一種鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種分析方法，具體地說，是固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合同位素峰形校 正檢索技術(shù)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子，屬于化學(xué)分析領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 鉤吻（Gelsemium elegans)又名野葛、胡蔓藤、斷腸草，是馬錢科、鉤吻屬植物胡蔓 藤，多年生常綠藤本植物。鉤吻是一種重要的中藥藥材，含有鉤吻堿、鉤吻堿子等多種生物 堿。有破積拔毒、祛瘀止痛、殺蟲止癢；鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜；抗炎、散瞳、抗腫瘤的功效，主要用于醫(yī) 治疥癩、濕瘆、瘰疬、癰腫、疔瘡、跌打損傷、風(fēng)濕痹痛、神經(jīng)痛等病癥 2]。鉤吻主要分布于浙 江、福建、湖南、廣東、廣西、貴州、云南等省。同時鉤吻的毒性很大，被認(rèn)為是世界上最毒的 植物之一，近年來，兩廣地區(qū)時會發(fā)生因誤食鉤吻而中毒致死的事件，呈逐年攀升趨勢，因 此，研宄用于鉤吻植物鑒定和司法鑒定的分析方法是有其必要性。鉤吻的分析方法目前有 快速試劑檢測法，液液萃取-薄層鑒別法（TLC)和超聲提取氣質(zhì)聯(lián)用法，但其分析方法耗時 費(fèi)力，純化效果和分析的靈敏度不夠理想，為分析工作帶來一定的難度。
[0003] 固相萃?。⊿PE)是對樣品富集的一種有效方法，具有很高的選擇性，被廣泛應(yīng)用 于藥物、生物、食品等樣品的分析。
[0004] 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，能對汽化后的目標(biāo)物進(jìn)行分離，并獲得其質(zhì)譜譜圖，起到 一定的定性作用。
[0005] 同位素峰型校正檢索技術(shù)能通過已知的校正物質(zhì)，對未知物的精確分子質(zhì)量和同 位素峰形進(jìn)行校正匹配，在低分辨率質(zhì)譜上實(shí)現(xiàn)對分子式的識別。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述問題，本發(fā)明的目的是提供建立固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用并結(jié)合同位素峰形 檢索技術(shù)（SPE-GC/MS-CLIPS)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子。
[0007] 本發(fā)明提供的的技術(shù)方案是這樣的：
[0008] -種鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的分析方法，采用固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合同位 素峰形校正檢索技術(shù)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子。
[0009] 進(jìn)一步的，上述的鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的分析方法，依次包括下述步驟：
[0010] 1)制備供試液
[0011] 11)稱取粉碎后樣品l.〇g，放入IOOmL錐形瓶中，加入20mL 1 %鹽酸，超聲提取 20min，過濾；
[0012] 12)凈化依次用3mL甲醇和3mL水活化PCX固相萃取柱，準(zhǔn)確移取5mL濾液上柱， 再用3mL水和3mL甲醇淋洗固相萃取柱，抽干，用5mL 5%氨化甲醇溶液洗脫，收集洗脫液， 洗脫液于40°C下氮吹至干，ImL丙酮定容，作為供試液；
[0013] 2)測定
[0014] 將步驟1)制備的供試液上氣質(zhì)聯(lián)用儀測定，鉤吻堿子和鉤吻堿的保留時間分別 是 15min 和 17min ;
[0015] 3)與標(biāo)準(zhǔn)譜圖的匹配結(jié)果
[0016] 鉤吻堿與NIST 08標(biāo)準(zhǔn)譜庫中鉤吻堿匹配度為94. 4%，鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖能與 文獻(xiàn)中鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖高度相似；
[0017] 4)同位素峰形校正檢索技術(shù)識別目標(biāo)物的精確分子質(zhì)量
[0018] 先選取全氟三丁胺的已知離子生成校正函數(shù)，再利用該校正函數(shù)校正目標(biāo)物精 確分子質(zhì)量和同位素峰形，從而獲得其分子式，保留時間為15min的目標(biāo)物分子式檢索首 位為C 2tlH22N2O,與鉤吻堿子的分子式一致；保留時間為17min的目標(biāo)物分子式檢索首位為 C2tlH22N2O2，與鉤吻堿的分子式一致。
[0019] 進(jìn)一步的，上述的鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的分析方法，所述的色譜條件為：色 譜柱：HP-5MS 0. 25_X30mX0. 25 μπι石英毛細(xì)管柱；載氣：高純He，流速：1. 2mL .rnirT1,程 序升溫：初始溫度為150°C，保持2min，然后KTC · min-1升至280°C，保持4min，進(jìn)樣口溫 度：280°C。分流進(jìn)樣，分流比為50:1，進(jìn)樣量為l.OyL。
[0020] 進(jìn)一步的，上述的鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的分析方法，所述的質(zhì)譜條件為：離 子源為電子轟擊源7〇 ev ;離子源溫度230°C，接口溫度280°C，四級桿溫度150°C，質(zhì)量范圍 m/z 40~350,采樣模式：原始掃描。以全氟三丁胺標(biāo)準(zhǔn)品為外標(biāo)對質(zhì)譜進(jìn)行校正。
[0021] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，Masswork?利用CLIPS技術(shù)可同時得到鉤吻堿子和鉤吻堿的精 確相對質(zhì)量數(shù)和同位素峰形，在低分辨率的單四極桿質(zhì)譜儀上實(shí)現(xiàn)了對精確質(zhì)量數(shù)的測 定，其質(zhì)量精度已經(jīng)接近了普通的高分辨質(zhì)譜，與固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合所得到的質(zhì)譜 譜圖，可相互印證確證結(jié)果。為鉤吻的植物鑒定和鉤吻中毒司法鑒定工作提供了有力的支 持。
【附圖說明】
[0022] 圖1鉤吻供試液的總離子流圖；
[0023] 圖2鉤吻堿和鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖；
[0024] 圖3兩個目標(biāo)物的同位素峰形校正檢索結(jié)果；
[0025] 圖4酸水直接提取（A)，PCX固相萃?、呛虲18固相萃?。–)富集凈化效果比 較；
[0026] 圖5液相色譜串聯(lián)四級桿飛行時間質(zhì)譜儀采集的總離子流圖；
[0027] 圖6目標(biāo)物的質(zhì)譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制，任 何人在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)所做的有限次的修改仍在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)。
[0029] 實(shí)施例1
[0030] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0031] GC7890A/5975C氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國Agilent公司產(chǎn)品），配有NIST 08質(zhì)譜解析軟 件；Masswork?質(zhì)譜解析軟件（美國Cerno BioScience公司產(chǎn)品）；LC1290/QT0F6550液相 色譜串聯(lián)四級桿飛行時間質(zhì)譜儀（美國Agilent公司產(chǎn)品）；超聲波清洗器。
[0032] 鉤吻生藥采自梧州市郊外，經(jīng)梧州食品藥品檢驗(yàn)所鑒定為馬錢科萌蔓藤植物；PCX 固相萃取小柱（天津博納艾杰爾科技有限公司）；丙酮（HPLC級，美國Fisher公司），其他 試劑均為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)ELGA PURELAB ClassicUVF 凈化系統(tǒng)過濾的去離子水。
[0033] 2實(shí)驗(yàn)部分
[0034] 2. 1色譜條件色譜柱：HP-5MS 0. 25_X30mX0. 25μπι石英毛細(xì)管柱；載氣：高 純He，流速：1. 2mL · min-1，程序升溫：初始溫度為150°C，保持2min，然后KTC · min-1升至 280°C，保持4min，進(jìn)樣口溫度：280°C。分流進(jìn)樣，分流比為50:1，進(jìn)樣量為1.0 μ L。
[0035] 2. 2質(zhì)譜條件離子源為電子轟擊源（EI) 70ev ;離子源溫度230°C，接口溫度280°C， 四級桿溫度150°C，質(zhì)量范圍m/z 40~350,采樣模式：原始掃描。以全氟三丁胺標(biāo)準(zhǔn)品為 外標(biāo)對質(zhì)譜進(jìn)行校正。
[0036] 2. 3供試液的制備
[0037] 2. 3. 1提取稱取粉碎后樣品l.Og，放入IOOmL錐形瓶中，加入20mL 1%鹽酸，超聲 提取20min，過濾。
[0038] 2. 3. 2凈化依次用3mL甲醇和3mL水活化PCX固相萃取柱，準(zhǔn)確移取5mL濾液上 柱，再用3mL水和3mL甲醇淋洗固相萃取柱，抽干，用5mL 5%氨化甲醇溶液洗脫，收集洗脫 液，洗脫液于40°C下氮吹至干，ImL丙酮定容，作為供試液。
[0039] 2. 4測定結(jié)果
[0040] 供試液上氣質(zhì)聯(lián)用儀測定，鉤吻堿子和鉤吻堿的保留時間分別是15min和17min。 其總離子流圖（TIC)見圖1，兩個目標(biāo)峰的質(zhì)譜譜圖見圖2。
[0041] 2. 5與標(biāo)準(zhǔn)譜圖的匹配結(jié)果
[0042] 鉤吻堿與NIST 08標(biāo)準(zhǔn)譜庫中鉤吻堿（Gelsemine)匹配度為94. 4%，結(jié)果見表1。 而因 NIST 08標(biāo)準(zhǔn)譜庫中未收載鉤吻堿子該物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)譜圖，故鉤吻堿子未能與NIST 08 標(biāo)準(zhǔn)譜庫匹配結(jié)果。但鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖能與文獻(xiàn)中鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖高度相似。
[0043] 表1鉤吻堿與NIST 08標(biāo)準(zhǔn)譜庫的匹配信息
[0044]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的分析方法，其特征在于，采用固相萃取-氣質(zhì)聯(lián) 用結(jié)合同位素峰形校正檢索技術(shù)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的分析方法，其特征在于，依次 包括下述步驟： 1) 制備供試液 11) 稱取粉碎后樣品l.Og，放入IOOmL錐形瓶中，加入20mL 1%鹽酸，超聲提取20min， 過濾； 12) 凈化依次用3mL甲醇和3mL水活化PCX固相萃取柱，準(zhǔn)確移取5mL濾液上柱，再用 3mL水和3mL甲醇淋洗固相萃取柱，抽干，用5mL 5%氨化甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫 液于40°C下氮吹至干，ImL丙酮定容，作為供試液； 2) 測定 將步驟1)制備的供試液上氣質(zhì)聯(lián)用儀測定，鉤吻堿子和鉤吻堿的保留時間分別是 15min 和 17min ; 3) 與標(biāo)準(zhǔn)譜圖的匹配結(jié)果 鉤吻堿與NIST 08標(biāo)準(zhǔn)譜庫中鉤吻堿匹配度為94. 4%，鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖能與文獻(xiàn) 中鉤吻堿子的質(zhì)譜譜圖高度相似； 4) 同位素峰形校正檢索技術(shù)識別目標(biāo)物的精確分子質(zhì)量 先選取全氟三丁胺的已知離子生成校正函數(shù)，再利用該校正函數(shù)校正目標(biāo)物精確分 子質(zhì)量和同位素峰形，從而獲得其分子式，保留時間為15min的目標(biāo)物分子式檢索首位 為C2tlH 22N2O,與鉤吻堿子的分子式一致；保留時間為17min的目標(biāo)物分子式檢索首位為 C 2tlH22N2O2，與鉤吻堿的分子式一致。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的分析方法，其特征在于，所述 的色譜條件為：色譜柱：HP-5MS 0. 25mmX30mX0. 25ym石英毛細(xì)管柱；載氣：高純He，流 速：1. 2mL .mirT1,程序升溫：初始溫度為150°C，保持2min，然后10°C .miiT1升至280°C，保 持4min，進(jìn)樣口溫度：280°C。分流進(jìn)樣，分流比為50:1，進(jìn)樣量為LOy L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的分析方法，其特征在于，所述 的質(zhì)譜條件為：離子源為電子轟擊源70ev ;離子源溫度230°C，接口溫度280°C，四級桿溫度 150°C，質(zhì)量范圍m/z 40~350,采樣模式：原始掃描，以全氟三丁胺標(biāo)準(zhǔn)品為外標(biāo)對質(zhì)譜進(jìn) 行校正。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子的分析方法；旨在提供建立固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用并結(jié)合同位素峰形檢索技術(shù)(SPE-GC/MS-CLIPS)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子；其技術(shù)方案：采用固相萃取-氣質(zhì)聯(lián)用結(jié)合同位素峰形校正檢索技術(shù)分析鉤吻中的鉤吻堿和鉤吻堿子；屬于化學(xué)分析領(lǐng)域。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104807908
【申請?zhí)枴緾N201510238825
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 羅達(dá)龍, 劉慧妍
【申請人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2015年5月12日