一種用于病死豬肉監(jiān)測的新型檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于病死豬肉監(jiān)測的新型檢測方法，其制備樣品處理液：取肉樣2-4克于燒杯中，剪碎后加入重量為肉樣重量的20~40倍日蒸餾水，放入超聲波提取儀中超聲15-20分鐘，靜置后取濾液作為樣品處理液；再取樣品處理液2ml加入2-5%乙酸0.1-0.2ml，反應(yīng)3min后放入儀器內(nèi)檢測其吸光度；接著取樣品處理液2ml加入0.2-1%3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺0.05-0.20ml，0.02%H2O20.05-0.15ml后，放入儀器內(nèi)測其5min內(nèi)吸光度的變化的情況，即記錄反應(yīng)動力學(xué)曲線，并記錄最大值參數(shù)2max；通過參數(shù)2，及參數(shù)2max和參數(shù)1的比值。本發(fā)明把單一考察過氧化物酶活性與豬肉品質(zhì)的相關(guān)性換成考察過氧化物酶活性、血紅蛋白含量及過氧化物酶活性兩者之間的關(guān)系與豬肉品質(zhì)的相關(guān)性，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)快速、簡便的檢測肉類的品質(zhì)。
【專利說明】一種用于病死豬肉監(jiān)測的新型檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明專利涉及可見分光儀器領(lǐng)域和食品安全快速檢測領(lǐng)域，具體涉及一種用于 病死豬肉監(jiān)測的新型檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前現(xiàn)有檢測病死豬肉的技術(shù)主要有：一是感官檢測，主要通過對豬肉外觀包括 色澤、彈性、氣味等感官指標(biāo)人為判斷其新鮮程度，方法雖然簡便易操作且成本較低，但受 人為主觀影響較大，缺乏充分科學(xué)依據(jù)，更因其對操作人員有較高要求，難以普及；二是PH 測定法，病死豬在后熟過程中，因生前能量的過度消耗，肌肉蓄積的乳酸和磷酸含量與健康 豬相比較低，pH較健康豬肉高，可以通過pH試紙或pH計(jì)測肉浸出液的pH值來判斷豬肉 的健康狀況，健康豬肉的PH值在5. 5-6. 5之間，但本法受外界干擾較大(唐愛明，王輝，病、 死豬肉的檢驗(yàn)與分析，畜產(chǎn)品與安全，2011年8月下刊，40-42)三是過氧化物酶反應(yīng)法，過 氧化物酶活性水平是檢測肉類品質(zhì)的重要指標(biāo)，病、死豬體內(nèi)過氧化物酶較少甚至沒有，但 本法受血紅蛋白干擾較大，血紅蛋白由于其空間結(jié)構(gòu)辣根過氧化物酶相似，可作為過氧化 物酶模擬酶，[CTAB對血紅蛋白仿過氧化物酶催化活性的影響，中國科技論文在線，2008年 9月第3卷第9期666-671]在一定條件下會產(chǎn)生相同的酶反應(yīng)效果；四是硫酸銅沉淀法， 健康豬肉肉浸液中含有的離子正負(fù)電荷婁相同總電荷為0,肉浸液的pH值即為蛋白質(zhì)等電 點(diǎn)。而病、死豬肉生前組織蛋白發(fā)生了一定程度分解，其分解產(chǎn)物如蛋白、多肽等以負(fù)電荷 形式存在，若向其中加入硫酸銅，其中的負(fù)電荷可以Cu 2+反應(yīng)生成沉淀，但本方法需要前處 理較復(fù)雜且需要同時做對照實(shí)驗(yàn)，結(jié)果不易判斷，無法達(dá)到快速普及的效果(孔憲琴、梁航、 黃素珍，病死豬肉的快速檢驗(yàn)與處理，肉類研究，2008年第1期，59-62);五是細(xì)菌內(nèi)毒素檢 驗(yàn)法，通過對肉品中細(xì)菌產(chǎn)生的毒素的檢測來判定是否為病死肉，此法操作較復(fù)雜，其中的 微生物呈色反應(yīng)更要求豬肉新鮮不能隔夜較難普及，另外此法只能簡單定性無法達(dá)到定量 的效果。
[0003] 病、死豬肉是指生豬在病死后沒有經(jīng)過宰殺放血或放血不全，沒有經(jīng)過獸醫(yī)檢疫 的豬肉產(chǎn)品。（唐愛明，王輝，病、死豬肉的檢驗(yàn)與分析，畜產(chǎn)品與安全，2011年8月下刊， 40-42)病豬、死豬肉由于放血不完全會留存一些致病菌及毒素，人若食用后會對身體健康 產(chǎn)生不利影響。目前檢測豬肉品質(zhì)中被廣泛接受的方法是過氧化物酶活性法，病豬、死豬肉 中過氧化物酶活性很低甚至沒有，而健康豬肉中過氧化物酶活性較高，此方法主要基于此 通過對肉品過氧化物酶活性間接對肉品進(jìn)行判斷。這種方法雖然可以定量，但由于放血不 完全的豬肉內(nèi)血紅蛋白含量較高，且血紅蛋白也有同樣的響應(yīng)，在某些條件下血紅蛋白的 響應(yīng)甚至更伏，會對本法產(chǎn)生嚴(yán)重干擾，使檢測結(jié)果偏差較大，對色澤較深的肉影響更大。 冷凍后解凍的肉品因?yàn)榻M織中水分結(jié)冰后會破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，更易使血紅蛋白溶出，對反應(yīng) 的干擾較大。
[0004] 因此，找到一種可以避免或排除血紅蛋白干擾的方法對檢測病死豬肉有重要意 義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種可以避免或排除血紅蛋白干擾的用于病死豬肉監(jiān)測的 新型檢測方法。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的解決方案是： 一種用于病死豬肉監(jiān)測的新型檢測方法，其具體步驟為： 步驟1、制備樣品處理液：取肉樣2-4克于燒杯中,剪碎后加入蒸饋水,蒸饋水重量為肉 樣重量的2(Γ40倍，放入超聲波提取儀中超聲15-20分鐘，靜置后過濾，取濾液作為樣品處 理液； 步驟2、檢測參數(shù)1 :取步驟1的樣品處理液2ml加入2-5%乙酸0. 1-0. 2ml，反應(yīng)3min 后放入儀器內(nèi)檢測其吸光度； 步驟3、檢測參數(shù)2 :取步驟1的樣品處理液2ml加入0. 2-1% 3, 3'，5, 5' -四甲基聯(lián) 苯胺0. 05-0. 20ml，0. 02% H2O2 0. 05-0. 15ml后，放入儀器內(nèi)測其5min內(nèi)吸光度的變化的情 況，即記錄反應(yīng)動力學(xué)曲線，并記錄最大值參數(shù)2_ ; 步驟4、通過參數(shù)2 (吸光度的變化情況，即酶反應(yīng)動力學(xué)曲線)，及參數(shù)2max和參數(shù)1 的比值，利用儀器自動判斷肉的品質(zhì)。
[0007] 采用上述方案后，本發(fā)明把原來獨(dú)立的兩個指標(biāo)結(jié)合起來一起考慮，即把單一考 察過氧化物酶活性與豬肉品質(zhì)的相關(guān)性換成考察過氧化物酶活性、血紅蛋白含量及過氧化 物酶活性兩者之間的關(guān)系與豬肉品質(zhì)的相關(guān)性，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)一種快速、簡便的檢測肉類品質(zhì) 的方法，并且可以有效避免或排除血紅蛋白干擾，利用本算法，操作簡便，可較快速對肉的 品質(zhì)進(jìn)行判斷。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0008] 圖1為本發(fā)明方法監(jiān)測豬肉過氧化物酶活力的曲線圖。

【具體實(shí)施方式】
[0009] 以下結(jié)合附圖及實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳述： 實(shí)驗(yàn)材料 病害豬肉樣品：某養(yǎng)豬廠取得的病死小豬，按正常豬肉屠宰方式屠宰切割，取豬前腿肉 部分作為樣品，若未用完室于冰箱冷凍層保存?zhèn)溆茫?5份不同樣品，其中25份作為樣本 集，10份作為校正集； 健康豬肉樣品：經(jīng)檢疫合格的豬肉，取豬前腿肉部分作為樣品，若未用完室于冰箱冷凍 層保存?zhèn)溆?，?5份不同樣品，其中25份作為樣本集，10份作為校正集； 樣品前處理：取檢測肉樣，表層與深層各取一塊約25-35g，去除脂肪及筋腱部分，用樣 品剪剪碎后充分混勻，加入150-250g純凈水后放入超聲波提取儀中5-15min，靜置后過濾 取濾液作為樣品處理液備用。
[0010] 本法主要包括以下步驟： (1)制備樣品處理液：取2-4克肉樣于燒杯中，剪碎后加入蒸饋水，蒸饋水重量為肉樣 重量的2(Γ40倍，放入超聲波提取儀中超聲15-20分鐘，靜置后過濾，取濾液作為樣品處理 液； (2)檢測參數(shù)I :取樣品處理液2ml加入2-5%乙酸0. 1-0. 2ml，反應(yīng)3min后放入儀器 內(nèi)檢測其吸光度。
[0011] (3)檢測參數(shù)2:取樣品處理液2ml，加入0.2-1% 3,3'，5,5'-四甲基聯(lián)苯胺 0. 05-0. 20ml，0. 02% H2O2 0. 05-0. 15ml后，放入儀器內(nèi)測其5min內(nèi)吸光度的變化的情況，即 記錄反應(yīng)動力學(xué)曲線，并記錄最大值參數(shù)2_。
[0012] (4)通過參數(shù)2 (吸光度的變化情況，即酶反應(yīng)動力學(xué)曲線)，及參數(shù)2_和參數(shù)1 的比值，利用儀器自動判斷肉的品質(zhì)。
[0013] 圖1中所示為豬肉過氧化物酶活力曲線，其中細(xì)實(shí)線曲線為色澤較深的病死豬肉 的酶活力曲線，粗實(shí)線為正常豬肉的酶活力曲線，虛線為色澤正常病死豬肉酶活力曲線， 可以看出病死豬肉酶活動力曲線有兩種情形：1是加入試劑后迅速達(dá)到活力峰值并迅速減 弱，2是一直較平穩(wěn)且活力較低。而正常豬肉的酶活力則是慢慢增加且能達(dá)到較高水平。原 因是血紅蛋白也會有過氧化物酶的活性干擾測定結(jié)果。
[0014] 表1樣本集數(shù)據(jù)結(jié)果

【權(quán)利要求】
1. 一種用于病死豬肉監(jiān)測的新型檢測方法，其具體步驟為： 步驟1、制備樣品處理液：取肉樣2-4克于燒杯中,剪碎后加入蒸饋水,蒸饋水重量為肉 樣重量的20~40倍，放入超聲波提取儀中超聲15-20分鐘，靜置后過濾，取濾液作為樣品處 理液； 步驟2、檢測參數(shù)1 :取步驟1的樣品處理液2ml加入2-5%乙酸0. 1-0. 2ml，反應(yīng)3min 后放入儀器內(nèi)檢測其吸光度； 步驟3、檢測參數(shù)2 :取步驟1的樣品處理液2ml加入0. 2-1% 3, 3'，5, 5' -四甲基聯(lián) 苯胺0. 05-0. 20ml，0. 02% H2O2 0. 05-0. 15ml后，放入儀器內(nèi)測其5min內(nèi)吸光度的變化的情 況，即記錄反應(yīng)動力學(xué)曲線，并記錄最大值參數(shù)2_ ; 步驟4、通過參數(shù)2,及參數(shù)2max和參數(shù)1的比值，利用儀器自動判斷肉的品質(zhì)。
【文檔編號】G01N21/31GK104316477SQ201410538045
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月13日
【發(fā)明者】柯慧賢, 李娟 , 周曉芳, 林建鵬 申請人:廈門斯坦道科學(xué)儀器股份有限公司