專利名稱：雙酶法制備低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用雙酶法制備低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖的方法。
背景技術(shù)：
胡,巴種子內(nèi)胚乳(又稱胡蘆巴膠)的主要化學(xué)成分為半乳甘露聚糖， 已經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道，胡蘆巴半乳甘露聚糖可降低膽固醇和非胰島素依賴型糖尿
病患者的血糖水平，還可抑制人體對(duì)脂肪的吸收，起到減肥作用。如Madar 等人的報(bào)道(Polysaccharides composition of gelfraction derived from fenugreek and its effect on starch digestion and bile acid absorption in r.ats. J Agric food Chem， 1990， 38: 1535 — 159 )由種子提取的膠凝 部分含有大量的半乳甘露聚糖，正常鼠服后，體內(nèi)的血糖水平會(huì)有顯著降低， 膠凝成分的強(qiáng)吸水力，縮短過渡時(shí)的能力以及抑制空腹效果是其降血糖功效 的主要原因。
胡,巴豆膠具有中性的非離子性質(zhì)，在冷水和熱水中均能形成膠體溶 液，任何分子量的胡聲巴膠在低濃度時(shí)都可以在水中溶脹，但由于胡,巴膠 分子量較大，黏均分子量約為54萬，溶解性差，較稀的水溶液仍有較高的粘 度，在食品和藥品領(lǐng)域的應(yīng)用具有很大的局限性。而低分子量的胡蘆巴膠可 以在較高濃度時(shí)也溶于水，且具有比大分子量胡,巴膠更好的生物相容性， 所以制備低分子量的胡,巴膠以達(dá)到降低水溶液黏度、提高溶解性的目的， 對(duì)于其應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等方面具有重要意義。
現(xiàn)有的降解大分子多糖的方法主要包括化學(xué)降解法、酶降解法和物理降 解法。化學(xué)降解法條件要求苛刻，設(shè)備腐蝕嚴(yán)重，環(huán)境污染突出，且降解產(chǎn) 物的分子量分布較難控制；物理降解法的局限性較高，只適于在濃度極低的 狀態(tài)下進(jìn)行；而酶解法則能很好地克服這些缺點(diǎn)，是較為理想的途徑。此種 方法可分為專一性酶降解法和非專一性酶降解法兩種，根據(jù)繆月秋等人的報(bào) 道(胡蘆巴中性雜多糖酶解工藝優(yōu)化及其產(chǎn)物對(duì)青春雙歧桿菌增殖作用的研 究，安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006， " (2): 238 ~ 242 )利用專一性酶p-甘露聚
糖酶對(duì)胡f巴膠進(jìn)行降解，此法由于酶的提取、分離和純化困難，成本高， 目前工業(yè)化生產(chǎn)有很大困難。非專一性酶是指對(duì)胡蘆巴膠有降解作用的纖維 素酶及普魯蘭酶等，其具有酶來源豐富，成本低，降解條件溫和、環(huán)境污染 小、反應(yīng)過程和降解產(chǎn)物分子量分布易于控制、選擇性好、產(chǎn)物質(zhì)地疏松易 于研磨等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，提供一種新的高效降 解胡,巴膠的簡(jiǎn)單的方法，即用纖維素酶和普魯蘭酶聯(lián)合降解胡,巴膠制備 低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖的方法。
本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
一種雙酶法制備低分子量胡,巴半乳甘露聚糖的方法，其特征在于，包 括下述步驟
步驟一用緩沖溶液配制胡,巴半乳甘露聚糖溶液，加入纖維素酶，控制降 解溫度及時(shí)間進(jìn)行降解。
步驟二終止降解后經(jīng)乙醇沉淀，靜置，過濾，得纖維素酶降解產(chǎn)物。
步驟三用緩沖溶液將步驟一降解產(chǎn)物配制成溶液，加入普魯蘭酶，控制降
解溫度及時(shí)間進(jìn)行降解。
步驟四終止降解后，進(jìn)行脫蛋白處理。
步驟五經(jīng)乙醇沉淀，靜置，過濾，洗滌，真空干燥，得雙酶降解后的產(chǎn)物 胡聲巴半乳甘露聚糖，測(cè)定該產(chǎn)物黏均分子量。
所述步驟一中緩沖溶液為0.2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，pH值為 4.0-5.5，胡,巴膠溶液濃度為0.5~1.5%，溶脹時(shí)間為10~ 120min，水浴 加熱后，加入纖維素酶的量為500 - 5000U,降解溫度為40~50°C,降解時(shí) 間為1 ~4h。
步驟二中醇沉所用濃度為95%的食用酒精，它與濃縮液的體積比為5~ 10:1，靜置24小時(shí)，過濾后，收集沉淀。
步驟三中所述緩沖溶液為0.1-0. 2mol/mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶 液，pH值為4.0~6.0，溶液濃度為0.5-1.5%,溶月長(zhǎng)時(shí)間為10~ 120min,水 浴加熱后，加入普魯蘭酶的量為1000 ~ 5000ASPU,降解溫度為50~ 65。C，
降解時(shí)間為1 ~ 8h。
步驟四中脫蛋白處理是指向步驟三的水解液中加入等體積的1 ~ 8%三氯 乙酸溶液，室溫靜置4-12h后過濾，棄去沉淀，之后所得上清液再按照上 述方法再處理一次。
步驟五中的要求與步驟四相同，收集過濾后的沉淀用無水乙醇、丙酮洗 滌，沉淀真空千燥，得經(jīng)雙酶法降解后的低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖，利 用烏式黏度計(jì)測(cè)定產(chǎn)物黏均分子量。
本發(fā)明具有下述技術(shù)效果
1. 本發(fā)明改傳統(tǒng)的化學(xué)降解法、物理降解法及專一性酶解法為非專一性酶解 法，即利用纖維素酶及普魯蘭酶進(jìn)行降解，即克服了化學(xué)及物理降解法的缺 點(diǎn)，又降低了成本。
2. 本發(fā)明利用纖維素酶特異性切割P-1,4糖苷鍵從而可以切斷胡蘆巴膠分 子主鏈而達(dá)到降解的目的。
3. 本發(fā)明利用普魯蘭酶特異性切割a-l，6糖苷鍵從而可以切斷胡蘆巴膠分 子側(cè)鏈而達(dá)到降解的目的。
4. 本發(fā)明改傳統(tǒng)的利用一種酶進(jìn)行降解的方法為利用雙酶法進(jìn)行降解，即從 胡蘆巴膠的分子結(jié)構(gòu)入手，同時(shí)作用于主鏈與側(cè)鏈，達(dá)到降解的目的。
胡蘆巴半乳甘露聚糖，克服了產(chǎn)物分子量分布廣，干燥時(shí)間長(zhǎng)的缺點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明詳細(xì)說明。 雙酶法制備低分子量胡,巴半乳甘露聚糖的方法如下 將胡蘆巴膠精粉0. 5 ~ 1. 5g溶于lOOmLO. 2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶 液，用pH計(jì)調(diào)pH值為4.0-5.5，溶脹10 120niin，將溶液置于三頸瓶中， 邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為40~ 5G。C，加入纖維素酶5GG 5QGGU,降 解時(shí)間為l~4h。反應(yīng)終止后，將上述水解液逐漸滴入到大量的95%食用酒 精(水解液與95%食用酒精的體積比為1:5-10)中沉淀，靜置24小時(shí)， 過濾，棄去上清液，將沉淀0. 5 ~ 1. 5g溶于lOOmLO. 1 ~ 0. 2mol/mL磷酸氳二
鈉-檸檬酸緩沖溶液，用pH計(jì)調(diào)pH值為4. 0 ~ 6. 0，溶脹10 ~ 120min,將溶液
置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為50~65°C，加入普魯蘭酶
的量為1000 ~ 5000ASPU,降解時(shí)間為l~8h。反應(yīng)終止后，將上述水解液于
等體積1~8%三氯乙酸混合靜止4~12小時(shí)，離心除去沉淀，并重復(fù)一次。
將上清液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的體積
比為1:5-10)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，濾餅用無水乙醇
及丙酮各洗滌一次，過濾后沉淀真空干燥，得低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖，
黏均分子量為40000 - 55000。 實(shí)施例1
將胡蘆巴膠精粉0. 5g溶于lOOmLO. 2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用 pH計(jì)調(diào)pH值為4.4,溶脹10min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加 熱至降解溫度為4(TC，加入纖維素酶500U，降解時(shí)間為1.5h。反應(yīng)終止后， 將上述水解液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的 體積比為1:5)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，將沉淀1.5g溶 于lOOmLO. 1 ~ 0. 2mol/mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，用pH計(jì)調(diào)pH值為
4. 6,溶脹10min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為55
。C，加入普魯蘭酶的量為1500ASPU，降解時(shí)間為2h。反應(yīng)終止后，將上述
水解液于等體積1%三氯乙酸混合靜止12小時(shí)，離心除去沉淀，并重復(fù)一次。
將上清液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的體積
比為1:5)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，濾餅用無水乙醇及丙
酮各洗滌一次，過濾后沉淀真空干燥，得低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖，黏
均分子量為55000。 實(shí)施例2
將胡，巴膠精粉0. 8g溶于lOOmLO. 2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用 pH計(jì)調(diào)pH值為5. 0,溶脹20min，將溶液置于三頸^f瓦中，邊攪拌邊水浴加 熱至降解溫度為5(TC,加入纖維素酶1000U，降解時(shí)間為2h。反應(yīng)終止后， 將上述水解液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的 體積比為1:6)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，將沉淀1.2g溶 于lOOmLO. 1 ~ 0. 2mol/mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，用pH計(jì)調(diào)pH值為
5. 2，溶脹20min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為60
。C，加入普魯蘭酶的量為1500ASPU,降解時(shí)間為3h。反應(yīng)終止后，將上述
水解液于等體積2%三氯乙酸混合靜止10小時(shí)，離心除去沉淀，并重復(fù)一次。
將上清液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的體積
比為1:6)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，濾餅用無水乙醇及
丙酮各洗滌一次，過濾后沉淀真空干燥，得低分子量胡,巴半乳甘露聚糖，
黏均分子量為52000。 實(shí)施例3
將胡,巴膠精粉1. 0g溶于lOOmLO. 2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用
pH計(jì)調(diào)pH值為5.4，溶脹40min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加
熱至降解溫度為45。C，加入纖維素酶2000U,降解時(shí)間為3h。反應(yīng)終止后，
將上述水解液逐漸滴入到大量的95 %食用酒精(水解液與95 %食用酒精的
體積比為1:7)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，將沉淀l. Og溶
于lOOmLO. 1 ~ 0. 2mol/mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，用pH計(jì)調(diào)pH值為
5.8，溶脹40min，將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為65
。C,加入普魯蘭酶的量為2500ASPU,降解時(shí)間為4h。反應(yīng)終止后，將上述
水解液于等體積3%三氯乙酸混合靜止8小時(shí)，離心除去沉淀，并重復(fù)一次。
將上清液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的體積
比為1:7)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，濾餅用無水乙醇及
丙酮各洗滌一次，過濾后沉淀真空干燥，得低分子量胡,巴半乳甘露聚糖，
翻均分子量為50000。 實(shí)施例4
將胡,巴膠精粉1. 2g溶于lOOmLO. 2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用 pH計(jì)調(diào)pH值為5.0，溶脹60min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加 熱至降解溫度為45°C，加入纖維素酶3000U，降解時(shí)間為1.5h。反應(yīng)終止 后，將上述水解液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒 精的體積比為1: 5 )中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，將沉淀0. 8g 溶于lOOmLO. 1 ~ 0. 2mol/mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，用pH計(jì)調(diào)pH值為 5. 2，溶脹60min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為65 。C,加入普魯蘭酶的量為2000ASPU,降解時(shí)間為2h。反應(yīng)終止后，將上述 水解液于等體積4%三氯乙酸混合靜止6小時(shí)，離心除去沉淀，并重復(fù)一次。
將上清液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的體積
比為1:5)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，濾餅用無水乙醇及
丙酮各洗滌一次，過濾后沉淀真空干燥，得低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖，
黏均分子量為48000。 實(shí)施例5
將胡,巴膠精粉1. 5g溶于lOOmLO. 2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用
pH計(jì)調(diào)pH值為5. 4，溶脹80min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加
熱至降解溫度為40。C,加入纖維素酶5000U，降解時(shí)間為2h。反應(yīng)終止后，
將上述水解液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的
體積比為1:6)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，將沉淀0.5g溶
于lO(hnLO. 1 ~ 0. 2mol/mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，用pH計(jì)調(diào)pH值為
5. 8,溶脹80min，將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為55
。C，加入普魯蘭酶的量為2000ASPU,降解時(shí)間為4h。反應(yīng)終止后，將上述
水解液于等體積5°/ 三氯乙酸混合靜止4小時(shí)，離心除去沉淀，并重復(fù)一次。
將上清液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的體積
比為1:6)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，濾餅用無水乙醇及
丙酮各洗滌一次，過濾后沉淀真空干燥，得低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖，
黏均分子量為49000。 實(shí)施例6
將胡,巴膠精粉1. 0g溶于lOOmLO, 2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用 pH計(jì)調(diào)pH值為4. 4，溶脹100min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加 熱至降解溫度為5(TC，加入纖維素酶1500U,降解時(shí)間為3h。反應(yīng)終止后， 將上述水解液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的 體積比為1:7)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，將沉淀O. 8g溶 于100mL0. 1 ~ 0. 2mol/mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，用pH計(jì)調(diào)pH值為 4. 6，溶脹100min，將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為 60°C,加入普魯蘭酶的量為5000ASPU,降解時(shí)間為5h。反應(yīng)終止后，將上 述水解液于等體積6%三氯乙酸混合靜止8小時(shí)，離心除去沉淀，并重復(fù)一 次。將上清液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的 體積比為1:7)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，濾餅用無水乙
醇及丙酮各洗滌一次，過濾后沉淀真空干燥，得低分子量胡蘆巴半乳甘露聚
糖，黏均分子量為45000。 實(shí)施例7
將胡,巴膠精粉0. 5g溶于lOOmLO. 2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用
pH計(jì)調(diào)pH值為5.4，溶脹120min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加
熱至降解溫度為50°C，加入纖維素酶2000U，降解時(shí)間為1.5h。反應(yīng)終止
后，將上述水解液逐漸滴入到大量的95 %食用酒精(水解液與95 %食用酒
精的體積比為1: 8 )中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，將沉淀1. 0g
溶于lOOmLO. 1 ~ 0. 2mol/mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，用pH計(jì)調(diào)pH值為
5. 8，溶脹120min，將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為
60°C,加入普魯蘭酶的量為2500ASPU,降解時(shí)間為2h。反應(yīng)終止后，將上
述水解液于等體積7%三氯乙酸混合靜止10小時(shí)，離心除去沉淀，并重復(fù)一
次。將上清液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的
體積比為1:8)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，濾餅用無水乙
醇及丙酮各洗滌一次，過濾后沉淀真空干燥，得低分子量胡,巴半乳甘露聚
糖，黏均分子量為43000。 實(shí)施例8
將胡,巴膠精粉0. 8g溶于lOOmLO. 2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用 pH計(jì)調(diào)pH值為4.4，溶脹50min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加 熱至降解溫度為45。C，加入纖維素酶2000U，降解時(shí)間為2h。反應(yīng)終止后， 將上述水解液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的 體積比為1:9)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，將沉淀1.2g溶 于lOOmLO. 1 ~ 0. 2mol/mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，用pH計(jì)調(diào)pH值為 4.6，溶脹50min，將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為65 。C，加入普魯蘭酶的量為2500ASPU,降解時(shí)間為4h。反應(yīng)終止后，將上述 水解液于等體積8°/ 三氯乙酸混合靜止12小時(shí)，離心除去沉淀，并重復(fù)一次。 將上清液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的體積 比為1:9)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，濾餅用無水乙醇及 丙酮各洗滌一次，過濾后沉淀真空干燥，得低分子量胡，巴半乳甘露聚糖， 黏均分子量為45000。
實(shí)施例9
將胡,巴膠精粉1. 5g溶于lOOmLO. 2mol/mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，用 pH計(jì)調(diào)pH值為5.Q,溶脹90min，將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加 熱至降解溫度為4(TC，加入纖維素酶5000U,降解時(shí)間為4h。反應(yīng)終止后， 將上述水解液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的 體積比為1:10)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，將沉淀1.5g 溶于lOOmLO. 1 ~ 0. 2mol/mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，用pH計(jì)調(diào)pH值為 5. 2，溶脹90min,將溶液置于三頸瓶中，邊攪拌邊水浴加熱至降解溫度為55 。C,加入普魯蘭酶的量為5000ASPU,降解時(shí)間為5h。反應(yīng)終止后，將上述 水解液于等體積5°/ 三氯乙酸混合靜止6小時(shí)，離心除去沉淀，并重復(fù)一次。 將上清液逐漸滴入到大量的95%食用酒精(水解液與95%食用酒精的體積 比為1:10)中沉淀，靜置24小時(shí)，過濾，棄去上清液，濾餅用無水乙醇及 丙酮各洗滌一次，過濾后沉淀真空干燥，得低分子量胡,巴半乳甘露聚糖， 黏均分子量為47000。
盡管參照實(shí)施例對(duì)所公開的涉及雙酶法制備低分子量胡，巴半乳甘露聚 糖的方法進(jìn)行了特別描述，以上描述的實(shí)施例是說明性的而不是限制性的， 在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，所有的變化和修改都在本發(fā)明的范 圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1、一種雙酶法制備低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖的方法，其特征在于，包括下述步驟:步驟一:用緩沖溶液配制胡蘆巴膠溶液，溶脹后加入纖維素酶，控制降解溫度及時(shí)間進(jìn)行降解。步驟二:終止降解后經(jīng)乙醇沉淀，靜置，過濾，得纖維素酶降解產(chǎn)物。步驟三:用緩沖溶液將步驟一降解產(chǎn)物配制成溶液，溶脹后加入普魯蘭酶，控制降解溫度及時(shí)間進(jìn)行降解。步驟四:終止降解后，進(jìn)行脫蛋白處理。步驟五:經(jīng)乙醇沉淀，靜置，過濾，洗滌，真空干燥，得雙酶降解產(chǎn)物胡蘆巴半乳甘露聚糖，測(cè)定其黏均分子量。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖的制備方法，其特 征在于，所述緩沖溶液為乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，pH值為4.0-5.5，胡蘆巴 膠溶液濃度為0. 5~1.5%，溶脹時(shí)間為10-120min。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖的制備方法，其特 征在于，所述加入纖維素酶的量為500 - 5000U (U為酶活力單位)，降解溫 度為40 5(TC，降解時(shí)間為l 4h。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的低分子量胡，巴半乳甘露聚糖的制備方法，其特 征在于，所述醇沉所用濃度為95%的食用酒精，它與水解液的體積比為5 10:1，靜置24h，過濾后，收集沉淀。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖的制備方法，其特 征在于，所述緩沖溶液為磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液，pH值為4. 0 ~ 6. 0, ;容液濃度為0. 5 ~ 1. 5%，溶月長(zhǎng)時(shí)間為10~ 120min。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖的制備方法，其特 征在于，所述加入普魯蘭酶的量為1000 ~ 5000ASPU (ASPU為酶活力單位)， 降解溫度為50~65°C，降解時(shí)間為l-8h。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的低分子量胡,巴半乳甘露聚糖的制備方法，其特 征在于，所述脫蛋白處理是指向水解液中加入等體積的1 ~ 8%三氯乙酸溶液, 室溫靜置4 ~ 12小時(shí)后過濾，之后所得上清液再按照上述方法處理一次。
8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的低分子量胡，巴半乳甘露聚糖的制備方法， 其特征在于，所述要求與步驟四相同，收集過濾后的沉淀用無水乙醇、丙酮 洗滌過濾后，沉淀真空干燥，得到雙酶法水解后的低分子量的胡蘆巴半乳甘 露聚糖，產(chǎn)物翻均分子量根據(jù)特性黏度法推算，使用烏式黏度計(jì)(上海玻璃 儀器一廠)測(cè)定特性黏度，從而推算出翻均分子量。
全文摘要
本發(fā)明公開一種利用纖維素酶和普魯蘭酶制備低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖的方法，其工藝流程為纖維素酶降解、醇沉、普魯蘭酶降解、脫蛋白、醇沉、過濾、洗滌、干燥。首先按純化后的胡蘆巴膠精粉∶纖維素酶為(0.5～1.5g)∶(500～5000U酶活單位)比例加入纖維素酶，酶解終止后用乙醇沉淀得降解產(chǎn)物；再按纖維素降解產(chǎn)物∶普魯蘭酶為(0.5～1.5g)∶(1000～5000ASPU酶活單位)比例加入普魯蘭酶，降解完畢后脫蛋白，用乙醇沉淀，過濾，洗滌、沉淀真空干燥，得粘均分子量為50000左右的低分子量胡蘆巴半乳甘露聚糖。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有操作方便、成本低、反應(yīng)過程容易控制的特點(diǎn)，而且所得低分子量的胡蘆巴半乳甘露聚糖水溶性增強(qiáng)，在食品和醫(yī)藥工業(yè)具有廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C12P19/04GK101381749SQ20071005946
公開日2009年3月11日 申請(qǐng)日期2007年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月3日
發(fā)明者茜 孫, 張黎明, 王兆博, 王玲玲, 謝偉光 申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)