再用抗D單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:2進行混合均勻，得到抗D凝膠；
第二份用等量的抗C稀釋液洗滌三次，再用抗C單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:2比例混合均勻，得到抗C凝膠；
第三份用等量抗c稀釋液洗滌三次，再用抗c單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:2比例混合均勻，得到抗c凝膠；
第四份用等量抗E稀釋液洗滌三次，再用抗E單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:2比例混合均勻，得到抗E凝膠；
第五份用等量抗e稀釋液洗滌三次，再用抗e單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:2比例混合均勻，得到抗e凝膠；
第六份用等量空白凝膠洗滌緩沖液洗滌三次，再用空白凝膠洗滌緩沖液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:2比例混合均勻，得到空白凝膠；
(5)分裝:
按照每管32微升的量，將步驟四中配制的各凝膠分別依次加入到空白檢測卡中的六個微柱中，其中第一個微柱加抗D凝膠，第二個微柱加抗C凝膠，第三個微柱加抗c凝膠，第四個微孔加抗E凝膠，第五個微孔加抗e凝膠，第六個微孔加空白凝膠，形成Rh血型檢測卡。
[0018] 實施例二:
一種Rh血型檢測卡包括含有六個微柱的檢測卡，所述六個微柱內(nèi)分別裝有抗D凝膠、抗C凝膠、抗c凝膠、抗E凝膠、抗e凝膠和空白凝膠，其通過以下方法制備而成:
(I)葡聚糖凝膠的溶脹:
選用交聯(lián)葡聚糖凝膠G-75和交聯(lián)葡聚糖凝膠G-100按照質(zhì)量比1:1進行混合得葡聚糖凝膠混合物，然后按照葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:2加入純化水，進行懸浮溶脹72小時后；再用純化水對其洗滌三次，去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的凝葡聚糖膠顆粒；
(2)抗體稀釋液的配制:
抗D稀釋液:以磷酸鹽緩沖液(PBS)為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA 二鉀鹽)15g/L、牛血清白蛋白350g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8 ；
抗C稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽20g/L、牛血清白蛋白25g/L，pH 值為 6.6-6.8 ；
抗c稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽18g/L、牛血清白蛋白45g/L，pH 值為 6.6-6.8 ；
抗E稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15g/L、牛血清白蛋白 25g/L，pH 值為 6.6-6.8 ；
抗e稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽10g/L、牛血清白蛋白 20g/L，pH 值為 6.6-6.8 ；
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉2.07g/L、磷酸氫二鈉
0.219g/L、磷酸二氫鈉0.24g/L、甘氨酸21g/L ;并調(diào)節(jié)pH值為6.6-6.8 ；
(3)抗體稀釋:
取抗D單克隆抗體濃縮液與抗D稀釋液進行混合，使得到的抗D單克隆抗體工作液的效價> 64 ；
取抗C單克隆抗體濃縮液與抗C稀釋液混合，使得到的抗C單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
取抗C單克隆抗體濃縮液與抗C稀釋液混合,使得到的抗C單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
取抗E單克隆抗體濃縮液與抗E稀釋液混合，使得到的抗E單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
取抗e單克隆抗體濃縮液與抗e稀釋液混合,使得到的抗e單克隆抗體工作液的效價^ 16 ；
(4)凝膠洗滌:
將步驟(I)中溶脹的葡聚糖凝膠顆粒均分為六等份，其中一份用等量的抗D稀釋液洗滌三次，再用抗D單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:3進行混合均勻，得到抗D凝膠；
第二份用等量的抗C稀釋液洗滌三次，再用抗C單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:3比例混合均勻，得到抗C凝膠；
第三份用等量抗c稀釋液洗滌三次，再用抗c單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:3比例混合均勻，得到抗c凝膠；
第四份用等量抗E稀釋液洗滌三次，再用抗E單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:3比例混合均勻，得到抗E凝膠；
第五份用等量抗e稀釋液洗滌三次，再用抗e單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:3比例混合均勻，得到抗e凝膠；
第六份用等量空白凝膠洗滌緩沖液洗滌三次，再用空白凝膠洗滌緩沖液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:3比例混合均勻，得到空白凝膠；
(5)分裝:
按照每管24微升的量，將步驟四中配制的各凝膠分別依次加入到空白檢測卡中的六個微柱中，其中第一個微柱加抗D凝膠，第二個微柱加抗C凝膠，第三個微柱加抗c凝膠，第四個微孔加抗E凝膠，第五個微孔加抗e凝膠，第六個微孔加空白凝膠，形成Rh血型檢測卡。
[0019]以上所述的僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。
【主權項】
1.一種Rh血型檢測卡，包括含有六個微柱的檢測卡，所述六個微柱內(nèi)分別裝有等量的抗D凝膠、抗C凝膠、抗c凝膠、抗E凝膠、抗e凝膠和空白凝膠，其特征在于:通過以下方法制備而成: (1)葡聚糖凝膠的溶脹:選用至少兩種交聯(lián)葡聚糖凝膠進行混合，然后加入純化水中進行充分懸浮溶脹，再用純化水洗滌去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的葡聚糖凝膠顆粒； (2)制備各抗體稀釋液: 抗D稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽10-15g/L、牛血清白蛋白35-40g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8 ； 抗C稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15-20g/L、牛血清白蛋白 25-28g/L，pH 值為 6.6-6.8; 抗c稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽12-18g/L、牛血清白蛋白 40-45g/L，pH 值為 6.6-6.8; 抗E稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15-25g/L、牛血清白蛋白 20-25g/L，pH 值為 6.6-6.8 ； 抗e稀釋液:以磷酸鹽緩沖液為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽10-15g/L、牛血清白蛋白 25-35g/L，pH 值為 6.6-6.8 ； 空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉1.75-2.07g/L、磷酸氫二鈉0.185-0.219g/L、磷酸二氫鈉0.203-0.24g/L、甘氨酸18_21g/L ;并調(diào)節(jié)pH值為6.6-6.8 ； (3)制備各抗體工作液: 取抗D單克隆抗體濃縮液與抗D稀釋液進行混合，使得到的抗D單克隆抗體工作液的效價> 64 ； 取抗C單克隆抗體濃縮液與抗C稀釋液混合，使得到的抗C單克隆抗體工作液的效價^ 16 ； 取抗C單克隆抗體濃縮液與抗C稀釋液混合,使得到的抗C單克隆抗體工作液的效價^ 16 ； 取抗E單克隆抗體濃縮液與抗E稀釋液混合，使得到的抗E單克隆抗體工作液的效價^ 16 ； 取抗e單克隆抗體濃縮液與抗e稀釋液混合,使得到的抗e單克隆抗體工作液的效價^ 16 ； (4)凝膠洗滌: 取等量的葡聚糖凝膠顆粒分別用等量的抗D稀釋液、抗C稀釋液、抗c稀釋液、抗E稀釋液、抗e稀釋液和空白凝膠洗滌緩沖液進行洗滌至少三次，再加入相對應的抗D單克隆抗體工作液、抗C單克隆抗體工作液、抗c單克隆抗體工作液、抗E單克隆抗體工作、抗e單克隆抗體工作液和空白凝膠洗滌緩沖液進行混合，得到抗D凝膠、抗C凝膠、抗c凝膠、抗E凝膠、抗e凝膠和空白凝膠； (5)分裝: 按照每管24-32微升的量，將抗D凝膠、抗C凝膠、抗c凝膠、抗E凝膠、抗e凝膠和空白凝膠依次加到空白檢測卡的六個微柱中，形成Rh血型檢測卡。
2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟(I)中交聯(lián)葡聚糖凝膠為交聯(lián)葡聚糖凝膠G-25、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-50、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-75或交聯(lián)葡聚糖凝膠G-100。
3.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟(I)中交聯(lián)葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:2-1:3。
4.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟(I)中懸浮溶脹的時間為48-72小時。
5.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟(4)中抗體工作液與洗滌后凝膠的體積比為1:2-1:3。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種Rh血型檢測卡，包括含有六個微柱的檢測卡，所述六個微柱內(nèi)分別裝有等量的抗D凝膠、抗C凝膠、抗c凝膠、抗E凝膠、抗e凝膠和空白凝膠，其通過以下方法制備而成：葡聚糖凝膠的溶脹、制備各抗體稀釋液、制備各抗體工作液、凝膠洗滌、分裝形成Rh血型檢測卡。本發(fā)明采用不同大小、不同篩分范圍的交聯(lián)葡聚糖凝膠進行混合，并用純化水進行溶脹，有效地保證特異性的同時還擁有很高的靈敏度，并有效保證了體系的離子強度。
【IPC分類】G01N33-80
【公開號】CN104569443
【申請?zhí)枴緾N201410801586
【發(fā)明人】何流, 張艷, 徐寅生, 尹培培
【申請人】合肥天一生物技術研究所
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月22日