本發(fā)明公開了一種枸杞多糖鐵絡(luò)合物的制備方法，屬于絡(luò)合物領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

枸杞是我國傳統(tǒng)名貴中藥材，富含植物多糖、蛋白質(zhì)、維生素等營養(yǎng)成分。枸杞多糖是從枸杞中提取而得的一種水溶性多糖。已明確該多糖系蛋白多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6種單糖成分組成.經(jīng)研究表明，枸杞多糖是枸杞子調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老的主要活性成分，可改善老年人易疲勞、食欲不振和視力模糊等癥狀，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用。

缺鐵的治療對缺鐵性貧血的病人是很有必要的，其中靜脈注射特別適用于那些不能耐受口服鐵劑治療、不能夠完全吸收膳食鐵或者有造血障礙的人群，靜脈注射鐵劑中右旋糖酐鐵應(yīng)用廣泛，但其有明顯的不良反應(yīng)，據(jù)報道，接受右旋糖酐鐵治療的病人中，接近26％的病人出現(xiàn)了副作用，引起這種嚴(yán)重副反應(yīng)的根本原因還不明確，但是，已知對右旋糖酐的過敏反應(yīng)是引起這種嚴(yán)重副作用的原因，因此沒有右旋糖酐的靜脈注射鐵劑可以降低或者避免這些副作用。

多糖鐵絡(luò)合物是新一代補(bǔ)鐵劑，不僅有合適的絡(luò)合穩(wěn)定性，對胃腸道刺激性小，且當(dāng)其釋放鐵之后，多糖本身具有多方面的生物活性，可被吸收利用。多糖鐵絡(luò)合物由糖基和配糖鐵兩部分組成。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題：針對傳統(tǒng)缺鐵性貧血的病人，選用亞鐵鹽來治療缺

鐵性貧血，但其化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，生物利用度差，消化道刺激作用顯著，并且易在體內(nèi)產(chǎn)生內(nèi)源性自由基造成細(xì)胞膜損傷的缺點，提供了一種枸杞多糖鐵絡(luò)合物的制備方法，本發(fā)明先從枸杞干中經(jīng)過微波浸提、醇沉、脫蛋白、透析等工藝得到枸杞精多糖，以枸杞精多糖鐵鹽為原料，經(jīng)過堿化、絡(luò)合、醇沉、干燥等工藝最終制得枸杞多糖鐵絡(luò)合物，本發(fā)明制備得到的枸杞多糖鐵絡(luò)合物不僅可以作為新型補(bǔ)鐵劑，穩(wěn)定性好，對胃腸道無或極少刺激作用，而且結(jié)合枸杞多糖自身的生物活性，還具有調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老等作用，在人體釋放后可被吸收利用，無毒副作用。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

（1）稱取200～300g枸杞干，將其粉碎、過篩得60～80目枸杞粉末，將枸杞粉末按固液比1:6加入去離子水中，在溫度為70～80℃和微波頻率為2000～2200MHz下進(jìn)行微波浸提3～5次，每次浸提5～10min，浸提結(jié)后過濾，收集濾液，并將濾液合并，得到枸杞多糖水浸液；

（2）將上述枸杞多糖水浸液按體積比1:2加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)85%乙醇溶液中，攪拌15～20min后在室溫下靜置10～18h，靜置結(jié)束后過濾，收集沉淀物，將沉淀物按固液比1：3加入去離子水中混合，得枸杞粗多糖液，再將枸杞多糖液加入總體積3～5%的Sevage試劑進(jìn)行振蕩脫蛋白，振蕩10～15min后在4000～6000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離得上清液，將上清液裝入透析袋中，放入去離子水中透析，每隔3～5h更換一次水，透析20～24h后進(jìn)行減壓蒸餾，將濃縮液噴霧干燥得枸杞精多糖，所述的sevage試劑是氯仿和正丁醇按體積比4:1混合；

（3）取3～5g上述得到的枸杞精多糖溶于30～50mL的蒸餾水中，攪拌溶解后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為10～11，調(diào)節(jié)后向溶液中加入25～30mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%碳酸鈉溶液，混合后放入水浴中，在80℃水浴下邊攪拌邊滴加60～100mL濃度為0.5mol/L氯化鐵溶液，滴加結(jié)束后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液保持pH為10～11，并保持在80℃溫度下攪拌回流2～3h，回流結(jié)束后過濾，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的20%，得濃縮液；

（4）將上述濃縮液按體積比1:4加入無水乙醇中，攪拌混合后靜置3～5h后放入離心分離機(jī)中在5000～6000r/min離心分離20～30min，將沉淀物分別用丙酮和無水乙醇洗滌2～3次，將洗滌后的固體真空烘干，烘干后固體再次溶于蒸餾水中，在常溫下透析3～5h，透析后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮液，向濃縮液中加入其體積2～4倍的無水乙醇，分離得沉淀物后分別用丙酮和無水乙醇清洗2～3次，清洗后真空干燥，即可得到枸杞多糖鐵絡(luò)合物。

本發(fā)明的應(yīng)用方法：將本發(fā)明制備得到的枸杞多糖鐵絡(luò)合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素280～320mg的溶液，所述的注射用水為常規(guī)無菌去離子注射用水，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)15％的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值為9～11，控制溫度在55～65℃，然后再加入總質(zhì)量1～3‰的活性炭，攪拌混合25～35min后用0.20～0.22μm微濾膜過濾，將濾液滅菌，滅菌后的濾液灌裝到容器中，用蒸汽加熱溫度控制在110～130℃，保持15～25min，即得枸杞多糖鐵注射液成品。

本發(fā)明的有益效果是：

（1）本發(fā)明制備得到的枸杞多糖鐵絡(luò)合物可以作為新型補(bǔ)鐵劑，穩(wěn)定性好，對胃腸道無或極少刺激作用；

（2）本發(fā)明的枸杞多糖鐵絡(luò)合物結(jié)合枸杞多糖自身的生物活性，具有調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老等作用，在人體釋放后可被吸收利用，無毒副作用；

（3） 本發(fā)明制備工藝簡單，穩(wěn)定可靠，易操作，成本低。

具體實施方式

首先稱取200～300g枸杞干，將其粉碎、過篩得60～80目枸杞粉末，將枸杞粉末按固液比1:6加入去離子水中，在溫度為70～80℃和微波頻率為2000～2200MHz下進(jìn)行微波浸提3～5次，每次浸提5～10min，浸提結(jié)后過濾，收集濾液，并將濾液合并，得到枸杞多糖水浸液；將上述枸杞多糖水浸液按體積比1:2加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)85%乙醇溶液中，攪拌15～20min后在室溫下靜置10～18h，靜置結(jié)束后過濾，收集沉淀物，將沉淀物按固液比1：3加入去離子水中混合，得枸杞粗多糖液，再將枸杞多糖液加入總體積3～5%的Sevage試劑進(jìn)行振蕩脫蛋白，振蕩10～15min后在4000～6000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離得上清液，將上清液裝入透析袋中，放入去離子水中透析，每隔3～5h更換一次水，透析20～24h后進(jìn)行減壓蒸餾，將濃縮液噴霧干燥得枸杞精多糖，所述的sevage試劑是氯仿和正丁醇按體積比4:1混合；取3～5g上述得到的枸杞精多糖溶于30～50mL的蒸餾水中，攪拌溶解后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為10～11，調(diào)節(jié)后向溶液中加入25～30mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%碳酸鈉溶液，混合后放入水浴中，在80℃水浴下邊攪拌邊滴加60～100mL濃度為0.5mol/L氯化鐵溶液，滴加結(jié)束后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液保持pH為10～11，并保持在80℃溫度下攪拌回流2～3h，回流結(jié)束后過濾，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的20%，得濃縮液；將上述濃縮液按體積比1:4加入無水乙醇中，攪拌混合后靜置3～5h后放入離心分離機(jī)中在5000～6000r/min離心分離20～30min，將沉淀物分別用丙酮和無水乙醇洗滌2～3次，將洗滌后的固體真空烘干，烘干后固體再次溶于蒸餾水中，在常溫下透析3～5h，透析后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮液，向濃縮液中加入其體積2～4倍的無水乙醇，分離得沉淀物后分別用丙酮和無水乙醇清洗2～3次，清洗后真空干燥，即可得到枸杞多糖鐵絡(luò)合物。

實例1

首先稱取200g枸杞干，將其粉碎、過篩得60目枸杞粉末，將枸杞粉末按固液比1:6加入去離子水中，在溫度為70℃和微波頻率為2000MHz下進(jìn)行微波浸提3次，每次浸提5min，浸提結(jié)后過濾，收集濾液，并將濾液合并，得到枸杞多糖水浸液；將上述枸杞多糖水浸液按體積比1:2加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)85%乙醇溶液中，攪拌15min后在室溫下靜置10h，靜置結(jié)束后過濾，收集沉淀物，將沉淀物按固液比1：3加入去離子水中混合，得枸杞粗多糖液，再將枸杞多糖液加入總體積3%的Sevage試劑進(jìn)行振蕩脫蛋白，振蕩10min后在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離得上清液，將清液裝入透析袋中，放入去離子水中透析，每隔3h更換一次水，透析20h后將溶液減壓蒸餾、干燥得枸杞精多糖，所述的sevage試劑是氯仿和正丁醇按體積比4:1混合；取3g上述得到的枸杞多糖溶于30mL的蒸餾水中，攪拌溶解后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為10，調(diào)節(jié)后向溶液中加入25mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%碳酸鈉溶液，混合后放入水浴中，在80℃水浴下邊攪拌邊滴加60mL濃度為0.5mol/L氯化鐵溶液，滴加結(jié)束后用濃度為3mol/L的氫氧化鈉溶液保持pH為10，并保持在80℃溫度下攪拌回流2h，回流結(jié)束后過濾，得濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的20%，得濃縮液；將上述濃縮液按體積比1:4加入無水乙醇中，攪拌混合后靜置3h后放入離心分離機(jī)中在5000r/min離心分離20min，將沉淀物分別用丙酮和無水乙醇洗滌2次，將洗滌后的固體真空烘干，烘干后固體再次溶于蒸餾水中，在常溫下透析3h，透析后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮液，向濃縮液中加入其體積2倍的無水乙醇，分離得沉淀物后分別用丙酮和無水乙醇清洗2次，即清洗后真空干燥，即可得到枸杞多糖鐵絡(luò)合物。

將本發(fā)明制備得到的枸杞多糖鐵絡(luò)合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素280mg的溶液，所述的注射用水為常規(guī)無菌去離子注射用水，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)15％的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值為9，控制溫度在55℃，然后再加入總質(zhì)量1‰的活性炭，攪拌混合25min后用0.20μm微濾膜過濾，將濾液滅菌，滅菌后的濾液灌裝到容器中，用蒸汽加熱溫度控制在110℃，保持15min，即得枸杞多糖鐵注射液成品。

實例2

首先稱取250g枸杞干，將其粉碎、過篩得70目枸杞粉末，將枸杞粉末按固液比1:6加入去離子水中，在溫度為75℃和微波頻率為2100MHz下進(jìn)行微波浸提4次，每次浸提8min，浸提結(jié)后過濾，收集濾液，并將濾液合并，得到枸杞多糖水浸液；將上述枸杞多糖水浸液按體積比1:2加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)85%乙醇溶液中，攪拌17min后在室溫下靜置14h，靜置結(jié)束后過濾，收集沉淀物，將沉淀物按固液比1：3加入去離子水中混合，得枸杞粗多糖液，再將枸杞多糖液加入總體積4%的Sevage試劑進(jìn)行振蕩脫蛋白，振蕩13min后在5000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離得上清液，將清液裝入透析袋中，放入去離子水中透析，每隔4h更換一次水，透析22h后將溶液減壓蒸餾、干燥得枸杞精多糖，所述的sevage試劑是氯仿和正丁醇按體積比4:1混合；取4g上述得到的枸杞多糖溶于40mL的蒸餾水中，攪拌溶解后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為10.5，調(diào)節(jié)后向溶液中加入27mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%碳酸鈉溶液，混合后放入水浴中，在80℃水浴下邊攪拌邊滴加80mL濃度為0.5mol/L氯化鐵溶液，滴加結(jié)束后用濃度為3mol/L的氫氧化鈉溶液保持pH為10.5，并保持在80℃溫度下攪拌回流2.5h，回流結(jié)束后過濾，得濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的20%，得濃縮液；將上述濃縮液按體積比1:4加入無水乙醇中，攪拌混合后靜置4h后放入離心分離機(jī)中在5500r/min離心分離25min，將沉淀物分別用丙酮和無水乙醇洗滌2次，將洗滌后的固體真空烘干，烘干后固體再次溶于蒸餾水中，在常溫下透析4h，透析后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮液，向濃縮液中加入其體積3倍的無水乙醇，分離得沉淀物后分別用丙酮和無水乙醇清洗2次，即清洗后真空干燥，即可得到枸杞多糖鐵絡(luò)合物。

將本發(fā)明制備得到的枸杞多糖鐵絡(luò)合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素300mg的溶液，所述的注射用水為常規(guī)無菌去離子注射用水，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)15％的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值為10，控制溫度在60℃，然后再加入總質(zhì)量2‰的活性炭，攪拌混合30min后用0.21μm微濾膜過濾，將濾液滅菌，滅菌后的濾液灌裝到容器中，用蒸汽加熱溫度控制在120℃，保持20min，即得枸杞多糖鐵注射液成品。

實例3

首先稱取300g枸杞干，將其粉碎、過篩得80目枸杞粉末，將枸杞粉末按固液比1:6加入去離子水中，在溫度為80℃和微波頻率為2200MHz下進(jìn)行微波浸提5次，每次浸提10min，浸提結(jié)后過濾，收集濾液，并將濾液合并，得到枸杞多糖水浸液；將上述枸杞多糖水浸液按體積比1:2加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)85%乙醇溶液中，攪拌20min后在室溫下靜置18h，靜置結(jié)束后過濾，收集沉淀物，將沉淀物按固液比1：3加入去離子水中混合，得枸杞粗多糖液，再將枸杞多糖液加入總體積5%的Sevage試劑進(jìn)行振蕩脫蛋白，振蕩15min后在6000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離得上清液，將清液裝入透析袋中，放入去離子水中透析，每隔5h更換一次水，透析24h后將溶液減壓蒸餾、干燥得枸杞精多糖，所述的sevage試劑是氯仿和正丁醇按體積比4:1混合；取5g上述得到的枸杞多糖溶于50mL的蒸餾水中，攪拌溶解后用濃度為3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為11，調(diào)節(jié)后向溶液中加入30mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%碳酸鈉溶液，混合后放入水浴中，在80℃水浴下邊攪拌邊滴加100mL濃度為0.5mol/L氯化鐵溶液，滴加結(jié)束后用濃度為3mol/L的氫氧化鈉溶液保持pH為11，并保持在80℃溫度下攪拌回流3h，回流結(jié)束后過濾，得濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的20%，得濃縮液；將上述濃縮液按體積比1:4加入無水乙醇中，攪拌混合后靜置5h后放入離心分離機(jī)中在6000r/min離心分離30min，將沉淀物分別用丙酮和無水乙醇洗滌3次，將洗滌后的固體真空烘干，烘干后固體再次溶于蒸餾水中，在常溫下透析5h，透析后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮液，向濃縮液中加入其體積4倍的無水乙醇，分離得沉淀物后分別用丙酮和無水乙醇清洗3次，即清洗后真空干燥，即可得到枸杞多糖鐵絡(luò)合物。

將本發(fā)明制備得到的枸杞多糖鐵絡(luò)合物加入到注射用水中配制成每毫升含鐵元素320mg的溶液，所述的注射用水為常規(guī)無菌去離子注射用水，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)15％的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH值為11，控制溫度在65℃，然后再加入總質(zhì)量3‰的活性炭，攪拌混合35min后用0.22μm微濾膜過濾，將濾液滅菌，滅菌后的濾液灌裝到容器中，用蒸汽加熱溫度控制在130℃，保持25min，即得枸杞多糖鐵注射液成品。