專利名稱：一種蟲草菌絲體有效成分的提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥材有效成分的提取，具體涉及蟲草菌絲體有效成分的提取工藝。
背景技術(shù)：
一、蟲草中文名稱為冬蟲夏草，英文名稱為plant worms ；entomophyte，學(xué)名(拉丁文名) 為 Cordyceps sinensis。定義蝙蝠蛾幼蟲被蟲草菌(Cordyc印s sinensis)感染，死后尸體、組織與菌絲結(jié)成堅硬的假菌核，在冬季低溫干燥土壤內(nèi)保持蟲形不變達數(shù)月之久(冬蟲)，待夏季溫濕適宜時從菌核長出棒狀子實體(子囊座)并露出地面(夏草)，又名中華蟲草，又稱為夏草冬蟲，簡稱蟲草。是中國傳統(tǒng)的名貴藥材。真正的冬蟲夏草均為野生，它主要產(chǎn)于中國青海、 西藏、新疆、四川、云南、甘肅、貴州等省及自治區(qū)的高寒地帶和雪山草原。冬蟲夏草含水分10. 84%，脂肪8. 4%，粗蛋白25. 32%,粗纖維18. 53%,碳水化物 28. 90%，灰分4. 10%。脂肪含飽和脂肪酸13. 00%，不飽和脂肪酸82. 2 %。此外，還含蟲草酸約7%，是奎寧酸的異構(gòu)物。又含冬蟲夏草素，是一種淡黃色結(jié)晶粉末，在試管內(nèi)能抑制鏈球菌、鼻疽桿菌、炭疽桿菌、豬出血性敗血癥桿菌及葡萄狀球菌的生長。另含維生素B120. 29 微克/100克，尚含有麥角脂醇、六碳糖醇、生物堿等。是著名的滋補強壯藥，常用肉類燉食， 有補虛健體之效。適用于治療肺氣虛和肺腎兩虛、肺結(jié)核等所致的咯血或痰中帶血、咳嗽。 氣短、盜汗等，對腎虛陽痿、腰膝酸疼等亦有良好的療效，也是老年體弱者的滋補佳品。臨床上使用蟲草素多為輔助治療惡性腫瘤，癥狀得到改善的在91. 7%以上；主要用于鼻癌、咽癌，肺癌，白血病，腦癌以及其他惡性腫瘤的患者。北冬蟲夏草中蟲草酸的含量為3. 09克，野生的蟲草為5. 54克，蟲草酸是一種D-甘露醇，甘露醇能提高血漿滲透壓，導(dǎo)致組織內(nèi)的水分進入血管內(nèi)，從而減輕組織水腫，補充血漿。蟲草酸多用于腦水腫，防治急性腎功能衰竭，有調(diào)節(jié)心、腦、血管的作用，促進人體的新陳代謝、改善人體的微循環(huán)、降血月旨、降血壓。北冬蟲夏草中，蟲草多糖的含量為12. 8克，而野生為7. 0克，蟲草多糖在人體內(nèi)的作用機理是促進T淋巴細胞、巨噬細胞、白細胞的增殖與分化，產(chǎn)生各種免疫活性因子，促進骨髓干細胞、生殖細胞的增殖與分化，促進心、腦細胞的新陳代謝與血液循環(huán)。蟲草多糖的藥理試驗證明蟲草多糖具有抗腫瘤、抗傳染病的功效、增強性功能、補腎壯陽、益精氣、防止衰老、延年益壽；對老年人慢性支氣管炎、肺源性心臟病有顯著的功效。能提高肝臟的解毒能力，起到扶肝的作用。降血糖、降血脂，貧血的患者用于補血，增強脾臟的營養(yǎng)性血，蟲草多糖、生物活性強，適應(yīng)性廣，還具耐缺氧、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜的作用。發(fā)酵蟲草菌絲體含有超氧化物歧化酶(SOD)，酶活(u/mi)，含量為184. 4，野生為 149. 4，比酶活(u/mi)，含量為42. 4，而野生為10. 3。超氧化物歧化酶，是一種非常重要的抗氧化酵素，在人體內(nèi)自然生成的一種酶，它是保護人身體細胞的物質(zhì)，它可以幫助體內(nèi)消除細胞腺粒體過多產(chǎn)生的自由基，避免細胞受到氧化、老化或破壞；自由基對抗體的損傷和傷害是引起人體衰老和死亡的重要原因之一?？墒辜t血球內(nèi)的SOD活性增強，活化細胞，達到抗老回春的作用。超氧化歧化酶的功能是抗衰老、抗氧化、消除日光輻射藥物等，使身體所產(chǎn)生的超氧自由基，能抑制病毒、增強免疫功能、保持青春容顏等有顯著作用。近年來資源日益衰竭，人們嘗試培養(yǎng)冬蟲夏草菌絲體作天然蟲草的替代，已經(jīng)獲得認可。系采用從天然冬蟲夏草中分離出蟲草菌種，人工培養(yǎng)液體發(fā)酵制成。蟲草有效成分的提取方法主要是水提醇沉，也就是先用水提取，然后將提取液濃縮到一定濃度，加乙醇至70%的濃度，多糖會從溶液中沉淀下來，取沉淀物干燥，就得到粗多糖了 。水提時，可采用高溫、酶解、微波、超聲波等不同方法進行。但是這種提取對蟲草素、蟲草酸、SOD等成分的提取并不理想，往往在提取干燥時被破壞，或者被醇沉溶液帶走，使蟲草有效成分并沒有全部提取出來。二、蟲草素和蟲草多糖1、蟲草素中文同義詞3'-脫氧腺苷；蟲草菌素；蛹蟲草菌素；3-脫氧酰苷；冬蟲夏草素；冬蟲夏草菌素。英文名稱=Cordyc印in是蟲草中(尤其是核苷類)主要活性成分，也是第一個從真菌中分離出來的核苷類抗生素。蟲草素是一種天然來源的藥物，具有抗腫瘤、抗菌抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、清除自由基等多種藥理作用外，有良好的臨床應(yīng)用前景。目前蟲草素的研究現(xiàn)正成為藥物化學(xué)中一個極其活躍的領(lǐng)域。其特有的抗菌抗病毒活性，已引起全球科技發(fā)達國家的高度重視。它能抑制病毒的RNA合成；對枯草桿菌和鳥結(jié)核桿菌均有抑制作用；對 HIV-I型病毒也有殺傷作用；尤其對多種實體惡性腫瘤有很強的抑制作用。因此，將其作為一種用途廣泛的新藥來開發(fā)是必然的趨勢。蟲草素具有脂溶性，受熱容易破壞，常規(guī)提取是用10倍量的水于80°C熱回流提取 3次每次90分鐘，但是提取效率并不高。溫度如果超過80度很容易被破壞。2、蟲草多糖從冬蟲夏草菌絲體中提取出的有效成分還有蟲草菌絲體多糖，蟲草菌絲體多糖是由甘露糖、蟲草素、腺苷、半乳糖、阿拉伯糖、木糖精、葡萄糖、巖藻糖組成的多聚糖。實驗證明，蟲草菌絲體多糖可提高人體免疫功能，升高白細胞，臨床已用于治療惡性腫瘤。蟲草多糖常用的提取方法是先用水煎煮提取，然后將提取液濃縮到一定濃度，加乙醇至70%的濃度，多糖會從溶液中沉淀下來，取沉淀物干燥，就得到粗多糖了。綜上所述，要想同時完全提取出蟲草多糖和蟲草素是不太可能的。還有SOD、不飽和脂肪酸、揮發(fā)油等成分也是受熱容易破壞的。本發(fā)明工藝針對以上矛盾提供了解決方式。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種蟲草菌絲體有效成分的提取方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足。本發(fā)明提取工藝主要是采用液體發(fā)酵的蟲草菌絲體，用冷凍干燥技術(shù)干燥的菌絲體粉為原料，因為冷凍干燥沒有受熱，蟲草發(fā)酵菌絲體有效成分幾乎全部保留下來，再利用二氧化碳超臨界提取出蟲草素、SOD、不飽和脂肪酸等不耐熱有效成分后，再利用多糖溶解性質(zhì)，用水煎煮提取出蟲草多糖成分，兩者按提取比例混合，達到減少成分破壞，使蟲草菌絲體提取物含有全成分的目的。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案來實現(xiàn)本發(fā)明的蟲草菌絲體的主要有效成分為蟲草素和蟲草多糖；且蟲草素是蟲草腺苷有效成分中的一種，另外蟲草菌絲體的有效成分中還含有SOD、不飽和脂肪酸等有效成分。本發(fā)明的蟲草菌絲體有效成分的提取方法，包括如下步驟(1)將粉碎到20目到40目粒度的蟲草菌絲體凍干粉稱重。本發(fā)明的蟲草菌絲體凍干粉采用冷凍干燥技術(shù)獲得。較佳的，所述蟲草菌絲體凍干粉中水分的重量百分含量在7%以下。蟲草菌絲體凍干粉采用如下的方法制得蟲草液體發(fā)酵成蟲草菌絲體，發(fā)酵液固液分離，采用冷凍干燥的方法將蟲草菌絲體干燥，冷凍干燥后的蟲草菌絲體進行粉碎即得。 凍干后的蟲草菌絲體要粉碎到20目到40目。(2)將所述蟲草菌絲體凍干粉進行二氧化碳超臨界萃取，分離獲得蟲草菌絲體超臨界提取物和蟲草菌絲體渣。較佳的，所述二氧化碳超臨界萃取的方法為將所述蟲草菌絲體凍干粉加入到超臨界萃取釜中，在壓力為18-26MPa，溫度為35_50°C，CO2流量為60_160L/min的條件下，采用蟲草菌絲體凍干粉質(zhì)量的0. 5-3倍的乙醇水溶液為夾帶劑，萃取2-3h，在分離釜中分離獲得蟲草菌絲體超臨界提取物和蟲草菌絲體渣。較佳的，所述乙醇水溶液中乙醇的質(zhì)量百分比的濃度為60-95%，更佳的，所述乙醇夾帶劑的質(zhì)量百分比濃度為95%。較佳的，所述蟲草菌絲體超臨界提取物為蟲草素、SOD、不飽和脂肪酸等有效成分提取物。(3)將超臨界提取后的蟲草菌絲體渣用水煎煮提取，將煎煮提取的提取液依次經(jīng)真空減壓濃縮和噴霧干燥后獲得蟲草多糖提取物。較佳的，蟲草菌絲體渣用水煎煮提取的方法為蟲草菌絲體渣粉加入蟲草菌絲體渣粉干重的7. 5-8. 5倍量水，加熱煎煮提取三次，每次的保溫時間為1. 4-1. 6小時，離心分離提取液，合并三次提取液。較佳的，所述真空減壓濃縮時，控制真空度在0. 08-0. 09MPa之間，溫度在65_85°C 之間。較佳的，所述煎煮提取的提取液真空減壓濃縮至比重為1. 1-1. 2即可；更佳的，所述真空減壓濃縮至比重為115左右。較佳的，所述噴霧干燥時，進風(fēng)溫度控制在175士3°C，出風(fēng)溫度控制在75士3°C。(4)將獲得的蟲草菌絲體超臨界提取物和蟲草多糖提取物均勻混合，獲得所述蟲草菌絲體有效成分的提取物。上述蟲草菌絲體有效成分的提取物即為成分全面的蟲草菌絲體提取物。本發(fā)明的蟲草菌絲體有效成分的提取工藝具有如下特點1、蟲草液體發(fā)酵固液分離以后，一般是將菌絲體固體部分用熱風(fēng)循環(huán)烘箱80度干燥或者進風(fēng)溫度170度噴霧干燥成粉的，烘箱干燥大約需要10到24小時才能達到干燥要求，受熱時間長，噴霧干燥是瞬時高溫干燥，受熱時間短，但是溫度高。對蟲草菌絲體成分都有破壞作用。本發(fā)明工藝采用冷凍干燥的蟲草菌絲體凍干粉為原料，本身就是沒有成分損失的原料。2、蟲草菌絲體凍干粉，用二氧化碳超臨界萃取，對成分不會產(chǎn)生任何破壞。將粒度為20 40目的蟲草菌絲體凍干粉加入到超臨界萃取釜中，在一定的條件下萃取，在分離釜中分離蟲草素等有效成分提取物；本發(fā)明工藝降低了有機溶劑的使用，提高了生產(chǎn)效率，降低了生產(chǎn)成本。蟲草菌絲體超臨界提取物的提取收率為6. 7%左右，經(jīng)測定蟲草腺苷的含量 3. 1%，蟲草腺苷的提取率為95%左右。3、超臨界提取后的蟲草菌絲體粉經(jīng)加熱煎煮、真空減壓濃縮，、噴霧干燥后，獲得的蟲草多糖的提取收率為25%左右，經(jīng)檢測多糖含量30%，蟲草多糖的提取率為95.5%。4、將每百公斤蟲草菌絲體超臨界提取物和蟲草多糖提取物混合均勻，就得到成分全面的蟲草菌絲體提取物。本發(fā)明提取工藝針對要解決的技術(shù)問題，先采用液體發(fā)酵蟲草菌絲體和發(fā)酵液固液分離以后，用冷凍干燥的方法將菌絲體干燥，干燥后的蟲草菌絲體粉碎到20目到40目， 用二氧化碳超臨界萃取出蟲草素等易受熱破壞的脂溶性成分，超臨界提取后的蟲草菌絲體再用水提取醇沉的方法獲得蟲草多糖，將超臨界提取物和水提醇沉提取物按提取比例混合后，得到蟲草菌絲體全新成分提取物。本發(fā)明提取工藝大大的節(jié)約了資源，并提高了有效成分的含量和功效作用。


圖1蟲草菌絲體有效成分的提取工藝流程圖
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例進一步闡述本發(fā)明，應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護范圍。實施例1蟲草菌絲體有效成分的提取如圖1所示的蟲草菌絲體有效成分的提取工藝流程圖1、蟲草菌絲體凍干粉粉碎成20-40目顆粒，稱量投料量，放入萃取釜。要求顆粒均勻，水分不大于。2、二氧化碳流體提取3小時，壓力為21MPa，溫度為45度，夾帶劑乙醇水溶液的使用量按菌絲體0.5倍量，乙醇水溶液中乙醇的質(zhì)量百分比濃度可以是60-95%，更適合的濃度是95%。3、提取中，分離釜分離，分離釜I排放提取物，分離釜II排放乙醇。乙醇回收，殘留提取物和分離釜I提取物混合，得蟲草菌絲體超臨界提取物，裝入食用塑料桶中，提取收率為6. 7%左右，經(jīng)測定蟲草腺苷的含量為3. 1%。
蟲草菌絲體超臨界提取物重量蟲草菌絲體提取物的提取收率=-X 100%
蟲草菌絲體重量上述蟲草腺苷的含量是參考中國藥典2010版一部蟲草項下進行測定的。4、提取結(jié)束，打開萃取釜，排放蟲草菌絲體渣。5、蟲草多糖提取物將蟲草菌絲體渣投入提取罐中，用水煎煮提取三次，每次加工藝用水8倍量，煎煮保溫1. 5小時，過濾提取液，三次提取液合并，轉(zhuǎn)減壓真空濃縮崗位。6、提取液濃縮，開啟真空泵及循環(huán)水冷卻泵，待真空度升至0. 04MPa時，向蒸發(fā)器中加入提取液至液面高度在下視鏡中部，繼續(xù)抽真空，待真空度至0. OSMPa時，打開蒸汽開關(guān)，控制真空度在0. 08-0. 09MPa之間、溫度65_85°C之間，保持液位在視鏡范圍內(nèi)。當液體濃縮至比重為1. 15左右時(60°C )，快速濾過(孔徑80目)，濾液置噴霧干燥貯罐中，以備噴霧干燥用。7、噴霧干燥，進風(fēng)溫度控制在175士3°C，出風(fēng)溫度控制在75士3°C。收集蟲草多糖提取物。裝入PE袋中，提取收率為25 %左右，經(jīng)檢測多糖含量30 %左右。
蟲草水提取物質(zhì)量蟲草多糖的提取收率=-X 100%
蟲草菌絲體菌渣質(zhì)量上述蟲草多糖的含量是參考中國藥典2010版一部黃精項下多糖檢測方法進行檢驗的。8、批量混合，將蟲草菌絲體超臨界提取物和蟲草菌絲體多糖提取物，全部吸附混合均勻，裝入PE袋中，稱重，每桶包裝不超過25kg?；旌虾蟮目偺崛∈章蚀蠹s為30%。實施例2蟲草菌絲體有效成分的提取1、蟲草菌絲體凍干粉粉碎成20-40目顆粒，稱量投料量，與實施例1相同量，放入萃取釜。要求顆粒均勻，水分不大于7%。2、二氧化碳流體提取2-3小時，壓力控制為18_26MPa，溫度控制為35-50度，夾帶劑乙醇水溶液的使用量按菌絲體0. 5-3倍量，乙醇水溶液中乙醇的質(zhì)量百分比濃度可以是 60-95 %，更適合的濃度是95 %。3、提取中，分離釜分離，分離釜I排放提取物，分離釜II排放乙醇。乙醇回收，殘留提取物和分離釜I提取物混合，得蟲草菌絲體超臨界提取物，裝入食用塑料桶中，提取收率為6. 7%左右，經(jīng)測定蟲草腺苷的含量3. 1%。
蟲草超臨界提取物質(zhì)量蟲草超臨界提取物的提取收率=-X 100%
所用蟲草凍干粉質(zhì)量上述蟲草腺苷的含量是參考中國藥典2010版一部冬蟲夏草項下方法進行測定的。4、提取結(jié)束，打開萃取釜，排放蟲草菌絲體渣。5、蟲草多糖提取物將蟲草菌絲體渣投入提取罐中，用水煎煮提取三次，每次加工藝用水7. 5-8. 5倍量，煎煮保溫1. 4-1. 6小時，過濾提取液，三次提取液合并，轉(zhuǎn)減壓真空濃縮崗位。6、提取液濃縮，開啟真空泵及循環(huán)水冷卻泵，待真空度升至0. 04MPa時，向蒸發(fā)器中加入提取液至液面高度在下視鏡中部，繼續(xù)抽真空，待真空度至0. OSMPa時，打開蒸汽開關(guān)，控制真空度在0. 08-0. 09MPa之間、溫度65_85°C之間，保持液位在視鏡范圍內(nèi)。當液體濃縮至比重為1. 10-1. 20時(60°C )，快速濾過(孔徑80目)，濾液置噴霧干燥貯罐中，以備噴霧干燥用。7、噴霧干燥，進風(fēng)溫度控制在175士3°C，出風(fēng)溫度控制在75士3°C。收集蟲草多糖提取物。裝入PE袋中，提取收率為25 %左右，經(jīng)檢測多糖含量30 %左右。
蟲草水提取物質(zhì)量蟲草多糖的提取收率=-X 100%
蟲草菌絲體菌渣質(zhì)量上述蟲草多糖的含量是參考中國藥典2010版一部黃精項下多糖檢測方法進行檢驗的。8、批量混合，將蟲草菌絲體超臨界提取物和蟲草菌絲體多糖提取物，全部吸附混合均勻，裝入PE袋中，稱重，每桶包裝不超過25kg?；旌虾蟮目偺崛∈章蚀蠹s為30%。
權(quán)利要求
1.一種蟲草菌絲體有效成分的提取方法，包括如下步驟(1)將粒度為20 40目的蟲草菌絲體凍干粉稱重；(2)將所述蟲草菌絲體凍干粉進行二氧化碳超臨界萃取，分離獲得蟲草菌絲體超臨界提取物和蟲草菌絲體渣；(3)將超臨界提取后的蟲草菌絲體渣用水煎煮提取，將煎煮提取的提取液依次經(jīng)真空減壓濃縮和噴霧干燥后獲得蟲草多糖提取物；(4)將獲得的蟲草菌絲體超臨界提取物和蟲草多糖提取物均勻混合，獲得所述蟲草菌絲體有效成分的提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的蟲草菌絲體有效成分的提取方法，其特征在于，步驟(1)中，所述蟲草菌絲體凍干粉中水分的重量百分含量在7%以下。
3.如權(quán)利要求1所述的蟲草菌絲體有效成分的提取方法，其特征在于，步驟(1)中，所述蟲草菌絲體凍干粉采用如下步驟的方法制得蟲草液體發(fā)酵成蟲草菌絲體，發(fā)酵液固液分離，采用冷凍干燥的方法將蟲草菌絲體干燥，冷凍干燥后的蟲草菌絲體進行粉碎即得。
4.如權(quán)利要求1所述的蟲草菌絲體有效成分的提取方法，其特征在于，步驟(2)中，所述二氧化碳超臨界萃取的方法為將所述蟲草菌絲體凍干粉加入到超臨界萃取釜中，在壓力為18-26MPa，溫度為35_50°C，CO2流量為60-160L/min的條件下，采用蟲草菌絲體凍干粉質(zhì)量的0. 5-3倍的乙醇水溶液為夾帶劑，萃取2-3h，在分離釜中分離獲得蟲草菌絲體超臨界提取物和蟲草菌絲體渣。
5.如權(quán)利要求4所述的蟲草菌絲體有效成分的提取方法，其特征在于，步驟(2)中，所述乙醇水溶液中乙醇的質(zhì)量百分比濃度為60-95%。
6.如權(quán)利要求1所述的蟲草菌絲體有效成分的提取方法，其特征在于，步驟(3)中，蟲草菌絲體渣用水煎煮提取的方法為蟲草菌絲體渣粉加入蟲草菌絲體渣粉干重的7. 5-8. 5 倍量水，加熱煎煮提取三次，每次的保溫時間為1.4-1. 6小時，離心分離提取液，合并三次提取液。
7.如權(quán)利要求1所述的蟲草菌絲體有效成分的提取方法，其特征在于，步驟(3)中，所述真空減壓濃縮時，控制真空度在0. 08-0. 09MPa之間，溫度在65-85°C之間；所述煎煮提取的提取液真空減壓濃縮至比重為1. 1-1. 2。
8.如權(quán)利要求1所述的蟲草菌絲體有效成分的提取方法，其特征在于，步驟(3)中，所述噴霧干燥時，進風(fēng)溫度控制在175士3°C，出風(fēng)溫度控制在75士3°C。
9.一種蟲草菌絲體有效成分的提取物，為根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項所述的蟲草菌絲體有效成分的提取方法提取獲得。
10.如權(quán)利要求9所述的蟲草菌絲體有效成分的提取物，其特征在于，所述蟲草菌絲體有效成分主要為蟲草素和蟲草多糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥材有效成分的提取，具體涉及蟲草菌絲體有效成分的提取工藝。本發(fā)明提取工藝針對要解決的技術(shù)問題，先采用液體發(fā)酵蟲草菌絲體和發(fā)酵液固液分離以后，用冷凍干燥的方法將菌絲體干燥，干燥后的蟲草菌絲體粉碎到20目到40目，用二氧化碳超臨界萃取出蟲草素等易受熱破壞的脂溶性成分，超臨界提取后的蟲草菌絲體再用水提取醇沉的方法獲得蟲草多糖，將超臨界提取物和水提醇沉提取物按提取比例混合后，得到蟲草菌絲體全新成分提取物。本發(fā)明提取工藝大大的節(jié)約了資源，并提高了有效成分的含量和功效作用。
文檔編號A61K31/7076GK102349934SQ20111032613
公開日2012年2月15日 申請日期2011年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月24日
發(fā)明者周伯揚 申請人:周伯揚