在MRS固體培養(yǎng)基純化，經(jīng)鑒 定試驗(yàn)，得到乳酸鏈球菌及乳酸桿菌各1株，純化后的乳酸鏈球菌及乳酸桿菌 用裝有MRS固體培養(yǎng)基的試管保存；步驟三、乳酸鏈球菌和乳酸桿菌的活化 將純化好的乳酸鏈球菌和乳酸桿菌放在MRS液體培養(yǎng)基中活化，活化溫度為 35°C，活化時間24h，活化完成時每mlMRS液體培養(yǎng)基中至少含有乳酸鏈球菌 2. 5X 107cfu和乳酸桿菌3. OX 107cfu;步驟四、甜菜渣青貯微生物添加劑的 制備把活化的乳酸鏈球菌和乳酸桿菌按40-60%: 40-60%的重量百分比混合， 制成甜菜渣青貯微生物添加劑。其中，步驟二中所述的分離固體培養(yǎng)基配方為 牛肉膏l(xiāng)g，蛋白胨lg，酵母膏l(xiāng)g，葡萄糖lg，華茄汁20%，吐溫80 0.05%， 碳酸鈣2g，溴甲酚綠0.01%，瓊脂1.5g， pH為5.7-6.1。步驟二中所述的MRS 固體培養(yǎng)基配方為牛肉膏l(xiāng)g,蛋白胨lg，酵母膏0.5g，葡萄糖2g，吐溫 80 0.1%，碳酸,丐2g， K2HP04 0. 2g， MgS04. 7H20 0. 058g， MnS04. 4H20 0. 025g， 乙酸鈉0.5g，檸檬酸二銨0.2g，瓊脂1.5g， pH為6.2， 121。C滅菌15min。步 驟三中所述的MRS液體培養(yǎng)基配方為牛肉膏l(xiāng)g，蛋白胨lg，酵母膏0.5g， 葡萄糖2g，吐溫80 0,1%，碳酸鈣2g， K2HP04 0. 2g， MgS04. 7H20 0.058g， MnS04. 4H20 0. 025g，乙酸鈉0. 5g，擰檬酸二銨0. 2g， pH為6. 2， 121 。C滅菌15min。
甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑的應(yīng)用甜菜渣經(jīng)過干燥處理后使其水分含量在 65-75%，按照每kg甜菜渣加入10-15ml的量加入甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑，在 常溫下經(jīng)40-50天進(jìn)行發(fā)酵應(yīng)用。
本發(fā)明的特點(diǎn)在于(l)乳酸鏈球菌和乳酸桿菌均由甜菜渣中分離，對甜菜 渣青貯具有很強(qiáng)的針對性；(2)將乳酸鏈球菌和乳酸桿菌按比例混合，二者皆為 甜菜渣青貯過程中的優(yōu)勢菌群，協(xié)同作用明顯。
本發(fā)明的有益效果對比試驗(yàn)結(jié)果表明，用本發(fā)明甜菜渣青貯復(fù)合菌添加 劑處理的甜菜渣經(jīng)45天發(fā)酵，可顯著提高甜菜渣青貯效果
(l)試驗(yàn)組pH值發(fā)酵期間下降迅速，顯著低于空白對照組。試驗(yàn)組pH值和 空白對照組pH值分別為3. 94和4. 58， P〈0. 05;(2) 試驗(yàn)組較空白對照組霉菌和酵母菌數(shù)量顯著降低，分別為3.52X 107cfu/g和5. 87 X107cfu/g， P〈0.05;
(3) 試驗(yàn)組氨態(tài)氮占總氮的比值，即VBN/TN與空白對照組相比差異極顯著， 分別為10. 48%和14. 67%, P<0. 01;
(4) 試驗(yàn)組乳酸占總酸的比例較空白對照組提高9.24%， P〈0.05; 丁酸含量 較空白對照組顯著降低8.31%， P〈0.05。
具體實(shí)施例方式
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑是由從甜菜渣制作 的發(fā)酵液中分離得到的乳酸鏈球菌和乳酸桿菌各1株組成，具體是二者分別在 MRS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后，按照重量百分比由40-60%的乳酸鏈球菌和40-60%的 乳酸桿菌混合而成，其中，每mlMRS液體培養(yǎng)基中至少含有乳酸鏈球菌2.5X 107cfu和乳酸桿菌3. OX 107cfu。
具體實(shí)施方式
二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是按照重量百分 比由40%的乳酸鏈球菌和60%的乳酸桿菌混合而成。其它參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。 '
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是按照重量百分
比由50%的乳酸鏈球菌和50%的乳酸桿菌混合而成。其它參數(shù)與
具體實(shí)施例方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是按照重量百分
比由60%的乳酸鏈球菌和40%的乳酸桿菌混合。其它參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
五甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑通過以下步驟制備步驟一、 甜菜渣發(fā)酵液的制備取新鮮甜菜渣，按新鮮甜菜渣和蒸餾水的重量比為2: 1比例充分混合，靜置1-1.5h，經(jīng)雙層紗布過濾啟，過濾液加入按重量比為甜
菜渣葡萄糖=10: l比例的葡萄糖后混合，充分?jǐn)嚢韬笾糜?(TC發(fā)酵48h，
制成發(fā)酵液；步驟二、乳酸鏈球菌和乳酸桿菌的分離、純化將甜菜渣發(fā)酵液 稀釋50-100倍，置于分離固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基pH值為5. 7-6. 1 ，溫度在37-40 。C下培養(yǎng)48h，挑選溶鈣圈大、培養(yǎng)基變黃的菌落2個，分別放置在MRS固體 培養(yǎng)基純化，經(jīng)鑒定試驗(yàn)，得到乳酸鏈球菌及乳酸桿菌各1株，純化后的乳酸
6鏈球菌及乳酸桿菌用裝有MRS固體培養(yǎng)基的試管保存；步驟三、乳酸鏈球菌和 乳酸桿菌的活化將純化好的乳酸鏈球菌和乳酸桿菌放在MRS液體培養(yǎng)基中活 化，活化溫度為35"C，活化時間24h，活化完成時每mlMRS液體培養(yǎng)基中至少 含有乳酸鏈球菌2.5X107cfu和乳酸桿菌3.0X107cfu;步驟四、甜菜渣青貯 微生物添加劑的制備把活化的乳酸鏈球菌和乳酸桿菌按40-60%: 40-60%的 重量百分比混合，制成甜菜渣青貯微生物添加劑。其中，步驟二中所述的分離 固體培養(yǎng)基配方為牛肉膏l(xiāng)g，蛋白胨lg，酵母膏l(xiāng)g，葡萄糖lg，番茄汁 20%，吐溫80 0.05%，碳酸鈣2g，溴甲酚綠0.01%，瓊脂1.5g， pH為5.7-6.1。 步驟二所述的MRS固體培養(yǎng)基配方為牛肉膏l(xiāng)g，蛋白胨lg，酵母膏0.5g， 葡萄糖2g，吐溫80 0.1%,碳酸鈣2g， K2HP04 0.2g,MgSO4.7H2O 0.058g， MnSO4.4H2O0.025g,乙酸鈉0.5g，檸檬酸二銨0.2g,瓊脂1.5g， pH為6.2， 121 。C滅菌15min。步驟三中所述的MRS液體培養(yǎng)基配方為牛肉膏l(xiāng)g，蛋白胨 lg，酵母膏0.5g，葡萄糖2g，吐溫80 0.1。/。，碳酸鈣2g，K2HP04 0.2g，MgS04.7H20 0.058g, MnS04.4H20 0.025g，乙酸鈉0.5g，擰檬酸二銨0.2g， pH為6.2， 121°C 滅菌15min。
具體實(shí)施方式
六甜菜渣經(jīng)過干燥處理后使其水分含量在65-75%，按照 每kg甜菜渣加入10-15ml的量加入甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑，在常溫下經(jīng) 40-50天進(jìn)行發(fā)酵應(yīng)用。
具體實(shí)施方式
七甜菜渣經(jīng)過干燥處理后使其水分含量在70%，按照每kg 甜菜渣加入12ml的量加入甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑，在常溫下經(jīng)45天進(jìn)行發(fā) 酵應(yīng)用。
權(quán)利要求
1、一種甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑，其特征在于甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑按照重量百分比由40-60％的乳酸鏈球菌和40-60％的乳酸桿菌混合而成。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑，其特征在于甜 菜渣青貯復(fù)合菌添加劑按重量百分比由40%的乳酸鏈球菌和60%的乳酸桿菌混 合而成。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑，其特征在于甜 菜渣青貯復(fù)合菌添加劑按重量百分比由50%的乳酸鏈球菌和50%的乳酸桿菌混 合而成。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑，其特征在于甜 菜渣青貯復(fù)合菌添加劑按重量百分比由60%的乳酸鏈球菌和40%的乳酸桿菌混 合而成。
5、 一種甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑的制備方法，其特征在于甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑按以下步驟制備步驟一、甜菜渣發(fā)酵液的制備取新鮮甜菜渣， 按新鮮甜菜渣和蒸餾水的重量比為2: l比例充分混合，靜置l-1.5h，經(jīng)雙層 紗布過濾后，過濾液加入按重量比為甜菜渣葡萄糖=10: 1比例的葡萄糖后 混合，充分?jǐn)嚢韬笾糜?(TC發(fā)酵48h，制成發(fā)酵液；步驟二、乳酸鏈球菌和乳 酸桿菌的分離、純化將甜菜渣發(fā)酵液稀釋50-100倍，置于分離固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基pH值為5.7-6.1，溫度在37-4(TC下培養(yǎng)48h，挑選溶鈣圈大、培 養(yǎng)基變黃的菌落2個，分別放置在MRS固體培養(yǎng)基純化，經(jīng)鑒定試驗(yàn)，得到乳 酸鏈球菌及乳酸桿菌各1株，純化后的乳酸鏈球菌及乳酸桿菌用裝有MRS固體 培養(yǎng)基的試管保存；步驟三、乳酸鏈球菌和乳酸桿菌的活化將純化好的乳酸 鏈球菌和乳酸桿菌放在MRS液體培養(yǎng)基中活化，活化溫度為35°C，活化時間 24h，活化完成時每mlMRS液體培養(yǎng)基中至少含有乳酸鏈球菌2. 5X 107cfu和 乳酸桿菌3.0X107cfu;步驟四、甜菜渣青貯微生物添加劑的制備把活化的 乳酸鏈球菌和乳酸桿菌按40-60%: 40-60%的重量百分比混合，制成甜菜渣青 忙微生物添加劑。 '
6、 一種甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑的應(yīng)用，其特征在于甜菜渣經(jīng)過干燥處 理后使其水分含量在65-75%,按照每kg甜菜渣加入10-15ml的量加入甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑，在常溫下經(jīng)40-50天進(jìn)行發(fā)酵應(yīng)用。
7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑的應(yīng)用，其特征 在于甜菜渣經(jīng)過干燥處理后使其水分含量在70%，按照每kg甜菜渣加入12ml 的量加入甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑，在常溫下經(jīng)45天進(jìn)行發(fā)酵應(yīng)用。
全文摘要
甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑及其制備方法和應(yīng)用，它涉及一種反芻動物青貯飼料復(fù)合菌添加劑及其制備方法和應(yīng)用。它解決了現(xiàn)有甜菜渣青貯生產(chǎn)中乳酸菌數(shù)量不足的問題。甜菜渣青貯復(fù)合菌添加劑是由乳酸鏈球菌和乳酸桿菌各1株組成。制備方法一、發(fā)酵液的制備；二、乳酸鏈球菌和乳酸桿菌的分離、純化；三、乳酸鏈球菌和乳酸桿菌的活化；四、微生物添加劑的制備。應(yīng)用青貯時每kg經(jīng)過干燥處理水分含量在65-75％的甜菜渣加入10-15ml添加劑。用本發(fā)明添加劑處理的甜菜渣經(jīng)45天發(fā)酵，試驗(yàn)組與空白對照組比較，pH值、霉菌和酵母菌數(shù)量顯著降低，氨態(tài)氮占總氮的比值極顯著降低，同時，乳酸占總酸的比例顯著提高，丁酸含量顯著降低。本發(fā)明可顯著提高甜菜渣青貯效果。
文檔編號C12N1/20GK101629150SQ200910072720
公開日2010年1月20日 申請日期2009年8月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月21日
發(fā)明者劉春龍, 張永根, 張薇薇, 李忠秋, 曦 林 申請人:中國科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所