一種分析/分離依折麥布(r,r,s)型的光學(xué)異構(gòu)體的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬涉及一種高效液相色譜法，尤其是一種分析分離依折麥布及其光學(xué)異構(gòu) 體的高效液相色譜法。
【背景技術(shù)】
[0002] 依折麥布為膽固醇抑制吸收劑，適用于治療原發(fā)性高膽固醇血癥，純合子家族性 高膽固醇血癥(HoFH)和純合子谷留醇血癥(或植物留醇血癥），其分子式為C 24H23F2N〇4，化學(xué) 名為1-(4-氟苯基)-3(R)-[3-(4-氟苯基)-3(S)_羥丙基]-4(S)-(4-羥苯基)-2-吖丁啶(氮 雜環(huán)丁烷)酮一水合物，結(jié)構(gòu)式為
[0004] 該分子中含有3個(gè)手性中心，存在多個(gè)光學(xué)異構(gòu)體，對(duì)于依折麥布的光學(xué)異構(gòu)體雜 質(zhì)，在藥物合成過(guò)程當(dāng)中是需要進(jìn)行質(zhì)量控制的。含手性碳原子的光學(xué)異構(gòu)體的分離一直 是手性藥物合成和制劑過(guò)程中質(zhì)量控制的難點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)依折麥布及其光學(xué)異構(gòu)體的分離在依 折麥布藥物的合成和制劑過(guò)程的質(zhì)量控制方面具有現(xiàn)實(shí)意義。本發(fā)明旨在介紹一種方法來(lái) 分析與分離依折麥布及其(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，未見(jiàn)(R，R，S)型的光學(xué)異 構(gòu)體檢測(cè)方法的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種分析分離依折麥布及其(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì) 的高效液相色譜法，從而實(shí)現(xiàn)依折麥布與其(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)的分離測(cè)定。
[0006] 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，以纖維素類(lèi)手性柱，以正相混合溶劑為流動(dòng)相，可以將依折麥布及其 (R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體進(jìn)行有效分離，從而可以準(zhǔn)確控制依折麥布的質(zhì)量。本發(fā)明的方法 能簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確地分析分離依折麥布及其(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)。
[0007] 所述高效液相色譜法(簡(jiǎn)寫(xiě)為HPLC)分析/分離依折麥布及其(R，R，S)型的光學(xué)異 構(gòu)體的方法，其特征在于，采用以纖維素類(lèi)手性柱，以正相混合溶劑為流動(dòng)相的正相色譜法 進(jìn)行分離。
[0008] 進(jìn)一步地，所述纖維素類(lèi)手性柱是大賽璐(Daicel)的AS-H纖維素類(lèi)手性柱，柱長(zhǎng) 250mm、內(nèi)徑4.6mm，填料粒徑5μηι;可以獲得更好的分析分離效果。
[0009] 進(jìn)一步地，本發(fā)明的正相溶劑選用含有正己烷和異丙醇的混合溶劑。
[0010] 本發(fā)明的方法中的流動(dòng)相選用體積比例為60:40~95:5正己烷和異丙醇的混合溶 劑。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的含有正己烷和異丙醇的混合溶劑中，正己烷和異丙醇的體積比例 為75:25。
[0011] 本發(fā)明所述方法中的一種實(shí)施方式，至少包括以下步驟：
[0012] (1)將含有依折麥布和/或其(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體的樣品加正相混合溶劑制成 溶液I;
[0013] (2)設(shè)置液相色譜儀的參數(shù)為:流動(dòng)相流速為0.4~1.2mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為243nm， 色譜柱柱溫箱為20~40 °C ;
[0014] (3)取步驟(1)所得溶液I注入液相色譜儀，分析或分離出依折麥布及其(R，R，S)型 的光學(xué)異構(gòu)體。
[0015] 優(yōu)選地，所述溶液I中，依折麥布及其(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體的濃度為0. lg/L~ 1·5g/L〇
[0016] 優(yōu)選地，所述步驟(2)中色譜柱柱溫箱為為25°C。
[0017] 優(yōu)選地，步驟(3)中注入液相色譜儀的溶液I的量為2~50yL。
[0018]優(yōu)選地，依折麥布的保留時(shí)間為20~45min;依折麥布(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體的 保留時(shí)間為15~30min;依折麥布與依折麥布(R，R，S)型光學(xué)異構(gòu)體的分離度2 1.5。
[0019 ]本發(fā)明所述的分析分離方法中的一種實(shí)施方式，可按照以下方法實(shí)現(xiàn)：
[0020] (1)取依折麥布樣品適量，用異丙醇溶解樣品，配制成每lmL含依折麥布0.5~ 1.5mg的樣品溶液。
[0021 ] (2)設(shè)置流動(dòng)相流速為0.4~1.2mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為243nm，色譜柱柱溫箱為20~ 40°C，色譜柱柱溫的最佳溫度為25°C。
[0022] (3)取（1)的樣品溶液2~50yL注入液相色譜儀，完成依折麥布及其(R，R，S)型的光 學(xué)異構(gòu)體的分析與分離。
[0023] 其中：
[0024] 色譜柱:AS_H(Daice 1，250mm X 4 · 6mm，5μπι)纖維素手性色譜柱；
[0025] 流動(dòng)相:正己烷-異丙醇(正己烷:異丙醇體積比=75:25);
[0026]柱溫：25°c;
[0027] 檢測(cè)波長(zhǎng)：243nm;
[0028] 流速:0.5mL/min;
[0029] 進(jìn)樣體積：20yL。
[0030] 本發(fā)明采用纖維素類(lèi)AS-H(Daicel，250mmX4.6mm，5ym)手性色譜柱，能夠有效的 分析分離依折麥布及其光學(xué)異構(gòu)體(雜質(zhì)）；選擇流動(dòng)相溶解樣品，確保了溶液的穩(wěn)定性，且 溶劑峰對(duì)(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體測(cè)定無(wú)干擾;選擇進(jìn)樣體積20yL，柱溫為25°C，提高了色 譜峰的對(duì)稱(chēng)性。本發(fā)明解決了含依折麥布及其光學(xué)異構(gòu)體的原料的分析與分離問(wèn)題，從而 確保了依折麥布的質(zhì)量可控。
【附圖說(shuō)明】
[0031] 圖1是實(shí)施例1的高效液相色譜圖：圖中1號(hào)峰為依折麥布(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu) 體，2號(hào)峰為依折麥布。
[0032] 圖2是實(shí)施例2的高效液相色譜圖：圖中1號(hào)峰為依折麥布(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu) 體，2號(hào)峰為依折麥布。
[0033] 圖3是實(shí)施例3的高效液相色譜圖：圖中1號(hào)峰為依折麥布(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu) 體，2號(hào)峰為依折麥布。
[0034] 圖4是實(shí)施例4的高效液相色譜圖：圖中1號(hào)峰為依折麥布(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu) 體，2號(hào)峰為依折麥布。
[0035] 圖5是實(shí)施例5的高效液相色譜圖：圖中1號(hào)峰為依折麥布(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu) 體，2號(hào)峰為依折麥布。
【具體實(shí)施方式】
[0036] 下面結(jié)合實(shí)施例詳述本申請(qǐng)，但本申請(qǐng)并不局限于這些實(shí)施例。
[0037] 實(shí)施例1
[0038] 儀器與條件
[0039] 色譜柱:AS_H(Daicel，250mmX4.6mm，5ym);
[0040] 流動(dòng)相:正己烷-異丙醇(正己烷:異丙醇體積比=75:25);
[0041] 柱溫：25°C;
[0042] 流速:0.5mL/min;
[0043] 進(jìn)樣體積：20yL;
[0044] 檢測(cè)波長(zhǎng)：243nm;
[0045] 實(shí)驗(yàn)步驟
[0046] 分別取依折麥布對(duì)照品和依折麥布(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體對(duì)照品適量，加流動(dòng) 相溶解并定量稀釋制成每lmL中約含依折麥布、EZ-ZZ-309分別為0.5mg、5yg的混合溶液，作 為系統(tǒng)適用性溶液。取依折麥布適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每lmL約含0.5mg的溶液，作 為供試品溶液;精密量取供試品溶液lmL，置100mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為 對(duì)照溶液。量取系統(tǒng)適用性溶液20yL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，依折麥布峰和(R，R，S) 型的光學(xué)異構(gòu)體的分離度應(yīng)大于1.5。分別取供試品溶液和對(duì)照溶液20yL，按上述條件進(jìn)行 高效液相色譜分析，記錄色譜圖。按自身低濃度對(duì)照法計(jì)算(R，R，S)型光學(xué)異構(gòu)體的含量。
[0047] 結(jié)果見(jiàn)附圖1，圖中1號(hào)峰為依折麥布(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體，保留時(shí)間22.9min 左右;2號(hào)峰為依折麥布，保留時(shí)間29.8min左右?？梢钥闯鲈谠摋l件下依折麥布主峰和(R， R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體峰完全分離開(kāi)來(lái)。
[0048] 實(shí)施例2 [0049] 儀器與條件
[0050] 色譜柱:AS_H(Daicel，250mmX4.6mm，5ym);
[0051] 流動(dòng)相:正己烷-異丙醇(正己烷:異丙醇體積比=70:30);
[0052] 柱溫：25Γ;
[0053] 流速:0.5mL/min;
[0054] 進(jìn)樣體積：20yL;
[0055] 檢測(cè)波長(zhǎng)：243nm;
[0056] 實(shí)驗(yàn)步驟
[0057] 分別取依折麥布對(duì)照品和依折麥布(R，R，S)型的光學(xué)異構(gòu)體對(duì)照品適量，加流動(dòng) 相溶解并定量稀釋制成每lmL中約含依折麥布、EZ-ZZ-309分別為0.5mg、5yg的混合溶液，作 為系統(tǒng)適用性溶液。取依折