專利名稱：細胞培養(yǎng)方法以及使用該方法的自動培養(yǎng)裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及細胞培養(yǎng)方法以及實行該方法的細胞培養(yǎng)裝置，特別是涉 及不使雜菌等混入(污染)人體的培養(yǎng)細胞而可以得到大量的培養(yǎng)細胞的 細胞培養(yǎng)方法以及自動細胞培養(yǎng)裝置。
背景技術(shù)：
近年來，大量報道了有關(guān)使人體已損傷的組織或功能已降低的臟器等 再生的再生醫(yī)療的研究。在再生醫(yī)療中，需要大量構(gòu)成人體組織或臟器的 細胞，再生醫(yī)療所需要的細胞可以使用人工培養(yǎng)的培養(yǎng)細胞。
作為以往的與細胞培養(yǎng)有關(guān)的裝置，有如同專利文獻1所公開的那樣 可以對培養(yǎng)室內(nèi)的溫度、氣體濃度等氣氛進行控制的培養(yǎng)裝置、和如同專
利文獻2所公開的除了控制培養(yǎng)室內(nèi)的氣氛之外還可以控制培養(yǎng)組織向 培養(yǎng)容器的投入、培養(yǎng)藥劑的給排、進而可以控制培養(yǎng)室內(nèi)的氣氛的自動 培養(yǎng)裝置。
專利文獻1:日本專利第3021789號公報 專利文獻2:國際公開WO2005/059091號公報
在上述以往的培養(yǎng)裝置的前者，培養(yǎng)器內(nèi)培養(yǎng)基的更換、為了得到大 量的培養(yǎng)細胞而調(diào)節(jié)細胞密度的傳代培養(yǎng)等作業(yè)都是通過研究者等的手 工作業(yè)進行的。在是該裝置的情況下，例如對于培養(yǎng)基更換或傳代等作業(yè)， 在作業(yè)者打開裝置的門之后，在注意不要使菌混入到培養(yǎng)器內(nèi)的同時，拿 起培養(yǎng)皿等培養(yǎng)器的蓋，使用已滅菌的吸移管，非常注意地進行。另外， 在重復傳代培養(yǎng)的情況下，需要多次進行將增殖的培養(yǎng)細胞移植至多個培 養(yǎng)器中的作業(yè)，所以即便是熟練者，也有可能引起污染。
另一方面，就上述以往的培養(yǎng)裝置中的后者即自動培養(yǎng)裝置而言，如 前所述，也可以控制細胞的投入、培養(yǎng)藥劑的給排，進而還可以控制培養(yǎng)室內(nèi)的氣氛。但是，采用的方式是取出在培養(yǎng)裝置內(nèi)培養(yǎng)的細胞并在已注 入到容器內(nèi)的狀態(tài)下自動運送至裝置外，認為在取出培養(yǎng)細胞時的污染方 面還存在應(yīng)該解決的問題。
另外，在想要將人體的組織或臟器再生的情況下，需要大量的培養(yǎng)細 胞，但為了得到大量的培養(yǎng)細胞，需要將培養(yǎng)器大型化，需要增加從人體 取出的細胞的量。但是，如果將培養(yǎng)器大型化，則產(chǎn)生培養(yǎng)裝置當然也大 型化、設(shè)置空間增大的問題。另外，如果增加從人體取出的細胞的量，產(chǎn) 生對人體造成很大損傷的問題。
其中，作為與使草履蟲之類的實驗用細胞大量增殖的傳代培養(yǎng)技術(shù)有 關(guān)的文獻，有專利文獻3。關(guān)于在該專利文獻3中記載的技術(shù)，對于在填 充有培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)的培養(yǎng)細胞，提供新的培養(yǎng)基，對以前的培 養(yǎng)基和培養(yǎng)細胞的一部分進行沖洗，稀釋培養(yǎng)器內(nèi)的培養(yǎng)細胞。但是，本
技術(shù)是培養(yǎng)基沖洗后的細胞直接被供于測量，不適合大量獲得供于人體再 生醫(yī)療的純細胞。
專利文獻3:日本特開2004—208663號公報

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，對應(yīng)上述問題，提供能夠獲得大量在人體的再生 醫(yī)療中使用的培養(yǎng)細胞的細胞培養(yǎng)方法以及自動細胞培養(yǎng)裝置。
為了解決上述課題，本發(fā)明的培養(yǎng)方法包括 (1)將從人體取得的細胞和培養(yǎng)基注入到培養(yǎng)容器內(nèi)的步驟；(2) 進行放入有培養(yǎng)基和上述細胞的上述培養(yǎng)容器內(nèi)的換氣和培養(yǎng)基的更換， 并同時進行細胞培養(yǎng)的步驟；G)在對于上述培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)的培養(yǎng)細胞 進行了清洗之后，將上述已清洗的細胞殘留其一部分后將其從上述培養(yǎng)容 器內(nèi)回收到細胞回收容器的步驟；(4)對于在上述步驟(3)中殘留在上 述培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)細胞，注入培養(yǎng)基的步驟；和(5)反復實行上述步 驟(2)和步驟(4)的步驟。
另外，為了解決上述問題，本發(fā)明的自動培養(yǎng)裝置具有試劑供給單 元，其分開收納培養(yǎng)所必需的多種試劑；培養(yǎng)單元，其收納細胞培養(yǎng)容器; 回收單元，其回收在上述培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)的培養(yǎng)細胞；給排單元，其進行 向上述培養(yǎng)容器的細胞供給、試劑從上述試劑供給單元向上述培養(yǎng)容器的 供給、和培養(yǎng)細胞從上述培養(yǎng)容器向上述回收單元的排出；控制單元，其 對向上述培養(yǎng)容器的試劑供給動作、上述培養(yǎng)容器內(nèi)的細胞培養(yǎng)動作、和 培養(yǎng)細胞從上述培養(yǎng)容器的排出動作進行控制，具有對回收培養(yǎng)細胞時殘 留在上述培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)細胞進行包括基于上述給排單元的試劑供給 工序的細胞培養(yǎng)工序、和培養(yǎng)細胞的排出工序至少一次的機構(gòu)。
通過本發(fā)明，可以得到大量在人體的再生醫(yī)療中使用的培養(yǎng)細胞。


圖1是表示本發(fā)明的自動培養(yǎng)裝置的單元構(gòu)成的方框圖。
圖2是表示本發(fā)明的第一實施方式的自動培養(yǎng)裝置的大致構(gòu)成的方框圖。
圖3是本發(fā)明的第一實施方式的培養(yǎng)容器的立體圖。 圖4是圖3所示的培養(yǎng)容器的詳細側(cè)視圖。 圖5是表示培養(yǎng)容器的噴嘴配管部的剖視圖。 圖6是本發(fā)明的培養(yǎng)方法的流程圖。
圖7是表示本發(fā)明的第二實施方式的自動培養(yǎng)裝置的大致構(gòu)成的方 框圖。
具體實施例方式
(第一實施方式)
以下，參照

本發(fā)明，首先最先說明用實行本發(fā)明的細胞培養(yǎng) 方法的自動培養(yǎng)裝置的第一實施方式。
圖1是表示本發(fā)明的自動培養(yǎng)裝置的簡要構(gòu)成的方框圖。在圖1中， 200是分開收納人體細胞的細胞培養(yǎng)所必需的多種試劑的試劑供給單元， 其內(nèi)部構(gòu)成為可以將溫度保持成低于常溫的規(guī)定溫度范圍以便所收納的 試劑不會劣化。300是培養(yǎng)單元，在內(nèi)部收納有培養(yǎng)容器。400是回收單 元，是對培養(yǎng)單元內(nèi)培養(yǎng)的細胞或使用完的試劑進行回收的單元。500是 在試劑供給單元200和培養(yǎng)單元300和回收單元之間使試劑或細胞供給、 排出的給排單元。600是環(huán)境保護單元，是對從試劑供給單元200向培養(yǎng) 器供給的試劑的溫度或培養(yǎng)單元300內(nèi)的溫度、二氧化碳氣體(C02)濃 度進行控制的單元。700是用于觀察在培養(yǎng)單元300內(nèi)收納的培養(yǎng)器內(nèi)的 細胞培養(yǎng)狀態(tài)的觀察單元，具有顯微鏡、顯微鏡的移動裝置、或照射培養(yǎng) 容器內(nèi)的照明器具。800是對上述回收單元400、給排單元500、環(huán)境保 護單元600、觀察單元700進行控制的中央運算處理單元(CPU)。 900是 具有輸入對自動培養(yǎng)裝置的操作指令的操作器、或顯示由上述觀察單元 700得到的圖像的監(jiān)視器等的操作單元。
接著，參照附圖2對上述單元進行詳細說明。
試劑供給單元200具有具有可以開閉的蓋的收納盒(省略圖示)、 和在該收納盒的內(nèi)部通過支承構(gòu)件配置在規(guī)定位置的多個(在圖示例中為 3個)的試劑收容用的試劑袋5、 7、 9。對于收納盒，為了放置放入到試 劑袋5、 7、 9內(nèi)的試劑的劣化，具有用于將試劑袋的收容空間與外部阻斷 且將收容試劑袋的空間維持在規(guī)定溫度的絕熱材料。試劑袋5、 7、 9優(yōu)選 使用由具有可以折疊的柔性并對細胞不具有毒性的材料形成的輸液袋。具 體而言，例如優(yōu)選使用氯乙烯制、或硅橡膠制的袋。其中，在試劑袋5、 7、 9中各自分開收容有培養(yǎng)所必需的試劑，在該例中為清洗液、剝離劑、 培養(yǎng)基。其中，在試劑袋7中收容的剝離劑是在以具有粘附性細胞為培養(yǎng) 對象時所必需的試劑，在培養(yǎng)對象是具有游離性的細胞的情況下，不需要 剝離劑。
培養(yǎng)單元300具有作為恒溫槽的培養(yǎng)箱3、和在培養(yǎng)箱3內(nèi)收納的培 養(yǎng)容器l。培養(yǎng)箱3與試劑供給單元200—樣具有可以開閉的蓋，可以通 過關(guān)閉蓋來密閉內(nèi)部。此外，培養(yǎng)箱3在面對培養(yǎng)容器1的底面具有由透 明材料形成的觀察窗，可以從培養(yǎng)箱3的外部觀察到培養(yǎng)容器1。另外， 培養(yǎng)箱3通過后述的加熱器進行恒溫控制以使內(nèi)部具有規(guī)定溫度。為此， 為了提高加熱器的加熱效率，除了上述觀察窗的周圍優(yōu)選用絕熱材料覆 蓋。培養(yǎng)容器1是對從人體取出的細胞進行培養(yǎng)的設(shè)備，是使用對細胞沒 有毒性的材料且具有透光性的材料例如聚苯乙烯或聚對苯二甲酸乙二醇 酯進行成形得到的設(shè)備。另外，培養(yǎng)容器1是將容器的內(nèi)部相對于外部空 間維持成密閉狀態(tài)，以使插入到內(nèi)部的細胞或所培養(yǎng)的細胞不會與雜菌污
染。為此，安裝在培養(yǎng)容器l的管類的容器安裝部中實施了密封。
回收單元400具有對在培養(yǎng)容器1內(nèi)培養(yǎng)的培養(yǎng)細胞進行回收的多
個(在本例中為3個)細胞回收袋11、 13、 15，對以使用完的試劑進行 回收的廢液容器65，對細胞回收袋ll、 13、 15的管狀注入部進行熱密封 的公知的熱密封裝置66。細胞回收袋ll、 13、 15與試劑袋5、 7、 9一樣， 優(yōu)選使用由具有可以折疊的柔軟性且對細胞沒有毒性的材料形成的輸液 袋。具體而言，例如優(yōu)選使用氯乙烯制、或硅橡膠制的袋。此外，各細胞 回收袋11、 13、 15的大小優(yōu)選其收納量為能夠收納一次培養(yǎng)中在培養(yǎng)容 器l內(nèi)培養(yǎng)的細胞的量。另外，回收單元400所具有的細胞回收袋的數(shù)量 在本例中為3個，但優(yōu)選該數(shù)量至少為在培養(yǎng)容器1內(nèi)連續(xù)多次反復對同 一組織細胞僅僅進行培養(yǎng)的數(shù)量。
給排單元500具有用于向培養(yǎng)容器l內(nèi)供給試劑、細胞、空氣的供 給泵35，從培養(yǎng)容器1內(nèi)排出所培養(yǎng)的細胞或已使用完的試劑的排出泵 61，形成試劑袋5、 7、 9和培養(yǎng)容器1之間的流道的送液管23、 25、 27、 29，連接上述送液管29和設(shè)置在培養(yǎng)箱3內(nèi)的后述過濾器37的氣體管 38，連接上述送液管29和儲液容器43的細胞注入管39，連接設(shè)置培養(yǎng) 箱3的內(nèi)部的過濾器77和培養(yǎng)容器1的內(nèi)部空間的氣體交換管75，和設(shè) 置在上述配管系統(tǒng)上的套筒節(jié)流閥17、 19、 21、 33、 40。儲液容器43中 貯留從活體取出且與培養(yǎng)基等成為懸浮狀態(tài)的細胞，開口部被具有柔軟性 的薄膜45覆蓋。成為儲液容器43的蓋的膜45的設(shè)置是為了穿刺進入上 述懸浮狀態(tài)的細胞的注射器41。因此，膜45優(yōu)選為了不使雜菌等混入到 儲液容器43內(nèi)而具有將注射器41的穿刺痕密閉那樣的柔軟性且具有規(guī)定 厚度。
進而，給排單元500具有用于排出培養(yǎng)容器l內(nèi)的培養(yǎng)細胞或已使 用完的試劑的排出泵61，形成培養(yǎng)容器l和細胞回收袋ll、 13、 15以及 廢液容器65之間的流道的排出管53、 55、 57、 59，設(shè)置在上述排出流道 上的套筒節(jié)流閥47、 49、 51、 53。在本實施方式中，套筒節(jié)流閥使用能 夠壓死具有柔軟性的管且封閉流道的電磁驅(qū)動式開閉閥。另外，供給泵和 排出泵使用將具有柔軟性的管巻成排列成圓筒狀的多個巻筒并旋轉(zhuǎn)多個 巻筒將管內(nèi)的流體擠出的所謂變薄泵。
環(huán)境保護單元600具有在使試劑從收納剝離劑以及培養(yǎng)基的試劑袋
19、 21流向培養(yǎng)容器1的送液管29的一部分設(shè)置的加熱器31，和雖省略 圖示但設(shè)置在培養(yǎng)箱3的內(nèi)部的加熱器、溫度傳感器、二氧化碳氣體(C02) 傳感器等。另外，在培養(yǎng)箱3上連接有C02供給管，該C02供給管與C02 壓縮瓶連接。加熱器31在向培養(yǎng)容器1供給剝離劑、培養(yǎng)基的過程中進 行加熱。此外，設(shè)置在培養(yǎng)箱3內(nèi)的加熱器和溫度傳感器將培養(yǎng)容器1內(nèi) 的溫度維持在規(guī)定溫度。另外，C02傳感器檢測出培養(yǎng)箱3的內(nèi)部的C02 濃度。
觀察單元700具有設(shè)置在培養(yǎng)箱3的觀察窗的外部且用于觀察培養(yǎng) 容器1內(nèi)的細胞培養(yǎng)狀態(tài)的顯微鏡39、設(shè)置成夾持培養(yǎng)容器1且與顯微 鏡1對向的照明用的光源(省略圖示)、在與培養(yǎng)容器1的底面平行的平 面內(nèi)二維移動上述顯微鏡89的顯微鏡移動裝置(省略圖示)。顯微鏡89 包括可以將已拍攝的圖像信息作為電信號輸出的相機例如CCD相機而構(gòu) 成。顯微鏡移動裝置交叉配置由發(fā)動機和線形運動引導裝置的組合構(gòu)成的 移動裝置，通過使各發(fā)動機分開或連動，可以使顯微鏡向任意位置移動。
中央運算處理單元800根據(jù)從后述的操作單元900輸入的培養(yǎng)條件， 對上述回收單元400、給排單元500、環(huán)境保護單元600、觀察單元700 進行控制，由CPU構(gòu)成。CPU800具有ROM，該ROM中儲存有對后述 的裝置的動作進行控制的軟件。
操作單元900具有自動培養(yǎng)裝置的動作(培養(yǎng))條件的輸入用操作 器、顯示從該操作器輸入的動作條件或由上述顯微鏡89拍攝的圖像的監(jiān) 視器。其中，裝入到以上的自動培養(yǎng)裝置的泵、閥、發(fā)動機、加熱器、其 他促動器類，被驅(qū)動電路驅(qū)動，但省略對它們的說明。
接著，使用圖3、圖4，對培養(yǎng)器l進行詳細說明。
對培養(yǎng)容器1的橫截面形狀沒有特別限定，但關(guān)于在本實施方式中成 圓形的培養(yǎng)皿，在其上部開口形成有凸緣。利用該凸緣的平面，蓋67通 過熔敷等被粘著，培養(yǎng)容器1被密閉。此外，向培養(yǎng)容器1的側(cè)面插入噴 嘴69、 71、 73，在噴嘴69上連接有送液管29，在噴嘴71上連接有排出 管59，在噴嘴73上連接有氣體交換管75。其中，圖5是進一步詳細表示 噴嘴69和送液管29的連接狀態(tài)的圖。
接著，對上述噴嘴69、 71、 73的前端和培養(yǎng)容器1的底面的位置關(guān) 系進行說明。與送液管29連接的噴嘴69的前端位于培養(yǎng)容器1內(nèi)的液層 (培養(yǎng)時的液面位置)內(nèi)或空氣層內(nèi)。此外，就與排出管59連接的噴嘴 71的前端而言，由于有必要將培養(yǎng)已完成的細胞的一部分(少量)殘留 于培養(yǎng)容器1內(nèi)以用于下一次的培養(yǎng)，所以被設(shè)定于從培養(yǎng)容器1的內(nèi)部 底面具有規(guī)定間隙的位置。另外，與氣體交換管75連接噴嘴73的前端， 成為用于進行培養(yǎng)容器1內(nèi)的氣體和培養(yǎng)箱3內(nèi)的氣體的交換的給排口， 所以被設(shè)定于比培養(yǎng)器1內(nèi)的液層高的位置。
接著，將本發(fā)明的細胞培養(yǎng)方法與上述的自動培養(yǎng)裝置的動作進行關(guān) 聯(lián)說明。其中，在以下的說明中，以培養(yǎng)對象為具有粘附性的細胞的情況 為例進行說明。
(培養(yǎng)開始的準備)
在培養(yǎng)開始之前，操作者將自動培養(yǎng)裝置的回收單元400安裝細胞回 收袋ll、 13、 15，通過放射X射線或Y射線等對自動培養(yǎng)裝置進行滅菌 處理。其中，關(guān)于細胞回收袋ll、 13、 15的無菌狀態(tài)，在袋的制造完了 直至捆包時都可以通過照射放射線來確保。此外，在上述滅菌處理完了之 后，操作者將貯留有清洗液、剝離劑、培養(yǎng)基的試劑袋5、 7、 9安裝于試 劑供給單元200。另外，操作者使用注射器41將細胞或培養(yǎng)基等成為懸 浮狀態(tài)的細胞液注入到儲液容器43。當結(jié)束這些作業(yè)時，操作者投入自 動培養(yǎng)裝置的電源，從操作單元900輸入培養(yǎng)開始指令。于是，根據(jù)圖6 的操作流程，CPU800通過控制各單元實行細胞培養(yǎng)。 (步驟l:培養(yǎng)基注入)
當輸入培養(yǎng)開始的指令時，CPU800首先執(zhí)行用于注入培養(yǎng)基的控制。 即，CPU800輸出使給排單元500的套筒節(jié)流閥21和套筒節(jié)流閥33開放 的信號，接著輸出使供給泵35動作的信號。由此，在開放送液管27、 29 的流道的同時，驅(qū)動供給泵35。當驅(qū)動供給泵35時，在試劑袋9中貯留 的培養(yǎng)基通過送液管27、 29內(nèi)向培養(yǎng)容器1內(nèi)運送。此時，加熱器31根 據(jù)CPU800的指令被供給電流，由此培養(yǎng)基在管內(nèi)被加熱。當規(guī)定量的培 養(yǎng)基被運送向培養(yǎng)容器1時，CPU800在驅(qū)動供給泵35的情況下使套筒 節(jié)流閥21關(guān)閉。于是，培養(yǎng)箱3內(nèi)的空氣借助過濾器37被氣體管38、
送液管29吸入。在殘留于送液管29內(nèi)的培養(yǎng)基被用完的時刻，根據(jù) CPU800的指令，供給泵35被暫時停止，另外套筒節(jié)流閥33被關(guān)閉。在 關(guān)閉套筒節(jié)流閥21之后，向送液管29送入空氣，由此殘留在送液管29 內(nèi)的試劑(培養(yǎng)基)被迅速運送向培養(yǎng)容器l。其結(jié)果，防止了由送液管 29的試劑導致的堵塞。
(步驟2:細胞液注入) 當培養(yǎng)基的注入結(jié)束時，細胞液的注入控制通過CPU800來進行。細 胞液是事先準備好的，由操作者事先貯留在儲液容器43中，當從CPU800 輸出使套筒節(jié)流閥40開放的指令和使供給泵35驅(qū)動的指令時，套筒節(jié)流 閥40被開放，供給泵35被驅(qū)動。由此細胞液從儲液容器43通過送液管 39被注入到培養(yǎng)容器1內(nèi)。此外，當細胞液的注入結(jié)束時，通過來自 CPU800的指令，套筒節(jié)流閥40被關(guān)閉，供給泵35被停止。 (步驟3:培養(yǎng)開始)
當細胞液的注入結(jié)束時，CPU800進行培養(yǎng)箱3的內(nèi)部的C02的濃度 控制以及培養(yǎng)箱3的內(nèi)部的溫度控制，同時在預先設(shè)定的時間內(nèi)進行細胞 的培養(yǎng)。該預先設(shè)定的時間例如為3天左右，但還可以根據(jù)細胞的種類、 細胞的增殖速度等進行變更。 (步驟4:空氣運送)
在經(jīng)過了上述設(shè)定時間之后，進行培養(yǎng)容器1內(nèi)的換氣。本實施方式 的培養(yǎng)容器1的內(nèi)部在細胞培養(yǎng)過程中大致處于密閉狀態(tài)，有必要在適當 的時間內(nèi)進行培養(yǎng)容器l內(nèi)的換氣。為此，CPU800輸出使套筒節(jié)流閥33 開放的指令和使供給泵35驅(qū)動的指令。當套筒節(jié)流閥33開放，供給泵 35被驅(qū)動時，借助過濾器37被吸入的培養(yǎng)箱3內(nèi)的空氣借助氣體管38、 送液管29被提供給培養(yǎng)容器1內(nèi)(箭頭A方向)，與此同時培養(yǎng)容器1 內(nèi)的空氣借助氣體交換管75、過濾器77向培養(yǎng)箱3內(nèi)(箭頭B方向)排 出。在圖6的流程圖中，空氣運送為一次，但只要除外后述的培養(yǎng)基更換 時、細胞回收時，可以為任意次，也可以連續(xù)進行。另外，培養(yǎng)容器l內(nèi) 的空氣的交換，可以使從過濾器77向培養(yǎng)容器1內(nèi)(箭頭C方向)供給 培養(yǎng)箱3內(nèi)的空氣，從過濾器37向培養(yǎng)箱3內(nèi)(箭頭D方向)排出培養(yǎng) 容器l內(nèi)的空氣。 (步驟5:培養(yǎng)基更換) 在培養(yǎng)容器l內(nèi)的換氣結(jié)束之后，隔開規(guī)定時間，進行培養(yǎng)基更換。 關(guān)于培養(yǎng)基更換是為了，排出培養(yǎng)容器1內(nèi)的培養(yǎng)基以便排除在培養(yǎng)基中 洗脫的細胞的代謝物質(zhì)，向培養(yǎng)容器1內(nèi)注入新的培養(yǎng)基，由此補充營養(yǎng)
成分，并需要定期進行。通常，圖6的自步驟3 (S3)至步驟5 (S5)的 動作要隔開3天 7天實施，該時間是預先設(shè)定的，或者可以根據(jù)細胞的 增殖狀態(tài)任意變更。為了排出培養(yǎng)基，從CPU800輸出使套筒節(jié)流閥63 開放的指令，同時輸出驅(qū)動排出泵61的指令。由此，套筒節(jié)流閥63被開 放，排出泵61被驅(qū)動，借助排出管59、 58從培養(yǎng)容器1內(nèi)將含有細胞的 代謝物質(zhì)的培養(yǎng)基向廢液容器65排出。此外，培養(yǎng)基從培養(yǎng)容器1排出 時，套筒節(jié)流閥63被關(guān)閉，排出泵61被停止。
當培養(yǎng)基的培養(yǎng)基完了時，從試劑袋9向培養(yǎng)容器1供給新的培養(yǎng)基。 為了進行培養(yǎng)基的供給，CPU800輸出使套筒節(jié)流閥21、 33開放的指令， 同時輸出使供給泵35驅(qū)動的指令。由此，借助送液管27、 29運送試劑袋 9內(nèi)的培養(yǎng)基，通過加熱器31進行加熱，向培養(yǎng)容器1的內(nèi)部注入規(guī)定 量。當進行該培養(yǎng)基更換時，CPU800進行是否為預先設(shè)定的培養(yǎng)基更換 次數(shù)的判定。此外，在培養(yǎng)基更換未達到設(shè)定次數(shù)的情況下，返回至步驟 4 (S4)，反復進行步驟5 (S5)的空氣運送、步驟6 (S6)的培養(yǎng)基更換。 (步驟7:空氣運送)
此外，在培養(yǎng)基更換達到了規(guī)定次數(shù)的情況下，上述步驟7 (S4)的 最后的空氣運送與步驟4 (S4)同樣進行。其中，在自步驟3 (S3)至步 驟7 (S7)之間的細胞的培養(yǎng)期間內(nèi)，利用CPU800持續(xù)進行培養(yǎng)箱3內(nèi) 的C02濃度管理、溫度管理。另外，在培養(yǎng)期間內(nèi)，由操作者適當操作觀 察單元700，由此對培養(yǎng)容器l內(nèi)的培養(yǎng)狀態(tài)進行拍攝，在監(jiān)視器顯示所 拍攝的圖像。操作者通過觀察在監(jiān)視器顯示的圖像，確認培養(yǎng)的進展狀態(tài)。 (步驟8:細胞的回收次數(shù)的判定)
當步驟7 (S7)的空氣輸送在規(guī)定時間內(nèi)、例如數(shù)天內(nèi)進行時，進行 培養(yǎng)細胞的回收步驟。在培養(yǎng)細胞的回收步驟中，首先，進行針對自此進 行的細胞回收的設(shè)定次數(shù)的判定。在本實施方式中，對裝置進行設(shè)定以便 三次回收細胞。此外，在該步驟8 (S8)中，如果判定培養(yǎng)細胞的回收為
三次，則下一道工序進行至步驟13 (S13)的最終的細胞回收工序。另外， 如果培養(yǎng)細胞的回收為一次或兩次，則下一道工序進行至步驟9 (S9)。
(步驟9:細胞的回收次數(shù)的判定)
在步驟8 (S8)中，進行細胞回收是否為兩次的判定。此外，當其判 定結(jié)果不是兩次而是一次時，下一道工序進行至步驟IO (S10)的細胞回 收工序，另外，當其判定結(jié)果為兩次時，下一道工序進行至步驟ll (S11) 的細胞回收工序。
(步驟10:第一次的細胞回收)
當判定細胞回收為第一次時，進行培養(yǎng)容器1內(nèi)的培養(yǎng)基的排出工
序、在試劑袋5內(nèi)貯留的清洗液的注入工序、和隨之其后的排出工序，進 行培養(yǎng)細胞的清洗。隨后，實行將在試劑袋7內(nèi)貯留的剝離劑注入到培養(yǎng) 容器1內(nèi)的工序。當剝離劑被注入到培養(yǎng)容器1內(nèi)并經(jīng)過規(guī)定時間時，培 養(yǎng)細胞從培養(yǎng)容器1被剝離。接著，與判定細胞回收為第一次的結(jié)果相對 應(yīng)，實行向從培養(yǎng)容器1的底面剝離的培養(yǎng)細胞向細胞回收袋11的回收 工序。
為此，為了排出培養(yǎng)基，CPU800首先與在步驟5 (S5)中描述的培 養(yǎng)基排出一樣，輸入使套筒節(jié)流閥63開放的指令和使排出泵61驅(qū)動的指 令。由此，排出培養(yǎng)容器1內(nèi)的培養(yǎng)基。如果培養(yǎng)基的排出結(jié)束，通過 CPU800的指令，套筒節(jié)流閥63被關(guān)閉，排出泵61被停止。接著，為了 向培養(yǎng)容器1內(nèi)注入清洗液，CPU800輸出使套筒節(jié)流閥17、 33開放的 指令，同時輸出使供給泵35驅(qū)動的指令。由此，套筒節(jié)流閥17、 33被開 放，另外，供給泵35被驅(qū)動，在試劑袋5中貯留的清洗液被注入到培養(yǎng) 容器l內(nèi)。當向培養(yǎng)容器l內(nèi)注入必要量的清洗液時，供給泵35被停止， 套筒節(jié)流閥17、 33被關(guān)閉。在通過清洗液對培養(yǎng)細胞的清洗結(jié)束之后， 與在步驟5中描述的培養(yǎng)基排出一樣向廢液容器65中運送清洗液。此外， 從將清洗液從培養(yǎng)容器1排出時，為了向培養(yǎng)容器1內(nèi)注入剝離劑， CPU800輸出使套筒節(jié)流閥19、 33開放的指令、和使供給泵35驅(qū)動的指 令。由此，筒節(jié)流閥19、 33被開放，供給泵35被驅(qū)動，在試劑袋7中貯 留的剝離劑被注入到培養(yǎng)容器1內(nèi)。當剝離劑的注入結(jié)束時，供給泵35 被停止，套筒節(jié)流閥19、 33被關(guān)閉。此外，經(jīng)過短時間后，剝離劑使附
著在培養(yǎng)容器1的底面的培養(yǎng)細胞浮起。在培養(yǎng)細胞從培養(yǎng)容器1的底面
被剝離的時刻，CPU800向培養(yǎng)容器1內(nèi)注入培養(yǎng)基。在這里，培養(yǎng)基的 注入是為了削弱對細胞造成不良影響的剝離劑的作用而進行的。為此， CPU800輸出使套筒節(jié)流閥21、33開放的指令和使供給泵35驅(qū)動的指令。 由此，套筒節(jié)流閥21、 33被開放，供給泵35被驅(qū)動，培養(yǎng)基從試劑袋9 被注入到培養(yǎng)容器l內(nèi)。當培養(yǎng)基的注入結(jié)束時，供給泵35被停止，套 筒節(jié)流閥21、 33被關(guān)閉。
當為了削弱剝離劑的作用而注入培養(yǎng)基時，減少了剝離劑對培養(yǎng)細胞 的不良影響，相反，培養(yǎng)細胞再次變得容易附著于培養(yǎng)容器l上，所以有 必要迅速地進行培養(yǎng)細胞的回收。為此，CPU800在培養(yǎng)基的注入之后迅 速輸出使套筒節(jié)流閥開放的指令(在這里是第一次的回收，所以套筒節(jié)流 閥47被開放)和使排出泵61驅(qū)動的指令。由此，培養(yǎng)容器l內(nèi)的培養(yǎng)細 胞通過排出管59、 53被細胞回收袋11回收。如果培養(yǎng)細胞未被吸入到排 出管59、 53， CPU800使套筒節(jié)流閥47關(guān)閉，另外使排出泵61停止。然 后，從CPU800向熱密封裝置66輸出熱壓接細胞回收袋11的管部分的指 令。由此，細胞回收袋ll的管部分被熱密封。隨后，細胞回收袋ll被操 作者從裝置斷開。從裝置斷開的培養(yǎng)細胞放置袋由保冷庫保管。
在這里，在安裝于培養(yǎng)容器1的噴嘴71的前端和培養(yǎng)容器1的底面 之間設(shè)置有規(guī)定的空隙，所以培養(yǎng)細胞的一部分未被回收而直接殘留于培 養(yǎng)容器1內(nèi)。本發(fā)明的宗旨是通過對殘留于或不得不殘留于該培養(yǎng)容器1 內(nèi)的培養(yǎng)細胞進行反復培養(yǎng)，會得到大量的培養(yǎng)細胞。 (第二次的細胞培養(yǎng))
為此，當步驟10 (S10)的第一次的細胞回收結(jié)束時，CPU800對在 培養(yǎng)容器l內(nèi)殘留的細胞再次執(zhí)行步驟3 (S3)至步驟9 (S9)。由此，對 在培養(yǎng)容器l內(nèi)殘留的細胞進行培養(yǎng)。CPU800通過步驟8 (S8)、步驟9 (S9)判定此次的細胞回收為第幾次。在這里，判定結(jié)果為第二次。 (步驟ll:第二次的細胞回收)
當在步驟9 (S9)中判定細胞回收為第二次時，在步驟ll (S11)中， 以與步驟IO (S10)中的細胞回收相同的順序進行第二次的細胞回收。不 過，在該步驟ll (S11)的第二次細胞回收中，對應(yīng)于步驟9 (S9)的判
定結(jié)果，根據(jù)CPU800的指令，從培養(yǎng)容器1排出的細胞被細胞回收袋 13回收，熱密封裝置66在對細胞回收袋13的管部分進行熱壓接這一點 上與步驟10 (S10)相同。 (第三次的細胞培養(yǎng))
當步驟11 (S11)的第二次的細胞回收結(jié)束時，CPU800對殘留在培 養(yǎng)容器l內(nèi)的細胞再次反復實行步驟3 (S3)到步驟9 (S9)。由此，對殘 留在培養(yǎng)容器1內(nèi)的細胞進行培養(yǎng)。CPU800通過步驟8 (S8 )、步驟9 ( S9) 判定此次的細胞回收為第幾次。在這里，判定結(jié)果為第三次。 (步驟12:第三次的細胞回收)
當在步驟9 (S9)中判定細胞回收為第三次時，在步驟12 (S12)中， 以與步驟IO (S10)中的細胞回收相同的順序進行第三次的細胞回收。不 過，在該步驟12 (S12)的第三次細胞回收中，對應(yīng)于步驟9 (S9)的判 定結(jié)果，根據(jù)CPU800的指令，從培養(yǎng)容器1排出的細胞被細胞回收袋 15回收，熱密封裝置62在對細胞回收袋15的管部分進行熱壓接這一點 上與步驟10 (S10)相同。
當?shù)谌蔚呐囵B(yǎng)細胞的回收結(jié)束時，收容有所回收的培養(yǎng)細胞的細胞 回收袋ll、 13、 15被運至臨床，培養(yǎng)細胞被供于人體的組織再生。
如上述說明所示，通過本實施方式，在對培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)的細胞進行 回收時，其一部分殘留于培養(yǎng)容器中，對殘留在培養(yǎng)容器中的細胞再次進 行培養(yǎng)，由此可以使細胞大量增殖。此外，在本實施方式中，再次對殘留 于培養(yǎng)容器中的細胞進行培養(yǎng)，所以可以使用小尺寸的培養(yǎng)容器。將其與 如以往的傳代培養(yǎng)那樣把用培養(yǎng)容器培養(yǎng)了一次的培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)移至其他 多個培養(yǎng)容器繼續(xù)培養(yǎng)的情況下進行比較，實現(xiàn)了裝置的小型化。進而， 通過本實施方式，從活體取出組織細胞一次即可，所以可以減小對活體的 損傷。
另外，通過本實施方式，從活體取出的細胞通過注射器被注入帶有過 濾器的儲液容器，所以可以防止在向培養(yǎng)容器中收容細胞時細胞和雜菌的 污染。進而，通過本實施方式，培養(yǎng)細胞被自動回收至細胞回收袋，同時 細胞回收袋被熱密封，阻斷細胞回收袋與外部環(huán)境，然后取出，所以可以 防止在細胞回收時的細胞和雜菌的污染。
進而，通過本實施方式，在將試劑向培養(yǎng)容器內(nèi)供給時，培養(yǎng)容器內(nèi) 的空氣，從與培養(yǎng)箱內(nèi)相通的噴嘴趕走與所供給的試劑的量相對應(yīng)的培養(yǎng) 容器內(nèi)的空氣，所以可以順利地將試劑注入到培養(yǎng)容器內(nèi)。另外，同樣地， 在排出培養(yǎng)容器內(nèi)的試劑等液體時，從與培養(yǎng)箱內(nèi)相通的噴嘴，與排出的 試劑或含有細胞的液體的排出量相對應(yīng)，向培養(yǎng)容器內(nèi)供給空氣，所以可 以順利地進行培養(yǎng)容器內(nèi)的液體的去除。
另外，通過本實施方式，空氣向培養(yǎng)容器的給排是借助過濾器進行的， 所以可以提供干凈的培養(yǎng)環(huán)境并維持。
在本實施方式中，是以反復進行細胞培養(yǎng)和回收共計三次為例進行說 明的，但^:發(fā)明并不限于此。細胞培養(yǎng)和回收的反復次數(shù)只要根據(jù)所需的 細胞的量至少為2次以上，就可以任意設(shè)定。此時，與回收培養(yǎng)細胞的次
數(shù)相對應(yīng)，可以對設(shè)置在回收單元上的細胞回收袋的數(shù)量和套筒節(jié)流閥的 數(shù)量進行變更。其中，只要可以設(shè)置防止細胞回收時細胞和雜菌的污染的 裝置，就沒有必要向自動培養(yǎng)裝置中預先裝填多個細胞回收袋，必要時可 以采用向自動培養(yǎng)裝置裝填細胞回收袋的方法。
另外，在本實施方式中，如圖5所示，在培養(yǎng)容器的側(cè)面設(shè)置有噴嘴 69、 71、 73，所以也可以對應(yīng)于將多個培養(yǎng)容器重疊配置于培養(yǎng)箱內(nèi)的變 形例。
進而，本實施方式的培養(yǎng)裝置可以大致持續(xù)的進行細胞的培養(yǎng)，另外， 可以以規(guī)定時間間隔回收細胞。因此，在分多次對患者的臟器或組織等進 行再生治療的情況下，例如在進行輔助利用間質(zhì)系干細胞的白血病治療等 的情況下，可以以規(guī)定間隔數(shù)次供給間質(zhì)系干細胞。
如上述實施方式所示，分別借助套筒節(jié)流閥47、 49、 51、 63將細胞 回收袋ll、 13、 15和廢液容器65連接于一臺排出泵61的噴出管路上， 此時有可能出現(xiàn)廢液或回收細胞殘留于管路的情況。當這些廢液或死亡細 胞、進而是細胞的代謝物質(zhì)殘留于回收系管路時，在反復進行的下一次培 養(yǎng)細胞回收時會發(fā)生污染。有必要防止這樣的污染的發(fā)生。 (第二實施方式)
圖7表示可以防止這樣的污染的發(fā)生的第二實施方式的自動培養(yǎng)裝 置。如圖7所示，本實施方式的自動培養(yǎng)裝置與上述第一實施方式相比，
其不同點在于，用設(shè)置有與細胞回收袋ll、 13、 15和廢液容器65的數(shù)量 (共計4個)相對應(yīng)的噴嘴101、 103、 105、 107，來代替設(shè)置在第一實 施方式的培養(yǎng)容器1上的排出系統(tǒng)的噴嘴71。即，噴嘴IOI、 103、 105、 107分別與排出管119、 121、 123、 125連接。這些排出管119、 121、 123 分別與細胞回收袋ll、 13、 15連接，排出管125與廢液容器65連接。此 外，在這些排出管119、 121、 123、 125的中間，分別如圖所示連接有套 筒節(jié)流閥47、 49、 51、 63以及排出泵111、 113、 115、 117。其中，附圖 中套筒節(jié)流閥47、 49、 51、 63分別安裝在排出泵的吸引側(cè)，但它們也可 以安裝在排出泵的噴出側(cè)。其中，即便在本實施方式中，排出泵lll、 113、 115、 117以及套筒節(jié)流閥47、 49、 51、 63都根據(jù)CPU800的指令完成動 作。
如上所述構(gòu)成的本發(fā)明的自動培養(yǎng)裝置，與第一實施方式的自動培養(yǎng) 裝置相比，排出培養(yǎng)容器l內(nèi)的液體時的動作不同。即，在排出培養(yǎng)容器 1內(nèi)的廢液時，套筒節(jié)流閥63被開放，排出泵117被驅(qū)動。另外，在對 培養(yǎng)容器1內(nèi)的細胞進行回收時，在第一次的細胞回收時，套筒節(jié)流閥 47被開放，排出泵111被驅(qū)動。另外，在第二次的細胞回收時，套筒節(jié) 流閥49被開放，排出泵113被驅(qū)動；在第三次的細胞回收時，套筒節(jié)流 閥51被開放，排出泵115被驅(qū)動。
通過本實施方式，除了第一實施方式的效果之外，排出管119、 121、 123、 125獨立設(shè)置，所以在第二次以后回收的細胞中不會混入廢液或細 胞的代謝物質(zhì)。因此，可以得到干凈的培養(yǎng)細胞。
上述第二實施方式是避免在前次回收時殘留在管路中的廢液和細胞 的代謝物質(zhì)兩者混入到第二次以后的回收細胞中的實施方式，但可以按照 僅有廢液不會混入到第二次以后的回收細胞的方式進行變形。該實施方式 參照上述第二實施方式，對于第一實施方式僅是獨立設(shè)置廢液的回收系 統(tǒng)，由此完成。
權(quán)利要求
1.一種自動培養(yǎng)裝置，其特征在于，具有試劑供給單元，其分開收納培養(yǎng)所必需的多種試劑；培養(yǎng)單元，其收納細胞培養(yǎng)容器；回收單元，其回收在所述培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)的培養(yǎng)細胞；給排單元，其進行向所述培養(yǎng)容器的細胞供給、試劑從所述試劑供給單元向所述培養(yǎng)容器的供給、和培養(yǎng)細胞從所述培養(yǎng)容器向所述回收單元的排出；以及控制單元，其對向所述培養(yǎng)容器的試劑供給動作、所述培養(yǎng)容器內(nèi)的細胞培養(yǎng)動作、和培養(yǎng)細胞從所述培養(yǎng)容器的排出動作進行控制，具有對回收培養(yǎng)細胞時殘留在所述培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)細胞進行包括基于所述給排單元的試劑供給工序的細胞培養(yǎng)工序、和培養(yǎng)細胞的排出工序至少一次的機構(gòu)。
2. 如權(quán)利要求l所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于， 所述給排單元具有用于從設(shè)置于所述試劑供給單元的多個試劑袋選擇性地將一種試劑供給至所述培養(yǎng)容器的供給用管道、設(shè)置于所述管道上 的閥、和供給泵。
3. 如權(quán)利要求l所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于，在收納于所述多個試劑袋的試劑中含有培養(yǎng)基和清洗液。
4. 如權(quán)利要求3所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于， 在收納于所述多個試劑袋的試劑中還含有剝離劑。
5. 如權(quán)利要求l所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于， 所述給排單元具有回收培養(yǎng)細胞的多個回收袋、收容已使用完的試劑的廢液容器、用于從所述培養(yǎng)容器選擇性地將已使用完的試劑和培養(yǎng)細 胞排出到所述回收袋或廢液容器的排出用管道、設(shè)置在所述管道上的閥、 和排出泵。
6. 如權(quán)利要求l所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于，在所述培養(yǎng)容器上設(shè)置有多個與所述給排單元相連接的噴嘴。
7. 如權(quán)利要求6所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于， 與所述給排單元的排出用管道相連接的所述噴嘴的位于培養(yǎng)容器內(nèi) 的前端與所述培養(yǎng)容器的底面之間設(shè)置有規(guī)定間隙，通過所述間隙，在培 養(yǎng)細胞的回收時，培養(yǎng)細胞的一部分殘留于培養(yǎng)容器內(nèi)。
8. 如權(quán)利要求5所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述回收袋由具有熱壓接性的材料構(gòu)成，具有用于與所述排出用管道 連接的管部分。
9. 如權(quán)利要求8所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述給排單元具有對被來自所述控制單元的指令特定了的回收袋的 管部分進行熱壓接的熱密封裝置。
10. 如權(quán)利要求5所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于， 所述排出單元的排出用管道由對連接至所述培養(yǎng)容器的單個管、和連接至多個回收袋以及廢液容器的多個管進行連接而構(gòu)成，排出泵配置在所 述單個管上，閥配置在連接至多個回收袋以及廢液容器的各管上。
11. 如權(quán)利要求5所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于， 所述排出單元的排出用管道具有分別連接所述培養(yǎng)容器、廢液容器以及多個回收袋的多個管，在各管配置有排出泵和閥。
12. 如權(quán)利要求5所述的自動培養(yǎng)裝置，其特征在于， 所述排出單元的排出用管道包括連接所述培養(yǎng)容器和廢液容器的廢液用管、與所述培養(yǎng)容器相連接的單個管、和連接該單個管和多個回收袋 的多個管；所述廢液用管和與所述培養(yǎng)容器相連接的單個管上分別配置有排出 泵和閥。
13. —種培養(yǎng)方法，其特征在于，包括(1) 將從人體取得的細胞和培養(yǎng)基注入到培養(yǎng)容器的步驟；(2) 進行放入有培養(yǎng)基和所述細胞的所述培養(yǎng)容器內(nèi)的換氣和培養(yǎng) 基的更換，同時進行細胞培養(yǎng)的步驟；(3) 在對于所述培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)的培養(yǎng)細胞進行清洗之后，將所述 已清洗的細胞殘留其一部分后將其從所述培養(yǎng)容器內(nèi)回收到細胞回收容 器的步驟；(4) 對于在所述步驟(3)中殘留在所述培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)細胞，注 入培養(yǎng)基的步驟；和(5)反復實行所述步驟(2)和步驟(4)的步驟。
14. 如權(quán)利要求13所述的細胞培養(yǎng)方法，其特征在于， 進行所述步驟(4)和步驟(5)至少一次。
15. 如權(quán)利要求13所述的細胞培養(yǎng)方法，其特征在于， 在所述步驟(3)的細胞的回收步驟中，還包括在對所述培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)細胞進行清洗的步驟之后，通過注入剝離劑從所述培養(yǎng)容器剝離培 養(yǎng)細胞的步驟。
16. 如權(quán)利要求15所述的細胞培養(yǎng)方法，其特征在于， 在所述步驟(3)中的剝離劑注入之后，還包括為削弱剝離劑對培養(yǎng)細胞的影響而向所述培養(yǎng)容器內(nèi)注入新的培養(yǎng)基的步驟。
17. 如權(quán)利要求13所述的細胞培養(yǎng)方法，其特征在于， 在所述步驟(5)中回收的培養(yǎng)細胞被與步驟(3)中回收細胞的容器不同的容器回收。
18. 如權(quán)利要求15所述的細胞培養(yǎng)方法，其特征在于， 在所述步驟(5)中回收的培養(yǎng)細胞被與步驟(3)中回收細胞的容器不同的容器回收。
19. 如權(quán)利要求16所述的細胞培養(yǎng)方法，其特征在于， 在所述步驟(5)中回收的培養(yǎng)細胞被與步驟(3)中回收細胞的容器不同的容器回收。
全文摘要
本發(fā)明的培養(yǎng)方法，其包括將從人體取得的細胞和培養(yǎng)基注入到培養(yǎng)容器內(nèi)的步驟；(2)進行放入有培養(yǎng)基和所述細胞的所述培養(yǎng)容器內(nèi)的換氣或培養(yǎng)基的更換，同時進行細胞培養(yǎng)的步驟；(3)在對于所述培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)的培養(yǎng)細胞進行了清洗之后，將所述已清洗的細胞殘留其一部分后將其從所述培養(yǎng)容器內(nèi)回收到細胞回收容器的步驟；(4)對于在所述步驟(3)中殘留在所述培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)細胞，注入培養(yǎng)基的步驟；和(5)反復實行所述步驟(2)和步驟(4)的步驟。
文檔編號C12M3/00GK101370928SQ200680051118
公開日2009年2月18日 申請日期2006年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月17日
發(fā)明者上田實, 岡田邦彥, 加藤龍司, 各務(wù)秀明, 家島大輔, 鈴木力 申請人:株式會社日立醫(yī)藥;國立大學法人名古屋大學