和Re含量的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種心腦寧片中人參皂苷RgdP Re含量 的測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 心腦寧片為治療缺血性中風新型藥物，是根據(jù)標本兼治的治則而組方的。它是由 人參、當歸、川芎、黃芪制成，有補氣行血、活血化瘀、通脈搜絡(luò)之功。其中，人參皂苷Rg 1、Re 是方中人參的主要有效成分，為控制該藥品的質(zhì)量，保證療效，需對方中的人參皂苷Rgn Re 進行測定，以確保其含量在規(guī)定的范圍之內(nèi)。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中通常使用高效液相色譜法（HPLC)測定心腦寧片中人參皂苷Rgl、Re的 含量。但，中藥材中化合物組成復(fù)雜，次生代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)非常類似，并有較多的異構(gòu)體存在， 且活性成分含量往往較低，所以常規(guī)檢測方法難以適用。HPLC和其他分離方法相比具有柱 效高、靈敏度高、適用范圍廣等優(yōu)點，為中藥分析研宄工作提供了條件。近年來，應(yīng)用高效液 相色譜分析中藥成分已成為控制中藥質(zhì)量的重要手段之一。
[0004] 等度和梯度洗脫是高效液相色譜中的兩種基本操作模式。前者在分離的過程中流 動相的組成不隨時間的改變而發(fā)生變化，而后者則會發(fā)生變化，其中又以線性和階梯梯度 應(yīng)用最多。在實踐中，通過將等度、線性和階梯梯度進行組合，可衍生出無數(shù)種具有不同形 狀的梯度曲線，這就大大增加了分離條件選擇的靈活性。此外，梯度洗脫還可以縮短分析時 間以及壓縮譜帶的寬度，因此在復(fù)雜樣品如中藥等的分離中有著非常廣泛的應(yīng)用。
[0005] 盡管現(xiàn)有技術(shù)中已開發(fā)出了一些中藥材3種皂苷含量的高效液相色譜梯度洗脫 同時測定方法，例如：文獻2-高效液相色譜梯度洗脫法同時測定保心寧片中3種皂苷含量， 《藥物鑒定》，第20卷第1期；文獻3-HPLC測定益心舒膠囊中人參皂苷Rg 1, R^Rb1，《中國實 驗方劑學雜志》，第16卷第11期。但遺憾的是由于心腦寧片原料藥組分分離，次生代謝產(chǎn) 物高度類似，難以厘清其洗脫機理；而等度、梯度洗脫的組合衍生數(shù)近似于天文數(shù)字，并且 梯度洗脫的分離機理極為復(fù)雜，因而不能通過常規(guī)的設(shè)計實驗來篩選得到。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的之一在于針對現(xiàn)有技術(shù)中心腦寧片中有效成分人參皂苷RgJP Re 的定量測定方法分離度差，需要分別檢測以及檢測花費時間長和成本高的技術(shù)問題，提供 一種心腦寧片中人參皂苷RgJP Re含量的測定方法，該方法是經(jīng)過發(fā)明人長達數(shù)年堅持不 懈的努力和創(chuàng)造性的實驗設(shè)計得出。
[0007] 為解決現(xiàn)有的技術(shù)問題，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明提供一種心腦寧片中人參皂苷RgJP Re含量的測定方法，具體包括如下步 驟：
[0009] 1、色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性：色譜柱：AgilentTC-C18,4. 6X250mm ;以乙腈為流動 相A，以水為流動相B，按照下表進行等度和線性梯度洗脫；流速為每分鐘1.0 mL ;柱溫為 40°C ;檢測波長為203nm ;理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算不低于6000。
[0010]
【主權(quán)項】
1. 一種心腦寧片中人參皂苷RgJPRe含量的測定方法，所述心腦寧片的處方組成以重 量計為人參250g、川芎500g、當歸500g、黃芪500g;所述心腦寧片的制法為取人參、黃芪各 120g，粉碎成100目細粉備用；取川芎、當歸和剩余量的人參、黃芪，粉成10目粗粉，加水煎 煮二次，水用量為藥材重的8倍量，煎煮時間為2小時/次，濾過，合并二次濾液，濃縮成在 80°C下，相對密度為1. 15~1. 30,質(zhì)量為3kg的稠膏；取上述稠膏，加入上述細粉及適量淀 粉混勻，干燥成干膏，粉碎，用稀糖漿經(jīng)14~16目篩制粒，在50~60°C下烘干，用14目篩 整粒，加入1%硬脂酸鎂混勻，壓片，包衣，制成1000片即得；其特征在于，包括如下步驟： (1) 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性：色譜柱：AgilentTC-C18,4. 6X250mm;以乙腈為流動相 A，以水為流動相B，按照下表進行等度和線性梯度洗脫；流速為每分鐘1.OmL;柱溫為40°C; 檢測波長為203nm;理論塔板數(shù)按人參皂苷Rgl峰計算不低于6000 ;
(2) 對照品溶液的制備：精密稱取人參皂苷Rgjt照品、人參皂苷Re對照品，加甲醇制 成每lmL各含0. 2mg的混合溶液，搖勾，即得； (3) 供試品溶液的制備：取本品10g精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50mL，密塞， 稱定重量，加熱回流2h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，量取續(xù)濾液 25mL蒸干，殘渣加水30mL溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇振搖提取5次，每次 20ml，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次30mL，再用正丁醇飽和的水30mL洗滌，取 正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取 續(xù)濾液，即得； (4) 測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10yL，注入液相色譜儀，測定，即 得。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種心腦寧片中人參皂苷Rg1和Re含量的測定方法。其解決了人們一直渴望解決但始終沒有解決的心腦寧片原料藥組分分離困難，采用高效液相色譜法不能同時測定心腦寧片中人參皂苷Rg1和Re含量的技術(shù)難題，提供一種梯度洗脫高效液相色譜法，成功的使得人參皂苷Rg1和Re與其它峰分離。本發(fā)明的方法操作簡便，成本較低，檢測時間較短。本發(fā)明的方法可以作為心腦寧片藥品標準中標準的定量檢測方法。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104807905
【申請?zhí)枴緾N201510222627
【發(fā)明人】申晉昌, 謝國旗, 郝少君, 蘇峰, 王同渠, 王希東, 張正臣
【申請人】中國人民解放軍第三七一醫(yī)院
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2015年5月4日