一種千年健的組織培養(yǎng)基及其增殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種千年健的組織培養(yǎng)基以及其增殖方法，包括不同培養(yǎng)時(shí)期的四種培養(yǎng)基：（1）誘導(dǎo)培養(yǎng)基，（2）成苗培養(yǎng)基，（3）葉片培養(yǎng)基，（4）葉柄培養(yǎng)基，這四種培養(yǎng)基均以MS為基本培養(yǎng)基，附加蔗糖、瓊脂等物質(zhì)，pH5.8。經(jīng)過(guò)上述四種培養(yǎng)基的接種即可實(shí)現(xiàn)試管苗快速大量的增殖效果，為快速而優(yōu)質(zhì)地培養(yǎng)出千年健苗打好堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。應(yīng)用本培養(yǎng)基組培，再生植株能保持母本優(yōu)良性狀，提高幼苗繁殖速度，擴(kuò)大繁殖數(shù)量，并能有效利用種子、縮短育苗周期，滿足社會(huì)需求。
【專利說(shuō)明】一種千年健的組織培養(yǎng)基及其增殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及以千年健塊莖為外植體，進(jìn)行組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基及增殖方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 千年健喜溫暖、濕潤(rùn)、郁閉，怕寒冷、干旱和強(qiáng)光直射，是比較典型的喜陰植物。千 年健生長(zhǎng)緩慢，在生長(zhǎng)期間隨地上莖的增高，根莖也增長(zhǎng)和增粗，并不斷從根莖節(jié)上抽出新 芽，長(zhǎng)出新的分株，形成植株叢。
[0003] 正是由于千年健需要的自然生長(zhǎng)環(huán)境較為苛刻，而且生長(zhǎng)速度又比較緩慢，明顯 限制了千年健的開(kāi)發(fā)利用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種千年健的組培培養(yǎng)基及其增殖方法。
[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)： 一種千年健的組織培養(yǎng)基，根據(jù)其增值需要包括了四種培養(yǎng)基，各種培養(yǎng)基的原料及 其附加量分別是：（一)誘導(dǎo)培養(yǎng)基：以MS為基本培養(yǎng)基，附加蔗糖20?30g/L、瓊脂6. 5? 8. 5g/L、6-BA0. 5 ?2. 0mg/L、2, 4-D0. 05 ?0· lmg/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的 pH 值至 5. 8 ;(二）成 苗培養(yǎng)基：以MS為基本培養(yǎng)基，稀釋一倍，然后附加蔗糖20?30g/L、瓊脂6. 5?8. 5g/L、 6-BA0. 5 ?2. 0mg/L、2, 4-D0. 05 ?0· lmg/L、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0· 2% -0· 3% 的符合 HG/T3491 規(guī)定 的活性炭粉，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至5. 8 ;(三）葉片培養(yǎng)基：以MS為基本培養(yǎng)基，附加蔗糖 20 ?30g/L、瓊脂 6.5 ?8.5g/L、6-BA 0.3 ?1.5mg/L、NAA 0.1 ?0.2mg/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基 的pH值至5. 8 ;(四）葉柄培養(yǎng)基：以MS為基本培養(yǎng)基，附加蔗糖20?30g/L，瓊脂6. 5? 8. 0g/L、NAA 0. 2?1.0mg/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至5. 8。其中，2,4一D、NAA等不溶于水的 藥品先用少量95%乙醇溶解，如溶解不完全應(yīng)加熱促進(jìn)溶解然后加水定容，6-BA先溶于少 量lmol/L的鹽酸中，再加水定容。所用水應(yīng)符合GB/T6682標(biāo)準(zhǔn)。關(guān)于培養(yǎng)基的配制方法 均為實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)操作。
[0006] 結(jié)合以上組織培養(yǎng)基的使用，配合以下步驟，即可實(shí)現(xiàn)快速增殖的效果： φ塊莖期：將外植體在無(wú)菌條件下接種到MS培養(yǎng)基后，置于25°C ±2°C，光照強(qiáng)度 150(T2000Lx、光照時(shí)間為10h/d的環(huán)境中； (?牙尖期：塊莖頂芽長(zhǎng)到lcm時(shí)，切下芽尖接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，芽尖可以反復(fù)切 取直至不能長(zhǎng)出新芽尖或已經(jīng)污染，再將接種好的培養(yǎng)瓶放置在條件適宜的培養(yǎng)架上培養(yǎng) 45- 55d，形成叢生芽和愈傷組織； (D叢生芽+愈傷組織期：叢生芽和愈傷組織轉(zhuǎn)接到成苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)25- 30天，形 成試管苗； (?試管苗增殖期：將試管苗濃綠厚大的葉片切成〇. 5cmX0. 5cm的切片，葉面朝上接 種于葉片培養(yǎng)基上培養(yǎng)25- 30d，回到步驟(g),將試管苗生長(zhǎng)健壯的葉柄切成lcm長(zhǎng)小段 接種于葉柄培養(yǎng)基上培養(yǎng)45- 55山回到步驟@ ,再將剪掉葉片和葉柄的無(wú)菌小塊莖轉(zhuǎn) 接到成苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)27- 33d;回到步驟@ ; (g)煉苗移栽期：經(jīng)過(guò)數(shù)次_)、@步驟的循環(huán)增殖，將獲得的大量試管苗打開(kāi)瓶蓋 在自然光室溫下煉苗； (D馴化移栽期：將經(jīng)過(guò)煉苗過(guò)程的組培苗用自來(lái)水洗凈后，用遮陽(yáng)率為75%的遮陽(yáng)網(wǎng) 遮陽(yáng)，在溫度25 °C左右，相對(duì)濕度85%條件下移栽至土壤種植，用與MS濃度相當(dāng)?shù)拇罅吭?配制營(yíng)養(yǎng)液稀釋10倍進(jìn)行噴施。
[0007] 本發(fā)明的有益效果是： 克服了千年健自然生長(zhǎng)速度緩慢，限制性因子較多的劣勢(shì)?？梢钥焖俅罅康脑鲋?，人工 培育，給予適合的生長(zhǎng)環(huán)境，快速生長(zhǎng)，克服自然限制，增加千年健的產(chǎn)量。
[0008]

【具體實(shí)施方式】： 本發(fā)明下面結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步詳細(xì)闡述：一種千年健的組織培養(yǎng)基，根據(jù)其增值需 要包括了四種培養(yǎng)基，各種培養(yǎng)基的原料及其附加量分別是：（一）誘導(dǎo)培養(yǎng)基：以MS為基 本培養(yǎng)基，附加蔗糖25g/L、瓊脂7. 5g/L、6-BAl. 2mg/L、2, 4-DO. 07mg/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值 至5. 8 ;(二）成苗培養(yǎng)基：以MS為基本培養(yǎng)基，稀釋一倍，然后附加蔗糖25g/L、瓊脂7g/L、 6-BA1. 3mg/L、2, 4-D 0· 06mg/L、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0· 2% - 0· 3%的符合HG/T3491規(guī)定的活性炭粉， 調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至5. 8 ;(三）葉片培養(yǎng)基：以MS為基本培養(yǎng)基，附加蔗糖25g/L、瓊脂 7g/L、6-BA 0· 8mg/L、NAA 0· 15mg/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至5. 8 ;(四）葉柄培養(yǎng)基：以MS為 基本培養(yǎng)基，附加蔗糖27g/L，瓊脂7g/L、NAA 0. 6mg/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至5. 8。其中， 2, 4一D、NAA等不溶于水的藥品先用少量95%乙醇溶解，如溶解不完全應(yīng)加熱促進(jìn)溶解然后 加水定容，6-BA先溶于少量lmol/L的鹽酸中，再加水定容。所用水應(yīng)符合GB/T6682標(biāo)準(zhǔn) pH的調(diào)節(jié)使用lmol/L的NaOH或lmol/L的HC1，關(guān)于培養(yǎng)基的配制方法均為實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)操 作。
[0009] 結(jié)合以上組織培養(yǎng)基的使用，配合以下步驟，即可實(shí)現(xiàn)快速增殖的效果： (X)塊莖期：將外植體在無(wú)菌條件下接種到MS培養(yǎng)基后，置于25°C ±2°C，光照強(qiáng)度 150(T2000Lx、光照時(shí)間為10h/d的環(huán)境中； (?牙尖期：塊莖頂芽長(zhǎng)到lcm時(shí)，切下芽尖接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，芽尖可以反復(fù)切 取直至不能長(zhǎng)出新芽尖或已經(jīng)污染，再將接種好的培養(yǎng)瓶放置在條件適宜的培養(yǎng)架上培養(yǎng) 45- 55d，形成叢生芽和愈傷組織； @叢生芽+愈傷組織期：叢生芽和愈傷組織轉(zhuǎn)接到成苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)25- 30天，形 成試管苗； 試管苗增殖期：將試管苗濃綠厚大的葉片切成〇. 5cmX0. 5cm的切片，葉面朝上接 種于葉片培養(yǎng)基上培養(yǎng)25- 30d，回到步驟@ ,將試管苗生長(zhǎng)健壯的葉柄切成lcm長(zhǎng)小段 接種于葉柄培養(yǎng)基上培養(yǎng)45- 55山回到步驟@ ,再將剪掉葉片和葉柄的無(wú)菌小塊莖轉(zhuǎn) 接到成苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)27- 33d;回到步驟ι|); (1)煉苗移栽期：經(jīng)過(guò)數(shù)次@、(|)步驟的循環(huán)增殖，將獲得的大量試管苗打開(kāi)瓶蓋 在自然光室溫下煉苗； @馴化移栽期：將經(jīng)過(guò)煉苗過(guò)程的組培苗用自來(lái)水洗凈后，用遮陽(yáng)率為75%的遮陽(yáng)網(wǎng) 遮陽(yáng)，在溫度25 °C左右，相對(duì)濕度85%條件下移栽至土壤種植，用與MS濃度相當(dāng)?shù)拇罅吭?配制營(yíng)養(yǎng)液稀釋10倍進(jìn)行噴施。
[0010] 有關(guān)于組織培養(yǎng)過(guò)程中的一些操作和注意事項(xiàng)均屬于普通實(shí)驗(yàn)操作，故不做贅 敘。
[0011] 最后說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過(guò)參 照本發(fā)明的實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可在形 式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的精神 和范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種千年健的組織培養(yǎng)基，其特征在于根據(jù)其增值需要包括了四種培養(yǎng)基，各種培 養(yǎng)基的原料及其附加量分別是： 誘導(dǎo)培養(yǎng)基：以MS為基本培養(yǎng)基，附加蔗糖20?30g/L、瓊脂6. 5?8. 5g/L、 6-BA0. 5 ?2. 0mg/L、2, 4-D0. 05 ?0· lmg/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的 pH 值至 5. 8 ; 成苗培養(yǎng)基：以MS為基本培養(yǎng)基，稀釋一倍，然后附加蔗糖20?30g/L、瓊脂6. 5? 8. 5g/L、6-BA0. 5 ?2. 0mg/L、2, 4-D0. 05 ?0· lmg/L、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0· 2% - 0· 3% 的符合 HG/ T3491規(guī)定的活性炭粉，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至5. 8 ; 葉片培養(yǎng)基：以MS為基本培養(yǎng)基，附加蔗糖20?30g/L、瓊脂6. 5?8. 5g/L、6-BA 0· 3 ?1. 5mg/L、NAA 0· 1 ?0· 2mg/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的 pH 值至 5. 8 ; 葉柄培養(yǎng)基：以MS為基本培養(yǎng)基，附加蔗糖20?30g/L，瓊脂6. 5?8. Og/L、NAA 0· 2?L Omg/L，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至5. 8。
2. -種如上所述的千年健的組織培養(yǎng)基進(jìn)行的增殖方法，其特征是經(jīng)過(guò)以下步驟： ·:!)塊莖期：將外植體在無(wú)菌條件下接種到MS培養(yǎng)基后，置于25°C ±2°C，光照強(qiáng)度 150(T2000Lx、光照時(shí)間為10h/d的環(huán)境中； 牙尖期：塊莖頂芽長(zhǎng)到lcm時(shí)，切下芽尖接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，芽尖可以反復(fù)切 取直至不能長(zhǎng)出新芽尖或已經(jīng)污染，再將接種好的培養(yǎng)瓶放置在條件適宜的培養(yǎng)架上培養(yǎng) 45- 55d，形成叢生芽和愈傷組織； S:叢生芽+愈傷組織期：叢生芽和愈傷組織轉(zhuǎn)接到成苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)25-30天，形成 試管苗； 試管苗增殖期：將試管苗濃綠厚大的葉片切成〇. 5cmX0. 5cm的切片，葉面朝上接種 于葉片培養(yǎng)基上培養(yǎng)25-30d，回到步驟遂;，將試管苗生長(zhǎng)健壯的葉柄切成lcm長(zhǎng)小段接種 于葉柄培養(yǎng)基上培養(yǎng)45- 55山回到步驟if:,再將剪掉葉片和葉柄的無(wú)菌小塊莖轉(zhuǎn)接到成 苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)27- 33d ;回到步驟; :f+:煉苗移栽期：經(jīng)過(guò)數(shù)次:：！;、;$:步驟的循環(huán)增殖，將獲得的大量試管苗打開(kāi)瓶蓋在自 然光室溫下煉苗； :?:馴化移栽期：將經(jīng)過(guò)煉苗過(guò)程的組培苗用自來(lái)水洗凈后，用遮陽(yáng)率為75%的遮陽(yáng)網(wǎng) 遮陽(yáng)，在溫度25 °C左右，相對(duì)濕度85%條件下移栽至土壤種植，用與MS濃度相當(dāng)?shù)拇罅吭?配制營(yíng)養(yǎng)液稀釋10倍進(jìn)行噴施。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104186322SQ201410430193
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年8月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月28日
【發(fā)明者】徐偉明 申請(qǐng)人:徐偉明