專利名稱：添加火麻仁培養(yǎng)蟲草菌絲體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種添加火麻仁培養(yǎng)蟲草菌絲體的方法。
背景技術(shù)：
蟲草是由蟲草真菌寄生在昆蟲體內(nèi)之后形成的復(fù)合體。目前，已知多種蟲草有重要的藥用價值?！侗静菥V目》中記載了冬蟲夏草、蟬花和蛹蟲草的藥用功效。隨著國內(nèi)外學(xué)者對蟲草研究的不斷深入，表明蟲草屬真菌的代謝產(chǎn)物主要含有核苷類、氨基酸、多肽、多糖、 糖醇、留醇、脂肪酸、酯、烷烴、多胺類、維生素及微量元素等成分。藥理實驗表明，蟲草屬真菌的代謝產(chǎn)物具有免疫調(diào)節(jié)、治療腎衰、抗腫瘤、抗炎癥、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、抗心律失常、降血糖、 鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、延長睡眠時間、延緩衰老、耐缺氧等方面的作用?；鹇槿视置舐槿?、麻子仁,為?？芃oraceae植物大麻Cannabis sativa L.成熟果實。全國各地均有栽培。秋季果實成熟時采收，除去雜質(zhì)，曬干即可。富含飽和脂肪酸、 油酸、亞油酸、亞麻酸、蛋白質(zhì)、纖維、維生素BI、維生素B2、留醇、膽堿和葡萄糖醛酸等?！渡颀埍静萁?jīng)》中云其“味甘、平，主補中益氣，肥健不老”。有潤燥滑腸通便的功效，常用于治療老年人虛性便秘，并有降脂及抗動脈粥樣硬化作用。利用微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化中草藥的活性成分，可使培養(yǎng)物兼有微生物和中藥的功效成分，提高治療和保健功效，該領(lǐng)域具有廣闊的開發(fā)前景。林金鶯等用米曲霉對火麻仁柏進(jìn)行液體發(fā)酵，分解火麻仁蛋白質(zhì)為多肽(林金鶯，曾慶孝，董曄，中國調(diào)味品，2009，3 (34) 39-42)，為火麻仁柏的綜合利用開辟了新的思路。本發(fā)明利用火麻仁粗粉中豐富的營養(yǎng)成分為培養(yǎng)基，培養(yǎng)蟲草菌絲體，生產(chǎn)具有獨特功效成分的蟲草培養(yǎng)物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種添加火麻仁培養(yǎng)蟲草菌絲體的方法。該方法的操作步驟如下(I)生產(chǎn)菌株為中國被毛抱 Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu & Zeng 菌株 CSIN-32,保藏號 YBCCS NO. 411 ;蛹草擬青霉 Paecilomyces militaris Liang 菌株 PMIL-02,保藏號 YBCPM NO. 452 ;蝙幅蛾擬青霉 Paecilomyces hepiali Chen & Dai 菌株 PHEP-01，保藏號YBCPHN0. 551 ;于2008年6月16日保存于云南云百草實驗室；(2)菌種制備將步驟⑴所述菌株CSIN-32，PMIL-02和PHEP-01分別接種到PDA 斜面培養(yǎng)基，于10-30°C恒溫培養(yǎng)5-30d，用無菌水洗下孢子，稀釋調(diào)整使孢子終濃度達(dá)到 5X107個/毫升；(3)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備30-50%火麻仁粗粉，35%麩皮，5-10%谷糠，5-15%玉米粉，水料比為I. 2 1，按20%的裝量裝入IOOOml三角瓶中，121°C滅菌60min ;(4)發(fā)酵培養(yǎng)將步驟(2)中制備好的菌種分別按2ml/瓶的量接入步驟(3)三角瓶培養(yǎng)基中，于10-30°C，靜置培養(yǎng)，直到菌絲長滿即成發(fā)酵物；(5)發(fā)酵物后處理將步驟(4)中培養(yǎng)好的發(fā)酵物取出，50°C恒溫干燥至恒重，然后粉碎至80目粉末，采用HPLC法測定蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素的含量。本發(fā)明的關(guān)鍵點在于發(fā)酵培養(yǎng)基中主要原料為火麻仁粗粉，結(jié)合蟲草菌株的生長特性，調(diào)整培養(yǎng)基各原料的比例等培養(yǎng)條件。以上關(guān)鍵點如能把握好，可以顯著高產(chǎn)蟲草發(fā)酵培養(yǎng)物的功效成分。本發(fā)明操作簡便，效果良好，可應(yīng)用到大規(guī)模蟲草發(fā)酵生產(chǎn)蟲草菌絲體的實際生產(chǎn)過程中。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不是對本發(fā)明的限制。實施例I :添加火麻仁粗粉培養(yǎng)中國被毛孢菌產(chǎn)功效成分的效果(I)菌種制備將中國被毛孢菌株CSIN-32接種到PDA斜面培養(yǎng)基，于15°C恒溫培養(yǎng)25d，用無菌水洗下孢子，稀釋調(diào)整使孢子終濃度達(dá)到5 X IO7個/毫升；(2)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備40%火麻仁粗粉，35%麩皮，10%谷糠，15%玉米粉，水料比為I. 2 1，按20%的裝量裝入IOOOml三角瓶中，121°C滅菌60min ;(3)發(fā)酵培養(yǎng)將制備好的菌種分別按2ml/瓶的量接入三角瓶培養(yǎng)基中，于15°C， 靜置培養(yǎng)60天，直到菌絲長滿即成發(fā)酵物；(4)發(fā)酵物后處理將培養(yǎng)好的發(fā)酵物取出，50°C恒溫干燥至恒重，然后粉碎至80 目粉末，采用HPLC法測定蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素的含量，其結(jié)果見表I。表I添加火麻仁粗粉培養(yǎng)中國被毛孢菌產(chǎn)功效成分的效果
1# 蟲草爹—(ug/；g) ...(^/g> ~蟲草甘露醇含量(ug/g) 中國被毛孢_(dá)6 X IO4_80__700__5 X IO4_實施例2 :添加火麻仁粗粉培養(yǎng)蛹草擬青霉菌產(chǎn)功效成分的效果(I)菌種制備將蛹草擬青霉菌株P(guān)MIL-02接種到PDA斜面培養(yǎng)基，于25°C恒溫培養(yǎng)10d，用無菌水洗下孢子，稀釋調(diào)整使孢子終濃度達(dá)到5 X IO7個/毫升；(2)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備50%火麻仁粗粉，35%麩皮，5%谷糠，10%玉米粉，水料比為I. 2 1，按20%的裝量裝入IOOOml三角瓶中，121°C滅菌60min ;(3)發(fā)酵培養(yǎng)將制備好的菌種分別按2ml/瓶的量接入三角瓶培養(yǎng)基中，于25°C， 靜置培養(yǎng)30天，直到菌絲長滿即成發(fā)酵物；(4)發(fā)酵物后處理將培養(yǎng)好的發(fā)酵物取出，50°C恒溫干燥至恒重，然后粉碎至80 目粉末，采用HPLC法測定蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素的含量，其結(jié)果見表2。表2添加火麻仁粗粉培養(yǎng)蛹草擬青霉菌產(chǎn)功效成分的效果
蟲草多糖含量(ug/g)~~ 量(ug/g) (ug/g)蟲草甘露醇含(ug/g)" 蛹草擬青霉 ’3 X IO4_5 X IO3400_3 X IO4_實施例3 :添加火麻仁粗粉培養(yǎng)蝙蝠蛾擬青霉菌產(chǎn)功效成分的效果(I)菌種制備將蝙蝠蛾擬青霉菌株P(guān)HEP-Ol接種到PDA斜面培養(yǎng)基，于24°C恒溫培養(yǎng)7d，用無菌水洗下孢子，稀釋調(diào)整使孢子終濃度達(dá)到5 X IO7個/毫升；(2)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備45%火麻仁粗粉，35%麩皮，5%谷糠，15%玉米粉，水料比為I. 2 1，按20%的裝量裝入IOOOml三角瓶中，121°C滅菌60min ;(3)發(fā)酵培養(yǎng)將制備好的菌種分別按2ml/瓶的量接入三角瓶培養(yǎng)基中，于25°C， 靜置培養(yǎng)30天，直到菌絲長滿即成發(fā)酵物；(4)發(fā)酵物后處理將培養(yǎng)好的發(fā)酵物取出，50°C恒溫干燥至恒重，然后粉碎至80 目粉末，采用HPLC法測定蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素的含量，其結(jié)果見表3。表3添加火麻仁粗粉培養(yǎng)蝙蝠蛾擬青霉菌產(chǎn)功效成分的效果
權(quán)利要求
1.一種添加火麻仁培養(yǎng)蟲草菌絲體的方法，其特征在于該方法的操作步驟包括(1)菌種制備將菌株CSIN-32，PMIL-02和PHEP-Ol分別接種到PDA斜面培養(yǎng)基，于 10-30°C恒溫培養(yǎng)5-30d，用無菌水洗下孢子，稀釋調(diào)整使孢子終濃度達(dá)到5 X IO7個/毫升；(2)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備30-50%火麻仁粗粉，35%麩皮，5-10%谷糠，5-15%玉米粉， 水料比為I. 2 1，按20%的裝量裝入IOOOml三角瓶中，121°C滅菌60min;(3)發(fā)酵培養(yǎng)將制備好的蟲草菌種分別按2ml/瓶的量接入三角瓶培養(yǎng)基中，于 10-30°C，靜置培養(yǎng)，直到菌絲長滿即成發(fā)酵物；(5)發(fā)酵物后處理將培養(yǎng)好的發(fā)酵物取出，50°C恒溫干燥至恒重，然后粉碎至80目粉末，采用HPLC法測定蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素的含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種添加火麻仁培養(yǎng)蟲草菌絲體的方法。其操作步驟主要包括(1)蟲草菌種的制備；(2)蟲草菌發(fā)酵培養(yǎng)基的制備；(3)蟲草菌發(fā)酵培養(yǎng)；(4)蟲草菌發(fā)酵培養(yǎng)物后處理。使用本發(fā)明所提出的添加火麻仁培養(yǎng)蟲草菌絲體的方法，促進(jìn)蟲草菌高產(chǎn)蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素。本發(fā)明操作簡便，效果良好，可進(jìn)行大規(guī)模推廣應(yīng)用。
文檔編號A01G1/04GK102599004SQ20111002263
公開日2012年7月25日 申請日期2011年1月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月20日
發(fā)明者曾文波, 楊鐘林, 虞泓, 陳自宏 申請人:云南云百草實驗室有限公司