自古以來，蜂蜜已被用于治療微生物感染。近年來，人們對蜂蜜的治療功效(特別是在傷口愈合領(lǐng)域)的興趣再度興起。臨床試驗已表明，蜂蜜是有效的廣譜抗微生物劑，其對抗常見的傷口感染生物體諸如銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、白色念珠菌(Candidaalbicans)和大腸桿菌(Escherichiacoli)有效，并且在抗細(xì)菌的抗生素抗性菌株方面有效。作為一種天然產(chǎn)品，蜂蜜也提供了有吸引力的替代藥物治療。許多不同類型的蜂蜜具有抗菌活性。該活性主要歸因于摩爾滲透壓濃度、pH、過氧化氫產(chǎn)生和植物化學(xué)組分的存在。與大多數(shù)其它蜂蜜相比，源自麥盧卡樹(Leptospermumscoparium)的麥盧卡蜂蜜已被認(rèn)為具有優(yōu)異的抗微生物活性，這是由于這種蜂蜜中存在高水平的抗菌植物化學(xué)活性。然而，麥盧卡蜂蜜的供應(yīng)相對有限，不能滿足全球市場的需求。除了其抗微生物作用之外，蜂蜜的幾種其它活性被認(rèn)為有助于傷口愈合，特別是慢性傷口的愈合。具體地，蜂蜜具有對傷口自溶性清創(chuàng)和除臭的能力。清創(chuàng)是去除死的，損壞的或感染的組織以改善剩余健康組織的愈合潛力。蜂蜜也已被報道具有抗炎性質(zhì)，能夠刺激組織生長，并且控制疼痛和最小化瘢痕形成。目前市場上有幾種基于蜂蜜的傷口護(hù)理敷料。這些敷料中有許多使用麥盧卡蜂蜜或具有高水平的非過氧化物抗菌活性的其它蜂蜜，因為存在于傷口流體中的酸性、過氧化氫酶活性和蛋白質(zhì)消化酶可降低過氧化氫的抗菌效力。目前市售的基于蜂蜜的敷料包括由Comvita/DermaSciences制造的Medihoney系列產(chǎn)品，其包含麥盧卡蜂蜜，以及由Advancis制造的Activon(一種無添加劑的純麥盧卡蜂蜜)。其它基于蜂蜜的敷料含有蜂蜜和一種或多種另外的成分。這些成分包括MelladermPlus，其是由SanoMed制造的抗菌傷口凝膠。該凝膠含有來自保加利亞的多花山區(qū)的蜂蜜，所述蜂蜜具有天然高的葡萄糖氧化酶和酚含量(蜂蜜中的主要植物化學(xué)成分是酚類化合物)。在加工期間，蜂蜜不被加熱或輻照，因為這被認(rèn)為破壞其愈合性質(zhì)(特別是通過葡萄糖氧化酶產(chǎn)生過氧化氫)。替代地使用WO2008/049578中描述的臭氧化方法滅菌，其中將臭氧氣體鼓泡通過耐臭氧容器中的液化蜂蜜。然而，臭氧已經(jīng)被美國食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)為僅用于可重復(fù)使用的醫(yī)療裝置的滅菌劑，因此目前沒有被美國FDA授權(quán)用于對用于傷口愈合的基于蜂蜜的產(chǎn)品進(jìn)行滅菌。Mesitran系列是另一系列富含蜂蜜的傷口護(hù)理產(chǎn)品。由Triticum制造的L-Mesitran軟膏含有48％的醫(yī)用級蜂蜜和幾種其它組分，包括羊毛脂、向日葵油、鱈魚肝油、萬壽菊、蘆薈、維生素C和E以及氧化鋅。蜂蜜間抗微生物能力的差異可以超過一百倍，這取決于蜂蜜的地理、季節(jié)和植物來源，以及收獲、加工和儲存條件。因此，基于蜂蜜的敷料根據(jù)所使用的蜂蜜的類型具有不同的抗微生物功效。由Jenkins，Burton和Cooper(“ThedeterminationofantimicrobialactivityofthreehoneyimpregnatedwounddressingsbychallengetestwithEMRSA-15”,Advancis)撰寫的研究發(fā)現(xiàn)，含有Activon、Medihoney或Mesitran產(chǎn)品的基于蜂蜜的敷料均具有抗EMRSA-15的不同效力。Activon浸漬的敷料是最有效的，然后是Medihoney敷料，Mesitran產(chǎn)品具有大大減小的作用。因此，需要降低蜂蜜的抗微生物能力的可變性，并提高具有低抗微生物能力的蜂蜜的抗微生物活性。還期望提供不依賴于使用具有高水平植物化學(xué)組分的蜂蜜的有效的基于蜂蜜的傷口護(hù)理產(chǎn)品。還期望提供沒有通過臭氧化滅菌的有效的基于蜂蜜的傷口護(hù)理產(chǎn)品。還有幾種其它不包含蜂蜜的抗菌傷口護(hù)理敷料。這些敷料包括含銀敷料，諸如ConvaTec’sAg敷料，隨著傷口滲出物被吸收至敷料中，其以受控的方式釋放離子銀。然而，已經(jīng)報道了耐銀生物體，諸如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和腸球菌屬(enterococci)，并且所述生物體可促進(jìn)傷口愈合中的無痛。聚維酮碘(PVP-I)是聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮，PVP)和元素碘的穩(wěn)定化學(xué)復(fù)合物。其是用于局部應(yīng)用以治療和預(yù)防傷口感染的廣譜殺菌劑。已經(jīng)證明細(xì)菌不產(chǎn)生對PVP-I的抗性。自1994年以來，PVP-I已被美國FDA批準(zhǔn)用于急性小傷口的急救治療。然而，其安全性和有效性存在一些爭議，并且未被美國衛(wèi)生和人類服務(wù)部推薦用于壓力性潰瘍。氯己定對廣譜的非芽孢細(xì)菌具有快速的殺菌活性。已經(jīng)記錄了針對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和一系列臨床分離株的抗菌活性。然而，已經(jīng)觀察到甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)對氯己定有抗性。在英國，藥品和保健產(chǎn)品監(jiān)管機(jī)構(gòu)(MHRA)還發(fā)布了關(guān)于使用醫(yī)療器械和含有氯己定的藥物產(chǎn)品引起的過敏反應(yīng)風(fēng)險的患者安全警示。因此，還需要提供具有廣譜活性的無毒的，可用于治療慢性傷口的抗微生物傷口護(hù)理產(chǎn)品。本申請人已認(rèn)識到，蜂蜜的抗微生物活性取決于天然抑制劑與活化劑之間的微妙相互關(guān)系，并且已經(jīng)開發(fā)了組合物，其中蜂蜜的天然抗微生物活性可隨不同類型的蜂蜜以及蜂蜜的不同收獲物之間的可變性減小少而釋放，并且其中可以改善具有差的抗微生物效力的蜂蜜的抗微生物性質(zhì)。本申請人還發(fā)現(xiàn)，即使在通過暴露于γ輻照的滅菌之后，此類組合物還具有顯著的傷口愈合性質(zhì)。本申請人已經(jīng)認(rèn)識到，這些發(fā)現(xiàn)也適用于其它天然物質(zhì)。申請人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，組合物的抗微生物效力可以在寬范圍內(nèi)得以精確地增強(qiáng)和控制。這使得可能提供具有最適于預(yù)期用途的抗微生物效力的組合物。在其最廣泛的意義上，本發(fā)明提供了用于生成抗微生物活性的組合物，其包含能夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的酶和包含酶的底物的物質(zhì)。所述酶是除了可能存在于所述物質(zhì)中的夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的任何酶活性(本文稱為“底物轉(zhuǎn)化活性”)以外的酶(即，作為人干預(yù)的結(jié)果添加的)。優(yōu)選地，組合物是儲存穩(wěn)定的組合物，其不包括足以允許所述酶轉(zhuǎn)化所述底物的游離水。根據(jù)本發(fā)明，提供了用于生成抗微生物活性的儲存穩(wěn)定的組合物，其包含：能夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的純化的酶；和包括所述酶的底物的物質(zhì)；其中所述組合物不包括足以允許所述酶轉(zhuǎn)化所述底物的游離水。根據(jù)本發(fā)明，還提供了產(chǎn)生用于生成抗微生物活性的儲存穩(wěn)定的組合物的方法，其包括：將能夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的純化的酶與包括酶的底物的物質(zhì)接觸，其中所述組合物不包括足以允許所述酶轉(zhuǎn)化所述底物的游離水。根據(jù)本發(fā)明，還提供了用于生成抗微生物活性的儲存穩(wěn)定的組合物，其包含：能夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的酶；和缺乏過氧化氫酶活性并且包括所述酶的底物的物質(zhì)；其中所述組合物不包括足以允許所述酶轉(zhuǎn)化所述底物的游離水。根據(jù)本發(fā)明，還提供了產(chǎn)生用于生成抗微生物活性的儲存穩(wěn)定的組合物的方法，其包括：將能夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的酶與缺乏過氧化氫酶活性并且包括所述酶的底物的物質(zhì)接觸，其中所述組合物不包括足以允許所述酶轉(zhuǎn)化所述底物的游離水。在足夠的水存在下，儲存穩(wěn)定的組合物的酶能夠轉(zhuǎn)化底物并釋放過氧化氫。已知過氧化氫在抗多種不同的微生物方面是有效的。因此，在稀釋本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物后生成抗微生物活性。根據(jù)本發(fā)明，還提供了用于產(chǎn)生抗微生物組合物或溶液的方法，其包括用足夠的水稀釋本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物以允許酶轉(zhuǎn)化底物并釋放過氧化氫。根據(jù)本發(fā)明，還提供了抗微生物組合物或溶液，其包含用足夠的水稀釋的本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物，以允許通過酶轉(zhuǎn)化底物而釋放過氧化氫。過氧化氫酶是催化過氧化氫分解成水和氧的酶。使用缺乏過氧化氫酶活性的物質(zhì)意味著在來自不同來源的相似物質(zhì)之間或來自相同來源的不同收獲物之間，這種活性的量沒有可變性。這降低了可以從此類物質(zhì)生成的抗微生物活性的可變性。或者，如果物質(zhì)包括過氧化氫酶活性，并且不可能或不需要在物質(zhì)與酶接觸之前使物質(zhì)中的過氧化氫酶活性失活，則可以使用足夠的酶，以使得過氧化氫酶活性對可從所述物質(zhì)生成的過氧化氫的影響減小。這也降低了可從所述物質(zhì)生成的抗微生物活性的可變性。在一些實施方案中，優(yōu)選所述物質(zhì)缺乏過氧化氫酶活性。過氧化氫酶存在于許多植物和動物中?？稍谖镔|(zhì)的加工或提取期間除去過氧化氫酶活性，或者在物質(zhì)用于本發(fā)明的組合物之前滅活過氧化氫酶活性。過氧化氫酶活性可被熱滅活，例如通過巴氏滅菌。用于熱滅活過氧化氫酶活性的合適溫度為至少60℃、70℃或80℃，優(yōu)選持續(xù)至少2分鐘。術(shù)語“儲存穩(wěn)定的”在本文中用于指組合物可在環(huán)境溫度下儲存至少數(shù)天，優(yōu)選至少一周，更優(yōu)選至少一或兩個月，同時在稀釋組合物后保留生成抗微生物活性的能力。優(yōu)選的儲存溫度低于37℃，優(yōu)選20-25℃。優(yōu)選地，將組合物避光儲存。過氧化氫在環(huán)境溫度下通常是不穩(wěn)定的。本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物中缺乏足夠的游離水防止酶轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫，從而有助于在環(huán)境溫度下長時間保持組合物的穩(wěn)定性。本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物可包括一些水，條件是沒有足以允許酶轉(zhuǎn)化底物的游離水。水的適當(dāng)量將根據(jù)組合物的精確組分而變化。然而，通常，本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物優(yōu)選包含少于20％的總水含量，例如10％-19％的水。過氧化氫可在稀釋本發(fā)明的組合物后持續(xù)釋放一段時間，這取決于組合物中存在的底物的量和酶的活性。應(yīng)當(dāng)理解，可以選擇組合物中底物的量和/或酶的活性，以在組合物稀釋后提供相對高水平的過氧化氫在短時間內(nèi)的釋放，或較低水平的過氧化氫在較長時間內(nèi)的釋放。優(yōu)選地，在稀釋組合物后，組合物提供過氧化氫的持續(xù)釋放至少24小時，更優(yōu)選至少48小時的時間。優(yōu)選地，在稀釋組合物后，組合物以小于2mmol/升的水平提供持續(xù)至少24小時的時間的過氧化氫的持續(xù)釋放。存在于本發(fā)明的組合物中的酶是除了可存在于物質(zhì)中的能夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的任何酶活性(本文稱為“底物轉(zhuǎn)化活性”)以外的酶，即本發(fā)明的組合物包含所述物質(zhì)和添加的酶。在一些實施方案中，優(yōu)選在所述物質(zhì)中不存在底物轉(zhuǎn)化活性。應(yīng)當(dāng)理解，在本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物中應(yīng)存在足夠的酶以在稀釋組合物后根據(jù)需要轉(zhuǎn)化底物并形成過氧化氫。鑒于在足夠的水存在下通過本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物生成過氧化氫的重要性，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的組合物不應(yīng)含有任何添加的過氧化物酶。優(yōu)選地，酶是純化的酶。術(shù)語“純化的酶”在本文中用于包括酶制劑，其中酶已經(jīng)與當(dāng)酶產(chǎn)生時最初存在的至少一些雜質(zhì)分離。優(yōu)選已被除去或減少的雜質(zhì)包括否則會干擾酶轉(zhuǎn)化底物釋放過氧化氫的能力的雜質(zhì)。純化的酶處于高水平的純度可以不總是必要或需要的，條件是酶能夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫。在一些情況下，可能需要使用相對粗制的酶制劑。合適的純度水平的實例包括至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的純度。然而，優(yōu)選的是，生產(chǎn)酶時可最初存在的任何過氧化氫酶的量已經(jīng)減少。該酶可以通過重組或非重組方法產(chǎn)生，并且可以是重組或非重組酶。該酶可以從微生物來源，優(yōu)選地從非遺傳修飾的微生物純化。酶的純度水平可以根據(jù)組合物的預(yù)期用途適當(dāng)?shù)剡x擇。例如，如果組合物預(yù)期用于人消費，則食品級的純度可能是適當(dāng)?shù)?。對于醫(yī)療用途，應(yīng)使用醫(yī)療級或醫(yī)療裝置級的純度。優(yōu)選地該酶是氧化還原酶。可轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的氧化還原酶的實例包括葡萄糖氧化酶、己糖氧化酶、膽固醇氧化酶、半乳糖氧化酶、吡喃糖氧化酶、膽堿氧化酶、丙酮酸氧化酶、乙醇酸氧化酶和氨基酸氧化酶。這些氧化還原酶的相應(yīng)底物分別是D-葡萄糖、己糖、膽固醇、D-半乳糖、吡喃糖、膽堿、丙酮酸鹽、乙醇酸鹽和氨基酸。一種或多種氧化還原酶和一種或多種氧化還原酶的底物的混合物可以存在于本發(fā)明的組合物中。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，氧化還原酶是葡萄糖氧化酶，底物是D-葡萄糖。所述物質(zhì)可以是包括酶的底物的任何物質(zhì)。優(yōu)選地，所述物質(zhì)缺乏過氧化氫酶活性。優(yōu)選地，物質(zhì)是未精制的物質(zhì)。術(shù)語“未精制的”在本文中用于指未被加工成純形式的物質(zhì)。未精制的物質(zhì)包括可能已經(jīng)濃縮(例如通過干燥或煮沸)的物質(zhì)。優(yōu)選地，所述物質(zhì)包括來自天然來源(本文稱為“天然物質(zhì)”)的一種或多種底物。天然物質(zhì)的實例包括來自植物來源的物質(zhì)，包括來自樹液、根、花蜜、花、種子、果實、葉或枝條的物質(zhì)。更優(yōu)選地，物質(zhì)是未精制的天然物質(zhì)。優(yōu)選地，該物質(zhì)包括一種或多種下列底物：D-葡萄糖、己糖、膽固醇、D-半乳糖、吡喃糖、膽堿、丙酮酸鹽、乙醇酸鹽或氨基酸。優(yōu)選地，所述物質(zhì)是糖物質(zhì)。術(shù)語“糖物質(zhì)”在本文中用于表示包括一種或多種糖的任何物質(zhì)。術(shù)語“糖”在本文中用于指具有通式Cm(H2O)n的碳水化合物。優(yōu)選的糖包括單糖，諸如D-葡萄糖、己糖或D-半乳糖。優(yōu)選地，糖物質(zhì)包括來自天然來源的一種或多種糖(本文稱為“天然糖物質(zhì)”)。更優(yōu)選地，天然糖物質(zhì)是未精制的天然糖物質(zhì)。未精制天然糖物質(zhì)可以是(或衍生自)天然糖產(chǎn)品。在優(yōu)選實施方案中，未精制天然糖產(chǎn)物是蜂蜜。在一些優(yōu)選實施方案中，蜂蜜是已被處理以除去過氧化氫酶活性或使過氧化氫酶活性失活的蜂蜜?；蛘?，未精制天然糖物質(zhì)可以是加工的天然糖，諸如糖漿或轉(zhuǎn)化糖漿。如上所述，所述物質(zhì)本身可優(yōu)選缺乏能夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的酶活性(稱為“底物轉(zhuǎn)化活性”)。缺乏來自物質(zhì)的底物轉(zhuǎn)化活性具有的優(yōu)點是，來自不同來源的相似物質(zhì)之間或來自相同來源的不同收獲物之間的活性的量沒有變化。這進(jìn)一步降低了可從這些物質(zhì)生成的抗微生物活性的可變性。然后僅通過與物質(zhì)接觸的酶提供底物轉(zhuǎn)化活性，因此可控制組合物中存在的底物轉(zhuǎn)化活性的量?？蓪⒌孜镛D(zhuǎn)化活性在物質(zhì)的加工或提取期間除去，或者在物質(zhì)用于本發(fā)明的組合物中之前滅活。底物轉(zhuǎn)化活性可以通過熱滅活，諸如通過巴氏滅菌失活。用于使底物轉(zhuǎn)化活性熱失活的合適溫度為至少80℃，優(yōu)選持續(xù)至少2分鐘。熱失活的有利方面是過氧化氫酶活性和底物轉(zhuǎn)化活性都可以在單一熱滅活步驟中失活。本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物可包括抗微生物劑。例如，如果通過將酶與水溶液中的物質(zhì)在用于通過酶轉(zhuǎn)化底物的條件下接觸形成儲存穩(wěn)定的組合物，然后干燥組合物以將其水含量降低至一定水平(其中游離水不足以允許酶轉(zhuǎn)化底物)，則可以存在過氧化氫。然而，優(yōu)選地，儲存穩(wěn)定的抗微生物組合物不包括任何可檢測的過氧化氫。此種組合物可以諸如通過在沒有足夠游離水以允許酶轉(zhuǎn)化底的情況下將酶與底物接觸物來形成?？纱嬖谟诒景l(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物中的其它抗微生物劑的實例包括：抗生素、抗病毒劑或抗真菌劑。特別優(yōu)選的是，本發(fā)明的組合物是食品標(biāo)準(zhǔn)組合物。此類組合物可用于人消費。在其它特別優(yōu)選實施方案中，組合物是醫(yī)療級或醫(yī)療裝置級組合物。或者，本發(fā)明的組合物可具有用于動物食用的動物食物標(biāo)準(zhǔn)。特別優(yōu)選的是，組合物的每種組分是天然物質(zhì)(即每種組分來源于天然來源)。僅含有天然成分的本發(fā)明的組合物提供了對基于藥物的抗微生物制劑的有吸引力的替代品。優(yōu)選地，所述物質(zhì)是蜂蜜。蜂蜜優(yōu)選地可以是醫(yī)療級或醫(yī)療裝置級蜂蜜。在一些實施方案中，優(yōu)選的是，蜂蜜是已被處理以除去最初存在于蜂蜜中的過氧化氫酶活性或使該活性失活的蜂蜜。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，所述物質(zhì)是巴氏滅菌的蜂蜜，并且所述酶是葡萄糖氧化酶。根據(jù)優(yōu)選實施方案，物質(zhì)是醫(yī)療級或醫(yī)療裝置級蜂蜜，并且酶是醫(yī)療級或醫(yī)療裝置級酶，優(yōu)選葡萄糖氧化酶。蜂蜜是由蜜蜂使用花的花蜜制成的天然產(chǎn)品。其是飽和或過飽和的糖溶液。蜂蜜在食品法典國際食品標(biāo)準(zhǔn)中被定義為“由蜜蜂從植物花蜜或植物生活部分的分泌物或植物吮吸昆蟲在植物生活部分上的排泄物(蜜蜂收集所述花蜜、分泌物或排泄物，通過將其與它們自已的特定物質(zhì)結(jié)合進(jìn)行轉(zhuǎn)化、沉積、脫水、儲存和留在蜂巢中以熟化和成熟)產(chǎn)生的天然甜味物質(zhì)”(RevisedCodexStandardforHoney，2001)?；弁ǔ０s14％的單糖(w/w)、1％的酚化合物和85％的水。酚化合物賦予蜂蜜其味道、香氣和顏色。在蜂巢的溫暖條件(通常36℃)下，花蜜將很快發(fā)酵。為了防止這種情況，將花蜜與來自覓食蜂的唾液腺和下咽腺的含有酶的分泌物混合。在蜂巢中，花蜜從蜜蜂傳遞至蜜蜂，并且在其被存儲在蜂巢的小室中之前被添加了更多的分泌物。存在的酶的量隨著蜜蜂的年齡、飲食和生理階段(當(dāng)蜜蜂是覓食者時，其腺體會產(chǎn)生更多的消化酶)、集落的強(qiáng)度、蜂巢的溫度以及花蜜流和其糖含量而變化。由蜜蜂添加到花蜜的酶包括催化淀粉轉(zhuǎn)化為糊精和糖的淀粉酶，催化蔗糖轉(zhuǎn)化為果糖和葡萄糖的轉(zhuǎn)化酶和催化葡萄糖轉(zhuǎn)化成過氧化氫和葡萄糖酸的葡萄糖氧化酶。低劑量的過氧化氫阻止將快速發(fā)酵花蜜的酵母的生長。當(dāng)蜜蜂逐漸干燥花蜜以形成蜂蜜時，葡萄糖酸使蜂蜜產(chǎn)生酸性(在pH3.5與4.5之間)。水被有效地捕獲至蜂蜜中的糖分子并且不可用于進(jìn)一步的化學(xué)反應(yīng)。蜂蜜中‘游離’水的量被測量為水活度(aw)。蜂蜜中發(fā)現(xiàn)的aw的范圍已報道為0.47-0.70，平均值為0.562和0.589(RCIEGG,M；BLANC,B,1981,Thewateractivityofhoneyandrelatedsugarsolutions.Lebensmittel-WissenschaftundTechnologie14:1-6)。熟化的蜂蜜的aw太低，以至不支持任何菌種的生長，如果水含量低于17.1％，則沒有發(fā)酵(Molan,P.C.(1992).Theantibacterialactivityofhoney:1.Thenatureoftheantibacterialactivity.BeeWorld,73(1),5-28)。蜂蜜的酸性和游離水的缺乏防止了發(fā)酵的進(jìn)一步風(fēng)險，并停止葡萄糖氧化酶的工作。蜂蜜還含有可變量的源自花蜜的過氧化氫酶。開花蜂蜜的典型化學(xué)組成是：表1此外，存在痕量的花粉，其可以用于鑒定蜂蜜的植物來源，以及酶轉(zhuǎn)化酶、淀粉酶、過氧化氫酶和葡萄糖氧化酶。還有植物化學(xué)組分。這是變化的，但通常高達(dá)～1％，這取決于蜂蜜的來源。一旦稀釋，存在于天然蜂蜜中的葡萄糖氧化酶能夠轉(zhuǎn)化稀釋的蜂蜜中的葡萄糖底物以釋放過氧化氫。然而，蜂蜜含量(特別是葡萄糖氧化酶活性、葡萄糖和過氧化氫酶活性的含量)的可變性意味著來自不同來源的蜂蜜或來自相同來源的蜂蜜的不同收獲物在其抗微生物效力方面可具有非常大的可變性。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，可對蜂蜜進(jìn)行巴氏滅菌。蜂蜜的巴氏滅菌使存在于蜂蜜中的過氧化氫酶和葡萄糖氧化酶活性失活。任選地，可過濾巴氏滅菌的蜂蜜以除去可在收獲后存在于蜂蜜中的任何顆粒(諸如蠟顆粒和蜂翅)。為了形成本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物，一旦葡萄糖氧化酶已冷卻至不會使添加的葡萄糖氧化酶失活并且蜂蜜保持足夠的液體，以促進(jìn)與葡萄糖氧化酶的混合的溫度(適當(dāng)?shù)貫?5-40℃)，就可將葡萄糖氧化酶與巴氏滅菌的蜂蜜接觸?？稍谧阋允惯^氧化氫酶活性熱失活的溫度下對蜂蜜進(jìn)行巴氏滅菌。合適的最低溫度為60℃至80℃。該溫度應(yīng)優(yōu)選保持至少2分鐘。熱過程的控制可以是重要的，因為加熱蜂蜜的雙產(chǎn)物是HMF(羥基甲基糠醛)的形成，所述HMF用作蜂蜜中的熱和儲存變化的指示劑。HMF通過在酸的存在下果糖的分解形成。熱增加了該反應(yīng)的速度。速度的增加隨著熱量的增加而呈指數(shù)增長。對于蜂蜜升至高于40℃(接近正常蜂巢環(huán)境溫度)的每一度數(shù)，HMF迅速增加。HMF不是有害產(chǎn)物。果醬、糖蜜、金糖漿等可具有為蜂蜜水平的10至100倍的HMF水平。然而，HMF水平用作蜂蜜降解的指示，并且根據(jù)食品法典標(biāo)準(zhǔn)，40mg/l是歐盟對餐桌蜂蜜的最大允許水平。為了防止HMF的形成，優(yōu)選將蜂蜜迅速升高至使過氧化氫酶失活的溫度水平，然后使用熱交換機(jī)制將蜂蜜迅速降溫至最高40℃至45℃。在該優(yōu)選實施方案的過程中不添加水，因此所得組合物不包括足夠的游離水，以允許葡萄糖氧化酶轉(zhuǎn)化存在的葡萄糖以釋放過氧化氫。儲存穩(wěn)定的組合物包括：巴氏滅菌的蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。沒有可檢測的過氧化氫存在。組合物可在環(huán)境溫度下儲存至少數(shù)天。在本發(fā)明的其它實施方案中，可不對蜂蜜進(jìn)行滅菌。根據(jù)一些優(yōu)選實施方案，蜂蜜(巴氏滅毒的或未巴氏滅菌的)是乳酪型蜂蜜。乳酪型蜂蜜是已被處理以控制結(jié)晶的蜂蜜。乳酪型蜂蜜含有大量的小晶體，其防止可在未加工的蜂蜜中發(fā)生的較大晶體的形成。美國專利1,987,893中描述了用于產(chǎn)生乳酪型蜂蜜的方法。在該方法中，首先將生蜂蜜進(jìn)行巴氏滅菌，然后將預(yù)先加工的乳酪型蜂蜜添加至巴氏滅菌的蜂蜜中，以產(chǎn)生10％乳酪型蜂蜜與90％巴氏滅菌蜂蜜的混合物。然后將混合物在14℃的控制溫度下靜置。該方法在約一周內(nèi)產(chǎn)生一批乳酪型蜂蜜。種子批料可以通過使正常蜂蜜結(jié)晶并將晶體破碎成所需尺寸來制備。大規(guī)模生產(chǎn)者已通過使用槳攪拌蜂蜜混合物同時將混合物保持在14℃來改進(jìn)了該方法。在替代性乳化法中，可以省略巴氏滅菌步驟，取而代之以將蜂蜜緩慢溫?zé)嶂?7℃。葡萄糖氧化酶優(yōu)選是具有用于人類消費的食品標(biāo)準(zhǔn)的或具有用于醫(yī)療應(yīng)用的醫(yī)療級或醫(yī)療裝置級的純化的天然葡萄糖氧化酶制劑。葡萄糖氧化酶的活性可根據(jù)在儲存穩(wěn)定的組合物稀釋后所需的過氧化氫生成速率來選擇。幾種葡萄糖氧化酶制劑是可商購的(葡萄糖氧化酶根據(jù)參考文獻(xiàn)CAS：9001-37-0來鑒定)。來自非遺傳修飾的生物體的葡萄糖氧化酶的常見微生物來源包括黑曲霉(Aspergillusniger)、尼崎青霉(Penicilliumamagasakiense)、變幻青霉(Penicilliumvariabile)、特異青霉(Penicilliumnotatum)的選定菌株。來自GMO黑曲霉的醫(yī)療裝置級葡萄糖氧化酶可獲自BiozymeUK，活性為240iu/mg。來自黑曲霉的食品標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖氧化酶可獲自BIO-CATINC，活性為15,000個單位/g。非遺傳修飾的葡萄糖氧化酶可獲自BIO-CATINC，活性為12,000/g。來自黑曲霉的葡萄糖氧化酶(GO3B2)可獲自BBIEnzymesLimited，活性為360個單位/mg。污染物：α-淀粉酶不超過0.05％，糖精不超過0.05％，麥芽糖酶不超過0.05％，以及GO/Cat不超過2000。酶活性(諸如，葡萄糖氧化酶活性)可在例如1-400IU/mg或1-300IU/mg，諸如250-280IU/mg的范圍內(nèi)。所使用的酶的量可取決于幾個因素，包括組合物的期望用途，物質(zhì)中存在的任何過氧化氫酶活性的量，物質(zhì)中存在的底物的量，期望的過氧化氫釋放水平，以及過氧化氫釋放所需的時間長度。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地確定合適量的酶，如果需要，使用如下文實施例2中所述的孔擴(kuò)散測定來測定不同量的酶的過氧化氫釋放的程度。酶(諸如葡萄糖氧化酶)的合適量可以為0.0001％w/w至0.5％w/w的組合物。可選擇酶的用量，以便產(chǎn)生用于產(chǎn)生等效于選擇的酚標(biāo)準(zhǔn)物(諸如10％、20％或30％的酚標(biāo)準(zhǔn)物)的抗微生物活性的組合物。本發(fā)明的組合物，特別是其中物質(zhì)是蜂蜜(諸如未經(jīng)巴氏滅菌的蜂蜜)，并且酶是能夠轉(zhuǎn)化蜂蜜中的D-葡萄糖以釋放過氧化氫的葡萄糖氧化酶的本發(fā)明的組合物，可包含每克組合物至少1個單位，優(yōu)選高達(dá)1500個單位的葡萄糖氧化酶。所述葡萄糖氧化酶是除了可天然存在于物質(zhì)中的任何葡萄糖氧化酶活性以外的葡萄糖氧化酶活性(即，作為人干預(yù)的結(jié)果添加的)?！皢挝弧痹诒疚闹卸x為在pH7.0、25攝氏度下每分鐘引起1微摩爾葡萄糖的氧化的酶的量。本申請人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的組合物的抗微生物效力可僅通過增加組合物中存在的葡萄糖氧化酶活性的量來增加。在本發(fā)明的一些實施方案中，本發(fā)明的組合物包含每克組合物多于15個單位，例如至少30個單位、至少50個單位或至少100個單位，并適當(dāng)?shù)厣儆?85個單位，例如100-500個單位的葡萄糖氧化酶。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)此類組合物具有比每克組合物具有高達(dá)15個單位的葡萄糖氧化酶的組合物優(yōu)異的抗微生物性質(zhì)。具體地，此類組合物具有增強(qiáng)的抗廣泛的微生物(包括MSSA、MRSA、組A和B鏈球菌屬(Streptococci)、腸球菌(Enterococcus)、大腸桿菌(E.coli)、大腸桿菌ESBL、液化沙雷菌AmpC(Serr.liquefaciensAmpC)、肺炎克雷伯菌(Kleb.pneumoniae)、銅綠假單孢菌(Pseud.aeruginosa)和白色念珠菌(Candidaalbicans))的效力。在本發(fā)明的其它實施方案中，本發(fā)明的組合物包含每克組合物至少500個單位，例如500-1000個單位或685-1000個單位的葡萄糖氧化酶。已發(fā)現(xiàn)此類組合物具有甚至更優(yōu)異的抗微生物性能。具體地，此類組合物具有進(jìn)一步增強(qiáng)的抗廣泛的微生物(包括MSSA，MRSA，大腸桿菌ESBL和金黃色葡萄球菌)的效力。巴氏消毒過程使存在于蜂蜜中的任何酶活性失活，因此來自不同來源的巴氏滅菌的蜂蜜之間或來自相同來源的蜂蜜的不同收獲物之間的過氧化氫酶和底物轉(zhuǎn)化活性沒有可變性。底物轉(zhuǎn)化活性的量可通過添加具有確定量和活性的酶的純化葡萄糖氧化酶制劑來控制。因此，不同類型的蜂蜜以及蜂蜜的不同收獲物之間的抗微生物性質(zhì)的固有可變性顯著降低，并且具有低抗微生物能力的蜂蜜的抗微生物性質(zhì)得到改善。根據(jù)本發(fā)明的另外的優(yōu)選實施方案，所述物質(zhì)可以是轉(zhuǎn)化物質(zhì)，優(yōu)選轉(zhuǎn)化糖漿，諸如轉(zhuǎn)化楓糖漿。術(shù)語“轉(zhuǎn)化的”在本文中用于表示最初存在于物質(zhì)中的蔗糖已例如通過轉(zhuǎn)化酶或蔗糖酶的活性轉(zhuǎn)化為葡萄糖和果糖。此類轉(zhuǎn)化物質(zhì)然后可用于具有酶葡萄糖氧化酶的本發(fā)明的組合物。楓糖漿由糖楓或黑槭樹汁制成。在氣候寒冷的地區(qū)，這些樹在冬季到來之前將淀粉儲存在其莖和根中，所述淀粉當(dāng)在春季被轉(zhuǎn)換為糖時，在樹汁中升高。可叩擊楓樹，并且收集并濃縮滲出的汁液以形成楓糖漿。楓糖漿通常包含約66％的蔗糖，33％的水和1％的葡萄糖和果糖。由于存在低量的葡萄糖，當(dāng)與葡萄糖氧化酶組合時楓糖沒有強(qiáng)效的生成抗菌性的性質(zhì)。然而，如果蔗糖首先被轉(zhuǎn)化為葡萄糖和果糖(例如通過用轉(zhuǎn)化酶或蔗糖酶處)，則所得的轉(zhuǎn)化糖漿包括高得多的水平的葡萄糖氧化酶的底物。根據(jù)本發(fā)明，還提供了抗微生物組合物或用于生成抗微生物活性的組合物，其包含缺乏過氧化氫酶活性的物質(zhì)和能夠轉(zhuǎn)化所述物質(zhì)中的底物以釋放過氧化氫的酶。根據(jù)本發(fā)明還提供了產(chǎn)生抗微生物組合物或用于生成抗微生物活性的組合物的方法，所述方法包括：將能夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的酶與缺乏過氧化氫酶活性并且包括所述酶的底物的物質(zhì)接觸。根據(jù)本發(fā)明還提供了抗微生物組合物或用于生成抗微生物活性的組合物，所述組合物包含：物質(zhì)；和能夠轉(zhuǎn)化所述物質(zhì)中的底物以釋放過氧化氫的純化的酶。根據(jù)本發(fā)明還提供了產(chǎn)生抗微生物組合物或用于生成抗微生物活性的組合物的方法，所述方法包括：將能夠轉(zhuǎn)化底物以釋放過氧化氫的純化的酶與包括所述酶的底物的物質(zhì)接觸。本發(fā)明的組合物或抗微生物組合物還可包含過氧化氫。根據(jù)本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明的組合物或抗微生物組合物的抗微生物溶液。本發(fā)明的組合物和溶液可用于治療可用過氧化氫治療的任何微生物感染。實例包括由革蘭陽性細(xì)菌、革蘭陰性細(xì)菌、耐酸細(xì)菌、病毒、酵母、寄生或病原微生物或真菌引起的感染。具體地，可治療由以下微生物引起的感染：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、痤瘡丙酸桿菌(Propionibacteriumacnes)，金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)、腐生葡萄球菌(Staphylococcussaprophytics)、A組或B組β溶血型鏈球菌(BetahaemolyticStreptococci)、結(jié)腸彎曲桿菌(Campylobactercoli)、空腸彎曲桿菌(Campylobacterjejuni)、甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MethicillinResistantStaphylococcusAureus)(MRSA)、甲氧西林敏感性金黃色葡萄球菌(MethicillinSensitiveStaphylococcusAureus)(MSSA)、灰葡萄孢(Botrytiscinerea)、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)、隱孢子蟲屬(Cryptosporidium)、瘧原蟲屬(Plasmodium)和弓形體屬(Toxoplasma)。根據(jù)本發(fā)明還提供了本發(fā)明的組合物或溶液用于預(yù)防或抑制微生物生長的用途。根據(jù)本發(fā)明還提供了用作藥劑的本發(fā)明的組合物或溶液。根據(jù)本發(fā)明還提供了用于預(yù)防、治療或緩解微生物感染的本發(fā)明的組合物或溶液。本發(fā)明還提供了本發(fā)明的組合物或溶液在制備用于預(yù)防、治療或緩解微生物感染的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明，還提供了用于預(yù)防、治療或緩解微生物感染的方法，其包括向需要此類預(yù)防、治療或緩解的受試者施用本發(fā)明的組合物或溶液。受試者可以是人或動物受試者?？删植渴┯帽景l(fā)明的組合物。本申請人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的組合物，特別是其中未精制的天然物質(zhì)是蜂蜜的本發(fā)明的組合物，具有顯著的傷口愈合性質(zhì)。具體地，已經(jīng)持續(xù)一個月至一年以上的慢性傷口在用本發(fā)明的組合物治療的幾天內(nèi)明顯開始愈合。具體地，據(jù)信這種組合物的傷口愈合活性是由當(dāng)本發(fā)明的組合物例如通過傷口滲出物稀釋時提供的過氧化氫的持續(xù)低水平釋放導(dǎo)致的。這導(dǎo)致氧向傷口部位的遞送。氧在支持傷口愈合中具有多種重要作用。復(fù)雜的傷口愈合過程需要大量的能量。如果傷口感染，則存在甚至更大的能量需求，這又意味著對氧的需求更大。氧涉及自然愈合過程的許多機(jī)制。其在代謝支持、基質(zhì)修復(fù)、抗菌/感染控制以及信號傳導(dǎo)和細(xì)胞反應(yīng)的控制中具有關(guān)鍵作用。與沒有足夠氧合的那些傷口相比，接受足夠氧的傷口通常以增加的速率愈合。缺血/缺氧可以直接抑制傷口愈合過程，諸如血管生成、膠原合成和上皮形成，并且還阻礙白細(xì)胞殺死細(xì)菌的能力。隨著細(xì)菌繁殖，更多的白細(xì)胞被募集到傷口部位，進(jìn)一步增加氧消耗。對于傷口愈合，必須具有足夠的能量和營養(yǎng)物來驅(qū)動愈合過程。氧在這些代謝過程中是必需的。組織再生和愈合涉及肉芽組織的形成、上皮形成、收縮和重建模。愈合過程需要各種類型的細(xì)胞的增殖，隨著基質(zhì)建立，形成新的血管并且替換上皮。此類細(xì)胞活性取決于允許不受阻礙的呼吸的氧氣可用性。構(gòu)建所有生物聚合物(例如蛋白聚糖、結(jié)構(gòu)蛋白)所需的生物合成途徑取決于滿足潛在的能量需求的氧氣。需要多種酶，包括基質(zhì)金屬蛋白酶，并且這些酶在能量和從而氧的需求上也是昂貴的。膠原合成是這些過程的基本部分。膠原的沉積對于重建結(jié)締組織和作為血管生成過程的一部分是至關(guān)重要的。氧是在原膠原形成期間脯氨酸和賴氨酸的羥基化中所需的輔因子。成熟的膠原合成需要脯氨酰羥化酶和賴氨酰羥化酶，所述二者要行使它們的功能都依賴于氧。新血管形成/血管發(fā)生是完全愈合所必需的。這必須由適當(dāng)?shù)男盘栍|發(fā)。在高氧環(huán)境中，巨噬細(xì)胞白細(xì)胞可觸發(fā)該信號，導(dǎo)致涉及組織降解，隨后膠原形成和組織，內(nèi)皮細(xì)胞遷移/定殖和血管形成的協(xié)調(diào)的、復(fù)雜的系列事件。當(dāng)產(chǎn)生傷口時，身體的自然防御被激活。中性粒細(xì)胞在創(chuàng)傷后不久聚集在創(chuàng)傷部位，釋放殺菌活性氧(ROS)和過氧化氫(H2O2)以殺死細(xì)菌并預(yù)防感染。巨噬細(xì)胞響應(yīng)于環(huán)境刺激到達(dá)傷口，吞噬外來顆粒，并釋放血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)(一種對傷口愈合至關(guān)重要的血管生成因子)。氧在這些事件中發(fā)揮關(guān)鍵作用。巨噬細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞的主要微生物殺傷機(jī)制之一是“呼吸爆發(fā)”-這些細(xì)胞籍以殺死微生物的天然活性。在呼吸爆發(fā)過程中有缺陷的個體成為細(xì)菌感染的受害者。白細(xì)胞需要氧以遞送呼吸爆發(fā)效應(yīng)，并且升高的氧水平可提高其效力。這些白細(xì)胞還具有其它細(xì)菌殺傷機(jī)制，當(dāng)它們吞噬微生物(吞噬作用)時被觸發(fā)。這是一個氧依賴的過程，因為其涉及大量的能量消耗，所以其不能很好地在缺氧環(huán)境中工作。其在氧富集的情況下工作最好。氧對厭氧細(xì)菌也是致命的，并且在一些抗生素有效發(fā)揮作用中是重要的。分子氧是與生長因子和其它信號(例如，氧化還原信號)相互作用以調(diào)節(jié)信號傳導(dǎo)途徑的重要細(xì)胞信號。由巨噬細(xì)胞釋放的觸發(fā)血管生成的分子信號是“血管內(nèi)皮生長因子”(VEGF)。高氧水平可引起巨噬細(xì)胞白細(xì)胞釋放VEGF。許多其它重要因子和酶的基因由高氧水平誘導(dǎo)。一氧化氮(NO)的產(chǎn)生也被認(rèn)為是傷口愈合中的關(guān)鍵信號傳導(dǎo)和控制事件。NO由酶一氧化氮合酶(NOS)產(chǎn)生，并且存在于傷口愈合的早期階段，酶(iNOS)的可誘導(dǎo)形式被上調(diào)。然而，其只能在精氨酸和氧氣充足的情況下發(fā)揮作用，以使得能以適當(dāng)?shù)乃俾十a(chǎn)生NO。氧還在發(fā)出(刺激)進(jìn)行上皮形成過程的信號中發(fā)揮直接作用，上皮形成是其中新的上皮細(xì)胞增殖，組織自身并分化成結(jié)構(gòu)化上皮的關(guān)鍵后期愈合事件。因此，通過本發(fā)明的組合物向傷口部位持續(xù)供應(yīng)氧被認(rèn)為在促進(jìn)傷口愈合中是特別重要的。據(jù)認(rèn)為，除了它們的過氧化氫釋放活性之外，本發(fā)明的優(yōu)選組合物的傷口愈合活性也由組合物的許多活性促成。具體地，優(yōu)選的組合物據(jù)認(rèn)為具有對傷口清創(chuàng)和除臭，具有抗炎性質(zhì)，能夠刺激組織生長，以及控制疼痛和使瘢痕形成最小化的能力。惡臭是慢性傷口的常見特征，并且歸因于從分解的血清和組織蛋白產(chǎn)生惡臭化合物的厭氧細(xì)菌菌種的存在。除了抗微生物作用以外，包含葡萄糖(優(yōu)選按重量計24-40％)的本發(fā)明組合物允許細(xì)菌優(yōu)先于氨基酸代謝該惡臭化合物，導(dǎo)致無氣味的代謝物乳酸的產(chǎn)生。具有高摩爾滲透壓濃度(適當(dāng)?shù)鼐哂性谂c蜂蜜類似的范圍(即0.47-0.7)內(nèi)的aw)的本發(fā)明的組合物據(jù)認(rèn)為有助于通過組織蛋白酶的自溶作用清除傷口。本發(fā)明的組合物通過從傷口組織通過其強(qiáng)滲透作用抽出淋巴液而產(chǎn)生潮濕的傷口環(huán)境。這在傷口床與上覆的壞死組織的界面處提供了蛋白酶的恒定供應(yīng)。該作用也從下面清洗傷口床的表面。通過本發(fā)明的組合物與水接觸釋放的過氧化氫對蛋白酶的活化也可以起輔助作用。清除作用還可通過去除死組織來有助于降低傷口的細(xì)菌負(fù)荷。眾所周知死亡組織為細(xì)菌生長提供極好的培養(yǎng)基，并且如果留在傷口中則增加感染的風(fēng)險。身體的炎癥反應(yīng)標(biāo)志著愈合過程的開始，但長時間的反應(yīng)可抑制愈合，導(dǎo)致對組織的進(jìn)一步損傷，并使得更難以處理傷口。長期的炎癥反應(yīng)通常與高水平的滲出物有關(guān)。抑制炎癥以及減輕患者的疼痛，減少了血管的打開，從而減輕水腫和滲出。本發(fā)明的組合物清除感染和清創(chuàng)傷口的能力據(jù)認(rèn)為有助于抗炎作用。包括抗氧化劑(優(yōu)選存在于蜂蜜中的一種或多種抗氧化劑)的本發(fā)明組合物還可通過清除自由基來減少過度的炎癥。長期的炎癥引起纖維化，其在傷口中表現(xiàn)為肥厚性瘢痕形成。本發(fā)明的優(yōu)選組合物可通過減少炎癥，促進(jìn)血管生成和刺激肉芽組織的形成來減少瘢痕形成。本發(fā)明的優(yōu)選組合物還可以刺激上皮的生長。本發(fā)明的組合物也被認(rèn)為具有由白細(xì)胞介素-1(IL-1)介導(dǎo)的免疫刺激作用。本發(fā)明的組合物被認(rèn)為促進(jìn)IL-1從皮膚細(xì)胞的釋放。IL-1是也由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹突細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。其是身體對抗感染的炎癥反應(yīng)的重要部分。其增加粘附因子在內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)，以使白細(xì)胞能夠遷移到感染部位。其還作用于大腦的體溫調(diào)節(jié)中心，導(dǎo)致體溫升高。其被稱為內(nèi)源性熱原。升高的體溫有助于身體的免疫系統(tǒng)對抗感染。這是炎癥性免疫應(yīng)答的初始階段，其增強(qiáng)了系統(tǒng)的抗微生物活性。炎癥反應(yīng)通過其抗可能的感染的防御以及通過參與細(xì)胞和組織修復(fù)和再生長而在傷口愈合中起中心作用。本發(fā)明組合物的抗微生物作用據(jù)認(rèn)為通過免疫刺激作用得到輔助和補充，所述免疫刺激作用有助于受損組織和/或細(xì)胞的再生長和修復(fù)。本發(fā)明的組合物，特別是基于蜂蜜的組合物為傷口組織提供潮濕的愈合環(huán)境，而無浸軟周圍的風(fēng)險，并且防止敷料粘附到傷口床上，以使得當(dāng)更換敷料時沒有疼痛和組織損傷。此類組合物還刺激健康細(xì)胞發(fā)育并加速傷口中的肉芽形成和上皮形成過程。組合物還具有閉合作用以保護(hù)傷口和受損組織。還認(rèn)為基于蜂蜜的組合物導(dǎo)致傷口pH的顯著降低，這有利于愈合過程。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方面，本發(fā)明的組合物可用于傷口護(hù)理的方法，包括傷口的治療，或傷口敗血癥的治療或處理。傷口可以是急性傷口、慢性傷口、手術(shù)傷口(例如，剖腹產(chǎn)傷)、慢性燒傷或急性燒傷。本發(fā)明的組合物可用于預(yù)防性預(yù)防傷口敗血癥。如果使用本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物，應(yīng)當(dāng)理解，這可通過存在于傷口部位的液體稀釋，這由此導(dǎo)致由稀釋的組合物釋放過氧化氫。當(dāng)任何組織的完整性受損(例如皮膚破裂、肌肉撕裂、燒傷或骨折)時傷口產(chǎn)生。傷口可由動作(外傷)或外科手術(shù)，傳染病或潛在病況引起。急性傷口包括手術(shù)切口和創(chuàng)傷性損傷，諸如撕裂傷、擦傷、撕脫全國各地、穿透或咬傷和燒傷。急性創(chuàng)傷通常通過有序和及時的修復(fù)過程進(jìn)行，所述修復(fù)過程導(dǎo)致解剖學(xué)和功能完整性的持續(xù)恢復(fù)。慢性傷口是已存在超過三周或未能進(jìn)行通過有序和及時的過程以產(chǎn)生解剖和功能完整性，或進(jìn)行通過修復(fù)過程而未建立持續(xù)和功能結(jié)果的傷口(Lazarus等，ArchDermatol.1994；130(4):489-493)。慢性傷口可分為四類：靜脈潰瘍、動脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍和壓力性潰瘍。少數(shù)不屬于這些類別的傷口可由諸如輻射中毒或缺血的原因造成。通常發(fā)生在腿部的靜脈潰瘍占慢性傷口的約70％至90％，并且主要影響老年人。它們被認(rèn)為由靜脈中存在的防止血液向后流動的瓣膜的不當(dāng)功能引起的靜脈高壓造成。缺血是由功能障礙引起的，并且與再灌注損傷相結(jié)合，引起導(dǎo)致傷口的組織損傷。在靜脈疾病中，潰瘍通常位于踝和小腿之間的綁腿區(qū)域(通常在腿的內(nèi)側(cè))。動脈腿潰瘍作為動脈血流量減少和隨后組織灌注的結(jié)果而發(fā)生。動脈粥樣硬化或外周血管疾病是動脈性腿潰瘍的最常見原因。如果不進(jìn)行治療，血液供應(yīng)的減少可導(dǎo)致通過受影響的動脈提供給養(yǎng)的區(qū)域中的組織死亡。潰瘍發(fā)展通常是組織的迅速、深度破壞。動脈性腿部潰瘍可發(fā)生在小腿上的任何地方，并且通常更深且為圓形，具有清楚限定的邊界。糖尿病性潰瘍：糖尿病引起免疫妥協(xié)和對小血管的損害，阻止組織的充分氧合，這可引起慢性傷口。糖尿病引起神經(jīng)病，其抑制傷害感受和疼痛感覺。因此，患者最初可能不會注意到腿和腳的小傷口，因此可能不能防止感染或反復(fù)受傷。壓力也在糖尿病潰瘍的形成中起作用。由于慢性潰瘍，糖尿病患者截肢的風(fēng)險比普通人群高15％。壓力性潰瘍通常發(fā)生在具有抑制通常經(jīng)受壓力的身體部位(諸如腳跟、肩胛骨和骶骨)的運動的麻痹等病況的人中。壓力性潰瘍由當(dāng)組織上的壓力大于毛細(xì)血管中的壓力，從而限制血液流入該區(qū)域時發(fā)生的缺血引起。，比皮膚需要更多的氧氣和營養(yǎng)物的肌肉組織，顯示來自長期壓力的最糟糕的影響。如在其它慢性潰瘍中一樣，再灌注損傷損害組織。當(dāng)治療潰瘍時，希望：產(chǎn)生屏障以在傷口愈合時保護(hù)傷口；提供潮濕的傷口環(huán)境；脫落傷口；減少細(xì)菌負(fù)荷；以及理想地通過免疫調(diào)節(jié)和改善營養(yǎng)促進(jìn)愈合。常規(guī)的傷口處理產(chǎn)品不能實現(xiàn)所有這些作用。一些常規(guī)治療具這些作用中的一些作用，但具有相當(dāng)?shù)亩拘裕虼瞬皇抢硐氲闹委?。然而，本發(fā)明的組合物，特別是其中物質(zhì)是蜂蜜的本發(fā)明的組合物具有所有這些性質(zhì)。另外，本發(fā)明組合物的抗微生物效力可被控制為遠(yuǎn)比其它基于蜂蜜的傷口護(hù)理產(chǎn)品有效，并且所述組合物在抗涉及慢性傷口的一系列病原體(包括抗生素抗性生物體，諸如MRSA)方面是有效的。本發(fā)明的組合物在尤其是其中傷口可能變得更糟的的患者(諸如糖尿病患者)的傷口的早期治療中是特別有利的。利用本發(fā)明的組合物的早期治療防止了在慢性傷口中出現(xiàn)的并發(fā)癥，保持患者活躍，并且避免了治療并發(fā)癥的費用。還已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的組合物在減少或預(yù)防手術(shù)傷口感染方面是有效的。外科傷口的感染是一個問題，特別是在具有大約10％的相當(dāng)高的感染率的剖腹產(chǎn)中。本發(fā)明的組合物在手術(shù)后施用簡單。例如，可將本發(fā)明的組合物施用于敷料，然后與傷口接觸，并用第二敷料保持就位。以下實施例40表明，與歷史數(shù)據(jù)相比，本發(fā)明的組合物對手術(shù)后的剖腹產(chǎn)傷口的的單次施用將手術(shù)部位的感染率降低了60％。外周插入式中央導(dǎo)管(PICC管線)用于施用化療治療和/或其它藥物。PICC管線是一根長而細(xì)的柔性管，其被插入手臂靠近肘的轉(zhuǎn)彎處的大靜脈之一。然后將其穿入靜脈，直至尖端位于正好在心臟上方的大靜脈中。然而，可能在管線內(nèi)或在其進(jìn)入靜脈的區(qū)域中發(fā)展感染。如果感染發(fā)展，患者通常被給予抗生素。如果這些抗生素不能清除感染，或者如果感染是嚴(yán)重的，則可除去管線。為了減少感染發(fā)展的機(jī)會，可將含有抗微生物劑諸如氯己定或銀的敷料施用到管線入口部位。已發(fā)現(xiàn)通過將本發(fā)明的組合物局部施用于管線入口位點(參見下文實施例39)，本發(fā)明的組合物有效地防止和清除PICC管線的定殖。本發(fā)明的組合物可被容易地施加，而無需任何專門醫(yī)生培訓(xùn)或復(fù)雜的設(shè)備。該組合物非常適合用于第三世界，在第三世界患者通常具有增加的對感染的易感性的，并且用于手術(shù)和傷口護(hù)理的材料和器械通常比發(fā)達(dá)國家更容易受感染。本發(fā)明的組合物是無毒的，并且不具有與含銀敷料、PVP-I或氯己定相關(guān)的任何問題。本發(fā)明的組合物也可用于治療供體或受體移植部位。根據(jù)本發(fā)明，提供了治療傷口的方法，其包括向傷口施用本發(fā)明的組合物。據(jù)本發(fā)明還提供了用于治療傷口的本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明還提供了本發(fā)明的組合物在制備用于治療傷口的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明還提供了治療炎癥的方法，其包括向炎癥部位施用本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明還提供了用于治療炎癥的本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明還提供了本發(fā)明的組合物在制備用于治療炎癥的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明還提供了刺激組織生長的方法，其包括向需要此類刺激的部位施用本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明還提供了用于刺激組織生長的本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明還提供了本發(fā)明的組合物在制備用于刺激組織生長的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明還提供了清創(chuàng)傷口的方法，其包括向需要清創(chuàng)的傷口施用本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明還提供了用于清創(chuàng)傷口的本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明還提供了本發(fā)明的組合物在制備用于清創(chuàng)傷口的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明還提供了對傷口除臭的方法，其包括向需要除臭的傷口施用本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明還提供了用于對傷口除臭的本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明，還提供本發(fā)明的組合物在制備用于對傷口除臭的藥劑中的用途。對于傷口愈合應(yīng)用，本發(fā)明的組合物可以由保健提供者確定的適當(dāng)頻率施用。合適地，本發(fā)明的組合物可以至少每幾天施用，諸如每周施用，但優(yōu)選每天或隔天施用。施用的本發(fā)明的組合物的量將取決于許多因素，諸如組合物的抗微生物性質(zhì)的強(qiáng)度和組合物的其它傷口愈合性質(zhì)，取決于傷口的大小以及待治療的受試者的年齡和狀況。然而，對于許多應(yīng)用，預(yù)期施用2-100g，或5-100g本發(fā)明的組合物將是合適的，優(yōu)選10-50g。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，本發(fā)明的組合物是無菌的。無菌組合物優(yōu)選用于醫(yī)療應(yīng)用，諸如傷口愈合。本發(fā)明的組合物可通過任何合適的方法滅菌。本申請人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在通過暴露于γ輻照滅菌后，本發(fā)明的組合物保持葡萄糖氧化酶活性(并因此保持稀釋時釋放過氧化氫的能力)。因此，根據(jù)本發(fā)明，提供了已通過暴露于γ輻照而被滅菌的本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明還提供了對本發(fā)明的組合物滅菌的方法，其包括將組合物暴露于γ輻照。合適的γ輻照水平為10-70kGy，優(yōu)選25-70kGy，更優(yōu)選35-70kGy。由于臭氧沒有被美國FDA批準(zhǔn)用于對用于傷口愈合的基于蜂蜜的產(chǎn)品的滅菌，本發(fā)明的組合物優(yōu)選一直未通過臭氧化滅菌，并且不包括臭氧或已通過臭氧化進(jìn)行滅菌的任何組分。具體地，本發(fā)明的組合物不應(yīng)包含臭氧化蜂蜜或臭氧化油。用于醫(yī)療用途的本發(fā)明的優(yōu)選組合物是無菌的單次使用的組合物。在避光儲存的本發(fā)明的經(jīng)滅菌的組合物預(yù)期保持穩(wěn)定至少6個月。例如，可將此類組合物包裝在高密度聚乙烯/低密度聚乙烯(HDPE/LDPE)管或聚酯-鋁-聚乙烯(PET/AI/PE)小袋中。本發(fā)明的組合物優(yōu)選是醫(yī)療級或醫(yī)療裝置級組合物。優(yōu)選地，未精制的天然物質(zhì)是蜂蜜，合適地是醫(yī)療級或醫(yī)療裝置級蜂蜜。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物包含乳酪型蜂蜜，更優(yōu)選未巴氏滅菌的乳酪型蜂蜜?？扇菀椎鼐植渴┯么祟惤M合物，因為已通過乳化法使大晶體的存在或數(shù)量減少至最少。對于包含蜂蜜的本發(fā)明的組合物，應(yīng)當(dāng)理解的是，如果組合物被滅菌，則可以不需要在組合物中使用巴氏滅菌的蜂蜜?？商娲貎?yōu)選使用未巴氏滅菌的蜂蜜(優(yōu)選乳酪型蜂蜜)或其它未精制的天然物質(zhì)。在特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的組合物包含未巴氏滅菌的蜂蜜和添加的純化的葡萄糖氧化酶。因此，根據(jù)本發(fā)明，提供了用于生成抗微生物活性的儲存穩(wěn)定的組合物，其包含未經(jīng)巴氏滅菌的蜂蜜和添加的純化的葡萄糖氧化酶，所述葡萄糖氧化酶在足夠的游離水存在下能夠轉(zhuǎn)化蜂蜜中的D-葡萄糖以釋放過氧化氫，其中所述組合物不包括足以允許葡萄糖氧化酶轉(zhuǎn)化D-葡萄糖的游離水。根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種產(chǎn)生用于生成抗微生物活性的儲存穩(wěn)定的組合物的方法，其包括：將未經(jīng)巴氏滅菌的蜂蜜與純化的葡萄糖氧化酶接觸，所述純化的葡萄糖氧化酶在足夠的游離水的存在下能夠轉(zhuǎn)化蜂蜜中的D-葡萄糖以釋放過氧化氫，其中所述組合物不包括足以允許葡萄糖氧化酶轉(zhuǎn)化D-葡萄糖的游離水。此類組合物優(yōu)選包含每克組合物至少1個單位，優(yōu)選至多1500個單位的葡萄糖氧化酶。合適地，此類組合物包含每克組合物多于15個單位的葡萄糖氧化酶，例如每克組合物至少100個單位，優(yōu)選100-500個單位的葡萄糖氧化酶，或每克組合物至少500個單位，優(yōu)選500-1000個單位的葡萄糖氧化酶。此類組合物的蜂蜜可包含未經(jīng)巴氏滅菌的乳酪型蜂蜜。還根據(jù)本發(fā)明，提供了包含本發(fā)明的組合物以及藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的某些優(yōu)選方面，提供了包含本發(fā)明的組合物的敷料。合適的敷料包括紗布、繃帶、薄紗、薄膜、凝膠、泡沫、水膠體、藻酸鹽、水凝膠或多糖糊劑、顆?；蛑?。本發(fā)明的組合物可以與傷口敷料基質(zhì)諸如膠原或膠原-糖胺聚糖基質(zhì)一起存在。本發(fā)明的組合物可呈固體或半固體制劑的形式。固體或半固體制劑的實例包括膠囊劑、丹劑、凝膠帽、粉劑、水凝膠、丸劑、小丸劑或小球劑?；蛘?，本發(fā)明的組合物可呈液體制劑的形式。液體制劑的實例包括糖漿劑、糊劑、噴霧劑、滴劑、軟膏劑、乳膏劑、洗劑、油劑、搽劑或凝膠劑。典型的凝膠包括醇凝膠，諸如異丙醇、乙醇或丙醇凝膠，或水凝膠。本發(fā)明的組合物可呈適于向人或動物受試者施用的形式。合適的形式包括適于局部或口服施用的形式。適于局部施用的形式包括局部軟膏、乳膏、洗劑、油劑、搽劑、液體、凝膠或可溶性條帶。適于口服施用的形式包括膠囊劑、丹劑、凝膠帽、丸劑、小丸劑、小球劑、錠劑、牙線、牙膏、漱口劑、可溶性薄膜條。如果使用本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物，則該組合物可被存在于施用部位的液體(例如，通過用于口服給藥的唾液，或通過來自傷口的滲出液)稀釋，從而導(dǎo)致過氧化氫在所述施用部位的釋放。本發(fā)明的組合物可以與至少一種合適的抗微生物或免疫刺激性組分、賦形劑或佐劑，或其中期望提供生成抗微生物活性的能力的任何其它合適的組分一起存在。例如，本發(fā)明的組合物可以與抗菌劑、咳嗽藥、祛斑護(hù)理制劑、保濕劑、瘙癢緩解制劑、清潔劑、擦洗劑、洗滌劑、阻擋制劑、剝脫制劑一起存在。然而，優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物不包括任何抗生素。本發(fā)明的組合物可呈適于控釋或緩釋遞送的形式。例如，口服施用形式可具有腸溶衣以提供控釋或持續(xù)釋放遞送。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的組合物可呈用作化妝品組合物的形式。本發(fā)明的組合物可以與至少一種合適的化妝品賦形劑或佐劑一起存在?；瘖y品應(yīng)用涵蓋許多不同的個人護(hù)理應(yīng)用，包括頭發(fā)病況諸如頭皮屑的治療，或身體氣味的治療。本發(fā)明的組合物可以以預(yù)防性手部防護(hù)溶液或手部消毒劑溶液的形式提供。此類手防護(hù)溶液可以以乳膏、洗劑或水凝膠的形式提供，并且用作具有預(yù)防性防止微生物感染的有利性質(zhì)的洗手型產(chǎn)品。有利地，本發(fā)明的組合物可用于治療或預(yù)防MRSA或其它抗生素抗性微生物和細(xì)菌。本發(fā)明以非毒性方式克服了新出現(xiàn)的抗生素抗性微生物菌株的問題。對于本申請，本發(fā)明的組合物可以局部施用，例如作為局部軟膏、乳膏、洗劑、油劑、搽劑、液體和/或凝膠。本發(fā)明的組合物可以作為組織或皮膚擦拭物的一部分施用。微生物感染可以是口腔、眼睛、耳朵、皮膚、胸部或指甲感染?？谇桓腥究梢允茄例l疾病、口腔潰爛和/或口腔衛(wèi)生病癥。口腔衛(wèi)生病癥可以是口臭和/或牙齦炎。或者，口腔感染可以是咽喉感染或鼻感染，包括鼻葡萄球菌感染。眼睛感染可包括結(jié)膜炎。皮膚感染可以是真菌皮膚感染。真菌皮膚感染包括人的足癬和/或皮癬。在獸醫(yī)學(xué)中，真菌皮膚病況包括腐蹄病、皮癬和人畜共患皮膚感染的控制。指甲感染可以是真菌指甲感染，諸如甲真菌病。本發(fā)明的組合物可用于治療皮膚病癥，諸如痤瘡、濕疹或銀屑病。痤瘡和濕疹可具有可通過組合物治療的微生物感染組分，并且由刮擦引起的銀屑病損傷的繼發(fā)性微生物感染可通過本發(fā)明的組合物治療。本發(fā)明的組合物可用于獸醫(yī)學(xué)。重要的獸醫(yī)應(yīng)用包括微生物感染的治療和傷口護(hù)理的治療或管理或燒傷治療。具體病癥包括狗中的慢性皮膚感染(皮下葡萄球菌感染)、外耳炎(耳部感染)、動物口腔護(hù)理、雞彎曲桿菌感染、豬、家禽和牛的脊椎側(cè)凸、腸道微生物感染、隱孢子蟲感染、人畜共患感染、傷口敷料的清除，例如去除角和膿腫治療。本發(fā)明在獸醫(yī)用途中具有特別的優(yōu)點，因為其允許治療微生物感染而不將抗生素引入食物鏈。本發(fā)明的組合物可以以具對于其期望提供生成抗微生物活性的能力的任何其它組合物或產(chǎn)品提供。本發(fā)明的組合物可以作為與其它組合物或產(chǎn)品的混合物提供，或與其分開地提供，例如將其與另外的組合物或產(chǎn)品一起作為試劑盒包裝。當(dāng)本發(fā)明的組合物作為與另外的組合物或產(chǎn)品的混合物提供時，優(yōu)選地該另外的組合物或產(chǎn)品不包括足以允許酶轉(zhuǎn)化本發(fā)明組合物的底物的游離水。可為本發(fā)明的組合物提供使用該組合物的說明書。例如，可將本發(fā)明的組合物與說明書一起作為試劑盒包裝。根據(jù)本發(fā)明，提供了用于預(yù)防、治療或緩解微生物感染或用于治療傷口的試劑盒，其包含本發(fā)明的組合物或溶液，以及用于施用所述組合物或溶液的說明書。根據(jù)本發(fā)明，還提供了用于預(yù)防或抑制微生物生長的方法，其包括將本發(fā)明的組合物或溶液施加于需要預(yù)防或抑制微生物生長的表面或區(qū)域。本發(fā)明的組合物或溶液可特別地用于預(yù)防或抑制植物或昆蟲病原體的生長。例如，本發(fā)明的組合物或溶液可以特別適合于延長可食用產(chǎn)品(諸如水果或蔬菜)或其它產(chǎn)品(諸如高價值植物材料，包括鱗莖，尤其是百合鱗莖，或花)的保質(zhì)期，通過防止或抑制否則會損害產(chǎn)品的微生物生長。利用本發(fā)明的組合物或溶液(特別是當(dāng)所述組合物或溶液僅含有天然成分時)進(jìn)行的可食用產(chǎn)品或其它產(chǎn)品的處理可優(yōu)選使用農(nóng)藥或藥物產(chǎn)品。根據(jù)優(yōu)選實施方案，本發(fā)明的組合物或溶液可用于預(yù)防或抑制歐文氏菌屬(Erwinia)的生長。歐文氏菌屬是主要包含植物病原性菌種的腸桿菌科(Enterobacteriaceae)的屬。這些菌種產(chǎn)生水解植物細(xì)胞之間的果膠，導(dǎo)致細(xì)胞分離(稱為“植物腐爛”的疾病)的酶。該屬的熟知成員是梨火疫歐文氏菌(E.amylovora)，其在蘋果、梨和其它紅豆杉作物上引起火疫。胡蘿卜軟腐歐文氏菌(Erwiniacarotovora)(也稱為胡蘿卜軟腐果膠桿菌(Pectobacteriumcarotovorum))是另一菌種，其具有廣泛的宿主范圍，包括胡蘿卜、馬鈴薯、番茄、綠葉蔬菜、南瓜和其它葫蘆、洋蔥、青椒。該種能夠在其侵入的幾乎任何植物組織中引起疾病。其是儲存的水果和蔬菜的腐爛的常見原因，因此是非常重要的病原體。由胡蘿卜軟腐歐文氏菌引起的腐爛通常被稱為細(xì)菌軟腐病(BSR)。歐文氏菌屬感染是馬鈴薯儲存的特殊問題。如果歐文氏菌屬萌發(fā)，并且引起馬鈴薯中心的黑腐敗，則可能發(fā)生顯著的損失。該問題目前用藥品控制。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，本發(fā)明的組合物或溶液可用于預(yù)防或抑制由歐文氏菌屬感染引起的馬鈴薯的腐爛。僅含有天然成分的本發(fā)明的組合物或溶液的使用是特別優(yōu)選的。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的組合物或溶液可用于預(yù)防或抑制昆蟲病原體的生長，特別是蜂中微粒子蟲屬(Nosema)的生長。微粒子蟲屬是最普遍的成年蜜蜂疾病。其由存在于兩個階段-長壽孢子和復(fù)制營養(yǎng)階段中的單細(xì)胞微孢子蟲寄生蟲引起。如果成年蜜蜂攝取孢子，那么它們會開始發(fā)育成營養(yǎng)階段，其滲入內(nèi)襯蜜蜂腸道的細(xì)胞。存在感染蜜蜂的兩個描述的種：蜂小孢子蟲(Nosemaapis)和東方蜜蜂微孢子蟲(Nosemaceranae)。蜂小孢子蟲縮短感染的蜜蜂的壽命。東方蜜蜂微孢子蟲已從其亞洲宿主跨越物種屏障，并且已被發(fā)現(xiàn)比蜂小孢子蟲更具毒力。感染的覓食蜂從蜂巢中消失，該持續(xù)的蜜蜂丟失減少了帶入蜂巢的食物，直到菌落崩潰。用抗生素?zé)熐顾仉p環(huán)已胺鹽(從煙曲霉菌(Aspergillusfumigatus)制備的，石仔病的致病因子)處理微粒子蟲屬抑制中腸中孢子的繁殖，但不殺死孢子。該抗生素也非常昂貴，并且必須在淡季使用，以使其將污染市售蜂蜜并進(jìn)入人食物鏈的風(fēng)險最小化。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的組合物能夠殺死微粒子蟲屬的孢子和營養(yǎng)階段。根據(jù)本發(fā)明，提供了用于預(yù)防或治療蜂中的微粒子病的方法，其包括向蜜蜂施用本發(fā)明的組合物或溶液。優(yōu)選地，將呈粉末形式的本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物用水稀釋并施加于蜂箱?？梢岳缤ㄟ^在與呈粉末形式的葡萄糖氧化酶接觸之前對蜂蜜進(jìn)行干法巴氏滅菌來產(chǎn)生呈粉末形式的本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物?，F(xiàn)通過舉例的方式，參考附圖描述本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，其中：圖1顯示具有不同量的添加的葡萄糖氧化酶的巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜的抗微生物作用的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果；圖2顯示與不同酚標(biāo)準(zhǔn)物的作用相比較具有不同量的酶的本發(fā)明組合物的抗微生物作用的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果；圖3顯示具有添加的葡萄糖氧化酶的巴氏滅菌的Tineo蜂蜜的抗微生物作用的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果的照片；圖4顯示本發(fā)明的不同組合物的抗微生物作用的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果；圖5顯示了包括不同酶制劑的本發(fā)明的組合物的抗微生物作用的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果；圖6顯示在儲存60天或90天后來自本發(fā)明的組合物的抗微生物作用的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果；圖7顯示來自本發(fā)明的組合物的粉末制劑的抗微生物作用的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果；圖8顯示在本發(fā)明的組合物存在和不存在的情況下不同產(chǎn)品的抗微生物作用的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果；圖9顯示在本發(fā)明的組合物存在和不存在的情況下不同產(chǎn)品的抗微生物作用的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果；圖10顯示與麥盧卡UMF25+蜂蜜相比，本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物的抗菌作用的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果；圖11顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物處理感染的腳趾的作用；圖12顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腳趾潰瘍的作用；圖13顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腳趾潰瘍的作用；圖14顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療足部潰瘍的作用；圖15顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療足部潰瘍的作用；圖16顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療足部潰瘍的作用；圖17顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療足部潰瘍的作用；圖18顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療創(chuàng)傷性腿部傷口的作用；圖19顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療感染的腿部傷口的作用；圖20顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療足部潰瘍的作用；圖21顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖22顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖23顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖24顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖25顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖26顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖27顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖28顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖29顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療腿部潰瘍的作用；圖30顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療并發(fā)有基礎(chǔ)性骨髓炎的糖尿病性腿部潰瘍的作用；圖31顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療壓力性潰瘍的作用；圖32顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療感染的腋窩切口的作用；圖33顯示使用本發(fā)明的滅菌的基于蜂蜜的組合物治療導(dǎo)管入口點周圍的感染的作用；圖34顯示Surgihoney1(S1)、Surgihoney3(S3)和Medihoney(MH)對于不同測試生物體的時間殺滅曲線：(a)金黃色葡萄球菌；(b)甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌(MRSA)；(c)大腸桿菌；(d)抗萬古霉素腸球菌(VRE)；(e)銅綠假單胞菌；(f)克雷伯菌屬(Klebsiella)；(g)大腸桿菌ESBL；(h)糞腸球菌；圖35顯示測試S1和S2Surgihoney的抗病毒活性的噬斑測定的結(jié)果；圖36顯示使用S1Surgihoney治療感染的腿部潰瘍的結(jié)果的照片，其中：(a)顯示治療的第1天；(b)顯示治療的第4天；以及(c)顯示治療的第7天；圖37顯示使用S1Surgihoney治療壓瘡的結(jié)果的照片，其中：(a)顯示治療的第1天；以及(b)顯示治療的第30天；圖38顯示Surgihoney(SH)和兩種修飾的原型PT1和PT2的不同過氧化氫產(chǎn)生速率；以及圖39顯示了經(jīng)修飾的蜂蜜、SH、PT1和PT2中的酚活性與最大過氧化氫活性之間的關(guān)系。實施例1本實施例描述了用于產(chǎn)生本發(fā)明的儲存穩(wěn)定的組合物，以及稀釋儲存穩(wěn)定的組合物以釋放過氧化氫的優(yōu)選方法?！盎罨摹狈涿鄣闹圃旆椒ㄊ褂脽峤粨Q器將蜂蜜加熱2分鐘至80℃(如果需要，可使用更低的溫度，合適地至少60℃，只要這足以滅活過氧化氫酶)。該加熱過程的目的是對蜂蜜進(jìn)行巴氏滅菌，降低其粘度，以使得其可被過濾以除去可能在收獲后存在于蜂蜜中的任何蠟顆粒和蜂翼，并且使蜂蜜中的可影響過氧化氫的高效產(chǎn)生的任何過氧化氫酶失活。然后將巴氏滅菌的蜂蜜過濾，并使其自然冷卻至正常蜂箱溫度(35-40℃)。然后以低水平(相當(dāng)于蜂蜜中通常發(fā)現(xiàn)的水平)添加葡萄糖氧化酶以替代在蜂蜜中天然發(fā)現(xiàn)的但已通過巴氏滅菌方法失活的葡萄糖氧化酶。過濾的巴氏滅菌的蜂蜜在35-40℃下具有相當(dāng)大的流動性，因此可容易地將其與葡萄糖氧化酶混合。然而，不明白為什么不能在室溫下進(jìn)行混合。然后將所得的“活化的”蜂蜜在環(huán)境溫度下儲存。除了失活的葡萄糖氧化酶的替代之外，沒有對天然蜂蜜的組成進(jìn)行修飾。在“活化的”蜂蜜中沒有可檢測的過氧化氫?！盎罨摹狈涿鄣南♂屧凇盎罨摹狈涿巯♂尯?，過氧化氫在一段時間后釋放，因為游離水變得可用并且葡萄糖氧化酶開始轉(zhuǎn)化存在于蜂蜜中的葡萄糖。過氧化氫水平低于2mmol/升，但釋放較長時間。實施例2該實施例描述了證明活化的Ulmo蜂蜜的抗微生物作用的測試結(jié)果。如果蜂蜜含有添加的葡萄糖氧化酶，則被描述為“活化的”?？讛U(kuò)散測定將金黃色葡萄球菌(NCIMB9518)在營養(yǎng)瓊脂或營養(yǎng)肉湯中生長。通過在瓊脂平板的表面上擦拭過夜培養(yǎng)物，用培養(yǎng)物接種抗生素擴(kuò)散瓊脂平板。將板在室溫下靜置15分鐘。在瓊脂的表面上鉆7mm直徑的孔。將200微升樣品(酚標(biāo)準(zhǔn)物或蜂蜜)置于每個孔中。將板孵育16小時，使用指盤式卡尺(+/-0.1mm)測量抑制區(qū)。記錄區(qū)的直徑，包括孔的直徑。通過以所需濃度在純化水中稀釋酚來制備酚標(biāo)準(zhǔn)物。例如，通過將1g酚稀釋在9g純化水中制備10％的酚標(biāo)準(zhǔn)物。將標(biāo)準(zhǔn)物在30℃下儲存并在使用前搖動。蜂蜜蜂蜜：巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜。使用未活化的蜂蜜(即未添加葡萄糖氧化酶的蜂蜜)作為對照。酶的制備葡萄糖氧化酶：由BiozymeUK提供的來自GMO黑曲霉菌的醫(yī)療裝置級材料(非食品級)，活性240iu/mg。最初使用0.5％w/w的酶，但可將其降低至0.005％w/w的酶以達(dá)到20％的酚標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)量。過氧化氫的檢測來自Merckoquant的過氧化物測試：目錄號1.10011.0002，測量范圍/顏色-標(biāo)度刻度mg/lH2O20.5-2-5-10–25。在水溶液中的方法測定：將蜂蜜以50/50w/w溶于水中。將測試條的反應(yīng)區(qū)浸入測量樣品(15-30℃)持續(xù)1秒。允許過量的液體通過條的長邊徑流至吸收性紙巾上，并在15秒(目錄號110011)或5秒(目錄號110081)后確定反應(yīng)區(qū)的顏色與標(biāo)簽上的哪個顏色區(qū)域最完全一致。讀取以mg/lH2O2表示的相應(yīng)結(jié)果，或者如果需要，估計中間值。為了確定蜂蜜中沒有內(nèi)源性過氧化氫可用，將蜂蜜以50/50w/w溶于甲醇。在有機(jī)溶劑(易揮發(fā)醚)中的測定：將測試條的反應(yīng)區(qū)浸沒在測量樣品(15-30℃)中持續(xù)1秒。在溶劑蒸發(fā)(輕輕地來回扇動條帶3-30秒)之后，將反應(yīng)區(qū)域浸入蒸餾水中持續(xù)1秒，并允許過量的液體通過條帶的長邊緣徑流至吸收性紙巾上或在反應(yīng)區(qū)上輕輕地吹四次，每次3-5秒。在15秒(目錄號110011)或5秒(目錄號110081)后確定反應(yīng)區(qū)的顏色與標(biāo)簽上的哪個顏色區(qū)域最完全一致。讀取以mg/lH2O2表示的相應(yīng)結(jié)果，或者如果需要，估計中間值。結(jié)果圖1a顯示來自孔擴(kuò)散測定的結(jié)果，在所述測定中將含有巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜、已添加了不同量的葡萄糖氧化酶制劑(0.1％w/w、0.01％w/w、0.01％w/w、0.0015％w/w或0.0001％w/w)的巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜或麥盧卡UMF25+蜂蜜的樣品添加至接種有金黃色葡萄球菌的瓊脂平板的孔中。結(jié)果顯示對于每個樣品記錄的抑制區(qū)的直徑。含有至少0.001％w/w葡萄糖氧化酶(240iu/mg)的活化的蜂蜜對金黃色葡萄球菌的抗微生物作用等同于麥盧卡25+蜂蜜的抗微生物作用?；罨姆涿鄣淖饔檬菤⒕?。圖1b顯示了來自孔擴(kuò)散測定的結(jié)果，在所述孔擴(kuò)散測定中將含有添加了0.5％w/w的葡萄糖氧化酶制劑的巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜的樣品與MGO麥盧卡蜂蜜、麥盧卡25+蜂蜜的樣品以及一系列不同的酚標(biāo)準(zhǔn)物(10％-40％)相比較。結(jié)果顯示每個樣品的抑制區(qū)的面積。結(jié)果表明，活化的Ulmo蜂蜜的作用相當(dāng)于30％的酚標(biāo)準(zhǔn)物，并且作用為MGO麥盧卡蜂蜜的兩倍以上，以及幾乎為麥盧卡UMF25+蜂蜜的兩倍。圖2表明活化的蜂蜜的效力可通過添加適量的酶來適應(yīng)要求。實施例3該實施例描述了證實活化的Tineo蜂蜜的抗微生物作用的測試結(jié)果。如果蜂蜜含有添加的葡萄糖氧化酶，則被描述為“活化的”。使用TINEO蜂蜜和不同酚標(biāo)準(zhǔn)物的樣品進(jìn)行如實施例2中所述的孔擴(kuò)散測定。圖3a是顯示由不同樣品引起的金黃色葡萄球菌抑制區(qū)域的一式兩份瓊脂平板的照片。該圖包括顯示瓊脂板的孔中的樣品的布局的圖示：1.10％的酚標(biāo)準(zhǔn)物2.20％的酚標(biāo)準(zhǔn)物3.30％的酚標(biāo)準(zhǔn)物4.TINEO蜂蜜(未添加葡萄糖氧化酶的巴氏滅菌TINEO蜂蜜)5.TINEODeact(巴氏滅菌的TINEO蜂蜜，進(jìn)一步熱滅活)6.麥盧卡UMF25+7.TINEO20+(添加有葡萄糖氧化酶的巴氏滅菌的TINEO蜂蜜，0.005％Biozyme酶)圖3a顯示TINEO蜂蜜單獨或TINEO失活的蜂蜜都不會引起金黃色葡萄球菌生長的抑制。添加葡萄糖氧化酶的TINEO蜂蜜(TINEO20+)的作用大于麥盧卡UMF25+的作用，并相當(dāng)于30％的酚標(biāo)準(zhǔn)物。圖3b是顯示由不同樣品引起的金黃色葡萄球菌的抑制區(qū)的瓊脂平板的照片，其排列如下6.TINEO活性蜂蜜40+(0.05％酶w/w)7.麥盧卡蜂蜜UMF25+圖3b顯示TINEO活性蜂蜜25+和40+樣品在抑制金黃色葡萄球菌的生長上比麥盧卡蜂蜜25+樣品更有效。實施例4本實施例描述了證實活化的Ulmo和Tineo蜂蜜的抗微生物作用的測試結(jié)果。圖4a顯示來自如實施例2所述進(jìn)行的測量24小時孵育后金黃色葡萄球菌生長的抑制區(qū)的孔擴(kuò)散測定的三個重復(fù)的結(jié)果。去離子水中酚的濃度范圍為40-10％的樣品和2種類型的麥盧卡(麥盧卡UMF25+，麥盧卡550MGO)的樣品和具有0.01％w/wBiozyme葡萄糖氧化酶的活化的Ulmo蜂蜜(如實施例2)的樣品。圖4b顯示了來自另一孔擴(kuò)散測定的結(jié)果。將葡萄糖氧化酶(如實施例2中所述的Biozyme制劑)添加至巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜(0.005％酶w/w)中，并在40℃下儲存24或72小時。然后如實施例2所述，在孔擴(kuò)散測定中測試來自儲存的活化的蜂蜜的樣品的抗金黃色葡萄球菌的活性，并與4％至25％的一系列酚標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行比較。圖4b顯示活化的蜂蜜在40℃下儲存72小時時是穩(wěn)定的，并且活化的蜂蜜在其抗金黃色葡萄球菌的有效性方面相當(dāng)于20％的酚標(biāo)準(zhǔn)物。圖4c顯示了來自另一孔擴(kuò)散測定的結(jié)果，在所述測定中新批和舊批(舊批在新批之前約四個月被接收)的巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜(如實施例2中所述的Biozyme制劑，0.5％w/w)和具有遞增量的葡萄糖氧化酶的Tineo蜂蜜(如實施例2中所述的Biozyme制劑，0.0005-0.5％w/w)與麥盧卡18+和25+UMF蜂蜜以及10-40％的一系列酚標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行比較。在圖4c中，“正常”是指如所接受的巴氏滅菌的蜂蜜，“Deact”是指已被進(jìn)一步熱失活的巴氏滅菌的蜂蜜，“React”是指在添加葡萄糖氧化酶之前已被進(jìn)一步熱失活的巴氏滅菌的蜂蜜。因此，在無(“Ulmo舊4正?！薄ⅰ癠lmo新X”和“Ulmo新Y”)和具有添加的葡萄糖氧化酶的情況下測試Ulmo蜂蜜。圖4c顯示金黃色葡萄球菌的抑制區(qū)的面積?？梢钥闯?，舊批的巴氏滅菌的Ulmo蜂蜜(“Ulmo舊4React”)保持與新的巴氏滅菌的批次(“Ulmo新XReact”和“Ulmo新YReact”)相等的活性。所有這些批次顯示約為麥盧卡蜂蜜18+兩倍的活性，以及比麥盧卡蜂蜜25+更高的活性。向巴氏滅菌的Tineo蜂蜜中添加遞增量的葡萄糖氧化酶增加了蜂蜜的活性。在該測試中，0.005％w/w的酶大約相當(dāng)于10％的酚標(biāo)準(zhǔn)物，0.05％w/w的酶大約相當(dāng)于15％的酚標(biāo)準(zhǔn)物，0.5％w/w的酶大約相當(dāng)于25％酚標(biāo)準(zhǔn)。麥盧卡18+蜂蜜相當(dāng)于10％酚標(biāo)準(zhǔn)，麥盧卡25+蜂蜜顯示介于10％與15％酚標(biāo)準(zhǔn)之間的活性。實施例5在本實施例中，用巴氏滅菌的Tineo蜂蜜測試不同葡萄糖氧化酶制劑的作用。所用的酶制劑是如實施例2中所述的Biozyme制劑和來自ANHUIMINMETALSDEVELOPMENTI/ECO.,LTD的食品級非GMO來源的葡萄糖氧化酶(下文中稱為“Anhui”酶制劑)。圖5a顯示如實施例2中所述進(jìn)行的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果，在所述測定中將不含酶或含0.005-0.05％w/w的Anhui酶的巴氏滅菌的Tineo蜂蜜的樣品與不同的酚標(biāo)準(zhǔn)物(10％、20％、30％)和麥盧卡蜂蜜UMF25+的樣品相比較。結(jié)果表明，增加酶的量增加了活化的蜂蜜抗金黃色葡萄球菌的有效性。0.0125％w/w的酶大約相當(dāng)于20％的酚標(biāo)準(zhǔn)物和麥盧卡蜂蜜樣品，0.05％w/w的酶大約相當(dāng)于30％的酚標(biāo)準(zhǔn)物。圖5b顯示如實施例2中所述進(jìn)行的孔擴(kuò)散測定的結(jié)果，在所述測定中將不同量的酶添加至商業(yè)批次的巴氏滅菌的Tineo蜂蜜的樣品中?！癟ineo”樣品是沒有添加葡萄糖氧化酶的巴氏滅菌的蜂蜜?！癟ineoDeact”樣品是已被進(jìn)一步熱處理的巴氏滅菌并且不含添加的葡萄糖氧化酶的蜂蜜。“Tineo20+”樣品含有0.005％w/w的Biozyme葡萄糖氧化酶。結(jié)果表明，Tineo樣品沒有抗金黃色葡萄球菌的活性。Tineo20+樣品比麥盧卡25+更有效地抗金黃色葡萄球菌，并且介于20％的酚標(biāo)準(zhǔn)物與30％的酚標(biāo)準(zhǔn)物之間。實施例6本實施例描述了儲存60天或90天的活化的蜂蜜的穩(wěn)定性的測試結(jié)果。將如實施例2所述的來自Biozyme的葡萄糖氧化酶以0.005％w/w添加至巴氏滅菌的Ulmo或Tineo蜂蜜中，將所得混合物在37℃下儲存兩個月(Ulmo蜂蜜樣品)或在室溫下儲存90天(Tineo蜂蜜樣品)。所使用的酶的量對應(yīng)于將用于商業(yè)食品的量。儲存后，在如實施例2所述進(jìn)行的針對金黃色葡萄球菌的孔擴(kuò)散測定中測試樣品。將儲存的樣品與10％、20％和30％的酚標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行比較。圖6a顯示Ulmo蜂蜜樣品的結(jié)果，圖6b顯示了Tineo蜂蜜樣品的結(jié)果。對于任一類型的蜂蜜，在儲存期間沒有明顯的活性損失。實施例7本實施例描述了粉狀活化的蜂蜜的抗微生物活性的測試結(jié)果，在所述測試中將呈粉末形式的葡萄糖氧化酶添加至粉狀蜂蜜中。粉狀蜂蜜獲自ADMSpecialtyIngredients的HoniBake。將0.1％w/w的Biozyme葡萄糖氧化酶(如實施例2中所述的)添加至粉狀蜂蜜中。如實施例2所述，在針對金黃色葡萄球菌的孔擴(kuò)散測定中測試混合物的抗微生物活性。將混合物添加至瓊脂平板的兩個不同孔中。對照僅與蜂蜜粉末一起使用。結(jié)果示于圖7a中。對照孔顯示無活性，但活化的蜂蜜顯示出清楚的抑制區(qū)。圖7b顯示另一個孔擴(kuò)散測定的結(jié)果，在所述測定中將不同的粉狀蜂蜜與來自ANHUIMINMETALSDEVELOPMENTI/ECO.,LTD的粉狀酶混合(實施例5)。樣品孔24a僅為蜂蜜粉末，而樣品孔24b為與1％w/w的酶混合的蜂蜜粉末。再次地，可以看到清楚的抑制區(qū)。實施例8本實施例顯示各種不同產(chǎn)品本身以及當(dāng)與活化的蜂蜜(即添加了葡萄糖氧化酶的蜂蜜)混合時的抗微生物活性的測試結(jié)果。在如實施例2所述進(jìn)行的孔擴(kuò)散測定中測試抗金黃色葡萄球菌的抗微生物活性。測試的不同樣品列于下表2中，結(jié)果的照片示于圖8中。表2結(jié)果清楚地顯示當(dāng)與活化的蜂蜜混合時產(chǎn)品的增強(qiáng)的抗微生物效力。實施例9本實施例顯示各種不同產(chǎn)品本身以及當(dāng)與活化的蜂蜜(即，添加了葡萄糖氧化酶的蜂蜜)混合時的抗微生物活性的進(jìn)一步測試的結(jié)果。在如實施例2所述進(jìn)行的孔擴(kuò)散測定中測試抗金黃色葡萄球菌的抗微生物活性。測試的不同樣品列于下面，結(jié)果的照片示于圖9中。7.Ulmo活性蜂蜜20+。圖9b：6.麥盧卡蜂蜜25+7.Ulmo活性蜂蜜20+結(jié)果清楚地顯示當(dāng)與活化的蜂蜜混合時產(chǎn)品的增強(qiáng)的抗微生物效力。實施例10本實施例描述了包含未巴氏滅菌的蜂蜜和添加的純化的葡萄糖氧化酶的本發(fā)明的組合物的滅菌。以11.6-14.2kGy的目標(biāo)劑量(劑量為13.1-13.6kGy，如通過劑量計測定的)對10個各自含有50g組合物的密封小袋進(jìn)行γ輻照，隨后單獨測試無菌度。對于無菌度測試，所有的工作在層流下于潔凈室中進(jìn)行。將10g的所述組合物添加至100ml無菌胰蛋白胨大豆肉湯(TSB：酪蛋白的胰酶消化物，17g/L，大豆豆粕的木瓜酶消化物，3g/L，氯化鈉，5g/L，磷酸氫二鉀，2.5g/L，葡萄糖2.5g/L，pH7.3±0.2)并搖動混合，然后轉(zhuǎn)移至無菌容器中。再添加100ml的TSB以除去任何樣品殘余物，并將其添加至同一容器中。將TSB添加至樣品中并在30℃±2℃下孵育最少14天，并檢查微生物生長的跡象。在測試開始前對所有培養(yǎng)基進(jìn)行陽性對照。在完全孵育期后注意到一個陽性結(jié)果。35kGy作為滅菌劑量的證實被接受。使用類似于實施例2中所述的測定的孔擴(kuò)散測定對通過γ輻照滅菌之前和之后的小袋的測試證實：輻照對組合物的抗微生物活性的影響可忽略。滅菌后活性水平?jīng)]有可觀察到的降低。實施例11本實施例描述了與麥盧卡UMF25+蜂蜜和熱滅活的蜂蜜(非活性蜂蜜)相比，已經(jīng)使用γ輻照滅菌的本發(fā)明的組合物的抗微生物作用的測試結(jié)果，所述組合物包含未巴氏滅菌的蜂蜜和添加的純化的葡萄糖氧化酶(稱為“Surgihoney”)。使用麥盧卡蜂蜜UMF25+、非活性蜂蜜和Surgihoney的樣品進(jìn)行如實施例2中所述的孔擴(kuò)散測定。圖10(a)是顯示由不同樣品引起的金黃色葡萄球菌(ATCC9518)的抑制區(qū)的瓊脂平板的照片。麥盧卡蜂蜜UMF25+在圖中的頂行，非活性蜂蜜在中間行，而Surgihoney在底行。圖10(b)顯示用麥盧卡UMF25+蜂蜜(頂行)處理的平板和用Surgihoney(底行)處理的平板。結(jié)果清楚地表明，Surgihoney在滅菌后保留抗金黃色葡萄球菌的顯著的抗微生物活性，并且Surgihoney在抗金黃色葡萄球菌方面比麥盧卡蜂蜜UMF25+更有效。實施例12已經(jīng)使用γ輻照(以最小劑量35kGy)滅菌的包含未巴氏滅菌的蜂蜜和添加的純化的葡萄糖氧化酶的本發(fā)明組合物的穩(wěn)定性測試。加速老化技術(shù)基于以下假設(shè)：涉及材料劣化的化學(xué)反應(yīng)遵循Arrhenius反應(yīng)速率函數(shù)。該函數(shù)闡明均勻過程的溫度的10℃增加或降低導(dǎo)致化學(xué)反應(yīng)速率的約兩倍或1/2時間的變化。例如，在55℃下，5.3周相當(dāng)于貨架上的1年，在55℃下，兩年相當(dāng)于10.6周，五年將相當(dāng)于26.5周。將來自兩個不同生產(chǎn)批次的產(chǎn)品用于本研究。產(chǎn)品是包含10g組合物的小袋。已以最小劑量35kGy進(jìn)行γ輻照對小袋滅菌。將樣品在加速老化條件下于55℃(±2℃)儲存。實時與加速老化之間的關(guān)系如下：表3測試、測試間隔和所需樣品以相同的時間間隔測試來自每批的樣品。下表總結(jié)了所進(jìn)行的測試，以及每個批次每個時間點所需的樣品總數(shù)。*對于充滿的小袋重量測試使用相同的樣品**使用五個樣品進(jìn)行壓力試驗表4測試方法充滿的小袋重量：空小袋的平均皮重為1.7g。將10個小袋在校準(zhǔn)的實驗室天平上單獨稱重，扣除皮重，記錄結(jié)果。壓力測試：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序在壓力測試試驗臺上測試每個小袋。記錄通過次數(shù)和失敗次數(shù)。蜂蜜的pH：將五個小袋的內(nèi)容物合并至玻璃燒杯中。使用三種標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)HannapH計，然后在去離子水中漂洗電極。將pH電極和溫度探針浸入蜂蜜樣品中，從數(shù)字顯示器讀取pH值和溫度，并記錄。水分含量：從每個時間點取5袋蜂蜜。從每個小袋取出約1ml的樣品并放置在折射計的樣品板上(一次一個樣品)。蓋上樣品蓋，用戶通過透鏡觀察，同時將儀器指向諸如窗戶的光源。讀取刻度的值，如陰影線所示的，并記錄結(jié)果。顏色：打開一袋蜂蜜，將一些蜂蜜組合物放在白色瓷磚上。將蜂蜜組合物的顏色與HoneyColorChartPfund標(biāo)度相比較，記錄分?jǐn)?shù)(30-800)。結(jié)果充滿的小袋重量-加速老化批次A：表5批次B：表6壓力測試結(jié)果-加速老化測試間隔(周)批次A批次B2.610/1010/10表7pH測試結(jié)果-加速老化表8水分含量測試結(jié)果-加速老化批次A：表9批次B：表10顏色測試結(jié)果-加速老化表11下面的實施例13-35描述了使用本發(fā)明的組合物治療傷口的結(jié)果，所述組合物包含添加了葡萄糖氧化酶的未巴氏滅菌的蜂蜜(在實施例中組合物被稱為“Surgihoney”)。該Surgihoney以密封的小袋提供，每個小袋含有10g的組合物。小袋已經(jīng)使用γ輻照滅菌。從治療的第0天使用小袋。每次敷料更換涉及Surgihoney的新應(yīng)用。在實施例中記錄的每一天，或者有時更頻繁地更換敷料。將Surgihoney施加于敷料，或直接施加至傷口，然后用敷料覆蓋。在這兩種情況下，將Surgihoney與傷口直接接觸，并用敷料覆蓋。實施例13本實施例描述了使用Surgihoney治療感染的腳趾的結(jié)果。結(jié)果示于圖11中?；颊邽?8歲的糖尿病男性。左腳上的傷口已在治療開始前一個月發(fā)展，并引起輕度疼痛。a)第0天-傷口特征：傷口：3×2×1cm；99％健康肉芽形成但1％綠色菌落；周圍皮膚脫落；少量黃膿液滲出物產(chǎn)生臭味；b)第5天-傷口特征：傷口改善；每次施加1小袋蜂蜜進(jìn)行第二次敷料更換；甲硝唑和阿莫西林；還使用茶樹油；c)第10天-傷口特征：傷口改善；綠色菌落消失；傷口被清潔，干燥皮膚被除去，以及再施加一小袋蜂蜜。實施例14本實施例描述了使用Surgihoney治療腳趾潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖12中?；颊邽樵谟夷_上具有在治療前的一個月長的時期內(nèi)發(fā)展的感染性足趾潰瘍并引起輕度疼痛的61歲糖尿病女性。a)第0天-傷口特征：傷口：2×2×0.2cm；1％黃褐色脫落物，其余為肉芽形成的組織；少量黃色滲出物；b)第7天-傷口特征：傷口改善；對于敷料更換每日施加0.5袋Surgihoney；Flucox；c)第10天-傷口特征：傷口進(jìn)一步改善；停用Flucox。實施例15本實施例描述使用Surgihoney治療腳趾潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖13中?；颊邽樵谧竽_第一和第二腳趾上具有腳趾潰瘍的61歲糖尿病女性。輕度疼痛。a)第0天-傷口特征：傷口：0.8×0.8×0.2cm；100％肉芽形成的組織；少量漿液性滲出物；b)第7天-傷口特征：傷口愈合至不再張開的程度；每天半袋蜂蜜；Flucox；c)第10天-傷口特征：傷口改善；現(xiàn)在干燥，無脫落物或滲出；停用Flucox。實施例16本實施例描述使用Surgihoney治療足部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖14中。患者為具有已在治療前一個月發(fā)展的足部潰瘍的50歲女性糖尿病患者。報告了脆性皮膚但沒有疼痛。a)第0天-傷口特征：傷口：1×0.5×0.5cm；1％黃褐色脫落物，其余為肉芽形成的組織；極低量的黃色滲出物；b)第7天-傷口特征：傷口改善；干燥；脫落物由健康肉芽形成的組織代替；尺寸和深度減??；傷口用鹽水清洗，然后施加蜂蜜敷料(0.5小袋)；無抗生素；c)第9天-傷口特征：傷口大大改善；幾乎封閉，無滲出物；繼續(xù)施加敷料，每次0.5小袋。實施例17本實施例描述了使用Surgihoney治療足部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖15中。該患者為具有已發(fā)展一年以上的糖尿病性足部潰瘍的87歲糖尿病男性。周圍皮膚脆弱，但疼痛不明顯。a)第0天-傷口特征：傷口：1×1.8cm；1％黃褐色脫落物，其余為肉芽形成的組織；少量黃色漿液性滲出物；b)第3天-傷口特征：傷口改善；敷料更換施加1個蜂蜜小袋；沒有疼痛的報告；無抗生素；c)第6天-傷口特征：傷口改善；傷口床現(xiàn)在為100％肉芽形成的組織；進(jìn)一步施加蜂蜜小袋；在周圍潰瘍的干性皮膚上使用Diprosalic。實施例18本實施例描述使用Surgihoney治療糖尿病性足部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖16中。患者是患有由質(zhì)量差的鞋的刺激引起的糖尿病性足部潰瘍的男性?；颊咴谥委熐安坏?個月患有潰瘍。a)第0天-傷口特征：具有輕微疼痛的周圍紅色的皮膚；1％脫落物，99％肉芽形成的組織；感染和糖尿??；小體積的黃色漿液性滲出物；傷口尺寸：2cm×2cm×0.2cm；b)第7天-傷口特征：在醫(yī)院進(jìn)行評估，但從第1天至現(xiàn)在每天更換敷料。由為訓(xùn)練有素的護(hù)士的兒媳婦按照方案更換敷料。傷口改善；100％健康肉芽形成；健康的周圍皮膚，輕微的疼痛；所用抗生素，氟卡西林500mg，每6小時一次，持續(xù)7天；傷口尺寸：1.5cm×1.3cm×0.1。實施例19本實施例描述了使用Surgihoney治療足部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖17中?；颊邽榛加袊?yán)重且控制不良的糖尿病的55歲男性?；颊咴诮刂蟮牡谌齻€腳趾部位有一個深部潰瘍。a)第0天-傷口特征：傷口：3×3×3cm；1％黃褐色脫落物；1％綠色菌落；其余為肉芽組織；中等體積的黃膿滲出物；b)第1天-傷口特征：傷口改善；在施加蜂蜜(1小袋)之前，除去所有脫落物；甲硝唑；c)第3天-傷口特征：傷口改善；進(jìn)一步施加小袋；患者出院；拭子：+++皮膚菌群；無抗生素。實施例20本實施例描述了使用Surgihoney治療創(chuàng)傷性腿部傷口的結(jié)果。結(jié)果示于圖18中?；颊呤窃谙峦炔烤哂幸鹬卸忍弁吹膭?chuàng)傷性創(chuàng)傷的95歲女性。a)第0天-傷口特征：傷口：15×12×1cm；主要是肉芽組織但具有1％的傷口床壞死和黑色；中量的血紅蛋白滲出物(haemoserousexudate)；b)第3天-傷口特征：傷口是靜態(tài)的；無進(jìn)一步壞死，但傷口幾乎相同；施加1小袋蜂蜜；拭子：腸球菌屬；無抗生素；c)第8天-傷口特征：傷口改善；滲出物體積減少和壞死組織減少。實施例21本實施例描述了使用Surgihoney治療感染的腿部傷口的結(jié)果。結(jié)果示于圖19中?；颊邽榫哂行⊥雀腥緜诘?1歲女性。周圍皮膚脆弱，存在輕度疼痛。a)第0天-傷口特征：傷口尺寸：4.5×2.5cm；大部分紅色肉芽組織，具有1％黃/褐色脫落物；中等體積黃色漿液性滲出物。b)第15天-傷口特征：傷口改善；尺寸：4×2cm；存在較少的脫落物和漿液性滲出物；c)第19天-傷口特征：傷口改善；每個敷料施加Surgihoney。實施例22本實施例描述了使用Surgihoney治療足部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖20中?；颊邽樵诘谝?、第二、第三和第四腳趾截肢后維持慢性糖尿病性足部潰瘍的53歲女性糖尿病患者。a)第0天-傷口特征：傷口：6.5×3×0.2cm；肉芽組織，具有少量黃色漿液性滲出物；b)第5天-傷口特征：傷口尺寸略微改善，但床狀況幾乎保護(hù)不變；去除松散的肉芽組織；可吸收的敷料施加小袋的蜂蜜；無抗生素；c)第7天-傷口特征：傷口被健康肉芽組織清潔；每2天更換一次敷料，每次施加蜂蜜的小袋；d)第9天-傷口特征：傷口改善；尺寸減小，滲出物減少；患者出院。實施例23本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖21中?；颊邽榛加幸言谥委熼_始之前一年內(nèi)發(fā)展的并引起輕度疼痛的腿部潰瘍的女性。a)第0天-傷口特征：健康的周圍皮膚；1％脫落物，99％肉芽形成；中等體積的黃色漿液性滲出物；傷口尺寸：7cm×3cm；b)第7天-傷口特征：傷口改善和處于社區(qū)護(hù)理中的患者；施加1小袋Surgihoney；存在減小的尺寸和較少的滲出物；疼痛更可忍受。實施例24本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖22中。患者為具有不良營養(yǎng)狀況和脫水的77歲男性。近平臥式貧血(Anaemia.caprostrate)?；颊哂幸言谥委熐?-12個月內(nèi)發(fā)展的腿部潰瘍。輕度疼痛。a)第0天-傷口特征：傷口：20×10×0.5cm；1％黃褐色脫落物，其余為肉芽組織但有中度滲出物，膿綠色；拭子：+++混合的大腸菌群及假單胞菌屬；抗生素：BenPen,Clinda；b)第4天-傷口特征：傷口是靜態(tài)的；單獨的蜂蜜敷料；BenPen&Clinda；c)第8天-傷口特征：傷口改善；所有綠色脫落物消失；無抗生素；撲熱息痛。實施例25本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖23中。患者為患有已在6至12個月的時期內(nèi)發(fā)展的腿部潰瘍的91歲女性，她住院了并且具有很多痛苦。a)第0天-傷口特征：疼痛嚴(yán)重，有傷口臭味；感染；10％脫落物，50％定殖綠色，20％蜂窩織炎，20％健康肉芽形成；傷口：15cm×5cm×0.3cm；滲出物：小體積，漿液性和黃色的；b)第11天-傷口特征：輕度疼痛和傷口大大改善；100％健康肉芽形成；無感染；傷口：10cm×5cm×0.2cm；滲出物：低，血紅蛋白性的，紅色cm；50％傷口尺寸減小。實施例26本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖24中?；颊邽?8歲男性，UTI患者?；颊哂懈腥拘酝炔繚?。周圍皮膚被浸軟。傷口引起輕度疼痛。a)第0天-傷口特征：傷口尺寸：5cm×6cm×0.5cm；98％紅色肉芽，1％黃/褐色脫落物，1％壞死組織；小體積的血紅蛋白滲出物；b)第8天-傷口特征：傷口改善；每次敷料更換施加1小袋蜂蜜；拭子顯示少量皮膚菌群；無抗生素。實施例27本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖25中。患者為具有不良營養(yǎng)狀況和脫水的82歲女性?；颊呔哂幸言谥委熐?個月內(nèi)發(fā)展的腿部潰瘍。a)第0天-傷口特征：傷口：3×3×0.5cm；傷口床由健康肉芽組織組成；少量黃色血紅蛋白滲出物；b)第3天-傷口特征：傷口改善；拭子顯示+++皮膚菌群；敷料施加1小袋蜂蜜；無抗生素；c)第8天-傷口特征：傷口改善；傷口尺寸減小和滲出物體積減少。實施例28本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖26中。患者為具有低血清白蛋白的83歲的不能行動的男性?；颊呔哂性谥委熐?個月的時期內(nèi)發(fā)展的，導(dǎo)致中度水平的疼痛的腿部潰瘍。a)第0天-傷口特征：傷口：20×18×0.5cm；1％黃/褐色脫落物，1％綠色菌落，其余為肉芽形成的組織；中等體積的綠色漿液性滲出物；輕微的傷口臭味；b)第4天-傷口特征：傷口改善；已施加2小袋Surgihoney；++拭子上的假單胞菌屬；沒有給予抗生素；c)第8天-傷口特征：2次單獨的蜂蜜敷料更換后傷口改善；+++假單胞菌屬；大大改善，停用蜂蜜。實施例29本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖27中。患者為具有2型呼吸衰竭和行動性差的74歲男性吸煙者?；颊呔哂幸言谥委熐耙恢軆?nèi)發(fā)展的，引起中度疼痛的膿毒性皮膚撕裂。a)第0天-傷口特征：傷口：15×20×0.3cm；99％健康肉芽形成，但1％嚴(yán)重感染；中等體積的黃色著色的滲出物；拭子顯露出稀少的大腸菌群；抗生素：克林霉素；b)第6天-傷口特征：2次敷料更換后傷口改善；單獨的蜂蜜敷料；潰瘍現(xiàn)是干燥的；無來自拭子的生長；克林霉素；c)第9天-傷口特征：傷口改善；仍然殘留的蜂窩織炎，但潰瘍愈合；在拭子上再一次無生長；Clinda。實施例30本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖28中?；颊邽樵谕群褪直凵嫌袊?yán)重的廣泛潰瘍的81歲男性?；颊呔哂型庵苎芗膊『筒涣紶I養(yǎng)狀況。傷口已在治療前一個月發(fā)展。周圍皮膚脫落并引起嚴(yán)重疼痛。a)第0天-傷口特征：傷口：30×28×1cm；1％黃/褐色脫落物，其余為肉芽形成的組織；大量紅色的血紅蛋白滲出物；拭子顯示+++混合的大腸菌群及假單胞菌屬；b)第6天-傷口特征：傷口改善；極少的假單胞菌屬；無抗生素，但無痛性疼痛；c)第10天-傷口特征：傷口改善；+假單胞菌屬仍存在；疼痛不太嚴(yán)重。實施例31本實施例描述使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖29中?；颊邽榫哂型庵苎芗膊〉?7歲男性。腿部潰瘍發(fā)展于治療前一周。周圍皮膚脆弱，疼痛適度。a)第0天-傷口特征：傷口：1×1×0.2cm；1％黃/褐色脫落物，其余為肉芽形成的組織；傷口中存在少量黃色漿液性滲出物；b)第11天-傷口特征：在一系列敷料更換后，其中傷口是靜態(tài)的，現(xiàn)在顯示改善的跡象；體積較小的滲出物，傷口較??；每次更換施加1×蜂蜜小袋；拭子顯示金黃色葡萄球菌++；c)第18天-傷口特征：傷口是靜態(tài)的；傷口尺寸：3×3×0.2cm；金黃色葡萄球菌++存在。實施例32本實施例描述了使用Surgihoney治療腿部潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖30中?；颊邽榛加幸粋€月的重度糖尿病性潰瘍的43歲女性。潰瘍并發(fā)有基礎(chǔ)性骨髓炎，骨去除(bonedebriefed)和來自跟骨的金屬加工?；颊咚て屏怂哪_，隨后的治療導(dǎo)致骨感染。主治臨床醫(yī)生的意見是，很可能對患者的腳進(jìn)行截肢。a)第0天-傷口特征：具有40％脫落物，10％定殖的綠色，50％健康肉芽形成的傷口；周圍皮膚健康；中度疼痛；黃色膿液性滲出物介質(zhì)；傷口9cm×8cm×2com；無抗生素；b)第1天-傷口特征：傷口是靜態(tài)的；拭子：大腸菌群及假單胞菌屬；無抗生素；無鎮(zhèn)痛藥；c)第14天-傷口特征：傷口改善；使用1小袋Surgihoney；創(chuàng)傷緩慢肉芽形成，大大改善；拭子：少量皮膚菌群。實施例33本實施例描述使用Surgihoney治療壓力性潰瘍的結(jié)果。結(jié)果示于圖31中?；颊邽榫哂胁涣紶I養(yǎng)狀況的88歲女性糖尿病患者?；颊呔哂幸言谥委熤?個月內(nèi)發(fā)展的，引起中度水平的疼痛的具有脆弱周圍皮膚的壓力性潰瘍(3級)。a)第0天-傷口特征：傷口尺寸：0.7×0.7×0.2cm；1％黃/褐色脫落物，1％；其余部分為肉芽的脂肪組織；小體積的黃色膿存在；b)第3天-傷口特征：傷口愈合(閉合)；施加1小袋Surgihoney。實施例34本實施例描述使用Surgihoney治療感染的腋窩切口的結(jié)果。結(jié)果示于圖32中?；颊邽樵诒巯掠懈腥镜膫诘?1歲女性。周圍皮膚紅色，輕度疼痛。a)第0天-傷口特征：1％蜂窩織炎，99％肉芽形成；小體積的具有黃色膿的滲出物；傷口尺寸：5cm×5cm；b)第24天-傷口特征：傷口改善；在度假期間使用蜂蜜超過2周；無抗生素。實施例35本實施例描述了使用Surgihoney治療導(dǎo)管的入口點周圍的感染的結(jié)果。結(jié)果示于圖33中?；颊呤?1歲女性癌癥患者?；颊咴趯?dǎo)管進(jìn)入點周圍的乳房區(qū)域具有感染。在治療前不到1周出現(xiàn)傷口，其引起輕度疼痛。a)第0天-傷口特征：傷口：2cm×2cm；1％蜂窩織炎，其余為肉芽形成的組織；小體積的紅色漿液性滲出物；b)第6天-傷口特征：傷口大大改善；無滲出物；施加1小袋surgihoney；獲取拭子，但無生長；無抗生素；c)第14天-傷口特征：傷口改善至不再是問題的程度。實施例36SurgihoneySurgihoney是添加了純化的葡萄糖氧化酶的未巴氏滅菌的蜂蜜。制備具有不同的抗微生物能力的3種不同的Surgihoney制劑：S1Surgihoney：具有0.1％(w/w)添加的葡萄糖氧化酶的未巴氏滅菌的蜂蜜。所用的酶是來自BIO-CAT,INC的活性為15,000個單位/g的來自黑曲霉菌的食品級葡萄糖氧化酶。以11/6-14.2kGy的目標(biāo)劑量對含有50g的S1Surgihoney的密封小袋進(jìn)行γ輻照。S2Surgihoney：具有0.1％(w/w)添加的葡萄糖氧化酶的未巴氏滅菌的蜂蜜。所用的酶是來自BBIEnzymesLimited的活性為274個單位/mg的來自黑曲霉菌的葡萄糖氧化酶(GO3B2)。單位定義：在25℃，pH7.0下每分鐘引起1微摩爾葡萄糖氧化的酶量。污染物：α-淀粉酶不超過0.05％，蔗糖酶不超過0.05％，麥芽糖酶不超過0.05％，以及GO/Cat不超過2000。S3Surgihoney：具有0.25％(w/w)添加的葡萄糖氧化酶的未巴氏滅菌的蜂蜜。所用的酶是來自BBIEnzymesLimited的活性為274個單位/mg的葡萄糖氧化酶(GO3B2)。因此，S1Surgihoney含有每克組合物15個單位的葡萄糖氧化酶，S2Surgihoney含有每克組合物274個單位的葡萄糖氧化酶，S3Surgihoney含有每克組合物685個單位的葡萄糖氧化酶。實施例37Surgihoney的體外抗微生物活性本實施例描述了通過盤擴(kuò)散法、最小抑制濃度(MIC)以及最小殺滅濃度(MBC)測定和時間殺菌測量進(jìn)行的一系列傷口和潰瘍細(xì)菌分離株對Surgihoney的敏感性測試。概述結(jié)果：Surgihoney顯示高效的抗廣泛的革蘭陽性和革蘭陰性細(xì)菌和真菌的抑制性和殺菌活性。MIC/MBC顯著低于局部臨床使用中可能達(dá)到的濃度。傷口中的Surgihoney的局部濃度估計為約500gms/L。用于金黃色葡萄球菌的Surgihoney1的MIC/MBC為31和125gms/L，Surgihoney3的MIC/MBC為0.12和0.24gms/L。殺滅速度取決于效力。在Surgihoney1中，對于在48小時內(nèi)測試的所有生物體發(fā)生最有效的完全殺滅活性。對于Surgihoney3，最有效的殺滅活性在30分鐘內(nèi)發(fā)生。維持Surgihoney接種物制劑長達(dá)一周表現(xiàn)出完全的殺滅活性并且沒有細(xì)菌持久性。結(jié)論：Surgihoney具有作為具有高度活性的局部治療的廣泛潛力，所述局部治療將蜂蜜的愈合性質(zhì)的作用與用于皮膚損傷、傷口，潰瘍和腔的生物工程化產(chǎn)品的強(qiáng)效抗微生物活性組合。其具有抗多藥耐藥菌的高度活性。其比其它測試的蜂蜜更具活性，并且在抗菌活性方面可與化學(xué)抗菌劑相當(dāng)。表面?zhèn)诤推つw潰瘍在許多國家隨著人口年齡的不斷增加以及肥胖和2型糖尿病的全球流行而變得越來越普遍。在英國，社區(qū)護(hù)士花費大量時間敷裹腿部潰瘍，并且如果要在社區(qū)腿部潰瘍服務(wù)中保持標(biāo)準(zhǔn)，由腿部潰瘍護(hù)士進(jìn)行的監(jiān)護(hù)是必需的。皮膚中的大多數(shù)慢性中斷逐漸被細(xì)菌定殖。很難知道這些細(xì)菌何時是致病性的以及是否是致病性的，但很可能即使不存在明顯的感染，細(xì)菌定殖在減緩組織愈合，建立生物膜和導(dǎo)致傷口蛻裂和令人討厭的臭味中起作用。組織存活力是具有挑戰(zhàn)性的，特別是當(dāng)并發(fā)并存病時。慢性傷口總是逐漸被細(xì)菌定殖，這可能破壞愈合過程的穩(wěn)定性。當(dāng)樣品被報告為正在生長的細(xì)菌時，存在發(fā)送微生物樣品并提供全身性抗生素的誘惑。所有這些服務(wù)將選擇更耐藥的微生物，這是為什么慢性下肢潰瘍常常被多藥耐藥性生物諸如甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌定殖的原因。Surgihoney已被開發(fā)作為用于傷口的預(yù)防敷料。本研究檢查了Surgihoney的體外性質(zhì)。Surgihoney保留天然蜂蜜的所有建立的愈合性質(zhì)，但其抗微生物活性可被設(shè)定在任何需要的效力。本研究確定了Surgihoney1、2和3的最小抑制濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)以及時間殺滅曲線。方法提供了效力等級1、2和3的Surgihoney。將其作為無菌藥物級產(chǎn)品呈現(xiàn)在呈半固體形式的小袋中。從軟組織微生物學(xué)樣品收集臨床分離物。針對Surgihoney測試金黃色葡萄球菌的18個分離株(12個甲氧西林敏感(MSSA)和6個抗甲氧西林(MRSA))、β溶血性鏈球菌的6個分離株(Lancefield組A(2)、B(2)、C(1)、G(1))、腸球菌屬的某些種的5個分離株(包括抗萬古霉素屎腸球菌)、大腸桿菌的6個分離株(包括擴(kuò)展譜β內(nèi)酰胺酶生產(chǎn)菌)、克雷伯菌屬的2個分離株，粘質(zhì)沙雷氏菌(SerratiaMarcescens)AmpC生產(chǎn)菌的1個分離株、銅綠假單胞菌的4個分離株、魯氏不動桿菌(Acinetobacterlwoffii)的1個分離株、痤瘡丙酸桿菌(Propionibacteriumacnes)的1個分離株、脆弱擬桿菌(Bacteroidesfragilis)的1個分離株以及白色念珠菌的2個分離株、光滑念珠菌的1個分離株、Aspergillusfumigates的1個分離株。瓊脂擴(kuò)散法在已用測試生物體以一定濃度接種以獲得半融合生長的isosenitest瓊脂中切割6mm的孔。將試驗性研究中的測試Surgihoney和其它蜂蜜添加至孔中。最初進(jìn)行了試驗性研究，以將Surgihoney效力S1、S2、S3與來自世界各地：歐洲、南美洲、新西蘭，Yemani、蘇丹的各種蜂蜜以及與醫(yī)用蜂蜜、Medihoney和含有銀(SilverAquacell)和碘(Iodoflex)的抗微生物敷料相比較。在接種有金黃色葡萄球菌并用測試蜂蜜填充的板中切割孔，或在敷料的情況下，將這些敷料切成2×2cm并放置在接種板的表面上。在試驗性研究之后，針對一系列來自皮膚損傷的細(xì)菌分離株單獨測試了Surgihoney效力S1、S2、S3。將孔用約2gms純的所述3種效力的Surgihoney制劑填充至表面，稀釋并在等體積的無菌水中乳化。在18-24小時需氧培養(yǎng)(對于念珠菌屬和曲霉菌屬的某些種更長，對于丙酸桿菌屬的一個種和類桿菌屬的一個種進(jìn)行厭氧培養(yǎng))之后測量區(qū)域大小。最小抑制濃度和最小殺菌濃度將Surgihoney產(chǎn)品溫?zé)嶂?7℃以液化其，并將5gms與10mL無菌去離子水混合。該稀釋液被認(rèn)為是用于連續(xù)稀釋的“純凈”物質(zhì)。使用用于進(jìn)行最小抑制濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的英國抗微生物化學(xué)治療學(xué)會(BSAC)方法(AndrewsJM.Determinationofminimuminhibitoryconcentrations.JAntimicrob372Chemother2001；48(增刊1):5-16)。將Surgihoney產(chǎn)品在微量滴定板孔中從純凈至1/1024連續(xù)稀釋。將75μL的每種蜂蜜稀釋液添加至微量滴定板的條中的每個孔中。凈濃度表示250gm/L的濃度，1/2048的稀釋度表示約0.12gm/L。通過對來自純培養(yǎng)物的每種生物體取四個形態(tài)相同的菌落以產(chǎn)生0.5McFarland密度來制備測試生物體。將其以1:10進(jìn)一步稀釋。用75μL的測試分離株制劑接種包括對照的所有孔。將孔板在37℃下孵育18小時。MIC被認(rèn)為是顯示無可檢測的濁度的最稀的孔。將MIC孔和MIC孔周圍的孔在血瓊脂上繼代培養(yǎng)，并在37℃下孵育18小時以測定MBC。MBC是在培養(yǎng)后沒有生長的最稀的濃度。時間殺滅曲線通過取0.1mL的0.5MacFarlane密度的測試生物體并將其接種在3mL營養(yǎng)肉湯中來制備測試生物體接種物。將測試接種物分成3個單獨的小塊對照和向其中添加了0.5gSurgihoney1(S1)、Surgihoney3(S3)或Medihoney(MH)的3個測試制劑。接種物的菌落計數(shù)通過1:10的系列稀釋并在血瓊脂平板上涂鋪0.1mL(重復(fù)3次)來測定。將測試和對照接種物保持在30℃以模擬表面皮膚損傷的溫度。如上在0.5小時、2小時、4小時、24小時、48小時、72小時和168小時的時間以一式三份進(jìn)行菌落計數(shù)。通過將0.1ml原始接種物接種到營養(yǎng)肉湯中以中和Surgihoney的任何殘留效應(yīng)并在37℃孵育72小時，然后鋪板在血液瓊脂上以測定測試生物體存活，來進(jìn)行終末培養(yǎng)。結(jié)果抑制區(qū)尺寸。試驗性比較研究表明，所有Surgihoney效力具有比任何其它測試的蜂蜜(包括醫(yī)療級蜂蜜Medihoney)更大的抗微生物活性。S1的抑制區(qū)大于由任何其它蜂蜜產(chǎn)生的那些抑制區(qū)。銀敷料在敷料下面產(chǎn)生一定抑制作用，但沒有如對于Surgihoney存在的抑制區(qū)。碘敷料對金黃色葡萄球菌產(chǎn)生大的抑制區(qū)域(約70mm)，大于S1(36mm)并相當(dāng)于S3(67mm)。在定量區(qū)域尺寸測試中，所有效力上的Surgihoney在針對所有測試的細(xì)菌(革蘭陽性和革蘭陰性細(xì)菌，包括多重抗生素抗性細(xì)菌)和真菌菌種的瓊脂擴(kuò)散中產(chǎn)生抑制區(qū)。每種菌種的區(qū)域尺寸隨著Surgihoney效力制劑的增加而增加。表12.Surgihoney的抑制作用不僅僅取決于與活性劑的直接接觸(如與銀敷料一樣)，而是遠(yuǎn)遠(yuǎn)擴(kuò)散至孔之外，產(chǎn)生表12中列出的廣泛區(qū)域。MIC及MBCSurgihoney顯示了顯著的抗所有測試的分離株的抗微生物活性。MIC和MBC在相同菌種的分離株中非常一致，無論該分離株是多藥耐藥性的還是高度敏感的。表13列出了通過稀釋比測試的分離株種的MIC和MBC值，表14顯示了以克/升計的MIC和MBC。效力程度隨著Surgihoney的等級升高而上升。在大多數(shù)情況下，每個分離株的MBC在單一稀釋度內(nèi)接近MIC。傷口中的Surgihoney的局部濃度估計為約500gms/L。Surgihoney1對于金黃色葡萄球菌的MIC/MBC分別為31和125gms/L，Surgihoney3的MI/MBC分別為0.12和0.24gms/L。時間殺滅曲線。Surgihoney快速殺死細(xì)菌。從每毫升(cfu/mL)約105的集落形成單位開始，對照中的cfu/mL數(shù)穩(wěn)定上升，而在Surgihoney接種物中，cfu/mL在與兩種Surgihoney效力接觸后快速下降。在大多數(shù)情況下，對于S1和S3，30分鐘的cfu數(shù)量下降了1000倍(圖34)。對于S1，在大多數(shù)情況下到2小時時和對于S3到30分鐘時檢測不到細(xì)菌生長。腸球菌屬似乎更有彈性，持續(xù)48小時。對于所有生物體，殺滅活性是完全的，因為隨后在血瓊脂上鋪板的營養(yǎng)肉湯中的終末培養(yǎng)物未能檢測S1或S3接種體中的任何生物體。討論Surgihoney是天然蜂蜜，在目前的詞義上也是有機(jī)的，因為其與供人類消費的許多商業(yè)蜂蜜不同，不具有農(nóng)業(yè)添加劑或抗微生物殘留物。其不依賴于特定的花蜜來源，與其增強(qiáng)的活性取決于特定植物花蜜來源的蜂蜜諸如麥盧卡不同。可通過制備方法在Surgihoney中控制抗微生物活性，從而允許生產(chǎn)具有一致的測量效力的不同等級。該研究已清楚地證明了Surgihoney作為抗所測試的細(xì)菌和真菌的所有種類的高效抗微生物活性劑的功效。在比較Surgihoney與各種來源于世界各地的多種蜂蜜和醫(yī)療級蜂蜜Medihoney的初步試驗和性究中，Surgihoney顯示顯著更大的抗微生物功效。通過與常用的局部防抗菌劑銀和碘比較，Surgihoney3產(chǎn)生了與碘敷料一樣大的抗菌作用，并且大于銀敷料(AquacelAg)，所述銀敷料僅有效地抑制與敷料直接接觸的細(xì)菌。MIC和MBC測試顯示，Surgihoney在低至可能在局部治療中獲得的那些濃度的1/1000至1/10的濃度(估計為500gms/L)上不僅抑制而且殺死微生物。Surgihoney的殺滅活性在接近其抑制活性的濃度上發(fā)生。因此，當(dāng)在任何定殖或表面感染的傷口或軟組織腔中局部施加時，Surgihoney在多微生物抑制和根除中具有高度活性的潛力。由于許多慢性傷口定殖有抗性細(xì)菌，并且生物膜產(chǎn)生中的細(xì)菌持久性延遲傷口愈合，所以Surgihoney的使用可有助于適當(dāng)減少抗生素的使用以及促進(jìn)傷口愈合。在臨床使用中，傷口部位的局部Surgihoney濃度將顯著高于血清或深部組織中全身性抗生素的濃度。這反映在用于Surgihoney的MIC和MBC的值中，所述MIC和MBC的值相應(yīng)地高于對于全身性抗生素一般表達(dá)的值。時間殺滅曲線顯示了殺滅活性的速度極快，對于Surgihoney3，在30分鐘內(nèi)以及對于Surgihoney1，在2小時內(nèi)。盡管腸球菌屬顯示略微更具彈性，但對于革蘭陽性和革蘭陰性生物情況均如此。真菌、念珠菌屬的某些種、曲霉菌屬的一個種也需要較高的濃度和更長時間的暴露以抑制生長并殺死生物體。Surgihoney被配制為無菌產(chǎn)品，以作為局部傷口敷料施加于皮膚損傷和腔，目的是提供潮濕的傷口愈合環(huán)境，同時還減少微生物定殖，幫助除去脫落并促進(jìn)肉芽和上皮形成。其它抗微生物制劑可用作旨在治療或預(yù)防傷口感染的局部制劑。銀浸漬的敷料似乎具有良好的抗微生物活性，但是它們與蜂蜜制劑相比也顯示出細(xì)胞毒性。碘類似物也具有良好的抗微生物活性，但它們也被報道在某些情況下是有毒的。由于抗微生物抗性和毒性的發(fā)展，對氯己定制劑在傷口敷料中的使用也越來越關(guān)注。Surgihoney的臨床應(yīng)用可能是在局部應(yīng)用中、皮膚上、傷口和腔中。傷口可能逐漸被細(xì)菌定殖，其可形成生物膜并延遲愈合。隨著對抗微生物抗性日益關(guān)注和缺乏新型抗微生物劑，具有廣泛的抗微生物活性的局部試劑可在于軟組織損傷中減少全身性抗生素的使用方面發(fā)揮作用。這些體外研究已證明了Surgihoney作為具有高抗微生物活性的傷口敷料的潛力，其效力可被控制，并且還在傷口愈合中提供其它重要功能：潮濕屏障、脫落、局部營養(yǎng)供應(yīng)、局部免疫調(diào)節(jié)并且無細(xì)胞毒性。結(jié)論這些體外結(jié)果支持Surgihoney作為傷口敷料的臨床用途，并且這可以是能夠在傷口愈合過程中遞送所有所需作用以及作為強(qiáng)效和無毒的抗微生物劑的第一種產(chǎn)品。表12具有不同效力的Surgihoney(S1、S2、S3)的抑制區(qū)尺寸表13.顯示最小抑制濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的稀釋的來自純凈Surgihoney(S1、S2、S3)的系列二倍稀釋表14.以克/升表示的Surgihoney的MIC和MBC值實施例38Surgihoney的抗病毒活性將S1或S2Surgihoney與單純皰疹病毒在細(xì)胞培養(yǎng)基(細(xì)胞培養(yǎng)基中的蜂蜜和病毒的50％混合物)中混合，然后在37℃孵育1小時。然后將混合物鋪在細(xì)胞上，記錄針對每種混合物形成的病毒噬斑的數(shù)量。也進(jìn)行了沒有蜂蜜或利用對照蜂蜜的對照。在孵育1小時后記錄的病毒(單純皰疹病毒)噬菌斑的數(shù)量顯示在圖35中。與沒有蜂蜜的混合物的160個噬菌斑相比，對于S1或S2Surgihoney混合物沒有形成噬菌斑，對于具有對照蜂蜜的混合物形成150個噬菌斑。結(jié)果表明，S1和S2Surgihoney制劑都具有強(qiáng)效的抗病毒活性。實施例39利用管線部位敷料的Surgihoney的使用為了評估Surgihoney在防止外周插入式中央導(dǎo)管(PICC管線)的感染中的有效性，將S1Surgihoney局部施加于30名患者的手臂中的管線進(jìn)入部位。將約3g-8gS1Surgihoney施加于敷料，然后將所述敷料與傷口接觸，并通過第二敷料保持就位。評估了管線部位定殖和管線相關(guān)菌血癥，并與30名未接受Surgihoney敷料的患者進(jìn)行比較。結(jié)果示于下表15中。表15.S1Surgihoney在預(yù)防和清除管線部位定殖中的作用Surgihoney(30)非Surgihoney(30)初始時定殖的24評價過程中的定殖06評價過程中清除的定殖20得出Surgihoney是與管線部位敷料一起使用的有效的抗微生物劑。實施例40使用Surgihoney預(yù)防剖腹產(chǎn)傷口的感染手術(shù)傷口的感染是剖腹產(chǎn)的特殊問題，其具有約10％的相當(dāng)高的感染率。在英國，每年有與147,726例CS相關(guān)的剖腹產(chǎn)傷口感染的國家增加(8-24.6％)和NHS醫(yī)院間的廣泛變化(13.6-31.9％)(Bragg等，2010.VariationinratesofcaesareansectionamongEnglishNHStrustsafteraccountingformaternalandclinicalrisk:crosssectionalstudy.BMJ2010；341)。剖腹產(chǎn)傷口感染是延長住院時間、資源消耗以及其它發(fā)病率和死亡率的主要原因。從剖腹產(chǎn)術(shù)恢復(fù)對于發(fā)展術(shù)后傷口感染的婦女更加困難。為了評估Surgihoney在預(yù)防剖腹產(chǎn)傷口感染中的有效性，將S1Surgihoney在手術(shù)后局部施加于傷口一次。將約25g-35gS1Surgihoney施加于敷料，然后將所述敷料與傷口接觸，并通過第二敷料保持就位。在3個月內(nèi)評估了近200名患者。臨床評價當(dāng)在手術(shù)結(jié)束時對傷口敷料時，將Surgihoney作為傷口敷料提供給在2012年10月與2013年1月期間進(jìn)行剖腹產(chǎn)術(shù)(CS)的婦女。將每小袋10g的Surgihoney用于單個患者使用。通過使用無菌技術(shù)，‘非無菌’手術(shù)助手打開Surgihoney小袋，并小心地將無菌內(nèi)容物施加于無菌敷料。然后由產(chǎn)科醫(yī)生或助產(chǎn)士將敷料施加于外科傷口。在手術(shù)后，主治助產(chǎn)士完成評價記錄。收集的數(shù)據(jù)是MRSA狀態(tài)，糖尿病史，藥物和體重指數(shù)。手術(shù)后14天，主治助產(chǎn)士也記錄任何傷口愈合問題，特別是滲出、疼痛、炎癥的存在。如果有任何炎癥，要求傷口培養(yǎng)拭子，并記錄微生物學(xué)結(jié)果。基于由感染控制團(tuán)隊收集的數(shù)據(jù)，將在評價的三個月期間使用Surgihoney敷料的手術(shù)部位感染(SSI)率與評估前9個月的感染率進(jìn)行比較。傷口感染在臨床上被定義為需要抗生素治療的發(fā)炎傷口(紅斑、腫脹、排出)。SSI的比率計算為占所有進(jìn)行的CS術(shù)的百分比。結(jié)果結(jié)果示于下表16中。在3個月期間(2012年10月-2013年1月)，有186例CS，其中102例(55％)是緊急的。沒有婦女被MRSA定殖。4例(2.23％)具有糖尿病。42例(27.3％)具有>25的體重指數(shù)。在評價期間186例中有4例被確認(rèn)為CSSSI。這代表了2.15％的感染率。單個患者報告了以傷口刺激的形式存在的與Surgihoney治療相關(guān)的不良事件，所述不利事件在3天內(nèi)消退而無需進(jìn)一步干預(yù)。在前9個月中有590例CS手術(shù)(234例是選擇的和356例是緊急的)，感染控制監(jiān)督記錄了32例CSSSI，感染率為5.42％。感染率的降低是顯著的：p＝0.042(χ2檢驗)。表16.S1Surgihoney在預(yù)防剖腹產(chǎn)傷口感染中的作用*來自在信托上可能少報了歷史感染率的微生物學(xué)樣品數(shù)據(jù)。英國全國平均水平接近10％結(jié)果顯示，與歷史數(shù)據(jù)相比，用S1Surgihoney治療的組中手術(shù)部位感染的發(fā)生率較低(減少60％)。Surgihoney敷料被良好地耐受，幾乎沒有報道的不良反應(yīng)。當(dāng)使用Surgihoney時，傷口感染率下降了60.33％。通過使用來自研究的兩個臂的SSI數(shù)據(jù)，CSSSI率(預(yù)期的)在Surgihoney之前為5.42％，之后為(觀察到的)2.15％。在這些水平(其低于以前報道的9.6％的感染率)上，UK的外推CSSSI感染率將是(預(yù)期的)每年8007例和每年(觀察到的)3176例。差為4831例，這可能因使用Surgihoney而減少。得出S1Surgihoney有效地降低手術(shù)后的剖腹產(chǎn)傷口的感染率。使用對愈合組織無毒并且還促進(jìn)愈合過程的藥劑Surgihoney預(yù)防傷口的定殖是新型的潛在重要的發(fā)現(xiàn)，所述發(fā)現(xiàn)可改變治療手術(shù)傷口的方式。Surgihoney提供臨床上有效的和具有成本效益的干預(yù)，以顯著降低經(jīng)歷剖腹產(chǎn)的婦女的SSI。討論該評價表明，Surgihoney(一種高效的抗微生物傷口敷料)可以用作初期CS傷口的傷口敷料，以防止感染。作為具有建立的傷口愈合性質(zhì)的“天然”產(chǎn)品，Surgihoney除了提供有效的抗微生物活性以防止傷口定殖和感染之外，還可能促進(jìn)傷口愈合。一些基于鹵素的化學(xué)防抗菌劑可提供相同程度的抗微生物活性，但可延遲傷口愈合(JanWA.Comparisonofconventionalpyodinedressingwithhoneydressingforthetreatmentofdiabeticfootulcers.JPMI-JournalofPostgraduateMedicalInstitute2012；26(4):402-7)。碘傷口敷料在CS中是禁忌的(JointFormularyCommittee.TheBritishNationalFormulary.London:ThePharmaceuticalPress；2013)，并且一系列毒性與其使用相關(guān)(Pietsch和Meakins:Complicationsofpovidone-iodineabsorptionintopicallytreatedburnpatients.TheLancet1976；307(7954):280-2；Scoggin等：andacidosisinassociationwithtopicaltreatmentofburns.TheLancet1977；309(8018):959；Donovan等：SeizuresinaPatientTreatedwithContinuousPovidone–IodineMediastinalIrrigation.NewEnglandJournalofMedicine1992；326(26):1784；Colpaert:Iodinetoxicityasacauseoftotalatrioventricularblockinburnpatients.Burns2009；35:S45-S6；Ramaswamykanive:Cardiovascularcollapsefollowingpovidone-iodinewash.AnaesthesiaandIntensiveCare2011；39(1):127-30；Lakhal:Povidoneiodine:Featuresofcriticalsystemicabsorption.AnnalesFrancaisesd'AnesthesieetdeReanimation2011；30(7-8):e1-8):e1-e3.)。類似地，Cochrane系統(tǒng)評價顯示沒有足夠的證據(jù)來確定含銀敷料或局部閉幕式劑是否促進(jìn)傷口愈合，防止傷口感染(Storm-Versloot等：Topicalsilverforpreventingwoundinfection.CochraneDatabaseofSystematicReviews2010)或是對感染或污染的慢性傷口的有效治療(Vermeulen等：Topicalsilverfortreatinginfectedwounds(綜述).Cochranereview2010；(10):42)。盡管先前關(guān)于蜂蜜作為傷口敷料的臨床有效性的系統(tǒng)評價已顯示有益的不明確的證據(jù)，但該新制劑似乎在CS患者中提供顯著的臨床益處(Jull等：Honeyasatopicaltreatmentforwounds:TheCochraneCollaboration,2009；Jull等：Honeyasatopicaltreatmentforwounds.Cochranedatabaseofsystematicreviews(在線)2013；2)。在傷口感染率的時間比較中，評價已顯示感染率從干預(yù)前的5.42％至使用Surgihoney的2.15％的60.33％的降低。醫(yī)療相關(guān)感染是顯著且昂貴的醫(yī)療保健并發(fā)癥，約8％的住院和SSI患者占這些感染的14％，并且發(fā)現(xiàn)近5％的已經(jīng)歷了外科手術(shù)的患者已發(fā)展了SSI。SSI與相當(dāng)大的發(fā)病率相關(guān)，超過三分之一的術(shù)后死亡與SSI至少部分相關(guān)?？刮⑸镱A(yù)防常規(guī)地用于許多外科手術(shù)中以減少手術(shù)傷口感染。雖然外科醫(yī)生通常也使用皮膚消毒來在皮膚切口之前減少皮膚細(xì)菌負(fù)荷，但是使用抗微生物敷料并不是常規(guī)的做法。其原因可能是大多數(shù)局部抗菌劑對組織愈合具有有害作用。Surgihoney是具有有效的抗微生物活性的產(chǎn)品，其是無毒的并且促進(jìn)組織愈合。將該產(chǎn)品局部應(yīng)用于‘清潔’手術(shù)傷口實際上可以替代某些類型的手術(shù)中的全身性抗生素預(yù)防。此類進(jìn)展將有助于減少抗生素體積使用和對定殖細(xì)菌的選擇壓力。在本評價中選擇剖腹產(chǎn)傷口，因為患者大體上健康，沒有或很少有并發(fā)癥，并且CS感染率據(jù)報告不斷增加。這種增加的可能原因是年齡較大的母親，具有合并癥特別是糖尿病的母親，以及身體質(zhì)量指數(shù)較高的母親的普遍增加。盡管以前沒有常規(guī)地在初期傷口敷料中使用抗微生物劑，但該評價顯示了Surgihoney在預(yù)防CS傷口感染中的有趣和有效的作用。實施例41使用S1Surgihoney治療感染的腿部潰瘍患者為患有糖尿病和慢性腎臟疾病的52歲男性。潰瘍是廣泛的，疼痛的，有臭味，并生成大量漿液性滲出物。將S1Surgihoney與抗生素一起用作局部敷料。到第7天，傷口臭味減少，疼痛消除，并且大量的嚴(yán)重滲出物和假單胞菌屬感染被消除?；颊咴诘?天出院。結(jié)果的照片示于圖36中，其中：(a)顯示治療的第1天；(b)顯示治療的第4天；和(c)顯示治療的第7天。實施例42使用S1Surgihoney治療壓瘡患者是50歲的女性脊柱裂患者，她是殘疾的和不能動的?；颊咴谙卤巢恐流竟怯谐掷m(xù)了1年以上的褥瘡。該腔被化膿性鏈球菌(Streptococcuspyogenes)感染。S1Surgihoney用作局部敷料。從第2天報告了傷口改善。到第30天，軟組織腔幾乎完全愈合。在這一點上沒有檢測到鏈球菌屬。結(jié)果的照片示于圖37中，其中：(a)顯示治療的第1天；和(b)顯示治療的第30天。實施例43Surgihoney的抗微生物活性測試了通過西方蜜蜂(蜜蜂)制備的Surgihoney(SH)和兩種原型修飾的蜂蜜抗金黃色葡萄球菌(NCIMB9518)的抗微生物活性。我們還檢查了許多經(jīng)修飾的類型的Surgihoney的改變樣品的過氧化氫的產(chǎn)生水平的能力。方法：使用針對金黃色葡萄球菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株的生物測定方法將Surgihoney(SH)與兩種經(jīng)修飾的蜂蜜原型1(PT1)和原型2(PT2)進(jìn)行比較。進(jìn)一步的工作研究了從這些制劑生成過氧化氫的速率。結(jié)果：Surgihoney抗微生物活性經(jīng)顯示主要歸因于過氧化氫產(chǎn)生。通過修飾Surgihoney，顯示兩種更強(qiáng)效的蜂蜜原型生成大至2至3倍的抗菌活性和高達(dá)十倍的過氧化物活性。結(jié)論：Surgihoney是臨床可用的傷口抗菌敷料，其顯示良好的抗菌活性。已顯示兩種另外的蜂蜜原型具有抗微生物活性，所述抗微生物活性可能因所證實的過氧化物活性的增加而增強(qiáng)。方法1.通過生物測定法測定蜂蜜活性使用金黃色葡萄球菌(NCIMB9518)測量Surgihoney(SH)和兩種經(jīng)修飾的蜂蜜原型1(PT1)和原型2(PT2)的抗菌活性，并將其表示為當(dāng)量％酚。計算來自測試的三個樣品重復(fù)(在3天重復(fù)的)的平均值的值。測定方法。所使用的瓊脂孔擴(kuò)散法改造自MicrobiologyStandardMethodsManualfortheNewZealandDairyIndustry(1982)[蜂產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)委員會：提出的用于測量蜂蜜的非過氧化物活性的標(biāo)準(zhǔn)。于新西蘭：蜂產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)委員會；1982.]中描述的用于抑制性物質(zhì)的穿孔板測定。接種物制備。使用無菌營養(yǎng)肉湯(作為空白)、稀釋劑和具有1cm路徑的比色杯，將過夜培養(yǎng)物調(diào)整至在540nm測量的0.5的吸光度。測定板制備。將100μl體積的調(diào)節(jié)至0.5的吸光度的培養(yǎng)物用于接種150ml營養(yǎng)瓊脂以制備測定板。將瓊脂渦旋以充分混合并倒入已放置在水平表面上的大皮氏培養(yǎng)皿中。一旦瓊脂凝固，將板倒置過夜，然后第二天使用。為了測定，將這些接種的板從4℃取出，并在室溫下靜置15分鐘，然后將7.0mm直徑的孔切入瓊脂表面。將250μl測試材料(樣品或標(biāo)準(zhǔn)物)置于每個孔中。過氧化氫酶溶液。每天新鮮制備200mg/ml的來自牛肝臟的過氧化氫酶(SigmaC9322,2900個單位/mg)在蒸餾水中的溶液。樣品制備。通過將4g樣品添加至4ml普通蒸餾水中并在37℃下放置30分鐘以幫助混合來制備初級樣品溶液。為了制備二次溶液，將2ml初級樣品溶液添加至2ml蒸餾水中并混合用于總活性測試，并將2ml初級樣品溶液添加至2ml過氧化氫酶溶液中，并混合用于非過氧化物活性。酚標(biāo)準(zhǔn)物的制備。通過將酚溶解在水中制備標(biāo)準(zhǔn)物(w/v)10％、30％、50％的酚。在使用前將酚標(biāo)準(zhǔn)物在黑暗中達(dá)到室溫，并在添加至測試孔之前充分混合。將每種標(biāo)準(zhǔn)物以一式三份放置在3個孔中進(jìn)行測試。將標(biāo)準(zhǔn)物保持在4℃，有效期為一個月。樣品和標(biāo)準(zhǔn)物應(yīng)用。通過向3個孔中的每一個孔添加250μl，以一式三份地測試所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)物。平板孵育。在施加樣品后，將板在37℃下孵育約18小時。記錄抑制區(qū)的直徑，包括孔的直徑(7.0mm)。樣品抗菌活性的計算。計算每個酚標(biāo)準(zhǔn)物周圍的透明區(qū)的平均直徑并取平方。將％酚相對于透明區(qū)的平均直徑的平方繪制標(biāo)準(zhǔn)圖。使用線性回歸獲得最佳擬合直線，并且將該線的方程用于從透明區(qū)的直徑的平均測量值的平方計算每個稀釋的蜂蜜樣品的活性。為了允許進(jìn)行稀釋(假設(shè)Surgihoney的密度為1.35g/ml)，將該數(shù)值乘以為4.69的系數(shù)，然后將樣品的活性表示為當(dāng)量酚濃度(％w/v)?？偦钚裕核谢钚?，包括歸因于過氧化氫(H2O2)的活性。非過氧化物活性：通過用過氧化氫酶處理樣品除去H2O2。2.通過H2O2方法測定蜂蜜活性使用1.10011及1.10081測量活性。過氧化物測試試劑盒。濃度表示為當(dāng)量mg/LH2O2。樣品用純化水以1:10稀釋。在5分鐘孵育后，測量所有樣品在12小時內(nèi)每小時的H2O2產(chǎn)生，隨后在24和48小時時間點進(jìn)行該測量。測定方法。過氧化物酶將氧從過氧化物轉(zhuǎn)移至有機(jī)氧化還原指示劑，然后將其轉(zhuǎn)化為藍(lán)色氧化產(chǎn)物。通過目測比較測試條的反應(yīng)區(qū)與顏色標(biāo)度的區(qū)域來半定量地測量過氧化物濃度。將測試條的反應(yīng)區(qū)浸入Surgihoney樣品，持續(xù)1秒，允許過量的液體從條上徑流至吸收性紙巾上，并在15秒(目錄號110011)、5秒(目錄號110081)后，之后確定與顏色區(qū)域標(biāo)度更精確一致的在反應(yīng)區(qū)中形成的顏色。結(jié)果1.活性評級通過修飾蜂蜜樣品產(chǎn)生的抗微生物活性導(dǎo)致與單獨的Surgihoney相比，對于PT1和PT2的酚活性的分別兩倍和幾乎三倍的增加。Surgihoney(SH)和兩個經(jīng)修飾的原型PT1和PT2的3個樣品的結(jié)果顯示在表17中。2.通過H2O2方法測定蜂蜜活性觀察到原型修飾生成高達(dá)7倍和10倍的Surgihoney的過氧化氫活性。3個樣品的結(jié)果示于圖38中。通過取三種蜂蜜原型中的每一種的過氧化氫輸出的最高水平，并將其相對于總酚活性作圖，觀察到線性關(guān)系(圖39)。討論該工作的結(jié)果表明，Surgihoney(SH)以及兩個經(jīng)修飾的原型PT1和PT2的主要抗微生物活性歸因于過氧化氫。這對于來自各種花卉來源的某些其它蜜蜂是類似的發(fā)現(xiàn)。然而，與先前的工作不同，來自樣品的過氧化氫的可用性能夠被增強(qiáng)，并且在12小時時分別是單獨的Surgihoney(SH)的值的7倍和10倍。在3種蜂蜜原型的抗微生物活性與過氧化氫的最大輸出之間存在顯著的線性關(guān)系。該過氧化物活性提供了有效的抗微生物活性，其理想地適用于施用于急性或慢性傷口以治療或預(yù)防傷口感染的傷口敷料。盡管少量的過氧化氫酶存在于傷口中，并且男性的過氧化氫酶的血清水平已報道為50kU/l，但已顯示在創(chuàng)傷后的第一周期間，在愈合傷口中過氧化氫酶活性實際上降低，并且過氧化氫酶的活性水平在創(chuàng)傷后兩周恢復(fù)至原始水平。因此，過氧化氫酶的此類濃度極不可能影響利用外源施用的Surgihoney或兩種經(jīng)修飾的原型PT1和PT2觀察到的抗微生物活性?？刮⑸飩诜罅系睦硐胩卣魇牵河行?、無毒性、使用的容易性、患者和臨床醫(yī)生的可接受性和性價比。過氧化氫是有效的抗微生物劑，并且因為其抗?fàn)I養(yǎng)細(xì)菌、酵母和孢子的強(qiáng)有力的活性面已用作殺生物劑。其通過細(xì)胞組分的化學(xué)氧化產(chǎn)生其抗微生物作用。過氧化氫的人毒性是濃度依賴性的，一項研究聲稱，對于抗微生物和人毒性的差異濃度可能重疊。相比之下，某些蜂蜜制劑經(jīng)顯示是有效的抗微生物劑，通過隨時間連續(xù)地向傷口提供低濃度的過氧化氫，而不是在敷料時大量地提供過氧化氫，從而不存此類毒性。實際上，有令人信服的證據(jù)表明，當(dāng)將生理水平的過氧化氫施用于哺乳動物細(xì)胞時，這些細(xì)胞中存在生物反應(yīng)的刺激和特定生化途徑的活化。很明確地，Surgihoney和兩個經(jīng)修飾的原型PT1和PT2是抗微生物敷料，其提供有效的過氧化氫釋放超過至少24小時。結(jié)論已顯示Surgihoney和兩個經(jīng)修飾的原型PT1和PT2對于金黃色葡萄球菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株具有強(qiáng)效的抗微生物活性。已顯示這些抗微生物活性由過氧化氫產(chǎn)生?；钚允强煽s放的，并且可用過氧化氫活性來描述。這些經(jīng)修飾的蜂蜜提供有效的，無毒的且易于施用的敷料。表17顯示Surgihoney(SH)和兩種經(jīng)修飾的原型PT1和PT2抗金黃色葡萄球菌(NCIMB9518)的過氧化物和非過氧化物抗菌活性實施例44本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。醇凝膠水適量用途：用于治療痤瘡。不要在破損的皮膚上使用。“活性蜂蜜(5+)”用于表示應(yīng)當(dāng)使用比在不具有(5+)名稱的其它制劑中更多的葡萄糖氧化酶。實施例45該實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。水性噴霧25ml塑料瓶，其包含：活性蜂蜜10gTritonCF0.1g麥芽糖糊精或玉米淀粉1g用途：一般傷口，和應(yīng)用于燒傷TritonCF在該組合物中充當(dāng)表面活性劑。麥芽糖糊精和玉米淀粉用作成膜劑。實施例46本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。非水性噴霧活性蜂蜜70％丙二醇30％用法：一般傷口實施例47該實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。敷料-塑料袋海藻酸鈣敷料的范圍10cm×10cm，20cm×20cm活性蜂蜜10％w/w用途：傷口清創(chuàng)，用于相對較大的滲出性傷口。該組合物提供相對潮濕的環(huán)境。實施例48本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。蜂蜜和鎮(zhèn)痛藥活性蜂蜜99％布洛芬1％用途：用于傷口處理的所有階段，以提供傷口愈合中的疼痛治療。實施例49本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。粉末活性蜂蜜麥芽糖糊精布洛芬微晶纖維素(CMC)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)優(yōu)選地，將布洛芬以1-2％w/w包括在組合物中。其它組分可以變化，例如以實現(xiàn)不同水平的吸濕。用途：包裝在箔中，以防止吸水。PVP-提供粒化。CMC-提供水分干燥劑。實施例50本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。傷口清創(chuàng)重建水溶液，包含活性蜂蜜(諸如，5-50％活性蜂蜜)，任選還包括止痛劑，優(yōu)選布洛芬，合適地為1-2％w/w。用途：例如在分配器(諸如泵分配器)中，作為清創(chuàng)后的傷口漂洗，以提供早期開始傷口愈合和疼痛緩解。實施例51本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。泡沫敷料用以吸收滲出物的聚氨酯背襯浸泡在活性蜂蜜中的藻酸鈣的島狀物用以終止粘附傷口的硅膠用途：泡沫基敷料，以幫助擦拭傷口滲出物。實施例52本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。真菌指甲治療泡沫井中的石膏與活性蜂蜜(5+)羥基丙基纖維素甘油異丙醇檸檬酸一水合物用途：用于治療真菌性指甲感染實施例53本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。喉噴霧蜂蜜和甘油，優(yōu)選包含5-20％的蜂蜜用途：喉嚨痛。制劑可在用于噴霧的雙重分配器中，或在使用前用水重構(gòu)，然后噴霧。實施例54本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。軟膏劑(Pommade)活性蜂蜜25％白凡士林輕液體石蠟滑石高嶺土氧化鋅用途：用于治療感染性濕疹實施例55本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。唇膏用途：用于破裂的嘴唇實施例56本實施例列出了本發(fā)明的優(yōu)選的基于蜂蜜的組合物(稱為“活性蜂蜜”)，其包含蜂蜜和添加的葡萄糖氧化酶。面霜用途：用于治療痤瘡。已知蜂蜜具有抗痤瘡丙酸桿菌的活性。當(dāng)前第1頁1 2 3