專利名稱：一種用于生產(chǎn)子囊霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基及其發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于生產(chǎn)子囊霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基及其發(fā) 酵方法。
背景技術(shù)：
子囊霉素(Ascomycin，又名H(-520、FR-900520)是二十世紀(jì)六十年代從吸水鏈霉 菌Str印tomyces hygroscopicus的培養(yǎng)液中分離而得的一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。FK-520的化學(xué)名為17 a -乙基-1旦，14 a - 二羥基-12 3 [2_(4 a -羥基-3 3 -甲 氧基-13-1-(E)-甲基乙烯基)]-23 a，253-二甲氧基-13a ,19,21a，273-四甲基-11， 28-二氧雜-4-氮雜三環(huán)[22,3,1,0] 二十八碳-18-2，3，10，16-四酮，一水合物。分子量為 810. 5，分子式為C43H69N012H20。FK-520結(jié)構(gòu)式如式I所示。最初人們僅發(fā)現(xiàn)了 n(-520的抗真菌活性，在美國專利USP3244592中，H(-520被 描述為抗真菌劑。之后它的免疫抑制活性得到重視，歐洲專利EP0323865中描述了 H(-520 作為免疫抑制劑的應(yīng)用，中國專利CN101036649A中也描述了其作為免疫抑制劑的用途。 FK-520的免疫抑制活性的基本機(jī)理是通過阻斷T細(xì)胞活化、抑制細(xì)胞因子釋放和抑制肥大 細(xì)胞的活化來產(chǎn)生作用。目前，F(xiàn)K-520的同系物吡美莫司已上市用于治療特應(yīng)性皮炎，在 美國以商品名ELTJDEL出售。Junker et al. Biotechnology and Bioengineering 60, 580-588, (1998)公布了 利用一株纈氨酸過量表達(dá)的吸水鏈霉菌突變株Str印tomyceshygroscopicusMA7040來發(fā) 酵產(chǎn)生n(-520的發(fā)酵培養(yǎng)基，產(chǎn)量可高達(dá)2. 7g/L。但是該培養(yǎng)基僅適用于此突變株，其余 的吸水鏈霉菌在此發(fā)酵培養(yǎng)基中，n(-520產(chǎn)量低下。EP0323865A1公布了利用吸水鏈霉菌的一株高產(chǎn)菌株 Streptomyceshygroscopicus var. ascomyceticus(ATCC14891) (USP3244592)發(fā)酵生產(chǎn) FK-520的過程從斜面培養(yǎng)基上取n(-520產(chǎn)生菌接種于種子培養(yǎng)基搖瓶中，待種子長成后 接種于含發(fā)酵培養(yǎng)基(葡萄糖4. 5%、玉米漿干粉1. 0%、酵母粉1. 0%、玉米蛋白粉1. 0%, 小麥胚芽0. 5%、CaC030. l%，pH 6.8)的發(fā)酵罐中，通風(fēng)條件下，27°C培養(yǎng)96小時(shí)，經(jīng)HPLC 檢測效價(jià)為40mg/L。該發(fā)明公開了一種吸水鏈霉菌Str印tomyces hygroscopicus var. ascomyceticus發(fā)酵產(chǎn)生H(-520的發(fā)酵培養(yǎng)基，但是該培養(yǎng)基含有固體不溶性成分，不利 于發(fā)酵生產(chǎn)時(shí)的培養(yǎng)基均勻化，且使用該培養(yǎng)基生產(chǎn)n(-520，菌體生長過快，發(fā)酵后期供養(yǎng) 不足，菌株在該培養(yǎng)基中產(chǎn)物產(chǎn)率低下。W0029082A3公布了利用同樣的菌株吸水鏈霉菌Str印tomyceshygroscopicus var. ascomyceticus (ATCC14891)發(fā)酵生產(chǎn)H(-520的過程從斜面培養(yǎng)基(酵母提取物、麥 芽提取物、瓊脂斜面)上取冊-520產(chǎn)生菌接種于種子培養(yǎng)基(葡萄糖0. 1%、糊精1%、奶粉 0. 2%、棉籽粉0. 25%、酪蛋白水解物 0. 5%, MgS040. 005%, FeS040 . 00 2 5%, NaCl 0. 05%, CaCl 0. 002%,ZnS040. 004%,MnS040 . 00 0 5%,pH7. 0 的磷酸緩沖液 2ml/L, pH7. 2)搖瓶中， 于28 °C培養(yǎng)48小時(shí)后，接種于含發(fā)酵培養(yǎng)基(糊精14 %、棉籽粉1. 4 %、黃豆餅粉1. 0 %、甘油1. 0%、大豆蛋白胨1. 0%、聚乙烯乙二醇1. 25%、磷酸鉀0. 08%, CaC030. 15%, pH 7. 2) 的發(fā)酵罐中，通風(fēng)條件下培養(yǎng)，經(jīng)HPLC檢測效價(jià)為350-400mg/L。該發(fā)明公開了一種吸水鏈 霉菌 Streptomyces hygroscopicus var. ascomyceticus 發(fā)酵產(chǎn)生 FK-520 的發(fā)酵培養(yǎng)基， 產(chǎn)物發(fā)酵純度高，產(chǎn)量較先前專利報(bào)道的也有很大提高，但是依舊有待提高，且該培養(yǎng)基碳 源用量非常大，以致生產(chǎn)成本高。因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種生產(chǎn)成本低廉、產(chǎn)量高的FH-520發(fā)酵培養(yǎng)基及其 相應(yīng)的生產(chǎn)方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種用于生產(chǎn)如式I所示的子囊霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種使用上述發(fā)酵培養(yǎng)基生產(chǎn)子囊霉素的方法。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種用于生產(chǎn)如式I所示的子囊霉素的發(fā)酵培養(yǎng) 基，以所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總重量計(jì)，它含有碳源2. 0-8. 0%，有機(jī)氮源1. 0-5. 0%，和無機(jī)鹽 0. 1-0. 5% ；所述的有機(jī)氮源為2種或多于2種的下述物質(zhì)的組合酵母提取物、玉米漿干粉、 玉米蛋白粉、大豆蛋白胨、黃豆餅粉、棉籽粉、花生粕；
權(quán)利要求
一種用于生產(chǎn)如式I所示的子囊霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，以所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總重量計(jì)，它含有碳源2.0 8.0％，有機(jī)氮源1.0 5.0％，和無機(jī)鹽0.1 0.5％；所述的有機(jī)氮源為2種或多于2種的下述物質(zhì)的組合酵母提取物、玉米漿干粉、玉米蛋白粉、大豆蛋白胨、黃豆餅粉、棉籽粉、花生粕；F2009100565631C0000011.tif
2.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，以所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總重量計(jì)，它還 含有天然油脂0. 2-1.5%。
3.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的碳源選自蔗糖、葡萄糖、糊精、 淀粉、甘露醇、或乳糖。
4.如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的無機(jī)鹽選自磷酸鉀、硫酸鎂、 碳酸鈣、或其組合。
5.如權(quán)利要求2所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的天然油脂選自豆油、玉米油、 葵花籽油、豬油、或魚油。
6.一種生產(chǎn)如式I所示的子囊霉素的方法，其特征在于，所述的方法包括步驟(1)在如權(quán)利要求1-5任一所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中對Sti^ptomyceshygroscopicus var. ascomyceticus ATCC14891成熟種子進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；得到結(jié)構(gòu)如式I所示的子囊霉素。
7.如權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)方法，其特征在于，發(fā)酵培養(yǎng)溫度為28士2°C，pH7.O士 1，時(shí) 間為150-250小時(shí)。
8.如權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)方法，其特征在于，在發(fā)酵中期補(bǔ)加選自下述的物質(zhì)葡萄 糖、糊精、淀粉、(NH4) 2S04、酵母提取物、玉米漿干粉、或大豆蛋白胨。
9.如權(quán)利要求8所述的生產(chǎn)方法，其特征在于，補(bǔ)加物質(zhì)的量為0.2-1. 0%，按發(fā)酵培養(yǎng)基的重量計(jì)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于生產(chǎn)子囊霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基及使用該發(fā)酵培養(yǎng)基生產(chǎn)子囊霉素的方法。所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，以所述發(fā)酵培養(yǎng)基的總重量計(jì)，含有碳源2.0-8.0％，有機(jī)氮源1.0-5.0％，和無機(jī)鹽0.1-0.5％；所述的有機(jī)氮源為2種或多于2種的下述物質(zhì)的組合酵母提取物、玉米漿干粉、玉米蛋白粉、大豆蛋白胨、黃豆餅粉、棉籽粉、花生粕。
文檔編號C12P17/18GK101993903SQ20091005656
公開日2011年3月30日 申請日期2009年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月18日
發(fā)明者朱寶泉, 胡海峰, 陳怡倩 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院