專利名稱：外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種，特別是涉及一種外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
DNA、蛋白質(zhì)是構(gòu)成生命基礎(chǔ)物質(zhì)的重要生物大分子。近年來研究證實(shí)，生物包括人類的早衰、壽命縮短、患皮炎、血液病、腫瘤、癌癥與生物大分子的損傷有密切的聯(lián)系。研究證實(shí)紫外輻射、電離輻射、超聲波等物理因素以及光敏劑、自由基等化學(xué)因素等都可引發(fā)生物大分子的損傷。探尋可有效拮抗生物大分子損傷物質(zhì)成為近年來生物學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、化學(xué)、保健品等領(lǐng)域的熱點(diǎn)。目前已有多種從植物如沙棘、茶葉等提取物作為可有效修復(fù)生物大分子損傷功能的活性物質(zhì)的報(bào)道。這些活性物質(zhì)具有天然、效果好的特點(diǎn)，但原料價(jià)貴，提取過程需要溶劑浸提、分離純化，制備工藝及成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于提供一種毒性小的外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑的制備方法。 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是 本發(fā)明是一種外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑，其按質(zhì)量份的組分含量為
組分A :由4-0. 04%的a _N_氨基_D_葡萄糖或其衍生物、0. 65-0. 0005 %的高聚糖及其衍生物的水解酶類、4-0. 1%的乙酸或蟻酸和蒸餾水構(gòu)成； 組分B :由2-0. 01%的二元或三元有機(jī)酸、2_0. 001 %的小分子酚類及其酯類物質(zhì)或脂肪酸的衍生物構(gòu)成； 組分C :由0. 5-0. 001 %的水溶性2價(jià)銅鹽、0. 3_0. 001 %的水溶性鋅鹽或錳鹽構(gòu)成。 所述的a -N-氨基-D-葡萄糖為脫乙酰甲殼質(zhì)、可溶性甲殼質(zhì)、幾丁聚糖、脫乙酰幾丁質(zhì)；聚氨基葡糖中的一種；所述的a-N-氨基-D-葡萄糖衍生物為羧甲基殼聚糖、羧基殼聚糖、殼聚糖羥烷基衍生物、殼聚糖?；苌?、殼聚糖磺化衍生物中的一種。
所述的高聚糖及其衍生物的水解酶類為甲殼素酶、殼聚糖酶、溶菌酶、a-淀粉酶以及一些非專一性水解酶中的一種。 所述的二元或三元有機(jī)酸為琥珀酸、檸檬酸中的一種。 所述的小分子酚類及其酯類物質(zhì)為鄰羥基苯甲酸、水楊酸甲酯；所述的脂肪酸的衍生物為茉莉酸、茉莉酸甲酯中的一種。 所述的水溶性2價(jià)銅鹽為硫酸銅或氯化銅；所述的水溶性鋅鹽為硫酸鋅、氯化鋅、或錳鹽為硫酸錳、氯化錳。
—種外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑的制備方法，包括以下步驟(l)組分A
3的制備，在100g蒸餾水中，加入乙酸或蟻酸，攪勻，依次加入a -N-氨基-D-葡萄糖或其 衍生物和高聚糖及其衍生物的水解酶類，并攪拌至溶解，于60-15t:酶解4-25h，常溫放置 l-10h ; (2)加入組分B，即，二元或三元有機(jī)酸與小分子酚類及其酯類物質(zhì)或脂肪酸的衍生 物的混合物，攪拌至溶；(3)加入組分C，水溶性2價(jià)銅鹽與水溶性鋅鹽或錳鹽的混合物，充 分?jǐn)嚢?. 5-6h，水浴30-9(TC靜置8-36h，再于室溫靜置3_10h后過濾；(4)濾液即得成品。
采用上述方案后，由于本發(fā)明以資源極其豐富的天然多分子多糖的降解產(chǎn) 物-N-乙?；?13 -氨基葡萄糖為主原料，輔以小分子的有機(jī)酸、酚類及它們的衍生物、普通 的無機(jī)鹽類為原料，以簡易工藝制備出具有天然金屬模擬酶(SOD)活性的可有效拮抗DNA、 蛋白生物大分子的外源性損傷(紫外、光敏、活性自由基損傷)的外源模擬酶型生物分子 (DNA蛋白)損傷拮抗劑。具有原料易得、工藝簡單、無毒的特點(diǎn)。將在生物的抗輻射、抗病 等相關(guān)領(lǐng)域如農(nóng)業(yè)、輕工業(yè)、化妝品等領(lǐng)域具有廣泛的潛在應(yīng)用前景。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
具體實(shí)施方式

—、組分 本發(fā)明是一種外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑，其按質(zhì)量份的組分含量為
實(shí)施例1 :組分A是由0.03X的a-N-氨基-D-葡萄糖、0.02X甲殼素酶、體積分 數(shù)2.5%的乙酸、其余為水組成。組分B是由0.015%丁二酸、0.015%鄰羥基苯甲酸；組分 C是由0. 03%的硫酸銅、0. 001%的硫酸鋅構(gòu)成。 實(shí)施例2 :組分A是由0.02%的幾丁聚糖、0.01%殼聚糖酶、體積分?jǐn)?shù)0. 2%的乙 酸、其余為水組成。組分B是由0. 015%檸檬酸、0. 002%鄰羥基苯甲酸；組分C是由0. 02% 的氯化銅、0. 001 %的硫酸錳構(gòu)成。 實(shí)施例3 :組分A是由0. 025%的殼聚糖?；苌?、0. 003% a-淀粉酶、體積分 數(shù)0.02%的甲酸、其余為水組成。組分B是由0.025%丁二酸、0.004%水楊酸甲酯；組分C 是由0. 025%的硫酸銅、0. 002%的硫酸鋅構(gòu)成。
二、制備方法
制備方法1 : 組分A的制備，在盛有100g蒸餾水的錐形瓶中，加入2. 5ml冰醋酸，攪勻，依次加 入0.03克a-N-氨基-D-葡萄糖、0. 02%甲殼素酶。攪拌至溶解，于5(TC水浴酶解18h。常 溫放置5h ;(2)加入組分B，即由0.015g丁二酸、0.015g鄰羥基苯甲酸的混合物，攪拌至溶； (3)加入組分C，即由0. 03 %的硫酸銅、0. 001 %的硫酸鋅構(gòu)成的混合物，充分?jǐn)嚢?. 5h，水 浴5(TC靜置9h，再于室溫靜置3h后過濾；(4)濾液即為成品。
制備方法2 : 將一定量體積分?jǐn)?shù)為2%的醋酸加入帶攪拌的夾層反應(yīng)器中，攪拌下依次加入脫 乙酰度90%、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 2%的幾丁聚糖及0. 01 %殼聚糖酶，攪拌1. 8h后，于5(TC水 浴酶解反應(yīng)10h，取出于室溫靜置6h。再依次加入組分B(由質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.015%檸檬酸、 0. 002%鄰羥基苯甲酸組成的混合物)、組分C(由質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 02%的氯化銅、0. 001 %的 硫酸錳組成的混合物)，將反應(yīng)體系充分?jǐn)嚢?. 5h后，加熱至6(TC，保溫9h，再室溫靜置 10h，仔細(xì)過濾，過濾出不溶物。濾液以水稀釋60倍即為成品。
制備方法3 : 將一定量體積分?jǐn)?shù)為2%的甲酸加入帶攪拌的夾層反應(yīng)器中，攪拌下依次加入質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為0. 025%的殼聚糖?；苌锛?. 003% a-淀粉酶，攪拌lh后，于45。C水浴酶 解反應(yīng)15h，取出于室溫靜置4h。再依次加入組分B(由質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.015X檸檬酸、0. 002% 鄰羥基苯甲酸組成的混合物)、組分C(由質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 025%硫酸銅、0. 004%硫酸鋅組成 的混合物)，將反應(yīng)體系充分?jǐn)嚢?. 5h后，加熱至80°C ，保溫12h，再室溫靜置7h，過濾。濾 液以水稀釋30倍即為成品。
制備方法4 : 將一定量體積分?jǐn)?shù)為0. 2%的乙酸加入帶攪拌的夾層反應(yīng)器中，攪拌下依次加入 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 025%的羧基殼聚糖及0. 002% a-淀粉酶，攪拌1. 5h后，于5(TC水浴酶解反 應(yīng)18h，室溫靜置3h。依次將組分B(由質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 002%擰檬酸、0. 005%鄰羥基苯甲酸 組成的混合物)、組分C(由質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O. 02%硫酸銅、0. 005%氯化錳的混合物)加入其 中，充分?jǐn)噭?，加熱?0°C ，保溫8h后室溫靜置3h，過濾。濾液以水稀釋65倍即為成品。
三、試驗(yàn)證據(jù)
SDS-PAG試驗(yàn)證據(jù) 以365nm紫外光為輻照源，lmM蒽醌_2_磺酸鈉為光敏劑，對該拮抗劑與0. 25mM 蛋白質(zhì)(溶菌酶)水溶液體系進(jìn)行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳。多次SDS-PAG 實(shí)驗(yàn)表明以Marker作為對照，0. 25mM蛋白質(zhì)(溶菌酶)+lmM AQS混合二元體系在365nm 處光照90min，蛋白質(zhì)分子量顯著變大，表明蛋白質(zhì)發(fā)生了明顯的交聯(lián)反應(yīng)。同樣條件下， 0. 25mM溶菌酶+lmM AQS+拮抗劑(稀釋10-20倍的水溶液)體系中，蛋白質(zhì)的交聯(lián)反應(yīng)卻 基本消失，損傷明顯變小。說明該拮抗劑可有效拮抗蛋白質(zhì)(溶菌酶)的光敏損傷。
SDS-PAGE試驗(yàn)證據(jù) 以254nm紫外光為輻照源，5uL DNA (小牛胸腺DNA， 0. 3ug/uL) +7uLD. D. W.(超 純水)為對照，分別對0. 3ug/uL DNA (小牛胸腺DNA， 5uL) —元水溶液體系、0. 3ug/uL DNA (5uL) +拮抗劑(原液稀釋200倍，7uL) 二元體系紫外照射30min后，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電 泳(SDS-PAG)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，未加適宜濃度拮抗劑的DNA —元體系，經(jīng)254nm紫外光輻照 30min后DNA被降解；而同樣濃度DNA與適宜濃度的拮抗劑二元水溶液混合體系，在同樣條 件下進(jìn)行輻照，體系中的DNA卻未顯示明顯的損傷效應(yīng)說明該拮抗劑可有效拮抗DNA的紫 外輻射損傷。
權(quán)利要求
一種外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑，其特征在于其按質(zhì)量份的組分含量為組分A由4-0.04％的α-N-氨基-D-葡萄糖或其衍生物、0.65-0.0005％的高聚糖及其衍生物的水解酶類、4-0.1％的乙酸或蟻酸和蒸餾水構(gòu)成；組分B由2-0.01％的二元或三元有機(jī)酸、2-0.001％的小分子酚類及其酯類物質(zhì)或脂肪酸的衍生物構(gòu)成；組分C由0.5-0.001％的水溶性2價(jià)銅鹽、0.3-0.001％的水溶性鋅鹽或錳鹽構(gòu)成。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑及其制備方法，其特征在于所述的a -N-氨基-D-葡萄糖為脫乙酰甲殼質(zhì)、可溶性甲殼質(zhì)、幾丁聚糖、脫乙酰幾丁質(zhì)；聚氨基葡糖中的一種；所述的a-N-氨基-D-葡萄糖衍生物為羧甲基殼聚糖、羧基殼聚糖、殼聚糖羥烷基衍生物、殼聚糖?；苌铩ぞ厶腔腔苌镏械囊环N。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑，其特征在于所述的高聚糖及其衍生物的水解酶類為甲殼素酶、殼聚糖酶、溶菌酶、3_淀粉酶以及一些非專一性水解酶中的一種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑，其特征在于所述的二元或三元有機(jī)酸為琥珀酸、檸檬酸中的一種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑，其特征在于所述的小分子酚類及其酯類物質(zhì)為鄰羥基苯甲酸、水楊酸甲酯；所述的脂肪酸的衍生物為茉莉酸、茉莉酸甲酯中的一種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑及其制備方法，其特征在于所述的水溶性2價(jià)銅鹽為硫酸銅或氯化銅；所述的水溶性鋅鹽為硫酸鋅、氯化鋅、或錳鹽為硫酸錳、氯化錳。
7. —種根據(jù)權(quán)利要求1所述的外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟(l)組分A的制備，在100g蒸餾水中，加入乙酸或蟻酸，攪勻，依次加入a -N-氨基-D-葡萄糖或其衍生物和高聚糖及其衍生物的水解酶類，并攪拌至溶解，于60-15t:酶解4-25h，常溫放置l-10h ;(2)加入組分B， S卩，二元或三元有機(jī)酸與小分子酚類及其酯類物質(zhì)或脂肪酸的衍生物的混合物，攪拌至溶；(3)加入組分C，水溶性2價(jià)銅鹽與水溶性鋅鹽或錳鹽的混合物，充分?jǐn)嚢?. 5-6h，水浴30-9(TC靜置8-36h，再于室溫靜置3_10h后過濾；(4)濾液即得成品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑，它由α-N-氨基-D-葡萄糖或其衍生物、高聚糖及其衍生物的水解酶類、乙酸或蟻酸和蒸餾水、二元或三元有機(jī)酸、小分子酚類及其酯類物質(zhì)或脂肪酸的衍生物構(gòu)成、水溶性2價(jià)銅鹽、水溶性鋅鹽或錳鹽構(gòu)成。由于本發(fā)明以資源極其豐富的天然多分子多糖的降解產(chǎn)物-N-乙酰基-β-氨基葡萄糖為主原料，輔以小分子的有機(jī)酸、酚類及它們的衍生物、普通的無機(jī)鹽類為原料，以簡易工藝制備出具有天然金屬模擬酶(SOD)活性的可有效拮抗DNA、蛋白生物大分子的外源性損傷的外源模擬酶型生物分子損傷拮抗劑，具有原料易得、工藝簡單、無毒的特點(diǎn)。
文檔編號A61K33/32GK101785785SQ201010044838
公開日2010年7月28日 申請日期2010年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月12日
發(fā)明者馬建華 申請人:集美大學(xué)