專利名稱:一種多糖的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及真菌有效成分提取分離方法，具體涉及一種灰樹花多糖的高效提取方法。
背景技術(shù)：
灰樹花是擔子菌綱多孔菌科的一種藥食兼用的食用菌，含有多種活性物質(zhì)?；覙浠ǘ嗵鞘腔覙浠ㄖ凶钪饕囊活惢钚猿煞帧Ｓ形墨I報道它具有抗腫瘤、抗HIV病毒、調(diào)節(jié)免疫、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌與營養(yǎng)代謝等藥理作用?；覙浠ǘ嗵鞘且环N由高度分支化的β_1，6支鏈的 β -1，3葡聚糖，包括D-組分、MD-組分、X-組分、ΜΤ-2等生理活性組分?；覙浠ǘ嗵鞘撬袑嶒灥恼婢嗵侵锌鼓[瘤作用最強的，且口服有效。灰樹花多糖抗腫瘤、抗病毒等藥理活性均與其激活免疫系統(tǒng)，調(diào)節(jié)免疫功能相關(guān)。Suzuki等通過給小鼠服用灰樹花多糖給藥后體外培養(yǎng)脾細胞研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)上清中具有高濃度的IgG和IFN- y。Nanba等研究了灰樹花D組分對小鼠機體的免疫激活作用，發(fā)現(xiàn)小鼠體內(nèi)自然殺傷細胞、細胞T毒細胞、遲敏T 細胞均被激活1. 5 2. 2倍，IL-UIL-2和超氧負離子含量均得到不同程度的提高；李小定等研究發(fā)現(xiàn)，灰樹花均一多糖(PGF-I)經(jīng)口服給藥，能全面增強荷瘤小鼠的非特異性免疫、 細胞免疫及體液免疫功能。
研究發(fā)現(xiàn)灰樹花多糖具有廣泛的藥理作用，可以抑制腫瘤、穩(wěn)定血壓、降低血糖、 改善脂肪代謝?；覙浠ㄗ訉嶓w中有多種多糖，不同的多糖具有各自不同的藥理作用，目前尚缺乏對其多糖提取的有效方法。
微波具有的高頻特性、熱特性及生物效應(yīng)幾大特點所致。一方面，高頻微波促使樣品中偶極分子旋轉(zhuǎn)而導(dǎo)致弱氫鍵破裂及離子遷移，加速了多糖對樣品的滲透，并使多糖很快溶解；另一方面，微波是一種高頻波，它使提取體系中偶極分子因高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生高頻率摩擦，從而可在短時間內(nèi)產(chǎn)生極大的熱量，使整個樣品同時被加熱，從而大大加快了多糖的溶解；第三方面，微波具有生物效應(yīng)，微波會引起樣品細胞膜破裂，加速了多糖從細胞中釋放出來?？梢?，微波輔助提取法與傳統(tǒng)水提法相比，提取時間縮短，所得凈多糖產(chǎn)率也有一定的提高。
灰樹花菌絲體中除多糖外，還含有一定量的蛋白質(zhì)、膠質(zhì)和粗纖維等成分，如能采用有關(guān)酶類對菌絲體進行預(yù)處理，將會有利于糖類物質(zhì)的溶出和分離，從而提高多糖的提取率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是使用微波和酶復(fù)合技術(shù)，使灰樹花多糖提取率提高，提供一種高效的灰樹花多糖的方法。
本發(fā)明實現(xiàn)灰樹花多糖提取的技術(shù)方案為
1、一種多糖的提取方法，其特征在于該方法是將灰樹花子實體粉碎，加入蒸餾水后微波處理，然后加一定的膠原酶和纖維素酶等復(fù)合酶，升溫滅酶，離心，上清液用乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀，得灰樹花多糖。
2、灰樹花多糖的分離包括下列步驟
A、灰樹花多糖的微波輔助提取工藝
以灰樹花子實體為原料，粉碎成細粉，加1-50倍蒸餾水，調(diào)pH至5. 0-8. 0，按各種設(shè)定條件(提取時間為2-lOmin;微波功率200-2000W;液料比1 10_1 50)進行微波提取。微波提取過程為間歇微波處理，每次anin，中間停lmin，補加損失的水分使提取液體積保持相對恒定。處理完后將提取液過濾，按同樣條件重復(fù)提取1次，合并提取液。
B、灰樹花多糖的微波輔助提取工藝
經(jīng)過微波處理的提取液，調(diào)至pH5. 0-8.0，加1-5%的膠原酶和纖維素酶等復(fù)合酶，置30°C-80°C保溫反應(yīng)40min-120min后，立即升溫至70°C _100°C滅酶，立即升溫滅酶， 3000-6000r/min離心，取上清液，乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀，得灰樹花多糖。多糖含量為 5% -90%，多肽含量為80% -5%。
用本發(fā)明分離獲得的多糖可用^^叫、三氯乙酸法或幾種方法同時應(yīng)用進行脫蛋白處理，以得到純化多糖，多糖含量為20-99%。
本發(fā)明利用使用微波和酶復(fù)合技術(shù)提取總多糖，提高灰樹花多糖提取率。本發(fā)明方法操作簡便，多糖分離提取效果顯著，為發(fā)揮灰樹花多糖的藥效作用，制備各種適應(yīng)癥的藥物提供了可能。
具體實施方式
實施例1灰樹花多糖的提取
稱取灰樹花子實體細粉lOOOg，加8000ml蒸餾水，調(diào)pH至7. 0，按各種設(shè)定條件(提取時間為IOmin ；微波功率2000W;液料比1 20)進行微波提取。經(jīng)過微波處理的提取液，調(diào)至PH7. 0，加灰樹花質(zhì)量的3%的膠原酶和纖維素酶等復(fù)合酶，置40°C保溫反應(yīng)120min后，立即升溫至80°C滅酶，并繼續(xù)于60°C水浴中浸提lh，立即升溫至90°C滅酶。 5000rpm離心15分鐘，上清液留用。殘渣加入8000ml蒸餾水，上述方法重復(fù)3次，合并所有上清液。減壓濃縮，加入4倍體積95%乙醇，4°C過夜，5000rpm離心15分鐘，沉淀減壓干燥，碾碎，即得灰樹花多糖224. 8g，其中多糖含量為48. 6%。
實施例2灰樹花多糖的提取
以灰樹花子實體為原料，粉碎成細粉，加50倍蒸餾水，調(diào)pH至7. 0，按各種設(shè)定條件(提取時間為5min;微波功率1000W ；液料比1 30)進行微波提取。微波提取過程為間歇微波處理，每次anin，中間停lmin，補加損失的水分使提取液體積保持相對恒定。經(jīng)過微波處理的提取液，調(diào)至PH7.0，加灰樹花質(zhì)量的5%的膠原酶和纖維素酶(質(zhì)量比為 1 2)等復(fù)合酶，置40°C保溫反應(yīng)120min后，立即升溫至80°C滅酶，并繼續(xù)于60°C水浴中浸提lh，立即升溫滅酶，4000r/min離心，取上清液，乙醇沉淀，得灰樹花多糖。多糖含量為 73. 2%%，多肽含量為11. 2%。
實施例3灰樹花多糖的提取
以灰樹花子實體為原料，粉碎成細粉，加20倍蒸餾水，調(diào)pH至6. 0，按各種設(shè)定條件(提取時間為7min;微波功率500W;液料比1 50)進行微波提取。經(jīng)過微波處理的提取液，調(diào)至PH7. 5，加灰樹花質(zhì)量的2. 5%的膠原酶和纖維素酶(質(zhì)量比為2 5)等復(fù)合酶，置50°C保溫反應(yīng)120min后，立即升溫至70°C滅酶，3000r/min離心，取上清液，丙酮等有機溶劑沉淀，得灰樹花多糖。多糖含量為81.2%，多肽含量為14. 1%。
權(quán)利要求
1.一種多糖的提取方法，其特征在于該方法是將灰樹花子實體粉碎，加入蒸餾水后微波處理，然后加一定的膠原酶和纖維素酶等復(fù)合酶，升溫滅酶，離心，上清液用乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀，得灰樹花多糖。
2.如權(quán)利要求
1所述的一種多糖的提取方法，其特征在于其中所述的灰樹花多糖的分離包括下列步驟A、灰樹花多糖的微波輔助提取工藝以灰樹花子實體為原料，粉碎成細粉，加1-50倍蒸餾水，調(diào)pH至5. 0-8. 0，按各種設(shè)定條件(提取時間為2-lOmin;微波功率200-2000W;液料比1 10_1 50)進行微波提取。 處理完后將提取液過濾，按同樣條件重復(fù)提取1次，合并提取液。B、灰樹花多糖的微波輔助提取工藝經(jīng)過微波處理的提取液，調(diào)至PH 5. 0-8. 0，加灰樹花質(zhì)量的1-5%的膠原酶和纖維素酶等復(fù)合酶((質(zhì)量比為1 4)，置30°C-80°C保溫反應(yīng)40min-120min后，立即升溫至 700C -100°C滅酶，立即升溫滅酶，3000-6000r/min離心，取上清液，乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀，得灰樹花多糖。
專利摘要
本發(fā)明涉及灰樹花子實體多糖的提取方法。該方法是將灰樹花子實體粉碎，加入蒸餾水后微波處理，然后加一定的膠原酶和纖維素酶等復(fù)合酶進行處理，升溫滅酶，離心，上清液用乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀，得灰樹花多糖。本發(fā)明使用微波和酶復(fù)合技術(shù)提取灰樹花多糖，提高多糖提取率，為發(fā)揮灰樹花多糖的藥效作用，制備各種適應(yīng)癥的藥物提供了可能。
文檔編號C12S3/02GKCN102453105SQ201010528169
公開日2012年5月16日 申請日期2010年11月2日
發(fā)明者王智佳 申請人:天津濟命生生物科技有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan