本發(fā)明的基于木瓜蛋白酶比色檢測水中Hg2+的檢測方法，包括W下步驟：
[0041] (1)納米金顆粒的制備：取lOOmL濃度為0.Ig/L的氯金酸溶液（溶劑為水）于電 爐上加熱至沸騰并保持沸騰狀態(tài)2min，然后一邊攬拌沸騰的氯金酸溶液一邊快速加入6mL質(zhì)量濃度為lOg/L的巧樣酸S鋼溶液，攬拌速度為lOOOr/min，攬拌過程中持續(xù)加熱并保持 攬拌速度不變，直至所得溶液顏色由初始的淡黃色轉(zhuǎn)為清亮酒紅色后停止加熱，繼續(xù)攬拌 15min，在室溫（一般指25°C~35°C)下冷卻后，制得含納米金顆粒的溶液。
[0042] (2)制備P-PDCA-AuNPs溶液：用超純水稀釋上述步驟（1)中制備的含納米金顆粒 的溶液，調(diào)節(jié)溶液中納米金顆粒的濃度為2. 12nM;取2mL稀釋后的納米金顆粒溶液（抑值 6. 0)，加入0. 2血濃度為1. 0X10 7M的木瓜蛋白酶溶液，振蕩30min后，在120(K)r/min的轉(zhuǎn) 速下離屯、重溶，在避光條件下靜置12小時(shí)。然后加入0. 2血濃度為5. 0X10 4M的PDCA溶 液，振蕩30min后在避光條件下靜置6小時(shí)，得到制備好的P-PDCA-AuNPs溶液。
[00創(chuàng)按照步驟似同樣的方法制備P-PDCA-AuNPs溶液，其中木瓜蛋白酶溶液的摩爾濃 度分別為 1. 0X10 5m(編號a)、1. 0X10 6m(編號b)、1. 0X10 7m(編號C)、1. 0X10 %(編號 d)0
[0044] (3)分別向上述溶液中加入0.2血濃度為ImM的Hg21 容液，形成反應(yīng)系統(tǒng)并啟動 反應(yīng)，反應(yīng)過程中抑為6. 0。反應(yīng)15分鐘后，檢測各組體系的紫外可見吸收光譜，圖1為本 實(shí)施例的紫外光譜圖，圖2為根據(jù)圖1中Aew/Ae2。的比值繪制的柱狀圖。
[0045] 從圖1和圖2中可知：隨著木瓜蛋白酶濃度的減小，其吸收峰紅移得越大。并 且在520nm處的吸收峰有明顯降低，但當(dāng)濃度降到1.0X10 %時(shí)，其紅移程度反而不如 1. 0X10 7M。運(yùn)可能是因?yàn)楫?dāng)木瓜蛋白酶濃度太大時(shí)，納米金之間由于木瓜蛋白酶而相互連 接，發(fā)生等離子體共振現(xiàn)象而產(chǎn)生聚集，木瓜蛋白酶中的基團(tuán)無法與Hg2+結(jié)合從而紅移程 度較小，而當(dāng)濃度小時(shí)，木瓜蛋白酶中基團(tuán)過少，而無法將納米金顆粒之間的距離變小，從 而出現(xiàn)紅移變?nèi)醯默F(xiàn)象。所W，反應(yīng)體系初始成分中優(yōu)選1. 0X10 5m~1. 0X10 %的木瓜 蛋白酶溶液進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，其中1. 0X10 7m濃度為最優(yōu)選。
[0046] 實(shí)施例2 :
[0047] 一種本發(fā)明的基于木瓜蛋白酶比色檢測水中Hg2+的檢測方法，包括W下步驟： W4引 （1)按照實(shí)施例1的方法制得含納米金顆粒的溶液。
[0049] (2)制備P-PDCA-AuNPs溶液：用超純水稀釋上述步驟（1)中制備的含納米金顆 粒的溶液，調(diào)節(jié)溶液中納米金顆粒的濃度為2. 12nM。取9份體積均為2mL的稀釋后的納米 金溶液，分別置于溫度為10 °C、20 °C、30 °C、40 °C、50 °C、60 °C、70 °C、80 °C、90 °C的冰箱及水浴 鍋中。分別在每一份納米金溶液中加入0. 2mL濃度為1.OX10 7M的木瓜蛋白酶溶液，振蕩 30min后，在120(K)r/min的轉(zhuǎn)速下離屯、重溶，在避光條件下靜置12小時(shí)。然后加入0. 2血 濃度為5. 0X10 4M的PDCA溶液，振蕩30min后在避光條件下靜置6小時(shí)，得到制備好的 P-PDCA-AuNPs溶液。 陽化0] (3)分別向上述溶液中加入0. 2血濃度為ImM的Hg21 容液，形成反應(yīng)系統(tǒng)并啟動 反應(yīng)，反應(yīng)抑為6.0。反應(yīng)15分鐘后，檢測各組體系的紫外可見吸收光譜，檢測結(jié)果參見圖 3。 陽05U 如圖3所示，隨著溫度的升高，Aea/Ag2。的值也隨著升高，說明紅移程度加大，當(dāng)溫 度升到30°C時(shí)，紅移程度達(dá)到最大。60°C之后逐漸下降，90°C時(shí)降到最低。由此可W看出， 木瓜蛋白酶的溫度適應(yīng)范圍比較廣，最佳的范圍為30°C~60°C，而到90°C時(shí)，木瓜蛋白酶 開始失活，所WAew/As2。的值也下降。由此，反應(yīng)體系中初始溫度條件范圍為30°C~60°C， 優(yōu)選的最佳溫度為30 °C。 陽05引實(shí)施例3 :
[0053] 一種本發(fā)明的基于木瓜蛋白酶比色檢測水中Hg2+的檢測方法，包括W下步驟：
[0054] (1)按照實(shí)施例1的方法制得含納米金顆粒的溶液。 陽化引 似制備P-PDCA-AuNPs溶液：用超純水稀釋上述制備的步驟（1)中制備的含納米 金顆粒的溶液，調(diào)節(jié)溶液中納米金顆粒的濃度為2. 12nM;取2mL稀釋后的納米金溶液，加入 0. 2血濃度為1. 0X107M的木瓜蛋白酶溶液，振蕩30min后，在120(K)r/min的轉(zhuǎn)速下離屯、 重溶，在避光條件下靜置12小時(shí)得到混合溶液。取上述制備的混合溶液3份，加入0. 2mL 濃度分別為5X10 3m、5X10 4M、5. 0X10 5m的PDCA溶液，振蕩30min后在避光條件下靜置6 小時(shí)，得到制備好的P-PDCA-AuNPs溶液 1、P-PDCA-AuNPs溶液 2、P-PDCA-AuNPs溶液 3。
[0056] (3)并分別向上述P-PDCA-AuNPs溶液 1、P-PDCA-AuNPs溶液 2、P-PDCA-AuNPs溶 液3加入0. 2mL濃度為ImM的Hg21 容液，形成反應(yīng)系統(tǒng)并啟動反應(yīng)，反應(yīng)抑為6. 0。反應(yīng) 15分鐘后，檢測各組體系的紫外可見吸收光譜。
[0057] 檢測結(jié)果顯示：在不同濃度的PDCA加入后，P-PDCA-AuNPs溶液1、P-PDCA-AuNPs 溶液2、P-PDCA-AuNPs溶液3有些許顏色變化。P-PDCA-AuNPs溶液2的顏色變化更加明顯， 變?yōu)樗{(lán)色。P-PDCA-AuNPs溶液1和P-PDCA-AuNPs溶液3變成了紫藍(lán)色。紫外可見吸收光 譜也證明，P-PDCA-AuNPs溶液2的紅移更加明顯。由此，選擇濃度為5X10 4M的PDCA。 陽05引 實(shí)施例4 :
[0059] 一種本發(fā)明的基于木瓜蛋白酶比色檢測水中Hg2+的檢測方法，包括W下步驟：
[0060] (1)按照實(shí)施例1的方法制得含納米金顆粒的溶液。
[0061] (2)制備P-PDCA-AuNPs溶液：用超純水稀釋上述步驟（1)中制備的含納米金顆粒 的溶液，調(diào)節(jié)溶液中納米金顆粒的濃度為2. 12nM;取2mL稀釋后的納米金溶液，加入0. 2mL 濃度為1.OX10 7M的木瓜蛋白酶溶液，振蕩30min后，在120(K)r/min的轉(zhuǎn)速下離屯、重溶，在 避光條件下靜置12小時(shí)。然后加入0. 2血濃度為5. 0X10 4M的PDCA溶液，振蕩30min后 在避光條件下靜置6小時(shí)，得到制備好的P-PDCA-AuNPs溶液。
[0062] (3)取上述制備的P-PDCA-AuNPs溶液7份。向7份P-PDCA-AuNPs溶液中加入 0. 2血濃度分別為0. 01yM、0. 1yM、2yM、4yM、6yM、8yM、14yM的Hg2+溶液，形成反應(yīng)系 統(tǒng)并啟動反應(yīng)，反應(yīng)過程中抑為6.0。反應(yīng)15分鐘后，檢測各組體系的紫外可見吸收光譜。 圖4為本發(fā)明中不同濃度Hg2+的紫外-可見光譜圖；圖5為根據(jù)圖4中Ae?/As2。的比值繪 制的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0063] 從圖4可知：加入不同濃度的Hg2+得到的產(chǎn)物體系在520皿處的吸光度隨Hg2+ 濃度的增加而逐漸減小至穩(wěn)定，也因此證實(shí)了可W使用產(chǎn)物體系的紫外可見吸收光譜在 520nm處吸光度作為Hg2+的定量檢測指標(biāo)。 W64] 如圖5所示，通過測定一系列含不同摩爾濃度的Hg2+產(chǎn)物體系的紫外可見吸收光 譜，得出Hg21 容液中化2+的摩爾濃度與產(chǎn)物體系在520nm處吸光度之間呈線性關(guān)系的范圍 為0.OlyM~14yM，線性回歸方程為y= 0. 0252X+0. 1139 ;其中y為產(chǎn)物體系的紫外可 見吸收光譜中520nm處的吸光度，X為Hg2+溶液中化2+的含量（即摩爾濃度，單位yM)，相 關(guān)系數(shù)為0. 9959,并通過測量S次空白試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算得本檢測方法的檢出限為lOnM。 將檢出限lOnM代入上述線性回歸方程中，得到溶液中Hg2+的含量在檢出限時(shí)產(chǎn)物體系在 650nmW及520nm處吸光度的比值A(chǔ)ew/Ae2。為0. 114,可根據(jù)該吸光度定性判斷溶液中是否 含有化2+。
[0065] 當(dāng)待測溶液加入本發(fā)明的反應(yīng)體系中，所得產(chǎn)物體系在650nmW及520nm處吸光 度的比值A(chǔ)ew/Ae2。大于0. 114時(shí)即可定性判斷待測溶液中含有化2+，將產(chǎn)物體系在650皿W 及520nm處吸光度的比值A(chǔ)ee"/Ae2。代入上述線性回歸方程，即可計(jì)算得出待測溶液中化2+的 含量。
[0066] 實(shí)施例5 :
[0067] 一種本發(fā)明的基于木瓜蛋白酶比色檢測水中Hg2+的檢測方法，包括W下步驟：
[0068] (1)按照實(shí)施例1的方法制得含納米金顆粒的溶液。
[0069] (2)