專利名稱：油菜花粉發(fā)酵破壁新方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種油菜花粉發(fā)酵破壁新方法。
背景技術：
花粉(pollen)是植物雄性配子體，植物高度濃縮的“微型營養(yǎng)庫”，其不僅含有人體生存所需的多種營養(yǎng)物質，而且含有多種生物活性物質，對肌體的各種生理功能具有奇妙的調(diào)節(jié)作用，可以增強體質、提高免疫力、延緩衰老、降低血壓等，被譽為“完全營養(yǎng)品”?；ǚ凼怯苫ǚ郾诤蛢?nèi)含物(或原生質，花粉主要營養(yǎng)物質)所組成，花粉壁可分為外壁與內(nèi)壁，外壁主要由孢粉素和纖維素組成，內(nèi)壁主要由纖維素和果膠組成；由于組成壁成分性質的獨特性導致花粉細胞壁難于破損。這既影響了營養(yǎng)成分的吸收利用，也阻止了提取時營養(yǎng)物質的釋放。據(jù)統(tǒng)計，我國目前花粉資源利用率僅是一般資源量的1/24，為最高資源量的1/240。因此花粉的破壁十分重要。許多研究都證明了破壁后花粉的營養(yǎng)效果較破壁前好的多。
迄今為止，有關油菜花粉破壁的工藝有過很多報道，目前常用的破壁方法多為物理法(如高壓氣流碰撞法、超聲波法、冷凍加熱法、膨化法等)，主要存在的問題有1)對設備和工作條件要求高，投入大，不宜推廣和實施產(chǎn)業(yè)化；2)破壁率低；3)利用溫差法時，由于溫度的變化過大，導致花粉營養(yǎng)物質的極大破壞。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種油菜花粉發(fā)酵破壁新方法。
油菜花粉破壁的步驟如下1)培養(yǎng)基制備(1)豆用粉碎機碾碎，按1∶8-12的比例加水，在高壓鍋中蒸煮60-80min，用紗布過濾，或將黃豆包在紗布中蒸煮，提取黃豆汁，按黃豆∶蔗糖∶瓊脂＝8-12∶2-4∶3-5的比例制備培養(yǎng)基；(2)虎紅培養(yǎng)基按每1000ml蒸餾水中加入蛋白胨4-6g，葡萄糖8-12g，磷酸二氫鉀1-2g，硫酸鎂0.3-0.6g，瓊脂18-22g，氯霉素0.1-0.2g的比例溶解后，再加入1/3000虎紅水溶液80-120ml，分裝后，高壓滅菌；
(3)霉菌培養(yǎng)基按每1000ml蒸餾水中加入蛋白胨4-6g，酵母浸出液1-3g，磷酸氫二鉀0.5-1.5g，硫酸鎂0.3-0.6g，瓊脂18-20g，氯霉素0.1-0.2g的比例溶解(微溫)，調(diào)pH為6.5-7.0，煮沸，加18-20g葡萄糖，溶解后，過濾調(diào)pH為6.0±0.5，使滅菌后pH為6.4±0.2，高壓滅菌；(4)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基將馬鈴薯去皮切塊，加蒸餾水，煮沸10-20min。用紗布過濾，補加蒸餾水至1000ml，加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝，高壓滅菌；2)滅菌、接種將剛制備的培養(yǎng)基趁熱分裝于培養(yǎng)皿中(10-15ml)，在1.4Kg/cm2，121℃條件下滅菌15-20min，冷卻至室溫，在超凈工作臺上接種試管菌種，置28-30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；3)曲子制備采用麥麩培養(yǎng)基，每100g原料加水40-45g，攪拌均勻后，分裝于的三角瓶(每瓶30-40g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃條件下滅菌10-20min，冷卻至室溫，在超凈工作臺將培養(yǎng)皿中30-40％的菌種接入三角瓶，在28-30℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵；4)酶液制備將已發(fā)酵完全的曲子方入適量的溫水，約為原料的70-100％，浸泡3-4小時，然后用外力積壓曲子，收集發(fā)酵液，得酶液；5)發(fā)酵酶液將油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎過篩，得均勻花粉粒，用無水酒精噴灑滅菌，放入Φ20cm的培養(yǎng)皿中真空烘干備用。將粉碎均勻的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝1-3∶1)按9-12∶14-16的比例多次混合均勻，置培養(yǎng)皿中于恒溫培養(yǎng)箱中37±0.5℃發(fā)酵11-14小時，pH為4-5，即可得破壁花粉。
本發(fā)明的優(yōu)點是1)需要的設備簡單，成本低，易實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化；2)生產(chǎn)工藝簡捷、易操作；3)破壁率高，達98％以上，對營養(yǎng)成分破壞較??；4)能夠改良花粉的脫敏、脫苦、脫澀等。
具體實施例方式
2)虎紅(孟加拉紅)培養(yǎng)基將蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g，瓊脂20g，1/3000虎紅水溶液100ml，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸餾水中溶解后，再加入虎紅溶液，分裝后，高壓滅菌(121℃，20min)。
3)霉菌培養(yǎng)基將蛋白胨5g，酵母浸出液2g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g，瓊脂20g，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸餾水中，微溫溶解，調(diào)pH為6.8，煮沸，加20g葡萄糖，溶解后，過濾調(diào)pH為6.6，使滅菌后pH為6.5，高壓滅菌(115℃，20min)。
4)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)將馬鈴薯去皮切塊，加蒸餾水，煮沸20min。用紗布過濾，補加蒸餾水至1000ml，加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝，高壓滅菌(121℃，20min)。
2、滅菌、接種將剛制備的培養(yǎng)基趁熱分裝于Φ9cm的培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿中10ml，在1.4Kg/cm2，121℃條件下滅菌15min，冷卻至室溫，在超凈工作臺上接種試管菌種，置29℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。
3、曲子制備采用麥麩培養(yǎng)基，每100g原料加水40g，攪拌均勻后，分裝于250ml的三角瓶(每瓶35g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃條件下滅菌15min，冷卻至室溫，在超凈工作臺將培養(yǎng)皿中35％的菌種接入三角瓶，在30℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵36小時。
4、酶液制備將已發(fā)酵完全的曲子方入適量的溫水，約為原料的90％，浸泡3小時，然后用手積壓曲子，收集發(fā)酵液，得酶液。
5、發(fā)酵酶液將油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎過篩，得均勻花粉粒，用無水酒精噴灑滅菌，放入Φ20cm的培養(yǎng)皿中真空烘干備用。將粉碎均勻的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝2∶1)按10∶15的比例多次混合均勻，置培養(yǎng)皿中于恒溫培養(yǎng)箱中37℃發(fā)酵12小時，pH為4.5，即可得破壁花粉。
6、破壁效果破壁率為100％。
2)虎紅(孟加拉紅)培養(yǎng)基將蛋白胨6g，葡萄糖12g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.6g，瓊脂22g，氯霉素0.2g，加入1000ml蒸餾水中溶解后，再加1/3000虎紅水溶液120ml，分裝后，高壓滅菌(121℃，30min)。
3)霉菌培養(yǎng)基將蛋白胨6g，酵母浸出液3g，磷酸氫二鉀1.5g，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.6g，瓊脂20g，氯霉素0.2g，加入1000ml蒸餾水中，微溫溶解，調(diào)pH為6.8，煮沸，加20g葡萄糖，溶解后，過濾調(diào)pH為6.8，使滅菌后pH為6.4，高壓滅菌(115℃，30min)。
4)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)將馬鈴薯去皮切塊，加蒸餾水，煮沸20min。用紗布過濾，用蒸餾水定容至1000ml，加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝，高壓滅菌(121℃，30min)。
2、滅菌、接種將剛制備的培養(yǎng)基趁熱分裝于Φ9cm的培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿加入15ml，在1.4Kg/cm2，121℃條件下滅菌30min，冷卻至室溫，在超凈工作臺上接種試管菌種，置30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。
3、曲子制備采用麥麩培養(yǎng)基，每100g原料加水45g，攪拌均勻后，分裝于250ml的三角瓶(每瓶40g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃條件下滅菌20min，冷卻至室溫，在超凈工作臺將培養(yǎng)皿中40％的菌種接入三角瓶，在30℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵36小時。
4、酶液制備將已發(fā)酵完全的曲子放入適量的溫水，約為原料的100％，浸泡4小時，然后用手積壓曲子，收集發(fā)酵液，得酶液。
5、發(fā)酵酶液將油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎過篩，得均勻花粉粒，用無水酒精噴灑滅菌，放入Φ20cm的培養(yǎng)皿中真空烘干備用。將粉碎均勻的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝3∶1)按11∶16的比例多次混合均勻，置培養(yǎng)皿中于恒溫培養(yǎng)箱中37℃發(fā)酵14小時，pH為5.0，即可得破壁花粉。
6、破壁效果破壁率為99.1％
6、破壁效果破壁率為98.5％。
權利要求
1.一種油菜花粉發(fā)酵破壁新方法，其特征在于它的破壁步驟如下1)培養(yǎng)基制備(1)豆用粉碎機碾碎，按1∶8-12的比例加水，在高壓鍋中蒸煮60-80min，用紗布過濾，或將黃豆包在紗布中蒸煮，提取黃豆汁，按黃豆∶蔗糖∶瓊脂＝8-12∶2-4∶3-5的比例制備培養(yǎng)基；(2)虎紅培養(yǎng)基按每1000ml蒸餾水中加入蛋白胨4-6g，葡萄糖8-12g，磷酸二氫鉀1-2g，硫酸鎂0.3-0.6g，瓊脂18-22g，氯霉素0.1-0.2g的比例溶解后，再加入1/3000虎紅水溶液80-120ml，分裝后，高壓滅菌；(3)霉菌培養(yǎng)基按每1000ml蒸餾水中加入蛋白胨4-6g，酵母浸出液1-3g，磷酸氫二鉀0.5-1.5g，硫酸鎂0.3-0.6g，瓊脂18-20g，氯霉素0.1-0.2g的比例溶解(微溫)，調(diào)pH為6.5-7.0，煮沸，加18-20g葡萄糖，溶解后，過濾調(diào)pH為6.0±0.5，使滅菌后pH為6.4±0.2，高壓滅菌；(4)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基將馬鈴薯去皮切塊，加蒸餾水，煮沸10-20min。用紗布過濾，補加蒸餾水至1000ml，加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝，高壓滅菌；2)滅菌、接種將剛制備的培養(yǎng)基趁熱分裝于培養(yǎng)皿中(10-15ml)，在1.4Kg/cm2，121℃條件下滅菌15-20min，冷卻至室溫，在超凈工作臺上接種試管菌種，置28-30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；3)曲子制備采用麥麩培養(yǎng)基，每100g原料加水40-45g，攪拌均勻后，分裝于的三角瓶，在1.4Kg/cm2，121℃條件下滅菌10-20min，冷卻至室溫，在超凈工作臺將培養(yǎng)皿中30-40％的菌種接入三角瓶，在28-30℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵；4)酶液制備將已發(fā)酵完全的曲子方入適量的溫水，約為原料的70-100％，浸泡3-4小時，然后用外力積壓曲子，收集發(fā)酵液，得酶液；5)發(fā)酵酶液將油菜花粉真空烘干，粉碎過篩，得均勻花粉粒，用無水酒精噴灑滅菌，放入Φ20cm的培養(yǎng)皿中真空烘干備用；將粉碎均勻的花粉和酶液按9-12∶14-16的比例多次混合均勻，置培養(yǎng)皿中于恒溫培養(yǎng)箱中37±0.5℃發(fā)酵11-14小時，pH為4-5，即可得破壁花粉。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種油菜花粉發(fā)酵破壁新方法，其特征在于它的破壁步驟如下1)培養(yǎng)基制備(1)黃豆用粉碎機碾碎，按1∶10的比例加水，在高壓鍋中蒸煮65min，用紗布過濾，提取黃豆汁，按10mg黃豆，3mg蔗糖，4mg瓊脂的比例制備培養(yǎng)基，pH自然狀態(tài)。(2)虎紅(孟加拉紅)培養(yǎng)基將蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g，瓊脂20g，1/3000虎紅水溶液100ml，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸餾水中溶解后，再加入虎紅溶液，分裝后，高壓滅菌(121℃，20min)。(3)霉菌培養(yǎng)基將蛋白胨5g，酵母浸出液2g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g，瓊脂20g，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸餾水中，微溫溶解，調(diào)pH為6.8，煮沸，加20g葡萄糖，溶解后，過濾調(diào)pH為6.6，使滅菌后pH為6.5，高壓滅菌(115℃，20min)。(4)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)將馬鈴薯去皮切塊，加蒸餾水，煮沸20min。用紗布過濾，補加蒸餾水至1000ml，加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝，高壓滅菌(121℃，20min)。2)滅菌、接種將剛制備的培養(yǎng)基趁熱分裝于Φ9cm的培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿中10ml，在1.4Kg/cm2，121℃條件下滅菌15min，冷卻至室溫，在超凈工作臺上接種試管菌種，置29℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。3)曲子制備采用麥麩培養(yǎng)基，每100g原料加水40g，攪拌均勻后，分裝于250ml的三角瓶(每瓶35g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃條件下滅菌15min，冷卻至室溫，在超凈工作臺將培養(yǎng)皿中35％的菌種接入三角瓶，在30℃的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵36小時。4)酶液制備將已發(fā)酵完全的曲子方入適量的溫水，約為原料的90％，浸泡3小時，然后用手積壓曲子，收集發(fā)酵液，得酶液。5)發(fā)酵酶液將油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎過篩，得均勻花粉粒，用無水酒精噴灑滅菌，放入Φ20cm的培養(yǎng)皿中真空烘干備用。將粉碎均勻的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝2∶1)按10∶15的比例多次混合均勻，置培養(yǎng)皿中于恒溫培養(yǎng)箱中37℃發(fā)酵12小時，pH為4.5，即可得破壁花粉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種油菜花粉發(fā)酵破壁新方法。油菜花粉破壁的步驟如下1)培養(yǎng)基制備2)滅菌、接種；3)曲子制備；4)酶液制備將已發(fā)酵完全的曲子放入溫水，約為原料的70－100％，浸泡3－4小時，然后用外力積壓曲子，收集發(fā)酵液，得酶液；5)發(fā)酵酶液將油菜花粉真空烘干，粉碎過篩，得均勻花粉粒，用無水酒精噴灑滅菌，放入Φ20cm的培養(yǎng)皿中真空烘干備用。將粉碎均勻的花粉和酶液，按9－12∶14－16的比例多次混合均勻，置培養(yǎng)皿中于恒溫培養(yǎng)箱中37±0.5℃發(fā)酵，即可得破壁花粉。本發(fā)明的優(yōu)點是1)需要的設備簡單，成本低，易實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化；2)生產(chǎn)工藝簡捷、易操作；3)破壁率高，達98％以上，對營養(yǎng)成分破壞較??；4)能夠改良花粉的脫敏、脫苦、脫澀等。
文檔編號A23L1/076GK1452888SQ0311599
公開日2003年11月5日 申請日期2003年3月24日 優(yōu)先權日2003年3月24日
發(fā)明者沈生榮, 于海寧, 白驊 申請人:浙江大學