專利名稱：全血免疫檢測試劑中紅細胞和血清的分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫檢測試劑檢測全血時紅細胞和血清的分離方法。
已知免疫檢測試劑檢測人或動物血液中的抗原、抗體時，需分離血清和血球。普遍使用的方法是事先用離心機離心分離，離心后吸取血清進行檢測，血球、血清的分離和血清的檢測在時間和空間上不能同時進行，檢測對象實際上是血清；另一種分離血球和血清的方法是將全血通過一定孔徑的聚酯材料進行過濾，紅細胞體積小于或等于聚酯材料而被后者過濾，血清得以通過，該方法可實現(xiàn)血球、血清的分離和檢測同時進行，檢測對象是全血，但該方法因聚脂材料本身具有一定體積，象海綿一樣吸取一定量全血，檢測時全血使用量大，同時，為保證分離效果，聚酯孔徑要小于等于紅血球直徑，血清和血球因過濾孔徑較小，分離速度慢，使整個反應(yīng)時間延長，該聚酯材料已有商品化產(chǎn)品，生產(chǎn)廠家是美國格爾曼科學(xué)公司(Gelman Sciences Inc.)，其商品名為HemasepL(水平紅血胞分離材料)和HemasepV(垂直紅血胞分離材料)。
本發(fā)明的目的是提供一種快速分離微量末梢血中紅細胞和血清的方法，實現(xiàn)全血的快速免疫檢測。紅細胞在凝集因子作用下可相互凝集成團，凝集團體積在瞬間比單個紅細胞體積增大數(shù)千倍。因此很容易被玻璃纖維墊或其它大孔徑濾材過濾掉，很容易在短時間(幾秒)實現(xiàn)血清和紅細胞的分離，玻璃纖維墊本身不吸附血清，因此全血使用量較少，僅需末梢血100-200ul能引起紅細胞凝集的因子有兩類物質(zhì)，一類是植物凝集素，另一類是用紅細胞免疫動物得到的抗紅細胞抗體。一定濃度的植物凝集素和抗紅細胞抗體與全血混合，十多秒鐘肉眼即可觀察到紅細胞凝集成團，顯微鏡下觀察，可觀察到數(shù)千紅細胞凝集粘連在一起。紅細胞與血清分離劑配方如下一、水劑(一)緩沖液0.01M PH 7.2磷酸鹽緩沖液 (PB)0.85％NaCL(氯化鈉)0.2％ BSA(牛血清白蛋白)0.6％ 檸檬酸三鈉(也可使用其它抗凝劑，如肝素、EDTA等)5/萬 NaN3(疊氮鈉)(二)凝集因子稀釋度用上述緩沖液倍比稀釋凝集因子，稀釋度1∶2-1∶1024。取各稀釋度的分離劑10ul，加入全血四滴(約160ul)，肉眼觀察15秒或顯微鏡觀察5秒，出現(xiàn)紅細胞凝集的稀釋度，即為凝集因子的最適稀釋度。
因凝集因子包括數(shù)量眾多的、不同種類的植物凝集素和不同種類的動物抗紅細胞抗體，凝集因子的效價也不同，使用何種稀釋度，需具體按上述方法確定。
(三)按凝集因子的最適稀釋度將凝集因子和緩沖液混合即成水劑分離劑。二、固態(tài)分離劑按上述方法確定的水劑用玻璃纖維墊或其它多孔性吸附材料吸附飽和后凍干即成。
本發(fā)明寫明了紅細胞與血清分離劑的緩沖液的配方、凝集因子稀釋度的確定方法，以及水劑、固態(tài)分離劑的制備方法。
本發(fā)明提出的方法可用于全血快速免疫檢測試劑的制備，與現(xiàn)有方法比，制備的試劑可檢測末梢全血，用血量少，血清、紅細胞分離速度快，特別適合家庭、野外、醫(yī)生辦公室、診所等不具有儀器設(shè)備場所的使用。
以下所述實例詳述了本發(fā)明。1、配制0.01M PH7.2磷酸鹽緩沖液100ml2、加入NaCL 0.85克，檸檬酸三鈉0.6克NaN350毫克牛血清白蛋白200毫克，混勻3、用上述緩沖液倍比稀釋山羊抗紅細胞血清1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64.........4、各取上述倍比稀釋物10ul滴于載玻片上，分別加指尖全血四滴(約160ul)，輕搖混勻，15秒左右觀察，1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32均有紅細胞凝集，1∶32即為抗血清凝集效價。5、取上述緩沖液31ml加山羊抗人紅細胞血清1ml，混勻即成分離劑。6、將分離劑與乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)免疫層析試紙組成試劑盒，即成乙肝HBsAg全血免疫層析試劑。使用時，用毛細管或加樣器取10ul分離劑加于免疫層析試紙反應(yīng)端暴露玻璃纖維上，然后滴指尖血四滴于玻璃纖維上，紅細胞迅速凝集成團而被玻璃纖維墊及反應(yīng)膜阻擋過濾，分離的血清可以與金標抗-HBsAg反應(yīng)并因反應(yīng)膜的毛細作用沿反應(yīng)膜向吸水墊端移動，10-20分鐘，血清大部分被吸水墊通過反應(yīng)膜吸走，血清在通過反應(yīng)膜時可進一步與包被在膜上的抗-HBsAg發(fā)生反應(yīng)，而紅細胞被完全阻擋過濾在玻璃纖維墊上。結(jié)果判定如血中含有HBsAg，則在反應(yīng)面形成兩條紫紅線如血中不含有HBsAg，則在反應(yīng)面形成一條紫紅線
權(quán)利要求
本發(fā)明為全血免疫檢測試劑中紅細胞和血清的分離方法，其特征是在全血中混入紅細胞凝集因子如抗-紅細胞抗體、植物凝集素等，使數(shù)千個紅細胞凝集成肉眼可見或顯微鏡可觀察到的團塊(抗-紅細胞抗體和植物凝集可單獨使用，也可聯(lián)合使用)。紅細胞因凝集成團，不能通過過濾材料和小孔徑膜，而血清可以通過過濾材料和小孔徑膜，從而達到免疫層析檢測試劑和免疫滲濾檢測試劑檢測過程中血球和血清的分離，實現(xiàn)全血快速免疫檢測。
全文摘要
本發(fā)明為全血免疫檢測試劑中紅細胞和血清的分離方法,是屬于疾病診斷領(lǐng)域中血液的檢測方法。通過在全血中混入能引起紅細胞凝集的因子,使紅細胞凝集成團,凝集成團的紅細胞因體積增大不能通過過濾材料和小孔徑的膜被過濾,而血清可以通過膜,從而達到分離血清和紅細胞的目的,實現(xiàn)全血的快速檢測。
文檔編號G01N33/50GK1243251SQ98116438
公開日2000年2月2日 申請日期1998年7月28日 優(yōu)先權(quán)日1998年7月28日
發(fā)明者李晨陽 申請人:華美生物工程公司鄭州分公司