專利名稱：硒酵母產(chǎn)物,制備硒酵母產(chǎn)物的方法以及所述產(chǎn)物在制備食品、膳食補(bǔ)充品或藥品中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于食品、膳食補(bǔ)充品或藥品的硒酵母產(chǎn)物(seleniumyeast product)，該產(chǎn)物含有顯著和均一數(shù)量的易被消化和耐受的有機(jī)結(jié)合硒(organically bound selenium)。本發(fā)明也涉及一種制備硒酵母產(chǎn)物的方法以及利用此硒酵母產(chǎn)物制備食品、膳食補(bǔ)充品或藥品。
領(lǐng)域背景硒是人所必需的營(yíng)養(yǎng)元素。硒通過食物被攝取，但是食物中硒的含量參差不齊。在世界的大部分，栽種的農(nóng)作物含有很低的硒水平，因?yàn)樵撛卦谕寥乐械暮坑邢蕖?br>
硒對(duì)人的重要性已經(jīng)通過大量的實(shí)驗(yàn)被證實(shí)。硒被整合到不同的有機(jī)分子，包括特殊的氨基酸。1-硒代甲硫氨酸、硒代半胱氨酸、硒代胱氨酸和硒代乙硫氨酸是最重要的化合物。因此，硒是蛋白質(zhì)的一部分，而蛋白質(zhì)是對(duì)于身體而言重要的結(jié)構(gòu)。此外，硒是一些影響代謝、再生、預(yù)防癌癥、免疫防御和人精神的酶的重要成分。(即Rayman，M.，硒對(duì)人健康的重要性，Lancet 356233-241(2000).)。
由于在普通食物中通常硒含量不足，因此以濃縮物、膳食補(bǔ)充品或藥物的形式補(bǔ)充硒是有利的。這些可能包括無(wú)機(jī)硒，如亞硒酸鹽，或它們可能包括有機(jī)來(lái)源，包括硒酵母。在吸收和毒性方面，無(wú)機(jī)和有機(jī)硒存在明顯差異。無(wú)機(jī)化合物通常比硒的有機(jī)來(lái)源吸收顯著更慢并且更具有毒性。通常使用的有機(jī)硒來(lái)源是含硒酵母。
在培養(yǎng)酵母時(shí)，可以以無(wú)機(jī)化合物的形式向營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中加入硒，包括亞硒酸鈉和硒酸鈉。以這種方式加入到營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中的硒被酵母大量吸收，并被整合到有機(jī)化合物中，包括1-硒代甲硫氨酸。
硒酵母可以利用一些酵母物種來(lái)制備，包括啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)，Saccharomyces boulardii sequela和Saccharomyces torula，并使用不同的培養(yǎng)條件。結(jié)果導(dǎo)致酵母中可能形成硒有機(jī)化合物的可變的選擇。使用已知方法獲得的重復(fù)性不太令人滿意。低的重復(fù)性導(dǎo)致了權(quán)威人士、研究人員和消費(fèi)者不愿意使用硒酵母。
食品科學(xué)委員會(huì)(the Scientific Committee on Foods)申明硒酵母中1-硒代甲硫氨酸的含量介于20～50％，見EuropeanCommission，Scientific Committee on Food，Opinion on substancesfor nutritional purpose which have been proposed for use in themanufacture of foods for particular nutritional purposes，和“PARNUTS”，12 May 1999，page 5.Scienfific Committee on Food onthe Tolerable Upper Intake leVel of Selenium，11 October 2000，page2.使用的膳食補(bǔ)充品或藥物中必要的硒化合物(即種類)具有均一的濃度是至關(guān)重要的。
這一點(diǎn)允許對(duì)于硒的重要性進(jìn)行長(zhǎng)期的研究，其中從產(chǎn)品到產(chǎn)品的重復(fù)性對(duì)于解釋和使用這些研究結(jié)果具有重要性。
作為一商業(yè)產(chǎn)品，硒酵母通常通過使用具有不定組分的糖蜜培養(yǎng)制備。從文獻(xiàn)已知，不同類型的硒酵母導(dǎo)致變化的吸收水平，因此產(chǎn)生不同的反應(yīng)(即Clausen，J.等人，十種硒補(bǔ)充產(chǎn)品的比較，Selenium inMedicine and Biology，Walter de Gruyter&Co 305-14(1988))。一些專利描述了培養(yǎng)含有不同濃度的硒的硒酵母。因此，美國(guó)專利4,530,849公開具有1000ppm硒的硒酵母的培養(yǎng)。但是此專利并沒有公開硒如何被酵母結(jié)合，或此方法能在多大程度上被重復(fù)。
專利申請(qǐng)WO 98/37172也涉及硒酵母的培養(yǎng)和利用。培養(yǎng)方法包括將水溶性硒鹽和營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基混合，然后加入用水懸浮的酵母。產(chǎn)生的硒酵母含有的硒成分并沒有被分成衡定的、均一的化合物。獲得硒化合物的均一得率和組成的可能性仍然沒有描述。
事實(shí)上已知酵母和其它微生物能夠在含有最低水平營(yíng)養(yǎng)物的培養(yǎng)基(所謂基本培養(yǎng)基)上被培養(yǎng)。然而，這一方法在工業(yè)上通常并不使用，因?yàn)樗鼘?dǎo)致低的得率和不希望的微生物組分。因此，依照本發(fā)明使用基本培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)可能獲得良好的得率和最適用于人營(yíng)養(yǎng)的可重復(fù)的硒酵母組分是令人吃驚的。
因此，本發(fā)明涉及制備含有顯著和均一數(shù)量的可消化的有機(jī)結(jié)合硒的酵母產(chǎn)物的方法。
產(chǎn)生的酵母是一種粉末，可以直接使用也可以通過傳統(tǒng)技術(shù)被壓縮成片劑。這些片劑可以作為食品、膳食補(bǔ)充品或藥品上市。
發(fā)明簡(jiǎn)述在第一方面，本發(fā)明因此涉及用于食品、膳食補(bǔ)充品或藥品的硒酵母產(chǎn)品，該產(chǎn)品具有的特征是有機(jī)硒化合物的含量相應(yīng)于介于1000到1600ppm，優(yōu)選介于1100ppm到1500ppm，最優(yōu)選介于1200ppm到1400ppm的硒，1-硒代甲硫氨酸的含量恒定地占硒總含量的至少55％，并且無(wú)機(jī)硒化合物的硒含量不超過硒總含量的1％。
此結(jié)果產(chǎn)物進(jìn)一步的特征是人的吸收超過85％。
在第二方面，本發(fā)明涉及用于食品、膳食補(bǔ)充品或藥品的硒酵母產(chǎn)物的制備方法，其中酵母被培養(yǎng)在有氧條件下，該方法具有以下特征1、在培養(yǎng)過程中，以與營(yíng)養(yǎng)物在酵母中的消耗相應(yīng)的程度將此營(yíng)養(yǎng)物加入酵母；2、在流加培養(yǎng)基(feeding medium)中，葡萄糖和/或麥芽糖是唯一的碳源；3、在培養(yǎng)過程中乙醇的濃度不超過1％，優(yōu)選不超過0.5％，最優(yōu)選不超過0.2％；4、培養(yǎng)過程中pH值保持在4.0到6.0之間，優(yōu)選4.4到5.7之間，最優(yōu)選4.7到5.4之間，例如5.0；5、流加培養(yǎng)基被混入水溶性硒鹽，所述硒鹽的數(shù)量以酵母干物質(zhì)計(jì)算相當(dāng)于介于1000到1500ppm的硒。
在第三方面，本發(fā)明涉及通過本發(fā)明的方法制備的硒酵母產(chǎn)物。
在第四方面，本發(fā)明涉及食品、膳食補(bǔ)充品或藥品，其包括根據(jù)本發(fā)明的硒酵母產(chǎn)物。
在第五方面，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的硒酵母產(chǎn)物在制備食品、膳食補(bǔ)充品或藥品中的應(yīng)用。
發(fā)明詳述在詳細(xì)描述本發(fā)明的不同實(shí)施方案之前，一些特異于本發(fā)明主要方面的相關(guān)定義提供如下定義基本培養(yǎng)基含有酵母生長(zhǎng)必需的最小數(shù)量營(yíng)養(yǎng)物的培養(yǎng)基。
藥物質(zhì)量描寫在國(guó)家藥典上的產(chǎn)品特性。
起始培養(yǎng)基接種有酵母的水和附加營(yíng)養(yǎng)物的混合物。
流加培養(yǎng)基在接種酵母之后加入到起始培養(yǎng)基/培養(yǎng)物中的營(yíng)養(yǎng)物。
Zak-方法培養(yǎng)酵母的方法，其中所述酵母被加入起始培養(yǎng)基之后，接著營(yíng)養(yǎng)物通過流加培養(yǎng)基在有氧條件下被加入。營(yíng)養(yǎng)物在有氧條件下被加入的速率與該營(yíng)養(yǎng)物在酵母中的吸收速率相一致。正確的控制導(dǎo)致只有少量的醇形成。形成的醇在培養(yǎng)的最后階段被酵母所消耗。此方法是傳統(tǒng)的，并稱為Z-方法。它主要被Sren Sak先生所發(fā)展并被描述于丹麥專利No 28507(1921)。
人的吸收攝取的同位素的量與排泄在糞便中的同位素的量的差異。人的吸收以攝取的同位素量的百分?jǐn)?shù)計(jì)算。
如上所提及的，迄今已知的制備硒酵母產(chǎn)物的方法主要使用糖蜜作碳源，當(dāng)WO 98/37172使用以葡萄糖為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基時(shí)，此法因?yàn)椴荒鼙ＷC連續(xù)加入相應(yīng)于細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物和硒而與本發(fā)明的方法不同。另外，在相對(duì)短的時(shí)期內(nèi)加入硒混合物使對(duì)人的營(yíng)養(yǎng)具有特殊重要性的硒有機(jī)化合物的形成復(fù)雜化。
根據(jù)本發(fā)明，用于培養(yǎng)酵母的營(yíng)養(yǎng)物包括碳源和氮源，以及維生素和礦物質(zhì)形式的微量營(yíng)養(yǎng)物。
碳必須是在培養(yǎng)過程中能被立即吸收的形式，因此它必須高度溶于水并且具有能被酵母中存在的酶消耗的組分。這些碳源包括葡萄糖和能被純化成葡萄糖漿的麥芽糖，并且它們應(yīng)該能夠被用作產(chǎn)生食品、膳食補(bǔ)充品或藥品的微生物的營(yíng)養(yǎng)物。作為氮源，可以使用無(wú)機(jī)化合物，包括具有足夠高純度水平的氨，以避免毒性或不希望的化合物的形成。酵母的代謝還沒有被徹底了解，因此有必要加入酵母提取物形式的微量營(yíng)養(yǎng)物，這被描述在藥典中。
因此，根據(jù)本發(fā)明酵母能夠在具有藥物質(zhì)量的原材料的基礎(chǔ)上被制備，并且原材料的組成使酵母具有最低水平的能被用于生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物。典型的培養(yǎng)酵母的方法包括如下步驟1)處理營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基；2)加入酵母接種；3)培養(yǎng)；4)收獲；5)洗滌；6)熱處理；7)干燥。營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基是通過在加入酵母之前將糖物質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)溶于水而產(chǎn)生的，其中水被加熱到24到37℃，優(yōu)選26到34℃，最好是28到32℃。
向完全的、加熱的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中加入酵母進(jìn)行接種，酵母細(xì)胞被懸浮于以1到2Hz頻率攪拌的培養(yǎng)基中。硒酵母可以通過使用一些物種，包括啤酒糖酵母，Saccharomyces boulardii sequela和Saccharomyces torula來(lái)制備。在所述物種中，啤酒糖酵母通常被認(rèn)為適合人的攝取，并被廣泛用于制備面包和醇。根據(jù)本發(fā)明，利用生產(chǎn)菌株來(lái)制備硒酵母產(chǎn)物是有利的，所述生產(chǎn)菌株在遺傳上是穩(wěn)定的，因此不易產(chǎn)生變異。根據(jù)本發(fā)明，在一實(shí)施方案中ATCC No 74366菌株被使用，然而本發(fā)明并沒有被限制于此。
培養(yǎng)在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上進(jìn)行，此培養(yǎng)基作為特殊的基本培養(yǎng)基而被制成，并被以上的接種酵母(pitching yeast)接種。除此以外，額外的碳水化合物以葡萄糖和/或麥芽糖的形式被加入?；烊氚彼芤鹤鳛榈?。為了確保最大可能的生長(zhǎng)并阻止醇的形成，大量空氣被引入，優(yōu)選含有充足氧的空氣。在大規(guī)模制備中實(shí)際上很難確保完全的氧化，這會(huì)輕微改變酵母的營(yíng)養(yǎng)需求。在酵母濃度接近營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基總成分加酵母重量的4％時(shí)，培養(yǎng)被終止。營(yíng)養(yǎng)物在有氧條件下被加入的速率與該營(yíng)養(yǎng)物在酵母中的吸收速率相一致。結(jié)果，通過正確的控制只有少量的醇形成。在培養(yǎng)的最后階段形成的醇被酵母所消耗。
實(shí)際上，通過連續(xù)測(cè)量生長(zhǎng)過程中形成的乙醇形式的醇數(shù)量來(lái)控制營(yíng)養(yǎng)物加入的正確數(shù)量。
如果營(yíng)養(yǎng)物加入得太慢，沒有醇形成，如果加入醇太快，則形成大量的醇。因此，在任何時(shí)候存在的醇量都不應(yīng)該超過1％，優(yōu)選不超過0.5％，最優(yōu)選不超過0.2％。此外，生長(zhǎng)培養(yǎng)基的pH可以被用作保持營(yíng)養(yǎng)物的消耗和加入之間正確平衡的指示劑。因此在生長(zhǎng)過程中pH受到控制和調(diào)節(jié)，以便pH保持在4.0到6.0之間，優(yōu)選4.4到5.7之間，最優(yōu)選4.7到5.4之間，例如5.0。
收獲涉及從營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中分離培養(yǎng)的酵母。這一分離最好通過離心來(lái)完成，由此產(chǎn)生的濃縮酵母膏含有約20％重量的酵母。
洗滌的目的是除去酵母膏中過量的營(yíng)養(yǎng)物。
最有利的洗滌是加入水，接著離心，從而產(chǎn)生酵母膏。用這種方法將酵母洗滌2到6次，優(yōu)選4次，由此基本上所有的胞外營(yíng)養(yǎng)物都從酵母膏中被除去。
熱處理的目的是殺死酵母細(xì)胞，以便其中存在的硒變成人可消化利用的。熱處理也導(dǎo)致酵母細(xì)胞的高度瓦解。有利的熱處理可以如巴氏滅菌法那樣，在一溫度為87℃的平板熱交換器上持續(xù)30秒。
酵母可以通過傳統(tǒng)的干燥有機(jī)材料的方法被干燥，包括凍干、轉(zhuǎn)鼓式干燥、板式干燥(tray drying)或噴霧干燥，優(yōu)選噴霧干燥。
噴霧干燥除去水分，輸入的空氣溫度介于160到240℃之間，優(yōu)選180到220℃，最好大約是200℃。這一環(huán)節(jié)的輸出溫度可以從70到90℃，優(yōu)選80到90℃，最好大約是86℃。產(chǎn)生的粉末的含水量介于4到9％，優(yōu)選介于6到9％，最好是約8％。粉末可以隨后用水進(jìn)行潤(rùn)濕處理，再干燥，以改善以后的吸水能力。
根據(jù)本發(fā)明的硒酵母可以被用于制備食品、膳食補(bǔ)充品或藥品，其中既可以作為唯一的硒來(lái)源，也可以與其它的含硒成分聯(lián)合。
因此，本發(fā)明也涉及食品、膳食補(bǔ)充品或藥品，它們利用本發(fā)明的硒酵母作為硒來(lái)源。
在本發(fā)明的一實(shí)施方案中，所述使用包括包含崩解劑、流動(dòng)劑和硒酵母的產(chǎn)品。這些混合物被壓縮成每片含有25到800μg硒的片劑，特別是每片介于40到300μg硒，尤其是50到200μg硒。
然而，除了以上描述的應(yīng)用范圍，本發(fā)明也可用于其它類型的富含硒的食物，如面粉、其它粉狀食物和飲料。
參考以下的實(shí)施例，本發(fā)明在下面被詳細(xì)解釋。
實(shí)施例實(shí)施例11a)在此實(shí)施例中使用了一體積為0.014m3的發(fā)酵罐。
在培養(yǎng)的開始，用以下具有藥物質(zhì)量的原料組分制備營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基水Ph.Eur. 5,400g葡萄糖漿 Ph.Eur. 31.8gKH2PO4Ph.Eur. 25g2.5％的氨水 Ph.Eur. 114g生物素(0.01％)Ph.Eur. 2.1ml鹽酸硫胺素(1.0％) Ph.Eur. 2.5ml泛酸鈣Ph.Eur. 0.08g酵母提取物USP 75g硫酸鐵Ph.Eur. 0.10g硫酸鎂Ph.Eur. 5.0g硫酸錳Ph.Eur. 0.033g硫酸鋅Ph.Eur. 0.033g在將溫度調(diào)節(jié)到30℃之后，混入5g接種酵母。被接種的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基以每分鐘20升的量被吹入無(wú)菌空氣。使用一根旋轉(zhuǎn)軸以17Hz的頻率進(jìn)行攪拌。使用硫酸調(diào)節(jié)pH，以保持pH介于4.7到5.4之間。乙醇被控制在不超過0.2％，另外乙醇的濃度保持在盡可能接近于0。
在培養(yǎng)過程中，營(yíng)養(yǎng)物按以下數(shù)量隨流加培養(yǎng)基加入葡萄糖漿 Ph.Eur. 1,060.5g
2.5％的氨水 Ph.Eur. 1,451g另外，亞硒酸鹽被混入2.5％的氨水，如下亞硒酸納 Ph.Eur. 1.2758g葡萄糖漿、氨水和亞硒酸鈉被加入的速率與該物質(zhì)在酵母中的消耗速率相一致。這一點(diǎn)是通過連續(xù)地測(cè)量醇的形成而控制的。醇的濃度保持在接近于0。在18小時(shí)后停止氨水(2.5％)的加入。在19小時(shí)后停止培養(yǎng)。
酵母的收獲是通過將培養(yǎng)基和酵母轉(zhuǎn)移到離心機(jī)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，在此，5分鐘之內(nèi)酵母膏與多余的培養(yǎng)基相分離。產(chǎn)生的具有約20％干物質(zhì)含量的酵母膏被混入5000g水。隨后酵母混合物被再次離心。除去洗滌水，產(chǎn)生的酵母膏被混入5000g水，這一過程被重復(fù)四次以從培養(yǎng)基中分離酵母細(xì)胞。
洗過的酵母膏被轉(zhuǎn)移至平板巴氏滅菌器中，在此它受到于87℃持續(xù)30秒的熱處理。熱處理之后，平板巴氏滅菌器中的酵母膏被立即冷卻到4℃。酵母膏的量是1897.5g。
酵母膏被轉(zhuǎn)移到凍干機(jī)中。在-40℃被冷凍24小時(shí)之后，在18小時(shí)之內(nèi)水發(fā)生升華。由此產(chǎn)生380g含水量為0.2％的干燥硒酵母，具有干物質(zhì)中硒為1,380ppm的濃度。制備產(chǎn)生的硒酵母產(chǎn)物的食用特征和重復(fù)性被以下在實(shí)施例2、4、5中描述的方式所測(cè)定。
1b)酵母根據(jù)以上實(shí)施例1a制備。然而使用了具有150m3體積的發(fā)酵罐。營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基由相應(yīng)的成分以相同的相互比例組成，總重量為56848kg。葡萄糖漿和2.5％的氨水以與實(shí)施例1a同樣的方式被加入。為這一目的使用了13500kg葡萄糖漿和1410.5kg 2.5％的氨水。15kg亞硒酸鈉形式的硒被混入。在18小時(shí)后終止氨水的加入，在19小時(shí)后終止培養(yǎng)。
酵母的洗滌和熱處理根據(jù)實(shí)施例1所描述的原則進(jìn)行。
酵母的干燥是在一具有旋轉(zhuǎn)噴霧器輪的干燥塔中通過噴霧干燥進(jìn)行。噴霧器輪的頻率設(shè)定在167Hz。用于干燥的空氣溫度設(shè)定在200℃。產(chǎn)生的起始溫度是86℃。
含水量為7％的粉末總量為5035kg?；诟晌镔|(zhì)，硒的濃度為1355ppm。制備產(chǎn)生的硒酵母產(chǎn)物的食用特征和重復(fù)性被以下在實(shí)施例2、4、5中描述的方式所測(cè)定。
實(shí)施例2硒酵母的消化性和吸收2a)硒的體外消化性作為確定硒酵母體外消化性的基礎(chǔ)，使用了The Danish PlantDirectorate 1994 11月15日的9.1方法(豬中酶消化有機(jī)物質(zhì)的測(cè)定，即EFOS豬)的進(jìn)一步發(fā)展。此方法被更改了，以便符合人的消化條件。因此，能降解纖維素的酶沒有被包括在體外研究中。
原則是先用胃蛋白酶處理，再用胰酶制劑處理。不溶的樣品材料被濾出并干燥。通過比較測(cè)定的原始樣品中的硒和濾液及殘留物中的硒含量，從而計(jì)算出硒的可消化性。
因此，硒酵母與胃蛋白酶在pH 2.0相混合，在40℃孵育75分鐘，然后用胰酶制劑在pH 6.8、40℃處理3小時(shí)30分鐘。隨后用真空的方式過濾，并分別測(cè)定濾液和殘留物的硒含量。濾液中硒含量占樣品總硒含量的百分?jǐn)?shù)表示了硒酵母的體外可消化性。
獲得的硒酵母具有以下特征可消化的硒占99％。
2b)硒的體內(nèi)吸收和滯留作為確定體內(nèi)可消化性的基礎(chǔ)，使用了根據(jù)本發(fā)明的硒酵母，其中將硒-77含量為99.3％的穩(wěn)定同位素用于培養(yǎng)。因?yàn)樘烊划a(chǎn)生的硒只含7.8％的Se-77，同時(shí)含有49.82％的Se-80，因此，加入這些同位素后，可以通過使用ICP-MS(即Inductively Coupled Plasma-MassSpectrometry)測(cè)量這些同位素，從而測(cè)定人材料中的比例。
體內(nèi)的吸收、滯留和生物可獲得性還被進(jìn)一步測(cè)定如下12位年齡為20到55的男性參加者被給予了相當(dāng)于300μg硒-77的單一劑量的硒酵母。在5天內(nèi)收集參加者的糞便和尿液，同一時(shí)期收集了11個(gè)血樣。為了給收集的糞便和尿液設(shè)置對(duì)照，PABA(即對(duì)氨基苯甲酸)和塑料管被分別施用，它們都能作為收集樣品的對(duì)照而從糞便和尿液中回收。通過比較攝取的和從糞便中提取的硒-77，而確定硒-77的吸收量。
滯留量(即殘留的量)是通過攝入的痕量減去與攝入痕量相比通過糞便和尿液排出的量來(lái)測(cè)定的。血樣被用來(lái)描述藥效動(dòng)力學(xué)。
本發(fā)明的硒酵母獲得了以下吸收和滯留特征吸收為89％，滯留為74％。
2c)長(zhǎng)期攝取的體內(nèi)劑量/反應(yīng)一空白實(shí)驗(yàn)在持續(xù)兩年的時(shí)期內(nèi)進(jìn)行，一組49人每天服用一片含量分別為0、100、200或300μg硒的本發(fā)明的硒酵母。除此以外，參加者通過他們的食物攝取天然存在于飲食中的硒，其量為大約每天50μg。兩年之后已經(jīng)獲得了吸收和排泄的平衡，全血中的硒含量被測(cè)定了。
得到了以下結(jié)果
基于以上結(jié)果，攝入的硒酵母劑量和全血中的硒含量之間的線性關(guān)系可以被確定，并可以用以下的方式表示全血中的硒(μg/l)＝1.12×攝入量(μg/天)+38發(fā)現(xiàn)的對(duì)于本發(fā)明硒酵母的反應(yīng)超過現(xiàn)有技術(shù)描述的硒酵母(即Schrauzer，G.N.，Selenium in human nutrition，BioinorganicChemistry，8303-318(1978))。
2d)長(zhǎng)期攝入的副作用測(cè)試在1-2.5年的時(shí)期，本發(fā)明的硒酵母以100、200或300μg的劑量或安慰劑被提供給806人(平均分成4組)服用。這一時(shí)期覆蓋了接近1400人-年。在這一時(shí)期測(cè)試了所有人的耐受和副作用，2.6％即806人中有21人反應(yīng)有副作用。在隨機(jī)化終止之前，副作用被劃分為輕微17人，中度4人或嚴(yán)重0人。
隨后分析此隨機(jī)化，副作用隨機(jī)分布在各組中，8人涉及安慰劑，8人涉及200μg硒，6人涉及300μg硒。結(jié)論是副作用并不顯著，并且與本發(fā)明的硒酵母沒有關(guān)系。
實(shí)施例3片劑本發(fā)明硒酵母片劑由以下成分制備本發(fā)明硒酵母片劑輔料微晶纖維素二氧化硅脂肪酸鎂鹽流動(dòng)劑磷酸二鈣表面處理劑羥基丙基甲基纖維素滑石著色劑二氧化鈦這些成分用傳統(tǒng)的方式混合，并被壓縮成片劑，以便每片含有100μg來(lái)自硒酵母的硒。
實(shí)施例4硒酵母的物質(zhì)形成以傳統(tǒng)方式用糖蜜培養(yǎng)的硒酵母和兩批本發(fā)明的硒酵母被用來(lái)檢測(cè)各種硒化合物的含量。樣品在無(wú)氧環(huán)境中進(jìn)行酸水解，并用巰基乙酸作為穩(wěn)定劑。隨后結(jié)合實(shí)驗(yàn)室參考，通過HPLC測(cè)定硒代甲硫氨酸和亞硒酸鈉的含量。
糖密培養(yǎng)的硒酵母，在可抽提的及HPLC可接近的部分中硒代甲硫氨酸的含量為49％，而本發(fā)明兩個(gè)獨(dú)立生產(chǎn)批次的硒酵母在可抽提的及HPLC可接近的部分中硒代甲硫氨酸的含量分別為72.8和72.9％。
總硒的可抽提部分占95到101％，其中約有80％可以通過HPLC的方式被測(cè)試。總硒中1-硒代甲硫氨酸的最小真實(shí)量因此為72.8％×95％×80％＝55.3％。最大可能的真實(shí)量接近90％。測(cè)得的亞硒酸鈉的量低于1％?？梢允褂肊rik.H.Larsen等人描述的方法(即Larsen，E.H.等人，J.Anal.At.Spectrom，16，1403-1408，2000)測(cè)定硒的種類。
在該實(shí)施例中，可重復(fù)性的重要性勝于實(shí)際的真實(shí)量。
實(shí)施例5硒酵母和無(wú)機(jī)硒的體內(nèi)吸收與實(shí)施例2b)應(yīng)用的方法一樣，本發(fā)明的硒酵母與無(wú)機(jī)硒-77被提供給相同的12個(gè)測(cè)試者服用。人對(duì)兩種硒來(lái)源的吸收分別為89％(本發(fā)明硒酵母)和23％(無(wú)機(jī)硒)。
權(quán)利要求
1.一種制備用于食品、膳食補(bǔ)充品或藥品的硒酵母產(chǎn)物的方法，其中所述酵母在有氧條件下培養(yǎng)于基本培養(yǎng)基中，該方法特征在于具有以下步驟a)培養(yǎng)所述酵母，包括i)在培養(yǎng)過程中，以與營(yíng)養(yǎng)物在酵母中的消耗相應(yīng)的程度將所述營(yíng)養(yǎng)物加入酵母中；ii)在流加培養(yǎng)基中，葡萄糖和/或麥芽糖是唯一的碳源；iii)在培養(yǎng)過程中乙醇的濃度不超過1％，優(yōu)選不超過0.5％，且最優(yōu)選不超過0.2％；iv)培養(yǎng)過程中pH值保持在介于4.0到6.0之間，優(yōu)選介于4.4到5.7之間，最優(yōu)選介于4.7到5.4之間，例如5.0；和v)將水性硒鹽與流加培養(yǎng)基混合，其中所述水性硒鹽的量以酵母干物質(zhì)計(jì)算相當(dāng)于介于1000到1500ppm的硒。b)分離步驟(a)獲得的酵母。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征是分離步驟包括使用離心或過濾的方法收獲。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于進(jìn)一步包括以下步驟c)洗滌來(lái)自步驟(b)的酵母細(xì)胞，d)熱處理步驟(c)的酵母細(xì)胞，和e)任選地干燥步驟(d)的產(chǎn)物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述基本培養(yǎng)基由具有藥物質(zhì)量的原料組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1到4中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述酵母包括糖酵母屬物種，優(yōu)選啤酒糖酵母，Saccharomyces boulardii sequela和/或Saccharomyces torula。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其特征在于所述酵母是啤酒糖酵母。
7.用于食品、膳食補(bǔ)充品或藥品的硒酵母產(chǎn)物，其特征在于a)有機(jī)硒化合物的含量相應(yīng)于介于1000到1600ppm的硒，優(yōu)選介于1100ppm到1500ppm的硒，最優(yōu)選介于1200ppm到1400ppm的硒，b)1-硒代甲硫氨酸的含量恒定地占硒總含量的至少55％，并且無(wú)機(jī)硒化合物的硒含量不超過硒總含量的1％，c)所述硒酵母產(chǎn)物可以通過下述方法得到培養(yǎng)酵母培養(yǎng)物，所述酵母培養(yǎng)物接種了糖酵母物種的純培養(yǎng)物，優(yōu)選啤酒糖酵母，S.boulardii sequela和/或S.torula；加入碳源、氮源和硒源，其每單位時(shí)間加入的量相應(yīng)于預(yù)定時(shí)間段內(nèi)能被所述酵母吸收的量；和在基本培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，所述基本培養(yǎng)基只含有藥典中所描述的以原料形式存在的純化并均一性確定的營(yíng)養(yǎng)物。
8.權(quán)利要求7的硒酵母產(chǎn)物，其特征在于它可以通過權(quán)利要求1到6中任一項(xiàng)的方法獲得。
9.權(quán)利要求7或8的硒酵母產(chǎn)物在制備食品中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求7或8的硒酵母產(chǎn)物在制備膳食補(bǔ)充品中的應(yīng)用。
11.權(quán)利要求7或8的硒酵母產(chǎn)物在制備藥品中的應(yīng)用。
全文摘要
提供了用于食品、膳食補(bǔ)充品或藥品的硒酵母產(chǎn)物，其含有顯著和均一數(shù)量的易被消化的有機(jī)結(jié)合硒，在該硒酵母產(chǎn)物中硒化合物的含量介于1000到1600ppm的范圍，1－硒代甲硫氨酸的含量恒定地占硒總含量的至少55％，并且無(wú)機(jī)硒化合物中的硒含量不超過硒總含量的1％。除此以外，提供了一種制備用于食品、膳食補(bǔ)充品或藥品的硒酵母產(chǎn)物的方法，其中該酵母在有氧條件下被培養(yǎng)于基本培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)過程中，以與營(yíng)養(yǎng)物在酵母中的消耗相應(yīng)的程度將此營(yíng)養(yǎng)物加入酵母；葡萄糖和/或麥芽糖是流加培養(yǎng)基中的唯一碳源。
文檔編號(hào)A23L1/28GK1643130SQ03806081
公開日2005年7月20日 申請(qǐng)日期2003年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月15日
發(fā)明者S·莫斯加爾德, H·S·鮑林 申請(qǐng)人:法爾諾公司