本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2012年12月28日、申請(qǐng)?zhí)枮?01280068915.5、發(fā)明名稱為“通過顯微圖像自動(dòng)識(shí)別全血樣品中血小板的方法和設(shè)備”的原案申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。

本申請(qǐng)要求2011年12月30日遞交的序列號(hào)為61/581,887的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)的權(quán)益，其所公開的基本主題通過引用并入文中。

本發(fā)明總體涉及通過顯微圖像對(duì)全血樣品進(jìn)行分析的方法和設(shè)備，尤其涉及自動(dòng)分析血小板的方法和設(shè)備。

背景技術(shù)：

醫(yī)療診斷通常包括分析病人的全血樣品。較流行的診斷之一是全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(被稱為“cbc”)，其中，全血細(xì)胞計(jì)數(shù)為一系列包括“血小板計(jì)數(shù)”(即，凝血細(xì)胞計(jì)數(shù))的測(cè)試。該血小板計(jì)數(shù)實(shí)際上是一種濃度測(cè)定，即，單位體積中的血小板數(shù)量。在一個(gè)成年人體內(nèi)，正常的血小板計(jì)數(shù)通常約為每微升血液內(nèi)有150000到450000個(gè)血小板。異常的血小板計(jì)數(shù)成為健康問題的一個(gè)指標(biāo)，如，如感染、疾病等。如果血小板水平降低到每微升20000以下，則可能發(fā)生自發(fā)性出血，并且，這被認(rèn)為具有威脅生命的風(fēng)險(xiǎn)。

以前，通過在載玻片上涂抹少量的未稀釋血液或流式細(xì)胞術(shù)而實(shí)施血小板計(jì)數(shù)。對(duì)于涂片而言，該樣品被涂覆到載玻片上，并且對(duì)位于該涂片內(nèi)的血小板和其它的成分進(jìn)行計(jì)數(shù)?；谠摌悠分械南嚓P(guān)成分來估算血小板計(jì)數(shù)(即，該樣品內(nèi)每單位體積的血小板)。

通過電阻抗或光學(xué)流式細(xì)胞術(shù)分析儀來執(zhí)行血小板計(jì)數(shù)，該血液樣品必須被稀釋然后穿過一個(gè)小容器，其中，當(dāng)組成細(xì)胞連續(xù)地通過該容器時(shí)，電阻抗或者光學(xué)傳感器可以估算樣品中的組成細(xì)胞。根據(jù)樣品內(nèi)存在的成分，這些儀器的準(zhǔn)確性可能會(huì)受到影響。在一個(gè)阻抗式計(jì)數(shù)儀中，例如，紅細(xì)胞碎片可以被認(rèn)為和視作血小板，而且巨大血小板可以被認(rèn)為和視作紅細(xì)胞(rbc)。在這兩種情況下，自動(dòng)的血小板計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性都會(huì)受到影響。另外，樣品的稀釋必須精確，或者說，精度受到負(fù)面影響，并且已稀釋的樣品必須被妥善地進(jìn)行事后分析處理。所需的處理稀釋后的樣品的內(nèi)部管道經(jīng)常需要維護(hù)，并且至多對(duì)設(shè)備的復(fù)雜度和成本明顯有利。

所需要的是，用于對(duì)全血樣品執(zhí)行包括血小板計(jì)數(shù)的自動(dòng)分析的裝置和方法，其可克服現(xiàn)有技術(shù)的局限性，該局限性包括用于執(zhí)行該分析所需的時(shí)間、用于執(zhí)行該分析所需的操作員技術(shù)水平；并且，該裝置和方法比已知的現(xiàn)有技術(shù)的方法和裝置能夠提供更廣泛的適用性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種識(shí)別全血樣品中的血小板的方法。該方法包括步驟：a)將至少一種著色劑添加到該全血樣品中，該著色劑用于標(biāo)記血小板；b)將該全血樣品置于由至少一個(gè)透明板限定的腔中；c)將靜止地位于該腔內(nèi)的所述樣品的至少一部分成像以形成一個(gè)或多個(gè)圖像；并且d)采用分析儀識(shí)別樣品中的一個(gè)或多個(gè)血小板，該分析儀適于基于該圖像中可定量確定的特征識(shí)別血小板，該可定量確定的特征包括強(qiáng)度差異。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種識(shí)別全血樣品中的血小板的設(shè)備。該設(shè)備包括一個(gè)分析盒和一個(gè)分析裝置。該分析盒包括一個(gè)帶有一對(duì)平面構(gòu)件的分析腔，該平面構(gòu)件中的至少一個(gè)是透明的。將至少一種著色劑添加到該全血樣品中(如，在分析盒內(nèi))，該著色劑用于標(biāo)記血小板。該腔可操作地保持該樣品靜止地位于這兩個(gè)平面構(gòu)件之間。該分析裝置用于使靜止地位于該腔內(nèi)的該樣品的至少一部分成像。該分析裝置適于基于圖像內(nèi)的可定量確定的特征識(shí)別血小板，該可定量確定的特征包括強(qiáng)度差異。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式，確定了在圖像中局部區(qū)域內(nèi)的強(qiáng)度差異。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式，獲取了血漿的圖像強(qiáng)度。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式，使用強(qiáng)度差異的定向?qū)Ρ榷仍u(píng)估了血小板的候選者。

根據(jù)本發(fā)明的一方面，評(píng)估了該圖像以確定該樣品中存在一個(gè)或多個(gè)血小板簇。

根據(jù)本發(fā)明的一方面，識(shí)別該圖像內(nèi)的血小板候選者、并采用基于規(guī)則的分類器分析該圖像內(nèi)的血小板候選者，該分類器使用多個(gè)定量特征。

上面描述的本發(fā)明的各個(gè)方面和實(shí)施方式可以單獨(dú)或組合使用，且本發(fā)明不限于任何特定的配置。如附圖所示，根據(jù)下面提供的本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明的這些和其它的方面、實(shí)施方式、特征以及優(yōu)點(diǎn)將變得顯而易見。

附圖說明

圖1為根據(jù)本發(fā)明的可操作地執(zhí)行血小板分析的分析裝置的示意圖；

圖2為根據(jù)本發(fā)明的可使用的具有分析腔的分析盒的透視圖；

圖3為圖2所示的盒的分解圖；

圖4為支承分析腔的托盤的頂部平面視圖；

圖5為分析腔的示意性剖面圖；

圖6為顯示熒光成像下的樣品中的血小板和白細(xì)胞的圖像；

圖7為顯示膠線/樣品的界面的圖像；

圖8為顯示樣品/空氣的界面的圖像；

圖9為腔的樣品入口區(qū)域的圖像；

圖10是血小板內(nèi)的強(qiáng)度定向?qū)Ρ榷鹊氖疽鈭D解；

圖11a-圖11c是血小板候選者內(nèi)的圖像強(qiáng)度高斯分布的示意圖；

圖12是顯示在熒光成像下的樣品內(nèi)的小珠的圖像；

圖13是正交網(wǎng)格的邊界框內(nèi)的血小板候選者的示意圖；

圖14是當(dāng)前置于一個(gè)凸殼內(nèi)的圖14中顯示的一個(gè)血小板候選者的示意圖；

圖15為示出用于通過樣品圖像識(shí)別在樣品內(nèi)的血小板的本發(fā)明方法的實(shí)施方式的流程圖。

具體實(shí)施方式

參見圖1和圖2，本發(fā)明的各方面包括用于識(shí)別和枚舉靜止地位于分析腔內(nèi)的血液樣品中的血小板的方法和設(shè)備。分析腔通常容納在盒20內(nèi)，該盒被配置成與自動(dòng)化分析裝置22一起使用，其中，該自動(dòng)化分析裝置具有成像硬件和程控分析儀，該程控分析儀適于獲取和分析該樣品的圖像，從而識(shí)別和計(jì)數(shù)該樣品中的血小板。

參閱圖2至圖5，本發(fā)明不限于任意使用特定分析腔的實(shí)施方式。在美國(guó)專利no.7,850,916以及美國(guó)專利申請(qǐng)no.12/971,860、no.13/341,618和no.13/594,439中描述了可接受的分析腔(和附帶的盒)的例子，其全部?jī)?nèi)容均被引用并入本文中。為了該公開內(nèi)容，本發(fā)明將描述成使用美國(guó)專利申請(qǐng)no.13/594,439中描述的盒和分析腔。在專利申請(qǐng)no.13/594,439中公開的分析腔24包括一個(gè)上平面構(gòu)件26和一個(gè)附接在托盤30上的底部平面構(gòu)件28，托盤30可拆卸地安裝在盒20內(nèi)。在一些實(shí)施方式中，多個(gè)分離小珠31(如大小一致的小珠)被置于上平面構(gòu)件26和底部平面構(gòu)件28之間，且通常是與這些平面構(gòu)件相對(duì)的表面接觸。圖2示出了組裝的形式的盒20。圖3示出盒20的分解圖，盒20包括分析腔24和托盤30。圖4是安裝在托盤30上的分析腔24的頂視圖，并示出腔24的x-y平面視圖。圖5為腔24的示意性截面圖，示出腔24的z-x平面視圖。腔24的高度32沿z-軸延伸，并在這兩個(gè)平面構(gòu)件的相對(duì)的內(nèi)表面34和內(nèi)表面36之間延伸。對(duì)于全血樣品分析而言，腔24的高度32優(yōu)選地大約4微米(4μm)，但是腔24并不限于這一高度。

參照?qǐng)D1，與上述腔24可一起操作使用的分析裝置22，通常包括物鏡34、盒定位器36、一個(gè)或多個(gè)樣品照明器38，一個(gè)或多個(gè)析像管40和程控分析儀42。物鏡34和盒定位器36中的一個(gè)或兩個(gè)可朝向彼此移動(dòng)或可移動(dòng)彼此遠(yuǎn)離，從而改變分析裝置相對(duì)于腔24以及置于腔24內(nèi)的樣品的相對(duì)焦點(diǎn)位置。

樣品照明器38使用沿著預(yù)定波長(zhǎng)的光照射樣品。例如，樣品照明器38可包括落射熒光光源和透射光源。如下文將解釋的，諸如吖啶橙(也稱為“堿性橙15”或“aco”)的著色劑當(dāng)與全血混合且處于落射熒光光源(該光源通常發(fā)出在約450nm至490nm的范圍內(nèi)的光)發(fā)出的激發(fā)波長(zhǎng)時(shí)，發(fā)出具有特定波長(zhǎng)的光。約470nm的激發(fā)波長(zhǎng)是尤其有用的。例如，透射光源可操作地產(chǎn)生與紅光和綠光中相關(guān)的波長(zhǎng)的光。產(chǎn)生的紅光通常在約600nm至700nm的范圍內(nèi)，優(yōu)選地紅光約為660nm。產(chǎn)生的綠光通常在約515nm至570nm的范圍內(nèi)，優(yōu)選地綠光約為540nm。使用析像管40捕獲穿過樣品傳輸?shù)墓饣蛘邩悠钒l(fā)出的熒光，并且，代表所捕獲的光的信號(hào)被發(fā)送至程控分析儀42，在程控分析儀處信號(hào)被處理成圖像。以這樣的方式制作圖像：允許在每單位基礎(chǔ)上確定圖像內(nèi)所捕獲的透光率或熒光強(qiáng)度；例如“每單位基礎(chǔ)”為增加的單位，其中樣品圖像可被分割(例如像素)。

可接受的析像管40的示例為電荷耦合器件(ccd)型圖像傳感器，該圖像傳感器使穿過樣品的光(或來自樣品的光)轉(zhuǎn)化成電子數(shù)據(jù)格式圖像?；パa(bǔ)性金屬氧化物半導(dǎo)體(“cmos”)型圖像傳感器為可使用的圖像傳感器的另一示例。來自析像管40的信號(hào)為圖像的每一像素提供信息，該信息包括或者可被推導(dǎo)出包括強(qiáng)度、波長(zhǎng)和光密度。為強(qiáng)度值賦予例如0單位至4095單位(“ivu”)中的任意數(shù)值范圍。光密度(“od”)為相對(duì)于穿過基質(zhì)傳輸?shù)墓饬?，所吸收的光量的度量；例如，“od”值越高，則在透射期間所吸收的光量越大。可以光密度單位(“odu”)或其分?jǐn)?shù)定量描述od；例如，毫odu為odu的千分之一。一個(gè)“od”單位降低90％的光強(qiáng)度。作為定量值的“odu”或“毫odu”可用于通過透射光所獲得的圖像或通過透射光所衍生的圖像。來自析像管40的信息被分成多個(gè)通道。例如，來自析像管40的信息可被分成三個(gè)通道。然而，本發(fā)明不限于三通道的實(shí)施方式。三個(gè)通道中的第一通道可針對(duì)與樣品發(fā)出的第一波長(zhǎng)(例如，540nm，呈現(xiàn)綠色)的光有關(guān)的信息。第二通道可針對(duì)與樣品發(fā)出的第二波長(zhǎng)(例如，660nm，呈現(xiàn)紅色)的光有關(guān)的信息。第三通道可針對(duì)與穿過樣品的第三波長(zhǎng)(例如，413nm，該波長(zhǎng)用于確定藍(lán)光密度-“od”)的光有關(guān)的信息。本發(fā)明不限于這些特定的波長(zhǎng)或通道數(shù)目。

程控分析儀42包括中央處理單元(cpu)，且與盒定位器36、樣品照明器38和析像管40進(jìn)行通信。程控分析儀42適于(例如，被程控)發(fā)送和接收來自盒定位器36、樣品照明器38和析像管40中的一個(gè)或多個(gè)的信號(hào)。例如，該程控分析儀42適于：1)發(fā)送和接收來自盒定位器36的信號(hào)以相對(duì)于光學(xué)器件、照明器38和析像管40中的一個(gè)或多個(gè)而定位盒和腔24；2)將信號(hào)發(fā)送給樣品照明器38以產(chǎn)生規(guī)定波長(zhǎng)(或可替選地多個(gè)波長(zhǎng))的光；和3)發(fā)送和接收來自析像管40的信號(hào)以捕獲規(guī)定的時(shí)間段的光。應(yīng)當(dāng)注意，使用硬件、軟件、固件或其組合可實(shí)現(xiàn)程控分析儀42的功能。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠?qū)μ幚韱卧炭匾詧?zhí)行本文所描述的功能，而不需過多的實(shí)驗(yàn)。

程控分析儀42進(jìn)一步適于根據(jù)識(shí)別樣品圖像中的血小板的算法，處理從析像管40接收到的信號(hào)，并從與血小板類似但不是血小板的圖像特征以及使得血小板模糊的背景特征中區(qū)分出血小板。

分析裝置22適于對(duì)置于分析腔24內(nèi)的基本上未稀釋全血樣品進(jìn)行成像。該樣品與一定量的用于染色該樣品中包含的血小板的熒光染料(或其它著色劑)混合。向樣品中添加和混合該染料可以發(fā)生在使樣品成像前的任意時(shí)間；如，在通過毛細(xì)管流經(jīng)過腔24之前在盒的通道內(nèi)混合。染料滲過血小板并染色各個(gè)血小板。當(dāng)激發(fā)時(shí)，染料產(chǎn)生與特定顏色相關(guān)的特定波長(zhǎng)的熒光發(fā)射。血小板中的染料發(fā)出的光的具體顏色和強(qiáng)度通常是一系列因素的函數(shù)，包括：血小板中染料的濃度和血小板的ph。如下文即將描述的，熒光發(fā)射產(chǎn)生表示血小板的局部峰值發(fā)射區(qū)域，其從血小板發(fā)射出。

當(dāng)對(duì)全血樣品執(zhí)行l(wèi)dc時(shí)，可使用的可接受的著色劑的一個(gè)示例為吖啶橙(“aco”)。aco為熒光染料，當(dāng)其與全血樣品混合時(shí)，對(duì)樣品內(nèi)的血小板(以及wbc(白細(xì)胞)50和網(wǎng)狀細(xì)胞)染色。本發(fā)明不限于使用aco；可使用其它染料(例如堿性橙)代替aco，或者結(jié)合aco使用其它染料。以aco作為示例，如果樣品經(jīng)受在470nm波長(zhǎng)或大約470nm波長(zhǎng)的激發(fā)光照射，則血小板內(nèi)的aco將發(fā)射大約540nm的光(呈現(xiàn)綠色)以及大約660nm的光(呈現(xiàn)紅色)。

為了執(zhí)行血小板計(jì)數(shù)，分析儀42適于(如通過算法被程序控制)以引導(dǎo)樣品照明器38利用激發(fā)光(如約為470nm的光)和透射光(如約為413nm和660nm的光)照射靜止地置于樣品中的樣品。當(dāng)遇到激發(fā)光時(shí)，每個(gè)血小板中的熒光染料發(fā)射約為540nm的綠光和約為660nm的紅光。使用析像管40捕獲從該樣品中發(fā)射出的熒光和通過該樣品的透射光，將代表捕獲光的信號(hào)發(fā)送到程控分析儀42，在此處將該信號(hào)處理成圖像。以這樣的方式生成圖像：允許在每個(gè)單位基礎(chǔ)上確定圖像內(nèi)捕獲的熒光強(qiáng)度和透射強(qiáng)度。

程控分析儀42適于從析像管40中收集圖像數(shù)據(jù)信號(hào)和處理這些圖像數(shù)據(jù)信號(hào)以促進(jìn)識(shí)別圖像中顯示的血小板。程控分析儀42還適于確定靜止地置于所述分析腔24內(nèi)的樣品的體積。例如，算法適于識(shí)別分析腔24內(nèi)的樣品的邊界，例如膠線44/樣品46的界面(如，參見圖7)和通常存在于樣品46的邊緣且未碰到膠線44的樣品46/空氣48的界面49(如，參見圖8)，其中，膠線44形成腔24的橫向邊界。腔24的高度32是已知的或可確定的。一旦確定被樣品46占用的腔24的面積(如，圖像的各個(gè)像素具有相關(guān)的腔面積)，使用樣品面積和與腔24的相關(guān)高度可以確定樣品的體積。

在一些實(shí)施方式中，通過平滑算法對(duì)圖像數(shù)據(jù)信號(hào)進(jìn)行初始處理，該平滑算法過濾這些信號(hào)以使圖像的背景部分更加均勻。可接受的平滑算法的一個(gè)示例為將形貌濾波器(如，圖像打開濾波器)應(yīng)用到圖像數(shù)據(jù)。濾波器可用于減輕一些背景變化，且可用于去除圖像中的大型明亮的物體，如白細(xì)胞50(“wbc”)。由于wbc50內(nèi)包含的材料，wbc50(如rna、dna)可呈現(xiàn)為強(qiáng)度峰值，所述材料被用于增強(qiáng)血小板亮度的著色劑而加亮顯示。圖6示出圖像內(nèi)的血小板52和wbc50。然而，基于wbc50相對(duì)于血小板52的大的光強(qiáng)度，wbc50可以與血小板52區(qū)分開來。從圖像中消除wbc50(如，通過分割處理)有助于血小板52的識(shí)別。

也可以分析圖像數(shù)據(jù)以識(shí)別局部強(qiáng)度峰值。該局部峰值識(shí)別過程可以在“平滑”過程之前或之后執(zhí)行，但是在確定局部峰值強(qiáng)度之前執(zhí)行該平滑步驟首先消除一些潛在誤差源。然而無需這種平滑步驟?？梢允褂酶鞣N不同的技術(shù)執(zhí)行一個(gè)或多個(gè)規(guī)定的波長(zhǎng)下的局部強(qiáng)度峰值的識(shí)別。如下描述的，圖像強(qiáng)度可以基本上在整個(gè)樣品中變化，其中，變化可歸因于多種因素，如血漿強(qiáng)度變化、膠線近似、wbc濃度、rbc濃度等。可以通過定量地評(píng)估在局部基礎(chǔ)上的強(qiáng)度差異(如峰值)來提高血小板識(shí)別的準(zhǔn)確度。在此使用的術(shù)語“局部”是指靜止地置于腔24內(nèi)的樣品內(nèi)的限定的小區(qū)域，其中，這些小區(qū)域可根據(jù)預(yù)定的像素區(qū)域來限定，如一個(gè)5x5平方像素。一個(gè)5x5平方像素在評(píng)估血小板52時(shí)是有用的，因?yàn)樵谟糜诔上竦姆直媛氏峦ǔ＜s2-3μm大小的血小板31處于5x5平方像素的范圍內(nèi)。然而，本發(fā)明不限于這種特定大小的“局部區(qū)域”。在這些局部區(qū)域的每一區(qū)域中，確定最大樣品圖像強(qiáng)度值。例如，樣品可受到熒光激發(fā)光和所獲得的樣品圖像的影響，該樣品圖像包括發(fā)射光強(qiáng)度；如在綠色熒光通道內(nèi)的發(fā)射光強(qiáng)度。一旦確定了各個(gè)局部區(qū)域內(nèi)的圖像強(qiáng)度峰值，則可以用全局閾值消除低于該全局閾值的那些強(qiáng)度峰值(如，最大值)。這一識(shí)別過程建立了圖像內(nèi)的潛在表示血小板31的所有部分，這些部分在下文中分別被稱為“血小板候選者”。一旦識(shí)別出所有的潛在血小板候選者，那么就可以進(jìn)一步分析圖像數(shù)據(jù)來消除這些不是血小板52的候選者，并識(shí)別出在圖像內(nèi)可能存在的血小板凝塊。

與分析腔膠線44和樣品/空氣的界面49相鄰的樣品圖像部分的圖像強(qiáng)度可以通過由膠線44和樣品/空氣的界面49引起的光強(qiáng)度效應(yīng)而被污染。例如，從圖7中可看出，當(dāng)該樣品被照亮?xí)r，膠線44呈現(xiàn)為明亮的且具有高圖像強(qiáng)度。該膠線44的高圖像強(qiáng)度引發(fā)相鄰的區(qū)域比它們?cè)揪哂懈蟮膹?qiáng)度，繼而增高了弄錯(cuò)血小板識(shí)別的可能性，或者由于整體強(qiáng)度而丟失血小板52的可能性。從圖8中也可以看出，某些程度上同樣的效應(yīng)也發(fā)生在了樣品/空氣的界面49上。可以由分析儀42通過算法實(shí)施以解釋在相鄰圖像部分內(nèi)的強(qiáng)度污染(即，異常區(qū)域)的一種技術(shù)是，從血小板計(jì)數(shù)的考慮中去除這些相鄰圖像部分；如通過遮蓋等。例如，通過估算相關(guān)歷史數(shù)據(jù)確定去除多少樣品圖像。例如，去除與膠線相鄰的約100像素行的樣品圖像通常適于足以清除由于膠線44造成的強(qiáng)度污染。類似地，與樣品/空氣的界面49相鄰的約80像素行的樣品圖像通常適于足以清除由于該界面造成的強(qiáng)度污染。為了說明已清除的樣品圖像部分中存在的血小板52，可以基于在已清除區(qū)域局部的樣品圖像區(qū)域中確定的相對(duì)數(shù)量，來估算在這一區(qū)域內(nèi)的血小板數(shù)量。

在一些實(shí)施方式中，處理器42內(nèi)使用的算法可以進(jìn)一步適于辨認(rèn)血小板識(shí)別有問題的其他區(qū)域。例如，在一些情況下，分析腔24的區(qū)域可以具有抑制精確體積測(cè)定的差異。在這樣的情況下，在那樣的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行精確的血小板計(jì)數(shù)(是一個(gè)體積函數(shù))的能力可被折中。例如，圖9顯示了腔入口區(qū)域由于在該區(qū)域內(nèi)樣品過多造成的圖像異常58。為了解釋這種異常，該區(qū)域內(nèi)的血小板52的數(shù)量可以基于位于該問題區(qū)域的樣品區(qū)域中的血小板計(jì)數(shù)來估算。

另一個(gè)可以由分析儀42通過算法實(shí)施的促進(jìn)血小板52識(shí)別的技術(shù)，是消除初始獲取的圖像中存在的背景。例如，可將濾波器應(yīng)用于圖像數(shù)據(jù)信號(hào)，以去除在強(qiáng)度上(如，綠光強(qiáng)度)低于預(yù)設(shè)全局閾值的變化。可能被認(rèn)為是血小板52的低于全局閾值的局部強(qiáng)度最大值可以被消除，從而消除將那些強(qiáng)度峰值被誤認(rèn)為血小板52的可能性。例如，分割技術(shù)可作為一種清除背景的機(jī)制。本發(fā)明不限于任意特定的分割技術(shù)，可根據(jù)目前的應(yīng)用而選擇一種具體的技術(shù)。本發(fā)明也不限于使用分割技術(shù)來消除背景，也可以使用選擇(即“拾取”)像素或者區(qū)別具有特定屬性的像素的其他技術(shù)。

另一種可以由分析儀42通過算法實(shí)施的促進(jìn)識(shí)別血小板52的技術(shù)包含獲取(如，估算)樣品局部區(qū)域內(nèi)的血漿圖像強(qiáng)度。血漿通常比rbc更亮(即，更高的圖像強(qiáng)度)，但是沒有血小板52亮。添加到樣品中的至少一些熒光染料位于該血漿中，結(jié)果通過激發(fā)光照亮樣品，在血漿內(nèi)形成某種程度的發(fā)射光強(qiáng)度。然而，血漿中染料的分布在整個(gè)樣品中可能不是均勻的。因此，在分析腔24內(nèi)設(shè)置的樣品中，血漿的圖像強(qiáng)度可能會(huì)有很大變化。例如，表示樣品的第一區(qū)域內(nèi)的血漿的圖像強(qiáng)度的成像數(shù)據(jù)與樣品的第二區(qū)域內(nèi)的血漿的圖像強(qiáng)度的成像數(shù)據(jù)相比，可以差異高達(dá)30％-40％。在血漿強(qiáng)度中的均勻性的缺乏，使得在沒有負(fù)面地影響血小板識(shí)別過程的情況下，難于統(tǒng)一獲取血漿強(qiáng)度。在樣品存在大量rbc54的區(qū)域中，血漿強(qiáng)度的非均勻性特別有問題。如果不考慮血漿強(qiáng)度，則rbc區(qū)域內(nèi)可見的小的血漿區(qū)域可呈現(xiàn)為局部強(qiáng)度峰值，其可能會(huì)被錯(cuò)誤識(shí)別成血小板52。為了解決這一問題，該算法可適于在rbc區(qū)域內(nèi)應(yīng)用rbc遮蓋來將rbc54分割出來(或者從圖像中將它們?nèi)コ?，留下剩余的血漿區(qū)域。例如，rbc54在圖像信號(hào)數(shù)據(jù)的紅色通道中沒有表達(dá)。因此，使用紅色通道遮蓋形成的圖像將會(huì)只顯示血漿的強(qiáng)度和在rbc區(qū)域內(nèi)的任意血小板52的強(qiáng)度。根據(jù)兩種樣品成分之間的強(qiáng)度上的差異(如，比周圍像素高約20％的那些像素)，可定量地從局部血漿中區(qū)分出血小板52。在那些沒有足夠血漿的面積以不允許這類比較分析的rbc區(qū)域中，可以基于rbc54本身的圖像強(qiáng)度使用可替選的技術(shù)。例如，在那些區(qū)域內(nèi)的估算的血漿圖像強(qiáng)度可以基于下述估算：(rbc平均圖像強(qiáng)度)+3*(rbc圖像強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)偏差)＝估算的血漿強(qiáng)度。本方法不限于這種特定的可替選技術(shù)。

在將一個(gè)或多個(gè)上面描述的技術(shù)應(yīng)用于血小板候選者以及不考慮非血小板候選者(根據(jù)它們被識(shí)別的程度)后，可以通過評(píng)估每個(gè)獨(dú)立候選者的特征來進(jìn)一步分析剩余的候選者?？梢杂煞治鰞x42通過算法實(shí)施的第一技術(shù)包括評(píng)估給定區(qū)域內(nèi)候選者的強(qiáng)度峰值的方向?qū)Ρ榷取Ｔ搮^(qū)域可以根據(jù)強(qiáng)度峰值周圍的像素進(jìn)行限定。例如，使用對(duì)于全血分析有用的分辨率(如，0.5μm/5像素)，潛在地代表血小板候選者的區(qū)域可被限定為，從強(qiáng)度峰值向外直到約三或四個(gè)(3或4)像素，四(4)個(gè)像素外的區(qū)域被限定為血小板候選者外的區(qū)域。本發(fā)明不限于這些區(qū)域限定，且可以被選擇以適于當(dāng)前的應(yīng)用。在限定區(qū)域內(nèi)，血小板52具有強(qiáng)度的方向?qū)Ρ榷?，其中，在朝向區(qū)域的邊界的方向上，強(qiáng)度從區(qū)域的中心向外減小(即，從強(qiáng)度峰值向外，圖10中概要地示出)。例如，峰值強(qiáng)度在中心為最大值，并且朝向該區(qū)域邊界沿著向外延伸的斜坡減少。對(duì)于按照形成圖像的像素而被逐步分割的圖像，每個(gè)像素在朝區(qū)域邊界的方向上具有強(qiáng)度的減少。這種強(qiáng)度遞減存在于在該區(qū)域中心的最大強(qiáng)度值之外的多個(gè)方向上，但是并不是必須存在于所有方向上。該強(qiáng)度方向?qū)Ρ榷鹊闹芟蚓鶆蛐裕梢酝ㄟ^定量地評(píng)估圍繞該候選者的強(qiáng)度峰值每旋轉(zhuǎn)“y”度(如，每30度)時(shí)的像素的圖像強(qiáng)度來評(píng)估。每像素強(qiáng)度降低的比率，也可以變化以適應(yīng)當(dāng)前應(yīng)用。另外，第一強(qiáng)度減少百分比可用于樣品的第一區(qū)域，第二較高的強(qiáng)度減少百分比可用于樣品的血小板識(shí)別較為困難的其他區(qū)域；例如，在較高的血漿強(qiáng)度區(qū)域或rbc區(qū)域，使用較高的強(qiáng)度減少百分比。圖10概略地描述了血小板候選者的強(qiáng)度峰值，其示出在朝向區(qū)域邊界的單一方向上從區(qū)域中心向外的強(qiáng)度遞減。

另一種通過算法評(píng)估單個(gè)候選者的特征的技術(shù)包括：定量確定在給定區(qū)域(根據(jù)方向?qū)Ρ榷热缟舷薅ǖ膮^(qū)域)中圍繞候選者強(qiáng)度峰值的強(qiáng)度遞減的高斯分布。圖11a至圖11c概略地說明了強(qiáng)度峰值周圍強(qiáng)度的三種不同的高斯分布。在圖11a中，一種清晰地限定的強(qiáng)度峰值位于區(qū)域中心，且該強(qiáng)度分布均勻地遠(yuǎn)離該中心峰值減少；逐像素減少約4％的強(qiáng)度。這種強(qiáng)度分布在血小板圖像中非常典型，且具有這種分布的血小板候選者被接受作為血小板圖像。在圖11b中，這種分布說明了在被近似相同的強(qiáng)度區(qū)域(例如，該中心像素之間的強(qiáng)度變化低于3％)包圍的該區(qū)域中心內(nèi)的強(qiáng)度峰值，該近似相同的區(qū)域反而被在向外方向上有相對(duì)大的強(qiáng)度減少的區(qū)域包圍。這種強(qiáng)度分布(作為具有大強(qiáng)度峰值區(qū)域出現(xiàn))在血小板圖像中不太典型，且可能會(huì)作為被過分曝光的圖像的函數(shù)?；谠搱D像的情況，具有這種類型的高斯分布的血小板候選者可以被接受作為血小板；如，在它們有利地與局部血小板強(qiáng)度值等比較時(shí)，被接受作為血小板。在圖11c中，該分布說明了一種在該區(qū)域中心內(nèi)的相對(duì)清晰的強(qiáng)度峰值，該區(qū)域環(huán)繞沿外方向的強(qiáng)度驟減。這種強(qiáng)度分布不是血小板的象征，且這些血小板候選者也沒有被接受作為血小板52?？梢詫?duì)血小板候選者執(zhí)行高斯分布分析和方向?qū)Ρ榷确治鲋械囊环N或兩種分析。

在基本上未稀釋的全血樣品中，血小板52可以聚集成簇，在圖像中作為具有多個(gè)強(qiáng)度峰值的團(tuán)顯示出來。如果簇僅被視為單個(gè)血小板，則識(shí)別出的血小板52的數(shù)目將會(huì)比簇中實(shí)際存在的血小板的數(shù)目少。為了避免這種類型的錯(cuò)誤，分析儀42可以在算法上適于識(shí)別血小板簇和將它們與單個(gè)血小板52區(qū)分開來。一種識(shí)別和區(qū)分出簇的方法包括上面描述的高斯分布分析。這種技術(shù)使用高斯分布分析內(nèi)被定義為血小板候選者的區(qū)域(如，半徑為“x”像素內(nèi)的區(qū)域)的外部區(qū)域。為了識(shí)別簇，對(duì)比邊界處像素的圖像強(qiáng)度與局部血漿強(qiáng)度。如果一些候選者邊界像素(如，50％)分別具有比局部血漿圖像強(qiáng)度大的預(yù)定百分比的圖像強(qiáng)度，則那么該候選者就被認(rèn)為是簇。這是識(shí)別簇的一種方法的示例，本發(fā)明不限于這種特定實(shí)例。

一旦識(shí)別出簇，則可以使用多種技術(shù)來確定該簇中血小板52的數(shù)量。例如，可以應(yīng)用算法以確定對(duì)于簇內(nèi)的每個(gè)峰值的閾值圖像強(qiáng)度值(th)。該閾值圖像強(qiáng)度值(th)基于那個(gè)特定峰值的圖像強(qiáng)度和局部血漿強(qiáng)度值進(jìn)行確定。該閾值圖像強(qiáng)度值(th)比各個(gè)峰值強(qiáng)度值小，但是比局部背景強(qiáng)度值大。為了確定給定簇內(nèi)血小板52的數(shù)量，通過算法應(yīng)用一種“生長(zhǎng)”技術(shù)以識(shí)別簇。在這種生長(zhǎng)技術(shù)下，圖像單元(如，像素)與峰值強(qiáng)度圖像單元相鄰且具有等于或大于閾值圖像強(qiáng)度值(th)的強(qiáng)度值，被識(shí)別作為簇的一部分。然后這一過程將同一閾值評(píng)估，應(yīng)用到與被識(shí)別為簇的一部分的像素相鄰的像素。重復(fù)這一過程，直到?jīng)]有發(fā)現(xiàn)額外的具有比該閾值等級(jí)(th)高的強(qiáng)度等級(jí)的相鄰像素出現(xiàn)。

一旦該簇“成熟”了，確定在該簇內(nèi)與每個(gè)成熟的血小板(即，各個(gè)個(gè)體從上面描述的圖像強(qiáng)度峰值向外延伸)相關(guān)聯(lián)的面積，并確定這些延伸區(qū)域的平均面積值(plt平均成熟面積)。然后，對(duì)比該平均面積值(plt平均成熟面積)與已知的平均正常血小板面積(plt平均正常面積)。如果平均成熟面積(plt平均成熟面積)大于平均人類血小板面積的多倍(如，α*人類血平均正常面積，其中α可能等于1.x)，則可以由簇的總面積(a簇)除以平均人類血小板面積(如，a簇/plt平均正常面積)來限定該簇內(nèi)的血小板52的數(shù)量。如果平均成熟面積(plt平均成熟面積)小于上述平均人類血小板面積的多倍，則可以由簇的總面積(a簇)除以平均成熟血小板面積(如，a簇/plt平均成熟面積)來限定簇內(nèi)的血小板52的數(shù)量。

對(duì)于那些使用分析腔24的血小板分析，該分析腔24(例如在‘114申請(qǐng)中公開的腔)具有在其內(nèi)設(shè)置的小珠31，小珠31可以這樣出現(xiàn)在圖像中：其具有圍繞其邊界的亮環(huán)，即，圖像內(nèi)高強(qiáng)度的環(huán)。圖12顯示的圖像包括多個(gè)小珠31，每個(gè)小珠31具有在其邊界小珠31周圍的高圖像強(qiáng)度的環(huán)。

為了避免與小珠31相關(guān)的可能的血小板識(shí)別誤差(如，在亮環(huán)內(nèi)、或者非常接近環(huán)、或者在環(huán)內(nèi))，分析儀42可用于使用基于規(guī)則的分類器基于多個(gè)特征評(píng)估與小珠31相關(guān)的強(qiáng)度峰值。然而，為了分析用于血小板52的小珠相鄰區(qū)域，本發(fā)明不限于單獨(dú)使用該分析儀。

作為初始步驟，在圖像樣品中識(shí)別小珠31。例如，在所形成的樣品圖像內(nèi)可識(shí)別小珠31以確定樣品體積，在該圖像中小珠呈現(xiàn)為暗斑；如，在一些情況下，識(shí)別出來的小珠可以被遮蓋以更清楚地呈現(xiàn)為暗斑，從而促進(jìn)分析。然而，本發(fā)明不限于識(shí)別小珠31的這一技術(shù)。

一旦識(shí)別出小珠31，則識(shí)別小珠區(qū)域內(nèi)的每個(gè)圖像強(qiáng)度峰值，并將其視作血小板候選者。為了進(jìn)一步評(píng)估血小板候選者，然后候選者可受到如上所述的“生長(zhǎng)”技術(shù)的影響，以確定該候選者是否是血小板候選者或者可能是血小板簇。

對(duì)于被識(shí)別作為血小板候選者的每個(gè)強(qiáng)度峰值(例如，定位最靠近小珠31)，該候選者可使用基于規(guī)則的分類器進(jìn)一步評(píng)估候選者。在該基于規(guī)則的分類器的步驟中，使用多個(gè)定量特征中的至少一些特征來分析每個(gè)血小板候選者，多個(gè)定量特征中包括：面積、標(biāo)準(zhǔn)化峰值強(qiáng)度值、標(biāo)準(zhǔn)化平均強(qiáng)度值、標(biāo)準(zhǔn)化估算血漿強(qiáng)度、圓度、范圍(extent)、堅(jiān)實(shí)度(solidity)、偏心率、長(zhǎng)軸長(zhǎng)度和短軸長(zhǎng)度。這些定量特征是基于規(guī)則的分類器內(nèi)可以使用的特征的例子，但本發(fā)明不限于這些特定特征。此外，本發(fā)明不限于使用任何特定數(shù)量的這些特征或這些特征的任意特定結(jié)合；如，在一些情況下，基于規(guī)則的分類器在分類過程中可以使用少到一個(gè)特征或多到所有特征。

例如，為了評(píng)估特定的血小板候選者，該分類器可以先考慮候選者面積?？梢曰谠搱D像中候選者血小板占用的像素的數(shù)目來分配該候選者面積的定量值。

基于規(guī)則的分類器也適于考慮代表血小板候選者的標(biāo)準(zhǔn)化峰值強(qiáng)度值的定量值。例如，如上文所述，圖像強(qiáng)度值可被賦予例如0單位至4095單位(“ivu”)中的任意數(shù)值范圍的值。在這種特征中，將所確定的值除以4095可對(duì)峰值圖像強(qiáng)度值標(biāo)準(zhǔn)化。如上所述，該0-4095的強(qiáng)度范圍是一種任意范圍，且本發(fā)明不限于這種特定范圍。

基于規(guī)則的分類器也適于考慮代表血小板候選者的標(biāo)準(zhǔn)化平均強(qiáng)度值的定量值。在這種特征中，將所確定的值除以4095來平均和標(biāo)準(zhǔn)化血小板候選者內(nèi)的像素的圖像強(qiáng)度值。這里再次地，該0-4095的強(qiáng)度范圍是一種任意范圍，且本發(fā)明不限于這種特定范圍。

基于規(guī)則的分類器也適于考慮代表對(duì)于血小板候選者局部的血漿的標(biāo)準(zhǔn)化估算血漿強(qiáng)度的定量值。在這種特征下，以如上描述的方式相同或類似的方式，識(shí)別局部血漿區(qū)域，并確定那些血漿區(qū)域的代表性圖像強(qiáng)度值；如，確定局部血漿區(qū)域的平均強(qiáng)度值。采用例如上面描述的方式，標(biāo)準(zhǔn)化局部血漿區(qū)域的代表性圖像強(qiáng)度值；例如，將該值除以4095。

該基于規(guī)則的分類器還適于考慮代表血小板候選者的圓度的定量值。一種確定血小板候選者的圓度的方法包括使用下述等式：

其中，術(shù)語周長(zhǎng)被定義為圍繞血小板候選者邊界的距離，而術(shù)語面積是血小板候選者的面積。

基于規(guī)則的分類器也適于考慮代表血小板候選者范圍的定量值。在這一特征中，確定代表在邊界框60中也在“分割遮蓋”62內(nèi)的像素比例的定量值，該值被稱為范圍?！胺指钫谏w”62指邊界框60內(nèi)被血小板候選者所占用的區(qū)域。邊界框60的一個(gè)示例是包圍分割遮蓋62的正交網(wǎng)格64內(nèi)最小的框。圖13概略地示出置于正交網(wǎng)格64的邊界框60部分內(nèi)的橢圓形血小板候選者的分割遮蓋62。

基于規(guī)則的分類器也適于考慮代表血小板候選者的堅(jiān)實(shí)度的定量值代表。在這一特征中，確定代表在凸殼66內(nèi)也在分割遮蓋62內(nèi)的像素比例的定量值，該值也被稱為堅(jiān)實(shí)度。如上所述，該分割遮蓋62指被血小板候選者占用的區(qū)域。該凸殼66可以被定義為最小框，例如，分割遮蓋62可剛好放入該最小框內(nèi)，其中，包66可能不正交對(duì)齊。圖14概略地示出置于凸殼66內(nèi)的圖13中示出的橢圓形分割遮蓋62。

基于規(guī)則的分類器也適于考慮代表血小板候選者的偏心率的定量值。在這種特征中，確定橢圓形焦點(diǎn)之間的距離和其長(zhǎng)軸長(zhǎng)度的比率的定量值。

基于規(guī)則的分類器也適于考慮代表血小板候選者的長(zhǎng)軸長(zhǎng)度的定量值。在這種特征中，確定與分割遮蓋具有相同標(biāo)準(zhǔn)化的第二中心矩的橢圓形的長(zhǎng)軸的長(zhǎng)度(以像素表示)的定量值。

基于規(guī)則的分類器也適于考慮代表血小板候選者的短軸長(zhǎng)度的定量值。在這種特征中，確定與分割遮蓋具有相同標(biāo)準(zhǔn)化的第二中心矩的橢圓形的短軸的長(zhǎng)度(以像素表示)的定量值。

在來自特定對(duì)象的樣品總體內(nèi)，每一特征的定量值可在某種程度上發(fā)生變化，且還也在對(duì)象之間發(fā)生變化。例如，本發(fā)明通過典型地利用多個(gè)特征評(píng)估血小板候選者，來解釋這種變化性。通過使用多于一個(gè)特征來評(píng)估和識(shí)別血小板候選者，本方法降低了任何具體特征對(duì)評(píng)估的精確度產(chǎn)生負(fù)面影響的可能性。該變化性也可通過選擇性調(diào)整與每一特征相關(guān)的基準(zhǔn)定量值的幅值來說明。

在一些實(shí)施方式中，基于規(guī)則的分類器為基于學(xué)習(xí)模型的分類器。訓(xùn)練樣品圖像用于訓(xùn)練分類器，而受過訓(xùn)練的分類器反過來構(gòu)建學(xué)習(xí)模型。一旦建立學(xué)習(xí)模型，則利用該模型評(píng)估與來自樣品的血小板候選者圖像相關(guān)的特征(例如，如上文所描述的那些特征)，以及基于那些特征包括或排除那些特征。

訓(xùn)練樣品圖像為根據(jù)經(jīng)驗(yàn)采集的血小板圖像；例如由專業(yè)技術(shù)人員采集的血小板圖像。在一些實(shí)施方式中，訓(xùn)練樣品圖像可被分到各個(gè)特征相關(guān)的組中。出于訓(xùn)練目的，對(duì)于每一特征，選擇血小板圖像的數(shù)目以提供充分的數(shù)據(jù)，即提供充分的數(shù)據(jù)以使分類器受到訓(xùn)練從而對(duì)于分析類型來說具有可接受的精確度水平。在該實(shí)施方式內(nèi)所使用的學(xué)習(xí)模型不限于任何特定尺寸的訓(xùn)練組。訓(xùn)練組經(jīng)常可包含成百到成千個(gè)各類型的血小板特征以如實(shí)地表示在不同人、不同成像條件等中的變化性。

通過定量地評(píng)估訓(xùn)練組內(nèi)的每一血小板圖像可訓(xùn)練分類器(和建立學(xué)習(xí)模型)，以提供每一血小板的每一特征的基準(zhǔn)定量值。然后，共同的基準(zhǔn)定量值(或基準(zhǔn)值的統(tǒng)計(jì)學(xué)表示)可用于建立學(xué)習(xí)模型。學(xué)習(xí)模型允許本申請(qǐng)基于實(shí)際的圖像數(shù)據(jù)和該圖像數(shù)據(jù)的自動(dòng)解釋進(jìn)行調(diào)整從而提供所需的精確度。本發(fā)明不限于任何特定類型的學(xué)習(xí)模型?？山邮茴愋偷膶W(xué)習(xí)模型的示例包括諸如多層感知器的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型、諸如貝葉斯分類器的統(tǒng)計(jì)模型、諸如支持向量機(jī)(svm)的線性模型。所有這些類型學(xué)習(xí)模型都是廣為人知的，且本發(fā)明不限于其任意特定的實(shí)施方式。在一些實(shí)施方式中，可以使用這些模型(和/或其它模型)的組合。

在本發(fā)明的操作中，將未稀釋的全血樣品采集到例如圖2-5所示的一次性盒中。包括一種或多種著色劑(例如aco)和抗凝血?jiǎng)?例如edta)的試劑，被添加到樣品中以促進(jìn)血小板分析。將與試劑混合的樣品置于盒的分析腔部分中，在成像過程期間樣品靜止地位于該盒中。將盒插入(或者接合)到分析裝置22中，通過盒固定器36將盒相對(duì)于物鏡、樣品照明器38和析像管40合適地定位，隨后進(jìn)行成像。

在多數(shù)情況下，分析裝置22被程控以對(duì)靜止地置于腔24內(nèi)的全部樣品進(jìn)行成像。然而，在一些應(yīng)用中，可對(duì)樣品的一部分進(jìn)行成像。成像方法可根據(jù)即將進(jìn)行的應(yīng)用而變化。對(duì)于上述的血小板分析，成像方法包括使樣品受到熒光激發(fā)光源(例如來自落射熒光光源的約470nm的光)照射。激發(fā)光源導(dǎo)致與位于樣品內(nèi)的成分結(jié)合的著色劑發(fā)出兩個(gè)不同的波長(zhǎng)的熒光(例如，發(fā)出約660nm的紅光，發(fā)出約540nm的綠光)。析像管40捕獲來自樣品的發(fā)熒光的光，并且提供了代表所捕獲的光的強(qiáng)度和顏色(即，波長(zhǎng))的信號(hào)。該信號(hào)被處理成允許程控分析儀42基于信號(hào)形成樣品圖像的形式，該圖像可被定量分析以執(zhí)行血小板分析。

圖15中顯示的流程圖提供了方法的示例，通過該方法，根據(jù)本發(fā)明如上所述被成像的樣品中的血小板52能夠被識(shí)別且枚舉。本發(fā)明不需要圖15中確定的所有步驟在所有的實(shí)施方式中都被執(zhí)行，并且也不限于圖15中示出的步驟的特定順序。

圖15中示出的第一步驟包括將血液體積遮蓋應(yīng)用于圖像以確定被圖像內(nèi)的樣品占用的面積，然后該面積可被用于確定分析腔24的樣品的體積。也可以生成rbc遮蓋以隨后用來區(qū)分在特定區(qū)域內(nèi)的血小板52。

第二步驟包括去除樣品圖像內(nèi)的背景。如上文所述，圖像的背景部分可以通過包括閾值法的多種技術(shù)來識(shí)別，并且一旦被識(shí)別出來，可以通過濾波器、分割技術(shù)等去除。

第三步驟包括通過識(shí)別圖像給定區(qū)域中的局部強(qiáng)度最大值來識(shí)別圖像強(qiáng)度峰值。

第四步驟包括識(shí)別樣品圖像或者圖像部分中的wbc50，并將這些不是血小板候選者的圖像強(qiáng)度區(qū)域的區(qū)域排除在外。

第五步驟包括識(shí)別樣品圖像內(nèi)的小珠31，并布置可用于表示小珠31的圖像部分的遮蓋。

第六步驟包括估算需要識(shí)別血小板52的局部區(qū)域中的血漿強(qiáng)度；如，局部血漿強(qiáng)度值可被用于區(qū)分血小板52引起的局部強(qiáng)度峰值與血漿引起的局部強(qiáng)度峰值?？梢赃x擇性地在樣品內(nèi)的特定區(qū)域執(zhí)行這一步驟；如包含大量的rbc54的區(qū)域。

第七步驟包括分析特定血小板候選者，以確定該候選者的圖像強(qiáng)度峰值在從峰值向外延伸的一個(gè)或多個(gè)方向上是否具有方向?qū)Ρ榷取?/p>

第八步驟包括分析特定血小板候選者的圖像強(qiáng)度的高斯分布。如上所述，該高斯分布的性質(zhì)提供了特定候選者為真正血小板的可能性相關(guān)的信息。

第九步驟包括去除樣品圖像中的由成像系統(tǒng)中存在的缺陷(如分析腔面板的劃痕、面板上的碎屑等)而引起的成分。

第十步驟包括使用圖像生長(zhǎng)技術(shù)從候選者中識(shí)別出血小板52。這一技術(shù)可以被應(yīng)用到多種不同類型的血小板候選者上。例如，該生長(zhǎng)技術(shù)可以被應(yīng)用到被識(shí)別為潛在血小板簇的血小板候選者上。上面描述的示例中，生長(zhǎng)技術(shù)提供一種方式以評(píng)估被血小板候選者(或簇)占用的區(qū)域。該區(qū)域提供了隨后可以被用來評(píng)估候選者是否實(shí)際上是血小板的信息。如果該候選者是簇，則該區(qū)域提供可以被用來確定位于該簇內(nèi)的血小板52的數(shù)量的信息。

第十一步驟包括估算這些被確定為簇的候選者中的血小板52的數(shù)量?？捎糜诠浪愦貎?nèi)的血小板52的數(shù)量的數(shù)學(xué)方法的示例如上所述。本發(fā)明不限于這些特定算法。

第十二步驟包括對(duì)非常接近位于腔24內(nèi)的分離小珠31的血小板候選者進(jìn)行分類。如上所述，在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，程控分析儀42適應(yīng)于一種算法，該算法包括可能包含學(xué)習(xí)模型的基于規(guī)則的分類器。使用分類器評(píng)估血小板候選者并枚舉該識(shí)別出的血小板52。

一旦識(shí)別出真正的血小板52，則以單位體積值的血小板數(shù)量的方式、或以其它可用的形式，如第十三步驟所述，記錄在所確定的樣品體積內(nèi)的血小板52。

盡管已經(jīng)根據(jù)詳細(xì)實(shí)施方式示出和描述了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，本發(fā)明可進(jìn)行形式和細(xì)節(jié)上的各種修改。