本發(fā)明涉及一種定量分析水產(chǎn)品中多環(huán)芳烴的gc-ms分析方法，具體涉及索氏提取、凝膠凈化、氧化鋁-硅膠復(fù)合凈化的定量檢測(cè)水產(chǎn)品中多環(huán)芳烴的gc/ms分析方法。

背景技術(shù)：

多環(huán)芳烴（pahs）是含有兩個(gè)或以上的芳香環(huán)連接形成的碳?xì)浠衔?，屬于典型的pops，廣泛分布于自然環(huán)境介質(zhì)中。pahs多是具有淡黃色的晶體物質(zhì)，不僅熔點(diǎn)和沸點(diǎn)高，辛醇-水分配系數(shù)也高；但蒸汽壓和水溶性較低。pahs種類(lèi)很多，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)400余種單體及其衍生物，且大多對(duì)動(dòng)物和人體都具有很強(qiáng)致癌、致畸、致突變以及免疫毒性作用。

環(huán)境中pahs來(lái)源比較廣泛，主要包括天然來(lái)源和人為來(lái)源兩大部分。天然來(lái)源如森林和草原的天然火災(zāi)、火山爆發(fā)、某些細(xì)菌和植物的生物合成以及長(zhǎng)期地質(zhì)年代中生物成因前驅(qū)物的后期沉積改造，這些自然因素釋放的pahs是環(huán)境中pahs本底的基礎(chǔ)；人類(lèi)活動(dòng)來(lái)源包括廢物焚燒和化工燃料不完全燃燒、化石燃料(石油、天然氣、煤)的不完全燃燒、植物的燃燒、取暖、烹飪以及吸煙等。在現(xiàn)代社會(huì)中，pahs主要來(lái)源于人類(lèi)活動(dòng)。長(zhǎng)距離遷移性使這類(lèi)化合物分布到世界各地已經(jīng)成為一種全球性污染物，在全球范圍內(nèi)的不同介質(zhì)（水體、土壤、大氣、沉積物等）及生物體均有不同程度檢出。

多環(huán)芳烴完全具備pops所有的典型特性，pahs釋放到環(huán)境中，可通過(guò)直接進(jìn)入、地表徑流及干濕沉降等各種方式進(jìn)入到水生生態(tài)系統(tǒng)，由于pahs具有很強(qiáng)的親脂性，在水體環(huán)境中，它們更易于被有機(jī)質(zhì)富集，從而進(jìn)入有機(jī)生物體內(nèi)，在脂肪中累積；同時(shí)此類(lèi)化合物具有持久性和生物累積性，在魚(yú)類(lèi)等水產(chǎn)品中不斷富集，累積于生物體的這些污染物最終通過(guò)食物鏈傳遞并逐級(jí)放大，進(jìn)而在人體內(nèi)蓄積并危害人體健康，對(duì)人類(lèi)和生態(tài)系統(tǒng)存在潛在的危害。消費(fèi)水產(chǎn)品是人類(lèi)暴露有機(jī)污染物的重要途徑之一。因此，水產(chǎn)品中pahs的檢測(cè)技術(shù)是保障水產(chǎn)品安全的有效技術(shù)手段，是保障人民群眾健康的重要措施。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的復(fù)雜環(huán)境中多環(huán)芳烴前處理復(fù)雜，檢測(cè)效果差的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種操作簡(jiǎn)單、不易受雜志干擾、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、能夠同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中的16種多環(huán)芳烴類(lèi)物質(zhì)（萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[a]蒽、屈、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、茚并[1,2,3-cd]芘、苯并[g,h,i]苝）含量的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案

本發(fā)明基本原理是利用凝膠滲透色譜柱凈化法去除水產(chǎn)品食品中的脂肪、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，以丙酮、正己烷為萃取劑，利用氧化鋁-硅膠復(fù)合層析柱凈化法有效提取樣品中的pahs，然后采用gc/ms對(duì)pahs準(zhǔn)確定量分析。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種定量分析水產(chǎn)品中pahs的gc-ms方法，其步驟為：

（1）樣品前處理：生物體在室溫下解凍，去掉魚(yú)鱗和魚(yú)皮，用純凈水充分洗滌以除去可能的雜質(zhì)，取其背部肌肉作為分析對(duì)象，然后將樣品進(jìn)行冷凍干燥；將冷凍干燥過(guò)的樣品研磨成粉末、稱(chēng)重，然后用抽提過(guò)的濾紙包裹，放在干燥皿中于冰箱中冷藏備用。

（2）索氏提取：首先分別使用丙酮、二氯甲烷、正己烷三種有機(jī)溶劑淋洗抽提器皿；稱(chēng)取一定量的樣品（約5g），加入回收率指示物（nap-d8、ace-d10、phen-d10、chry-d12和pery-d12），然后用200ml正己烷/丙酮(1:1，v:v)索氏抽提48小時(shí)。優(yōu)選地，所述抽提器皿的市售的索氏提取器；或者優(yōu)選地，所述抽提器皿是本領(lǐng)域常規(guī)的圓底燒瓶連接冷凝器、抽提器組成的抽提器皿。

（3）有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)換：索氏提取后含有目標(biāo)物的有機(jī)溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至體積為2ml左右，然后將其轉(zhuǎn)移至5ml離心管內(nèi)，正己烷定容。分出1ml濃縮液用于測(cè)定樣品的脂肪含量，其余4ml準(zhǔn)備進(jìn)行凝膠色譜柱凈化。

（4）凝膠滲透色譜柱凈化（gpc）：首先使用60ml二氯甲烷和正己烷的混合溶液(1:1，v:v)淋洗gpc色譜柱，淋洗完后緩慢加入有機(jī)溶液樣品，然后用280ml溶劑淋洗，棄去前面110ml淋洗液，用圓底燒瓶收集110-280ml含有目標(biāo)物的組分。通過(guò)凝膠色譜柱以除去其中的脂肪和大分子蛋白質(zhì)等組分。

（5）氧化鋁-硅膠復(fù)合層析柱凈化：將收集的淋洗液濃縮為2ml，轉(zhuǎn)移至硅膠氧化鋁柱，用100ml正己烷/二氯甲烷(1:1，v:v)淋洗，用雞心瓶收集15-100ml含有目標(biāo)物的組分。

（6）氮吹定容：所得淋洗液再次旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮并小心地轉(zhuǎn)移至2.0ml的細(xì)胞瓶中，氮吹定容為1ml，加入內(nèi)標(biāo)化合物，最后等待氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用定量分析。

（7）儀器分析的色譜條件：采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（hp6890/gc5973,msd），選擇離子監(jiān)測(cè)模式（sim）進(jìn)行pahs的分析測(cè)定。色譜柱為db-17石英毛細(xì)管柱（60m×0.53mm×1.0um）。程序升溫條件為：初始溫度60℃，保留3min，然后以10℃/min的速度升至180℃，再以5℃/min的速度升至285℃，保留12min，以恒壓為10.0psi的高純氦氣（99.999%）為載氣，采用無(wú)分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為1ul。電子能量為70ev。進(jìn)樣口溫度為300℃，離子源為250℃。

有益效果

本發(fā)明提供了一種定量分析水產(chǎn)品中pahs的gc/ms方法。

現(xiàn)有方法相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

（1）利用凝膠滲透色譜柱及氧化鋁-硅膠多層復(fù)合凈化柱，去除水產(chǎn)品中脂肪和蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)干擾；

（2）利用負(fù)化學(xué)離子源（nci），選擇離子監(jiān)測(cè)模式（sim），定量分析水產(chǎn)品中pahs的含量水平，檢出限低，精確性高。

附圖說(shuō)明

此處所說(shuō)明的附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本申請(qǐng)的一部分，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：

圖1為本發(fā)明方法的流程圖。

具體實(shí)施方式

為了更好地理解發(fā)明，下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但附圖和實(shí)施例并不是對(duì)發(fā)明技術(shù)方案的限定。

實(shí)施例：

帶魚(yú)肌肉組織中pahs定量分析方法

（1）樣品前處理：生物體在室溫下解凍，去掉魚(yú)鱗和魚(yú)皮，用純凈水充分洗滌以除去可能的雜質(zhì)，取其背部肌肉作為分析對(duì)象，然后將樣品進(jìn)行冷凍干燥；將冷凍干燥過(guò)的樣品研磨成粉末、稱(chēng)重，然后用抽提過(guò)的濾紙包裹，放在干燥皿中于冰箱中冷藏備用。

（2）索氏提?。菏紫确謩e使用丙酮、二氯甲烷、正己烷三種有機(jī)溶劑淋洗抽提器皿；稱(chēng)取一定量的樣品（約5g），加入回收率指示物（nap-d8、ace-d10、phen-d10、chry-d12和pery-d12），然后用200ml正己烷/丙酮(1:1，v:v)索氏抽提48小時(shí)。優(yōu)選地，所述抽提器皿的市售的索氏提取器；或者優(yōu)選地，所述抽提器皿是本領(lǐng)域常規(guī)的圓底燒瓶連接冷凝器、抽提器組成的抽提器皿。

（3）有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)換：索氏提取后含有目標(biāo)物的有機(jī)溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，直至體積為2ml左右，然后將其轉(zhuǎn)移至5ml離心管內(nèi)，正己烷定容。分出1ml濃縮液用于測(cè)定樣品的脂肪含量，其余4ml準(zhǔn)備進(jìn)行凝膠色譜柱凈化。

（4）凝膠滲透色譜柱凈化（gpc）：首先使用60ml二氯甲烷和正己烷的混合溶液(1:1，v:v)淋洗gpc色譜柱，淋洗完后緩慢加入有機(jī)溶液樣品，然后用280ml溶劑淋洗，棄去前面110ml淋洗液，用圓底燒瓶收集110-280ml含有目標(biāo)物的組分。通過(guò)凝膠色譜柱以除去其中的脂肪和大分子蛋白質(zhì)等組分。

（5）氧化鋁-硅膠復(fù)合層析柱凈化：將收集的淋洗液濃縮為2ml，轉(zhuǎn)移至硅膠氧化鋁柱，用100ml正己烷/二氯甲烷(1:1，v:v)淋洗，用雞心瓶收集15-100ml含有目標(biāo)物的組分。

（6）氮吹定容：所得淋洗液再次旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮并小心地轉(zhuǎn)移至2.0ml的細(xì)胞瓶中，氮吹定容為1ml，加入內(nèi)標(biāo)化合物，最后等待氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用定量分析。

（7）儀器分析的色譜條件：采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（hp6890/gc5973,msd），選擇離子監(jiān)測(cè)模式（sim）進(jìn)行pahs的分析測(cè)定。色譜柱為db-17石英毛細(xì)管柱（60m×0.53mm×1.0um）。程序升溫條件為：初始溫度60℃，保留3min，然后以10℃/min的速度升至180℃，再以5℃/min的速度升至285℃，保留12min，以恒壓為10.0psi的高純氦氣（99.999%）為載氣，采用無(wú)分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為1ul，電子能量為70ev，進(jìn)樣口溫度為300℃，離子源為250℃。

以上所述的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，該描述沒(méi)有限制性，附圖中所示的也只是本發(fā)明創(chuàng)造的實(shí)施方式之一，實(shí)際的結(jié)構(gòu)并不局限于此。所以，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)確定的保護(hù)范圍內(nèi)。