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組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法與流程

文檔序號:12712236閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:依次對同一組織芯片進行RNA原位雜交、免疫組化染色和DNA原位雜交;

在所述RNA原位雜交、免疫組化染色和DNA原位雜交過程中,采用表位抗原修復蒸鍋對組織芯片進行分子交聯(lián)解鏈或抗原修復;

在RNA原位雜交、免疫組化染色過程中,在顯色后均用明膠甘油封片。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,所述免疫組化染色步驟包括對多個蛋白依次進行免疫組化染色。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,所述采用表位抗原修復蒸鍋對組織芯片進行分子交聯(lián)解鏈或抗原修復的具體步驟為:

A1、將抗原修復液加入抗原修復盒中,并將抗原修復盒置于表位抗原修復蒸鍋中預熱;

A2、然后將組織芯片浸泡于已預熱的抗原修復液中,95℃-98℃處理20 min至30 min;

A3、將抗原修復盒取出,室溫冷卻。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,在所述對多個蛋白依次進行免疫組化染色之前,需進行預實驗,確定每一次免疫組化染色所用抗體的最佳濃度和反應程度;所述對多個蛋白依次進行免疫組化染色根據(jù)所述多個蛋白對應抗體的信號,由弱到強的順序依次進行。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,在所述對多個蛋白依次進行免疫組化染色過程中,采用相同的顯色劑顯色。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,在所述RNA原位雜交、免疫組化染色和DNA原位雜交過程中,采用相同的顯色劑顯色。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,所述DNA原位雜交為TUNEL原位雜交。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,所述RNA原位雜交步驟中采用環(huán)保型生物制片透明劑脫蠟。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,當所述組織芯片為乳腺癌組織芯片時,所述對多個蛋白依次進行免疫組化染色所使用的一抗依次為CD68抗體、ET-IgG抗體、HIF-2a抗體、STAT-3抗體、MTC02抗體;

當所述組織芯片為結(jié)直腸癌組織芯片時,所述對多個蛋白依次進行免疫組化染色所使用的一抗依次為HIF-2a抗體、LT-IgG抗體、OS-IgG抗體、IgG抗體、CT-IgG抗體、MTC02抗體;或CD68抗體、LT-IgG抗體、OS-IgG抗體、CT-IgG抗體。

10.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,所述顯色劑為AEC顯色液。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織芯片的RNA-蛋白質(zhì)-DNA原位多重染色方法,其特征在于,在所述依次進行RNA原位雜交、免疫組化染色和DNA原位雜交之前還包括一驗證組織芯片質(zhì)量的步驟。

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