1.一種有效觀察油棕雌蕊解剖結(jié)構(gòu)的石蠟切片方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)取樣固定:首先摘取所要觀察油棕整個(gè)的雌花序,立刻進(jìn)行選擇分割,選擇需要觀察的雌蕊,把接近花托部位的雌蕊完全剝下來(lái),之后將萼片剝掉,立刻用刀將柱頭與子房分開(kāi),立刻將柱頭與子房一塊放入盛有卡諾固定液的高型稱量瓶里面;當(dāng)所需的樣品選取完后,用橡皮筋將扎有8~12個(gè)洞的塑料薄膜包裹在瓶口上面,放在真空干燥器中,抽真空1~1.5個(gè)小時(shí);其中:樣品與卡諾固定液的質(zhì)量體積比為1:16~1:20g/ml,卡諾固定液是按體積比3:1將乙醇與乙酸混合構(gòu)成;
(2)保存:樣品經(jīng)抽真空固定后,經(jīng)濃度95%乙醇、85%乙醇,每級(jí)浸泡20~25min,之后轉(zhuǎn)入濃度70%乙醇中浸泡2~3d保存?zhèn)溆茫4鏈囟葹?6~18℃;
(3)整染:將保存后的樣品轉(zhuǎn)入濃度50%乙醇-乙二醇混合溶液中浸泡5~6h后,轉(zhuǎn)入愛(ài)氏蘇木精稀釋液中,用橡皮筋將扎有8~12個(gè)洞的塑料薄膜包裹在瓶口上面,放在真空干燥器中,抽真空1個(gè)小時(shí)后,繼續(xù)放置在真空干燥器中,時(shí)間為20~24h,之后從真空干燥器中取出,蓋上蓋子,常溫下繼續(xù)放置48~52h;其中乙醇-乙二醇混合溶液是按體積比4:1將乙醇與乙二醇混合構(gòu)成;
(4)水洗、返藍(lán):樣品經(jīng)愛(ài)氏蘇木精稀釋液染色后,用蒸餾水浸洗樣品,之后用自來(lái)水返藍(lán),最后用蒸餾水浸泡;
(5)脫水、透明、加碎蠟:蒸餾水浸泡5~7h后,經(jīng)過(guò)脫水劑逐級(jí)脫水后,再經(jīng)氯仿逐級(jí)透明后,先加入純氯仿40~50%體積的碎蠟?zāi)?6℃溫箱中保溫1h,再加入以有少量碎蠟?zāi)≡诼确轮校?6℃溫箱中保溫24h以上;其中脫水劑為七種,依次為:濃度30%乙醇-乙二醇混合水溶液、濃度50%乙醇-乙二醇混合水溶液、濃度70%乙醇-乙二醇混合水溶液、濃度85%乙醇-乙二醇混合水溶液、含濃度1%伊紅的95%乙醇、無(wú)水乙醇-乙二醇混合溶液、無(wú)水乙醇;乙醇-乙二醇混合水溶液中,乙醇與乙二醇的體積比均為4:1;無(wú)水乙醇-乙二醇混合溶液中,無(wú)水乙醇與乙二醇的體積比為4:1;
(6)透蠟、包埋:加碎蠟?zāi)蟮臉悠方?jīng)濃度50%石蠟,濃度70%石蠟各浸泡3h,再經(jīng)純蠟A、純蠟B、純蠟C三杯,每杯浸泡50min,包埋時(shí)樣品橫臥,樣品與石蠟的體積比為1:60~1:80;
(7)修蠟塊、切片:將包埋樣品后的蠟塊分割,修整,修整好的蠟塊固定在底板后,進(jìn)一步修成梯形,其中梯形的下底與雌蕊的高平行,油棕雌蕊縱切,切片厚度為11~15μm;
(8)展片、粘片、烘干:選取所需蠟帶進(jìn)行粘片,于溫度為35℃的電熱展片臺(tái)展片后,將材料平放在鋪有白色A4紙的托盤(pán)上,放置在溫度為36℃鼓風(fēng)干燥箱中,直至烘干;其中粘片時(shí)所選的高品質(zhì)載玻片需用新醫(yī)用脫脂棉擦干凈,肉眼觀察透亮無(wú)雜物,所選的蠟帶長(zhǎng)度小于封片時(shí)所用蓋玻片長(zhǎng)度;
(9)脫蠟、透明:烘片結(jié)束后,在二甲苯溶液中脫蠟、透明各一次,每次浸泡28~35min;
(10)封片、烘片:將從透明缸里面取出的載玻片放在圓形濾紙上面,從右邊方向立即滴2~3滴封片劑,封片后放置在溫度為36℃烘箱中烘烤10~15d,待樹(shù)膠烤干后,進(jìn)行觀察;其中封片劑是按體積比5:1將中性樹(shù)膠與二甲苯混合構(gòu)成;
(11)觀片:將完成的切片在顯微鏡上觀測(cè),獲得所需圖像。