振蕩管五次，使 血液中的凝結(jié)塊混勻。室溫（25°C)血凝結(jié)1小時，垂直放置。室溫下，用臨床離心機(jī)以 1，400-2, 000g離心SST管（真空采血管，BD公司）十分鐘。吸取血漿到已進(jìn)行標(biāo)記的0. 5ml 離心管中，同一血漿樣品50 y 1 -管，分裝多管。立即凍存血漿樣品于-80°C，避免反復(fù)凍 融。
[0059] 向裝有樣本的離心管中分別依次加入lOOyl含有TSP(lmg/ml)的重水溶液、 200 y 1磷酸鹽緩沖液（0. 2M)以及300 y 1血漿，充分震蕩混勻后，13, OOOrpm離心10min。 取上清液加入5mm的核磁共振管中待用。
[0060] 二、核磁檢測
[0061] 1、核磁前預(yù)處理
[0062] (1)重水純化
[0063] 向編號后的樣本離心管中分別依次加入100y 1 TSP的重水溶液（lmg/ml)， 200 y 1磷酸鹽緩沖液（0. 2M)，以及300 y 1血清，充分震蕩混勻后，13, OOOrpm離心10min。 取上清液加入5mm核磁共振管中待用。
[0064] (2)穩(wěn)定樣品中的血漿代謝產(chǎn)物。
[0065] 2、HNMR譜圖的獲得
[0066] 采用馳豫編輯脈沖（CPMG脈沖）序列：-RD-90 ° -(-180 ° -) n-ACQ，采集 血漿樣本的數(shù)據(jù)，觀測血漿中的小分子代謝產(chǎn)物。CPMG實(shí)驗(yàn)的譜寬為8000Hz，采樣點(diǎn)數(shù)為 32k，采樣時間為2s，累加次數(shù)64次，為400s，2n為320ms，弛豫延遲為2s，其間采用低功率 脈沖對水峰進(jìn)行預(yù)飽和。以乳酸甲基信號雙峰的左側(cè)峰定為1. 33。在對自由感應(yīng)衰減（free induction decay，F(xiàn)ID)信號數(shù)據(jù)進(jìn)行填零，加上0.5Hz的線增寬因子后進(jìn)行傅立葉變換轉(zhuǎn) 得HNMR譜圖（如圖1所示，其中，圖la為健康人血漿代謝產(chǎn)物HNMR圖譜；圖lb為兒童活 動性結(jié)核病血漿代謝產(chǎn)物HNMR圖譜）。
[0067] 3、HNMR譜圖的標(biāo)準(zhǔn)化處理和分析
[0068] 對CPMG數(shù)據(jù)處理，是將0. 4~4. 4范圍內(nèi)的譜按照每段0.0 lppm進(jìn)行分段積分。 將積分按每張譜的總積分強(qiáng)度歸一化。數(shù)據(jù)采用平均中心化（mean centering)或Pareto 標(biāo)度化（Pareto scaling)進(jìn)行預(yù)處理之后米用 PCA(Principal Component Analysis)分 析。分析結(jié)果如圖2(圖2a為健康兒童與活動性結(jié)核病患兒血漿核磁共振氫譜（CPMG)的 PCA分析樣本分布圖；圖2b為其PCA分析的三維立體圖所示）。
[0069] 4、檢測結(jié)果
[0070] 運(yùn)用T檢驗(yàn)P值和受試者接受曲線（R0C)的方法來評價每個峰的相對重要性。具 體差異代謝產(chǎn)物見表1。根據(jù)HNMR的核磁代謝產(chǎn)物的特征信號得出具體差異代謝產(chǎn)物的歸 屬信息，將這些歸屬信息再與報(bào)道的信息核對，得出差異化學(xué)位移的物質(zhì)歸屬，結(jié)果如表2 所示。每一個化學(xué)位移都對應(yīng)一個峰下面積，根據(jù)峰面積計(jì)算得到每一個差異化學(xué)位移對 應(yīng)的正常組均值和結(jié)核病組均值（均值代表該化學(xué)位移所代表的物質(zhì)在血漿中的相對含 量）。
[0071] 表1、健康組與活動性結(jié)核病組之間的差異化學(xué)位移
[0072]
[0073] 表2、健康組與活動性結(jié)核病組的差異化學(xué)位移的物質(zhì)歸屬
[0074]
[0076] 根據(jù)表2中的十個化學(xué)位移代表的差異產(chǎn)物建立了一種檢測兒童活動性結(jié)核病 的方法。具體檢測方法如下：
[0077] 1、對待測兒童的血漿樣本中十個差異產(chǎn)物所代表的十個化學(xué)位移： 0? 82-0. 88ppm、l. 19-1. 20ppm、l. 25-1. 30ppm、l. 32-1. 34ppm、4. 11-4. 13ppm、 1. 46-1. 48ppm、2. 03-2. 04ppm、2. 22-2. 23ppm、3. 20-4. OOppm 和 3. 56ppm 進(jìn)行核磁檢 測，分別得到待測兒童在 〇? 82-0. 88ppm、1. 19-1. 20ppm、1. 25-1. 30ppm、1. 32-1. 34ppm、 4. 11-4. 13ppm、l. 46-1. 48ppm、2. 03-2. 04ppm、2. 22-2. 23ppm、3. 20-4. OOppm 和 3. 56ppm 的 化學(xué)位移峰對應(yīng)的峰下面積，并根據(jù)峰下面積計(jì)算得到十個差異產(chǎn)物的相對含量。
[0078] 2、將待測兒童血漿中十個差異產(chǎn)物的相對含量分別與正常兒童對應(yīng)的差異產(chǎn)物 的相對含量進(jìn)行比較，判斷待測兒童是否患有活動性結(jié)核?。?br>[0079]若待測兒童血衆(zhòng)中 1. 19-1. 20ppm、1. 32-1. 34ppm、4. 11-4. 13ppm、2. 03-2. 04ppm、 2. 22-2. 23ppm和3. 56ppm的化學(xué)位移對應(yīng)的差異產(chǎn)物的相對含量比正常兒童高，且 0? 82-0. 88ppm、l. 25-1. 30ppm、l. 46-1. 48ppm 和 3. 20-4. OOppm 的化學(xué)位移對應(yīng)的差異產(chǎn)物 的相對含量比正常兒童低，則表明待測兒童患有兒童活動性結(jié)核?。?br>[0080]若待測兒童血衆(zhòng)中 1. 19-1. 20ppm、1. 32-1. 34ppm、4. 11-4. 13ppm、2. 03-2. 04ppm、 2. 22-2. 23ppm和3. 56ppm的代謝產(chǎn)物的相對含量沒有比正常兒童高，或0? 82-0. 88ppm、 1. 25-1. 30ppm、l. 46-1. 48ppm和3. 20-4. OOppm的代謝產(chǎn)物的相對含量沒有比正常兒童低， 則表明待測兒童不患有兒童活動性結(jié)核病。
[0081] 實(shí)施例2、檢測兒童活動性結(jié)核病的方法的應(yīng)用
[0082] 選擇42例血漿樣本，其中22例用于模型訓(xùn)練，包括活動性結(jié)核病患兒11例，健康 兒童11例；其余20例用于模型測試，包括健康兒童7例，活動性結(jié)核病患兒13例?；顒?性結(jié)核病患兒均經(jīng)臨床診斷確定。所有的血漿樣本均在清晨空腹下抽取，分離血漿后儲存 在-80低溫冰箱中。
[0083] 1、用實(shí)施例1中的檢測兒童活動性結(jié)核病的方法對22例樣本（活動性結(jié)核病患 兒11例，健康兒童11例）進(jìn)行訓(xùn)練。
[0084] 結(jié)果表明：該方法的正確率為100%，采用隨機(jī)選擇方法進(jìn)行交叉驗(yàn)證，驗(yàn)證結(jié)果 為100%，說明該方法具有很好的預(yù)測能力，且有較高的特異性和敏感性。
[0085] 2、模型訓(xùn)練完成后，接著用該方法對20個驗(yàn)證樣本進(jìn)行檢測。
[0086] 結(jié)果表明：7例健康兒童組均判斷正確，13例兒童活動性結(jié)核病組均判斷正確，正 確率為100%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于診斷兒童活動性結(jié)核病的產(chǎn)品，包括記載有如下內(nèi)容的診斷卡：對 待測兒童血衆(zhòng)進(jìn)行核磁檢測，分別得到〇? 82-0. 88ppm、L19-1. 20ppm、L25-1. 30ppm、 I. 32-1. 34ppm、4. 11-4. 13ppm、I. 46-1. 48ppm、2. 03-2. 04ppm、2. 22-2. 23ppm、3. 20-4.OOppm 和3. 56ppm的化學(xué)位移代表的差異產(chǎn)物的相對含量； 若 1. 19-1. 20ppm、l. 32-1. 34ppm、4. 11-4. 13ppm、2. 03-2. 04ppm、2. 22-2. 23ppm和 3. 56ppm的化學(xué)位移代表的差異產(chǎn)物的相對含量均比正常兒童高，且0. 82-0. 88ppm、 L25-1. 30ppm、L46-1. 48ppm和3. 20-4.OOppm的化學(xué)位移代表的差異產(chǎn)物的相對含量均 比正常兒童低，則所述待測兒童為或候選為活動性結(jié)核病患者； 若 1. 19-1. 20ppm、l. 32-1. 34ppm、4. 11-4. 13ppm、2. 03-2. 04ppm、2. 22-2. 23ppm和 3. 56ppm的化學(xué)位移代表的差異產(chǎn)物的相對含量不是均比正常兒童高，或