一種化妝品及其原材料的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本申請(qǐng)涉及化妝品技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種化妝品及其原材料的檢測(cè)方法。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]現(xiàn)階段，消費(fèi)者或者檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)化妝品及其原料進(jìn)行皮膚刺激性檢測(cè)，從而檢測(cè)化妝品的好壞。這種檢測(cè)一般是用皮膚斑貼試驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)從醫(yī)學(xué)檢測(cè)中的過敏源篩查檢測(cè)演變而來(lái)。皮膚斑貼試驗(yàn)因其實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，適用范圍廣，被大量用于化妝品及其原材料過敏性測(cè)試。
[0004]具體方法為:隨機(jī)尋找10名以上受試個(gè)體，個(gè)體要求成年健康、無(wú)特殊過敏史、無(wú)重大疾病史，性別不限，以女性為主。用生理鹽水反復(fù)清洗受試個(gè)體前臂內(nèi)側(cè)，手腕上部。將0.5ml受試物均勻涂抹在斑貼紗布上，再將其貼敷在受試個(gè)體手腕上部，每個(gè)個(gè)體做兩次平行試驗(yàn)，同時(shí)以生理鹽水作為對(duì)照試驗(yàn)，并在貼敷后6小時(shí)、12小時(shí)各觀察一次。根據(jù)觀察結(jié)果，將刺激反應(yīng)分為五個(gè)等級(jí):1.“一”陰性:受試部位無(wú)任何反應(yīng)；2.“土”可疑:皮膚出現(xiàn)瘙癢或輕微發(fā)紅；3.“ + ”弱陽(yáng)性:皮膚出現(xiàn)單純紅斑、瘙癢；4.“++”中度陽(yáng)性:皮膚出現(xiàn)水腫性紅斑、丘疹；5.“+++”強(qiáng)陽(yáng)性:皮膚出現(xiàn)顯著紅斑、丘疹及水皰。最后將所有受試個(gè)體的反應(yīng)現(xiàn)狀進(jìn)行統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)，從而得出受試物刺激強(qiáng)弱。
[0005]但是，該方法以人體為直接實(shí)驗(yàn)對(duì)象，實(shí)驗(yàn)有潛在健康風(fēng)險(xiǎn)，不易做重復(fù)性測(cè)試。
[0006]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N化妝品的檢測(cè)方法，解決現(xiàn)有技術(shù)中化妝品檢測(cè)以人體未實(shí)驗(yàn)對(duì)象，存在安全風(fēng)險(xiǎn)且不易重復(fù)測(cè)試的問題。
[0008]—種化妝品及其原材料的檢測(cè)方法，包括以下步驟:取若干動(dòng)物受精蛋胚，在蛋殼的氣室端打開一個(gè)開口，向開口內(nèi)加入生理鹽水，再撕掉氣室膜，露出絨毛尿囊膜；將四氟環(huán)貼合固定在動(dòng)物受精蛋胚的絨毛尿囊膜上，處于四氟環(huán)的環(huán)內(nèi)部分形成受試區(qū)域；取待測(cè)樣品若干，加入到受試區(qū)域，然后在動(dòng)物受精蛋胚外側(cè)覆蓋一層保鮮膜，再將動(dòng)物受精蛋胚置于孵箱中；一段時(shí)間后，將動(dòng)物受精蛋胚從孵箱中取出，觀察并比較環(huán)內(nèi)與環(huán)外絨毛尿囊膜上血管的變化，確定損傷等級(jí)，根據(jù)損傷等級(jí)確定待測(cè)樣品的刺激等級(jí)。
[0009]優(yōu)選的，所述觀察并比較環(huán)內(nèi)與環(huán)外絨毛尿囊膜上血管的變化，確定損傷等級(jí)，具體為:觀察并比較環(huán)內(nèi)與環(huán)外絨毛尿囊膜上血管的變化，確定血管效應(yīng)值，血管效應(yīng)值對(duì)應(yīng)如下:血管流動(dòng)正常，無(wú)血流出，血管效應(yīng)值為O ;血管內(nèi)無(wú)血流，血管效應(yīng)值為I ;血管充血或血流增加，血管效應(yīng)值為2 ;環(huán)內(nèi)有1-10個(gè)出血點(diǎn)，血管效應(yīng)值為3 ;環(huán)內(nèi)出血點(diǎn)大于10個(gè)或者出血點(diǎn)不可數(shù)但覆蓋面積小于環(huán)內(nèi)面積的1/8，血管效應(yīng)值為4 ;環(huán)內(nèi)出血點(diǎn)不可數(shù)但覆蓋面積大于或等于環(huán)內(nèi)面積的1/8且小于環(huán)內(nèi)面積的1/4，或者環(huán)內(nèi)沒有出血點(diǎn)但紅暈覆蓋面積小于環(huán)內(nèi)面積的1/4，血管效應(yīng)值為5 ;環(huán)內(nèi)出血點(diǎn)不可數(shù)但覆蓋面積大于或等于環(huán)內(nèi)面積的1/4且小于環(huán)內(nèi)面積的1/2，或者環(huán)內(nèi)沒有出血點(diǎn)但紅暈覆蓋面積大于或等于環(huán)內(nèi)面積的1/4且小于環(huán)內(nèi)面積的1/2，血管效應(yīng)值為6 ;環(huán)內(nèi)大量出血，出血面積大于或等于環(huán)內(nèi)面積的1/2且小于環(huán)內(nèi)面積的3/4，血管效應(yīng)值為7 ;環(huán)內(nèi)大量出血，出血面積大于或等于環(huán)內(nèi)面積的3/4，或者形成結(jié)痂，血管效應(yīng)值為8。
[0010]優(yōu)選的，所述根據(jù)損傷等級(jí)確定待測(cè)樣品的刺激等級(jí)，具體為:求取血管效應(yīng)值的平均值，根據(jù)平均值確定待測(cè)樣品的刺激等級(jí)，刺激等級(jí)對(duì)應(yīng)如下平均值=0，為無(wú)刺激；O<平均值< 2，為應(yīng)激性刺激；2 <平均值< 3，為輕微刺激；3 <平均值< 5，為中度刺激；平均值> 5，為重度刺激。
[0011 ] 優(yōu)選的，動(dòng)物受精蛋胚為雞胚、鴨胚和鵝胚中的一種。
[0012]優(yōu)選的，待測(cè)樣品包括甲基氯異噻唑啉酮、杰馬液、十二烷基硫酸鈉、尼泊金甲酯丙酯和苯氧乙醇中的至少一種。
[0013]優(yōu)選的，孵箱環(huán)境為溫度37.5°C ±0.5°C，相對(duì)濕度50%_60%，孵化時(shí)間不低于30分鐘。
[0014]優(yōu)選的，取用至少十個(gè)動(dòng)物受精蛋胚。
[0015]本申請(qǐng)的有益效果是，由于本申請(qǐng)使用動(dòng)物受精蛋胚作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，不會(huì)作用到人體，就降低了安全風(fēng)險(xiǎn)，也便于重復(fù)測(cè)試。
[0016]同時(shí)，待測(cè)樣品直接作用于絨毛尿囊膜，實(shí)驗(yàn)更加真實(shí)、準(zhǔn)確。
[0017]
【附圖說明】
[0018]圖1為血管效應(yīng)值為O時(shí)絨毛尿囊膜血管的狀態(tài)圖；
圖2為血管效應(yīng)值為I時(shí)絨毛尿囊膜血管的狀態(tài)圖；
圖3為血管效應(yīng)值為2時(shí)絨毛尿囊膜血管的狀態(tài)圖；
圖4為血管效應(yīng)值為3時(shí)絨毛尿囊膜血管的狀態(tài)圖；
圖5為血管效應(yīng)值為4時(shí)絨毛尿囊膜血管的狀態(tài)圖；
圖6為血管效應(yīng)值為5時(shí)絨毛尿囊膜血管的狀態(tài)圖；
圖7為血管效應(yīng)值為6時(shí)絨毛尿囊膜血管的狀態(tài)圖；
圖8為血管效應(yīng)值為7時(shí)絨毛尿囊膜血管的狀態(tài)圖；
圖9為血管效應(yīng)值為8時(shí)絨毛尿囊膜血管的狀態(tài)圖。
[0019]
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面通過【具體實(shí)施方式】結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0021]由于絨毛尿囊膜血管與人眼結(jié)膜血管組成較為相似，而人體粘膜，如眼結(jié)膜、生殖器、嘴唇、肛門、鼻腔等，對(duì)外界刺激的敏感度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于皮膚的敏感度，尤其是人眼結(jié)膜的敏感度最高，因此，本申請(qǐng)使用未孵化的動(dòng)物受精蛋胚，動(dòng)物受精蛋胚可選用雞胚、鴨胚、鵝胚等中的一種，這種實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為真實(shí)、準(zhǔn)確。
[0022]如圖1所示，將四氟環(huán)20貼合固定在動(dòng)物受精蛋胚上，處于四氟環(huán)20的環(huán)內(nèi)部分形成受試區(qū)域11，取待測(cè)樣品加入到受試區(qū)域11，從而在受試區(qū)域11進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其中，四氟環(huán)20可以選用聚四氟乙烯環(huán)、四氟墊、四氟密封圈或四氟帶。
[0023]觀察并比較環(huán)內(nèi)與環(huán)外絨毛尿囊膜上血管的變化，確定每個(gè)雞胚的血管效應(yīng)值，環(huán)內(nèi)絨毛尿囊膜上血管的變化與血管效應(yīng)值對(duì)應(yīng)如下:
如圖1所示，血管流動(dòng)正常，無(wú)血流出，血管效應(yīng)值為O。圖2中，血管內(nèi)無(wú)血流，血管效應(yīng)值為I。圖3中，血管有充血或血流增加的現(xiàn)象，血管效應(yīng)值為2。圖4中，環(huán)內(nèi)有1-10個(gè)出血點(diǎn)31，血管效應(yīng)值為3。圖5中，環(huán)內(nèi)出血點(diǎn)31大于10個(gè)，血管效應(yīng)值為4。圖6中，環(huán)內(nèi)出血點(diǎn)31的數(shù)量難以統(tǒng)計(jì)但覆蓋面積大于或等于環(huán)內(nèi)面積的1/8且小于環(huán)內(nèi)面積的1/4，血管效應(yīng)值為5。圖7中，環(huán)內(nèi)出血點(diǎn)31數(shù)量更多，具體也不可數(shù)，但覆蓋面積大于或等于環(huán)內(nèi)面積的1/4且小于環(huán)內(nèi)面積的1/2，血管效應(yīng)值為6。圖8中，環(huán)內(nèi)已大量出血，形成紅暈32，出血面積大于或等于環(huán)內(nèi)面積的1/2且小于環(huán)內(nèi)面積的3/4，血管效應(yīng)值為7。圖9中，環(huán)內(nèi)出血量更大，出血面積已大于或等于環(huán)內(nèi)面積的3/4，血管效應(yīng)值為8。
[0024]根據(jù)血管效應(yīng)值的平均值確定待測(cè)樣品的刺激等級(jí)。刺激等級(jí)對(duì)應(yīng)如下:平均值=0，為無(wú)刺激<平均值< 2，為應(yīng)激性刺激；2 <平均值< 3，為輕微刺激；3 <平均值< 5，為中度刺激；平均值> 5，為重度刺激。
[0025]實(shí)施例1:
取10個(gè)孵化10天的雞胚，用手捻鉆在雞胚氣室端上開一個(gè)小孔，進(jìn)而用鋸齒鑷小心擴(kuò)大雞胚上的小口，最終將開口擴(kuò)大至整個(gè)氣室區(qū)域。然后將生理鹽水滴滿整個(gè)氣室端，充分潤(rùn)濕氣室膜，然后用鋸齒鑷小心撕掉氣室膜，使雞胚絨毛尿囊膜CAM暴露出來(lái)。
[0026]將四氟環(huán)20貼合固定在CAM上，CAM處于四氟環(huán)20的環(huán)內(nèi)部分形成受試區(qū)域11。將紅石榴面膜用無(wú)菌水制成透明懸液，取一定量的懸液加入到受試區(qū)域11。然后在雞胚外側(cè)覆蓋一層保鮮膜，防止雞胚水分流失，并將雞胚置于孵箱環(huán)境中，孵箱環(huán)境為溫度37 °C，相對(duì)濕度50%。
[0027]—段時(shí)間后，將雞胚從孵箱中取出，觀察并比較環(huán)內(nèi)與環(huán)外絨毛尿囊膜上血管的變化，測(cè)得10個(gè)雞胚的血管效應(yīng)值分別為:0，O, O, O, O, O, O, O, O, O0去除一個(gè)最高值和一個(gè)最低值之后，求得平均值為0，則紅石榴面膜對(duì)人體無(wú)刺激，對(duì)人體皮膚無(wú)害。
[0028]實(shí)施例2:
取5個(gè)孵化10天左右的雞胚，用手捻鉆在雞胚氣室端上開一個(gè)小孔，進(jìn)而用鋸齒鑷小心擴(kuò)大雞胚上的小口，最終將開口擴(kuò)大至整個(gè)氣室區(qū)域。然后將生理鹽水滴滿整個(gè)氣室端，充分潤(rùn)濕氣室膜，然后用鋸齒鑷小心撕掉氣室膜，使雞胚絨毛尿囊膜CAM暴露出來(lái)。
[0029]將四氟環(huán)20貼合固定在CAM上，CAM處于四氟環(huán)20的環(huán)內(nèi)部分形成受試區(qū)域11。將“百雀羚水嫩倍現(xiàn)盈彩精華面膜”用無(wú)菌水制成透明懸液，取一定量的懸液加入到受試區(qū)域11。然后在雞胚外側(cè)覆蓋一層保鮮膜，防止雞胚水分流失，并將雞胚置于孵箱環(huán)境中，孵箱環(huán)境為溫度37°C，相對(duì)濕度50%。
[0030]—段時(shí)間后，將雞胚從孵箱中取出，觀察并比較環(huán)內(nèi)與環(huán)外絨毛尿囊膜上血管的變化，測(cè)得10個(gè)雞胚的血管效應(yīng)值分別為:5，6，6，6，3。去除一個(gè)最高值和一個(gè)最低值之后，求得平均值為4.6，則“百雀羚水嫩倍現(xiàn)盈彩精華面膜”對(duì)人體為中度刺激。
[0031]實(shí)施例3:
取5個(gè)孵化10天左右的雞胚，用手捻鉆在雞胚氣室端上開一個(gè)小孔，進(jìn)而用鋸齒鑷小心擴(kuò)大雞胚上的小口，最終將開口擴(kuò)大至整個(gè)氣室區(qū)域。然后將生理鹽水滴滿整個(gè)氣室端，充分潤(rùn)濕氣室膜，然后用鋸齒鑷小心撕掉氣室膜，使雞胚絨毛尿囊膜CAM暴露出來(lái)。
[0032]將四氟環(huán)20貼合固定在CAM上，CAM處于四氟環(huán)20的環(huán)內(nèi)