本發(fā)明涉及果品檢測(cè)，具體涉及一種測(cè)定柑橘類產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法。

背景技術(shù)：

1、目前世界上生產(chǎn)柑橘的國(guó)家和地區(qū)約有140多個(gè)。然而，柑橘黃龍病、潰瘍病、炭疽病等檢疫性病害嚴(yán)重威脅著世界柑橘業(yè)的發(fā)展。其中，柑橘黃龍病是由亞洲韌皮桿菌侵染引起，通過柑橘木虱廣泛傳播，對(duì)柑橘極具毀滅性的一種病害，被稱為柑橘的“癌癥”。為了嚴(yán)控柑橘黃龍病以減少經(jīng)濟(jì)損失，近年來，在柑橘主產(chǎn)區(qū)興起了一種通過樹干注射青霉素、四環(huán)素和氨基糖類抗生素等抗生素來防治柑橘黃龍病的方法，其中氨芐青霉素、土霉素、四環(huán)素和強(qiáng)力霉素的防治效果明顯由于其他抗生素，是樹干注射治療黃龍病的首選藥劑。

2、雖然“樹干注射抗生素”能很好的防治柑橘黃龍病，但是注射入樹干的抗生素經(jīng)果樹吸收代謝后以原藥或代謝物的形式殘留在果樹和柑橘水果中，而不合理、不規(guī)范、甚至盲目使用抗生素會(huì)導(dǎo)致果品抗生素殘留量嚴(yán)重超標(biāo)，危害消費(fèi)者的健康。因此，為了能夠?qū)M(jìn)出口柑橘產(chǎn)品的質(zhì)量安全進(jìn)行更好的監(jiān)督管理以保障人民的身心健康，開發(fā)柑橘及其果汁中四環(huán)素類抗生素殘留量的測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)。

3、但是抗生素類農(nóng)藥活性高，且柑橘產(chǎn)品是一種復(fù)雜的基質(zhì)，在檢測(cè)過程中存在著嚴(yán)重的基質(zhì)效應(yīng)，導(dǎo)致難以靈敏且準(zhǔn)確的獲得柑橘類產(chǎn)品中的抗生素含量，克服基質(zhì)效應(yīng)，以及快速、優(yōu)質(zhì)、大量從柑橘產(chǎn)品中獲得目標(biāo)化合物是本領(lǐng)域的檢測(cè)難點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種測(cè)定柑橘類產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，旨在克服柑橘類產(chǎn)品基質(zhì)效應(yīng)，獲得靈敏度高且準(zhǔn)確性好的檢測(cè)方法，用于檢測(cè)市面上柑橘產(chǎn)品和待出口柑橘產(chǎn)品中青霉素類和四環(huán)素類抗生素藥物殘留量，從而達(dá)到健全柑橘類產(chǎn)品中抗生素監(jiān)測(cè)體系，保障消費(fèi)者的健康。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，所述方法包括：

3、s1，制備樣品；

4、s2，分別提取所述樣品中的青霉素和四環(huán)素類；

5、s3，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，所述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀包括色譜條件和質(zhì)譜條件，所述色譜條件如下：

6、流動(dòng)相a為0.1％甲酸水溶液，流動(dòng)相b為甲醇乙腈溶液，其中，甲醇乙腈溶液由甲醇與乙腈按體積比為2:1混制而成；

7、梯度洗脫程序：

8、在0min時(shí)，流速0.25ml/min，流動(dòng)相a為90％，流動(dòng)相b為10％；

9、在1.0min時(shí)，流速0.25ml/min，流動(dòng)相a為90％，流動(dòng)相b為10％；

10、在4.5min時(shí)，流速0.25ml/min，流動(dòng)相a為10％，流動(dòng)相b為90％；

11、在6.5min時(shí)，流速0.25ml/min，流動(dòng)相a為10％，流動(dòng)相b為90％；

12、在6.6min時(shí)，流速0.25ml/min，流動(dòng)相a為90％，流動(dòng)相b為10％；

13、在8min時(shí)，流速0.25ml/min，流動(dòng)相a為90％，流動(dòng)相b為10％。

14、優(yōu)選地，在上述技術(shù)方案中，所述提取所述樣品中的四環(huán)素類抗生素具體包括：

15、先向所述樣品加入預(yù)設(shè)量四環(huán)素萃取劑，渦旋混合、振蕩提取，離心取上清液；

16、再活化psa小柱，取所述上清液過psa小柱，用水淋洗psa小柱棄流出液，用1％氨水洗脫psa小柱取淋洗液，向所述淋洗液中加入稀釋液，混勻后用過濾膜過濾，得含四環(huán)素類抗生素的提取液。

17、優(yōu)選的，在上述技術(shù)方案中，所述psa小柱中的凈化填料為psa吸附劑。

18、根據(jù)上述技術(shù)方案，本申請(qǐng)采用psa小柱是將psa吸附劑(粉末)填充在柱子上，psa吸附劑通過離子交換功能選擇性吸附青霉素和四環(huán)素類目標(biāo)物，雜質(zhì)隨水淋洗流出，再通過淋洗液將目標(biāo)化合物洗脫下來，達(dá)到凈化的目的。

19、優(yōu)選的，在上述技術(shù)方案中，所述預(yù)設(shè)量萃取劑為0.1ml?1％edta-2na和20ml0.5％甲酸乙腈。

20、優(yōu)選的，在上述技術(shù)方案中，所述稀釋液為1％甲酸的1:1乙腈水。

21、優(yōu)選的，在上述技術(shù)方案中，所述過濾裝置為有機(jī)相濾膜。

22、優(yōu)選的，在上述技術(shù)方案中，所述提取所述樣品中的青霉素具體包括：

23、向樣品加入乙腈，渦旋混合、振蕩提取，加入緩沖液振蕩提取，離心取上清液，取所述上清液加水混勻，用過濾裝置過濾。

24、優(yōu)選的，在上述技術(shù)方案中，所述緩沖液為0.2％乙酸水溶液。

25、優(yōu)選的，在上述技術(shù)方案中，所述過濾裝置為雙層0.22μm疏水性ptfe針式濾器。

26、優(yōu)選的，在上述技術(shù)方案中，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的質(zhì)譜條件中的化合物參數(shù)如下：

27、

28、

29、與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明具有如下的有益效果：

30、(1)檢測(cè)對(duì)象為柑橘類產(chǎn)品中的抗生素農(nóng)藥殘留量，活性高，較傳統(tǒng)農(nóng)藥檢測(cè)更加困難；

31、(2)由于目標(biāo)物在前處理過程中有損失，進(jìn)樣過程中也會(huì)受基質(zhì)干擾而導(dǎo)致含量偏高或偏低，因此本發(fā)明在空白樣品中添加已知濃度的標(biāo)液作為對(duì)照。因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)對(duì)照品在前處理過程中和進(jìn)樣過程中與待測(cè)樣品受到的干擾是一致的，所獲得的結(jié)果相較于傳統(tǒng)以溶劑做標(biāo)液做對(duì)照檢測(cè)更可靠。

技術(shù)特征：

1.一種測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，其特征在于，所述提取所述樣品中的四環(huán)素類抗生素具體包括：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，其特征在于，所述psa小柱中的凈化填料為psa吸附劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，其特征在于，所述預(yù)設(shè)量萃取劑為0.1ml?1％edta-2na和20ml0.5％甲酸乙腈。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，其特征在于，所述稀釋液為1％甲酸的1:1乙腈水。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，其特征在于，所述過濾膜為有機(jī)相濾膜。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，其特征在于，所述提取所述樣品中的青霉素具體包括：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，其特征在于，所述緩沖液為0.2％乙酸水溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，其特征在于，所述過濾裝置為雙層0.22μm疏水性ptfe針式濾器。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，其特征在于，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的質(zhì)譜條件中的化合物參數(shù)如下：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開一種測(cè)定柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素殘留量的方法，所述方法包括：S1，制備樣品；S2，分別提取所述樣品中的青霉素和四環(huán)素類；S3，采用液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，所述液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜儀包括色譜條件和質(zhì)譜條件，所述色譜條件如下：流動(dòng)相A為0.1％甲酸水溶液，流動(dòng)相B為甲醇乙腈溶液，其中，甲醇乙腈溶液由甲醇與乙腈按體積比為2:1混制而成。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明改變樣品前處理方法、調(diào)整測(cè)定條件和設(shè)計(jì)抗生素殘留量計(jì)算公式，測(cè)定獲得柑橘產(chǎn)品中青霉素和四環(huán)素類抗生素的回收率和精密度較高。

技術(shù)研發(fā)人員：秦富,包昌健,韋娜,霍伶,鄭玲,汪文龍,朱鳳婷
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南寧海關(guān)技術(shù)中心
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9