1.一種脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，該脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒包括：標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品、包被載體、酶標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物液、分析緩沖液及濃縮洗滌液；
標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品是以胎牛血清為基質(zhì)，由脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗原稀釋而成，其中標(biāo)準(zhǔn)品的濃度包括1000ng/mL、500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、0ng/mL共6個(gè)濃度，質(zhì)控品分為質(zhì)控低值和質(zhì)控高值，濃度范圍依次為150±15ng/mL、300±35ng/mL。
2.如權(quán)利要求1所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，載體為微孔板、磁性顆?；蛩芰瞎?。
3.如權(quán)利要求1所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，用于標(biāo)記的酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。
4.如權(quán)利要求1所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，化學(xué)發(fā)光底物液為3-(2’-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3’-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷或魯米諾。
5.如權(quán)利要求1所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，分析緩沖液為含有1％牛血清白蛋白和0.05％吐溫-20的10mM磷酸鹽緩沖溶液，pH7.2-7.4。
6.如權(quán)利要求1所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，濃縮洗滌液為含有1％吐溫-20的20mM磷酸鹽緩沖溶液，pH7.2-7.4。
7.一種脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒制備方法，其特征在于，該脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒制備方法包括以下步驟：
步驟一，制備脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品：
用pH7.4、20mmol/L PBS緩沖液與胎牛血清按體積比3∶1比例混合配制成基礎(chǔ)緩沖液，用基礎(chǔ)緩沖液將脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2重組抗原稀釋成濃度為1000、500、250、100、50、0ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品；用基礎(chǔ)緩沖液將脂蛋白相關(guān)磷脂 酶A2重組抗原稀釋成濃度為300ng/mL高值質(zhì)控品和150ng/mL低值質(zhì)控品，高、低質(zhì)控品的濃度測定范圍經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析確定為300±35ng/mL、150±15ng/mL；
步驟二，制備包被有脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體的載體：
載體為微孔板或塑料管時(shí)，包被載體通過以下方法制備：脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體用包被緩沖液稀釋，取待包被載體，將經(jīng)過稀釋的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體負(fù)載于載體上，包被結(jié)束后，吸去包被緩沖液，再加入封閉緩沖液，置于37℃封閉2小時(shí)或4℃封閉過夜；棄去封閉液，室溫18-25℃干燥3-4小時(shí)后加入干燥劑密封包裝，得到脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體包被載體，所述包被緩沖液為pH7.2-7.4、10mmol/L磷酸鹽溶液，脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體的稀釋濃度為5ug/mL；稀釋的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體在載體上的包被量可為每孔100ul；包被的條件可置于37℃包被2小時(shí)或4℃包被過夜；封閉緩沖液為pH7.2-7.4、10mmol/L PBST溶液，內(nèi)含1％BSA、0.1％Proclin300及3％蔗糖；封閉緩沖液的加入量可為每孔300ul；封閉后包被載體的干燥環(huán)境相對濕度小于30％；
步驟三，制備脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體酶標(biāo)記物：
用于標(biāo)記的酶為堿性磷酸酶時(shí)，酶標(biāo)記抗體的制備方法為：采用戊二醛交聯(lián)法將脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體與堿性磷酸酶偶聯(lián)，用pH7.2、10mmol/L PBS緩沖液充分透析，在透析后的結(jié)合物溶液中加入等體積的甘油，-20℃以下保存；標(biāo)記好的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體酶結(jié)合物可用20％胎牛血清稀釋液稀釋至工作濃度，置于4℃保存至有效期，胎牛血清稀釋液為pH7.4、20mmol/L PBST溶液，內(nèi)含20％胎牛血清、5％蔗糖、0.1％Proclin300、0.01％食品紅；
步驟四，制備化學(xué)發(fā)光底物液：
上述堿性磷酸酶標(biāo)記抗體對應(yīng)的化學(xué)發(fā)光底物為3-(2’-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3’-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷(AMPPD)，AMPPD化學(xué)發(fā)光底物液的配制方法為：稱取24g三羥甲基氨基甲烷、160g NaCl、4g KCl，吸取0.5mL Proclin300、200mL AMPPD，用去離子水定容至1000mL；
上述辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體對應(yīng)的化學(xué)發(fā)光底物為魯米諾，魯米諾化學(xué)發(fā)光底物液的配制方法為：基于1000mL化學(xué)發(fā)光底物A液，含有1.75g魯米諾、0.05g 4-羥基聯(lián)苯、0.011g 4-碘苯硼酸、9.8g硼酸、4.5g硼砂，用去離子水定容后調(diào)整pH至8.0；基于1000mL化學(xué)發(fā)光底物B液，含有0.34g過氧化脲、1mL吐溫-20、51.6g Na2HPO4·12H2O、8.5g NaH2PO4·2H2O，用去離子水定容后調(diào)整pH至7.6；
步驟五，制備分析緩沖液，分析緩沖液為pH7.4、10mmol/L PBST緩沖液，內(nèi)含1％BSA、0.1％Proclin300；
步驟六，制備濃縮洗滌液，濃縮洗滌液為pH7.2-7.4、20mmol/L PBS緩沖液，內(nèi)含1％吐溫-20；
步驟七，組裝脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，將標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品、包被載體、酶標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光底物液、分析緩沖液及濃縮洗滌液組裝成脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒。
8.如權(quán)利要求7所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒制備方法，其特征在于，在步驟二中，載體為磁性顆粒時(shí)，包被載體通過以下方法制備：吸取3mL內(nèi)含2％磁顆粒的PBS溶液，用磁力架分離，用去離子水清洗；用清洗液清洗磁顆粒并調(diào)整體積至6mL；加入5mg脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體，置于4℃內(nèi)混勻30min；加入12mg碳二亞胺，置于4℃內(nèi)孵育過夜；用pH7.4、100mmol/L PBS緩沖液清洗磁顆粒；加入Tris和EDTA，使終濃度依次為50mmol/L和4mmol/L；調(diào)節(jié)pH至7.4，抗體終濃度為1mg/mL，得到脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體包被載體，清洗液為pH6.0、10mmol/L PBS緩沖液。
9.如權(quán)利要求7所述的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒制備方法，其特征在于，在步驟三中，用于標(biāo)記的酶為辣根過氧化物酶時(shí)，酶標(biāo)記抗體的制備方法為：溶解2mg辣根過氧化物酶于1mL去離子水中，加入0.4mL50mmol/L過碘酸鈉溶液，4℃緩慢搖動(dòng)30min，用pH4.4、1mmol/L醋酸鈉緩沖 液透析過夜，加入2mg脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體，4℃震蕩過夜，使用400ul200mmol/L NaBH4溶液進(jìn)行還原，經(jīng)pH7.4、20mmol/L PBS緩沖液透析過夜后用HPLC二次純化，收集蛋白峰，加入等體積甘油，-20℃以下保存；標(biāo)記好的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抗體酶結(jié)合物可用20％胎牛血清稀釋液稀釋至工作濃度，可置于4℃保存至有效期，胎牛血清稀釋液為pH7.4、10mmol/L PBST溶液，內(nèi)含20％胎牛血清、5％蔗糖、0.1％Proclin300、0.01％食品紅。