一種檢測纖維蛋白原的方法及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種檢測纖維蛋白原的方法及試劑盒。本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法以亞硫酸鈉作為沉淀劑，通過與纖維蛋白原特異性的反應(yīng)形成沉淀，可以直接應(yīng)用在半/自動生化分析儀上，而不用事先稀釋血漿樣本，操作簡單，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。實驗表明，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法檢測結(jié)果準(zhǔn)確性高、靈敏度好，精密度好，線性范圍寬。本發(fā)明所述試劑盒穩(wěn)定性好，保存期長，方便在全自動生化分析儀上檢測，適用范圍廣，便于推廣使用，可廣泛應(yīng)用于各級醫(yī)院、衛(wèi)生預(yù)防部門和醫(yī)學(xué)生物科研單位測定血清中纖維蛋白原濃度。
【專利說明】一種檢測纖維蛋白原的方法及試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗測定【技術(shù)領(lǐng)域】，具體的說是涉及一種檢測纖維蛋白原的方法 及試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 纖維蛋白原（FBG/FIB)即凝血因子I，是血液中含量最高的凝血因子，纖維蛋白原 具有雙重生物活性，既是凝血酶作用的底物又是高濃度纖溶酶的靶物質(zhì)，因此纖維蛋白原 在凝血系統(tǒng)和纖溶系統(tǒng)同時發(fā)揮作用，是體內(nèi)重要的凝血因子。
[0003] 臨床研究發(fā)現(xiàn)血漿纖維蛋白原的水平變化與凝血障礙、出血性疾病、彌漫性血管 凝血以及炎癥反應(yīng)有密切關(guān)系。健康成年人纖維蛋白原的含量范圍約在2-4g/L，減少常見 于肝損傷、結(jié)核病、燒傷等；增高常見于動脈硬化、糖尿病、腎病綜合癥等。同時，近年來發(fā)現(xiàn) 纖維蛋白原是心腦血管疾病的重要危險因素之一，因此在臨床上倍受重視。纖維蛋白原的 檢測已成為出血和血栓檢查的常規(guī)檢測項目，具有重要的臨床診斷意義。
[0004]目前，纖維蛋白原的測定方法主要分為功能測定法、物理化學(xué)測定法和免疫測定 法。功能測定法又稱為凝固蛋白法，利用其特異的2種生化反應(yīng)，即凝血酶的蛋白水解作用 和隨后的纖維蛋白單體聚集為纖維蛋白多聚體，在這些方法中，通過加入凝血酶形成纖維 蛋白凝塊后的檢測不同，又可分為重量測定法、酚試劑法，凝血酶凝固時間法等。物理化學(xué) 測定法可分為鹽析法、熱沉淀法和電泳法等。免疫學(xué)測定法是將純FBG作為抗原免疫動物， 制成多克隆抗體或單克隆抗體，然后用其致敏乳膠或者以被動或反向血凝、免疫比濁、單向 免疫擴散及ELISA等技術(shù)測定FBG。以上方法中，從理論上分析功能法準(zhǔn)確特異，是WHO推 薦的參考方法，但因其測定的是纖維蛋白而不是纖維蛋白原，而且纖維蛋白一旦形成就會 吸附一些凝血因子或纖溶因子，這會引起測定誤差，此外，在獲得纖維蛋白和洗滌時比較麻 煩且難以做到完全徹底，還容易造成污染，即使現(xiàn)已有自動凝血分析儀，但是此方法的操作 仍有不簡便之處，前期處理過程較多。物理化學(xué)法測定應(yīng)用最廣，快速簡單，但影響測定的 因素多。免疫學(xué)方法其所針對的抗原決定簇也存在二纖維蛋白質(zhì)單體、纖維蛋白原降解產(chǎn) 物和異常纖維蛋中，因此特異性比較差。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明目的是針對現(xiàn)檢測纖維蛋白原的方法準(zhǔn)確度低、特異性差等問 題，提供了一種準(zhǔn)確度高、特異性好的檢測纖維蛋白原的方法及試劑盒。
[0006] 為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007] -種檢測纖維蛋白原的方法，待測樣品與亞硫酸鹽和強堿性緩沖液混合，然后加 入中性分散劑，在620-630nm波長下檢測吸光度，與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液比池，計算 待測樣品的纖維蛋白原濃度。
[0008] 作為優(yōu)選，所述中性分散劑為聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、納米銀溶膠、 明膠或瓊脂中的一種或兩種以上。
[0009] 作為優(yōu)選，所述強堿性緩沖液為2氨基-2甲基-1丙醇緩沖液。
[0010] 本發(fā)明還提供了一種檢測纖維蛋白原的試劑盒，包括亞硫酸鹽、強堿性緩沖液、中 性分散劑。
[0011] 作為優(yōu)選，所述亞硫酸鹽為亞硫酸鈉。
[0012] 作為優(yōu)選，所述強堿性緩沖液為2氨基-2甲基-1丙醇緩沖液。
[0013] 作為優(yōu)選，所述中性分散劑為聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、納米銀溶膠、 明膠或瓊脂中的一種或兩種以上。
[0014] 作為優(yōu)選，還包括氯化鈉。
[0015] 作為優(yōu)選，所述氯化鈉的工作濃度為0. 9%。
[0016] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法以亞硫酸鈉作為沉淀劑，通 過與纖維蛋白原特異性的反應(yīng)形成沉淀，可以直接應(yīng)用在半/自動生化分析儀上，而不用 事先稀釋血漿樣本，操作簡單，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。實驗表明，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方 法檢測結(jié)果準(zhǔn)確性高、靈敏度好，精密度好，線性范圍寬。本發(fā)明所述試劑盒穩(wěn)定性好，保存 期長，方便在全自動生化分析儀上檢測，適用范圍廣，便于推廣使用，可廣泛應(yīng)用于各級醫(yī) 院、衛(wèi)生預(yù)防部門和醫(yī)學(xué)生物科研單位測定血清中纖維蛋白原濃度。

【具體實施方式】
[0017] 本發(fā)明實施例公開了一種檢測纖維蛋白原的方法及試劑盒。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以 借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng) 域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的產(chǎn)品和方法已經(jīng)通 過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所 述的產(chǎn)品和方法進行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0018] 為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0019] 一種檢測纖維蛋白原的方法待測樣品與亞硫酸鹽和強堿性緩沖液混合，然后加入 中性分散劑，在620-630nm波長下檢測吸光度，與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液比濁，計算待 測樣品的纖維蛋白原濃度。
[0020] 本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法，以亞硫酸鹽作為沉淀劑，通過與待測樣品中 的纖維蛋白原與亞硫酸鹽發(fā)生反應(yīng)形成沉淀，反應(yīng)產(chǎn)生的懸濁液吸光度與纖維蛋白原的濃 度呈正比，然后通過與標(biāo)準(zhǔn)溶液比濁檢測待測樣品中的纖維蛋白原的濃度。由于纖維蛋白 原與亞硫酸鹽發(fā)應(yīng)具有特異性，因此本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法可以直接應(yīng)用在半 /自動生化分析儀上，而不用事先稀釋血漿樣本，操作簡單，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。
[0021] 其中，待測樣品中纖維蛋白原的濃度按如下公式計算：
[0022] 纖維蛋白原濃度（g/L)=標(biāo)準(zhǔn)液濃度X待測樣品吸光度/標(biāo)準(zhǔn)液吸光度。
[0023] 本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法在檢測時還加入中性分散劑，所述中性分散劑 能夠促使反應(yīng)生成的沉淀顆粒均勻分散于溶液中，防止產(chǎn)生大顆粒沉淀。
[0024] 作為優(yōu)選，所述中性分散劑為聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、納米銀溶膠、 明膠或瓊脂中的一種或兩種以上。
[0025] 其中，所述聚乙二醇優(yōu)選為聚乙二醇400、聚乙二醇600或聚乙二醇6000 ;所述聚 乙烯吡咯烷酮優(yōu)選為聚乙烯吡咯烷酮50、聚乙烯吡咯烷酮70或聚乙烯吡咯烷酮90。
[0026] 更優(yōu)選的，所述中性分散劑為聚乙二醇。聚乙二醇除了能夠促使反應(yīng)生成的沉淀 顆粒均勻分散于溶液中外還具有協(xié)同沉淀的作用，因此使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。
[0027] 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法中，所述強堿性緩沖液為2氨基-2 甲基-1丙醇（AMP)緩沖液。
[0028] 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法中，所述強堿性緩沖液的pH值為 10. 0-12. 0，更優(yōu)選為 11. 0。
[0029] 進一步的，作為優(yōu)選，所述緩沖液的濃度為40mmol/L-200mmol/L。
[0030] 為了保證待測樣品中纖維蛋白原充分反應(yīng)，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法中 所述亞硫酸鹽、中性分散劑均過量或適量。
[0031] 本發(fā)明還提供了一種檢測纖維蛋白原的試劑盒包括亞硫酸鹽、強堿性緩沖液、中 性分散劑。
[0032] 其中，作為優(yōu)選，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒中，所述亞硫酸鹽為亞硫酸 鈉。其中，所述亞硫酸鈉濃度優(yōu)選為400mmol/L-800mmol/L。
[0033] 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒中，所述強堿性緩沖液為2氨 基-2甲基-1丙醇（AMP)緩沖液。
[0034] 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒中，所述強堿性緩沖液的pH值為 10. 0-12. 0，更優(yōu)選為 11. 0。
[0035] 進一步的，作為優(yōu)選，所述緩沖液的濃度為40mmol/L-200mmol/L。
[0036] 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒中，作為優(yōu)選，所述中性分散劑為 聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、納米銀溶膠、明膠或瓊脂中的一種或兩種以上。
[0037] 其中，所述聚乙二醇優(yōu)選為聚乙二醇400、聚乙二醇600或聚乙二醇6000 ;所述聚 乙烯吡咯烷酮優(yōu)選為聚乙烯吡咯烷酮50、聚乙烯吡咯烷酮70或聚乙烯吡咯烷酮90。
[0038] 在一些實施例中，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒中，所述中性分散劑為聚 乙二醇。所述聚乙二醇的濃度優(yōu)選為2g/L-5g/L。
[0039] 在一些實施例中，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒中，所述中性分散劑為聚 乙烯吡咯烷酮。所述聚乙烯吡咯烷酮的濃度優(yōu)選為0. 8g/L-2. Og/L。
[0040] 在一些實施例中，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒中，所述中性分散劑為聚 乙烯醇。所述聚乙烯醇的濃度優(yōu)選為0. 3g/L-0. 6g/L。
[0041] 在一些實施例中，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒中，所述中性分散劑為納 米銀溶膠。所述納米銀溶膠的濃度優(yōu)選為0. 5ml/L-2ml/L。
[0042] 在一些實施例中，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒中，所述中性分散劑為明 膠。所述明膠的濃度優(yōu)選為0.2g/L-0.4g/L。
[0043] 在一些實施例中，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒中，所述中性分散劑為瓊 月旨。所述瓊脂的濃度優(yōu)選為0. 2g/L-0. 4g/L。
[0044] 進一步的，本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的試劑盒還包括氯化鈉，以增加離子強度， 使試劑盒保持與人體相同的生理鹽水濃度，從而促進反應(yīng)的進行。
[0045] 作為優(yōu)選，所述氯化鈉的工作濃度為0. 9%。
[0046] 本發(fā)明提供的檢測纖維蛋白原的試劑盒可以為單一試劑。如，將亞硫酸鹽、強堿性 緩沖液、中性分散劑制成單一試劑。
[0047] 本發(fā)明提供的檢測纖維蛋白原的試劑盒也可以為多試劑。如，將中性分散劑和強 堿性緩沖液制成第一試劑，將亞硫酸鹽和氯化鈉制成第二試劑，在檢測時，將第一試劑與第 二試劑混合，從而檢測待測樣品中的纖維蛋白原。
[0048] 其中，作為優(yōu)選，在檢測時，所述待測樣品與第一試劑的體積比為1:15。
[0049] 為了進一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細說明。
[0050] 實施例1 :本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法
[0051] 將AMP緩沖液與中性分散劑組成混合液（AMP濃度為80mmol/L，中性分散劑為 lml/L的鈉米銀膠體，pHll. 0)，在濃度為9g/L的氯化鈉和600mmol/L的亞硫酸鈉溶液中， 待測樣品與混合液按體積比，待測樣品：混合液=1:15的比例混合，得到的懸濁液在630nm 波長下檢測吸光度A#，然后與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度A#比濁，計算待測樣品 的纖維蛋白原濃度，公式為樣品FBG濃度（g/L)=標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度XA^/A#。
[0052] 實施例2 :本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法
[0053] 將AMP緩沖液與中性分散劑組成混合液（AMP濃度為60mmol/L，中性分散劑為3g/ L的PEG6000和0. 5ml/L的鈉米銀膠體，pHll. 0)，在濃度為9g/L的氯化鈉和600mmol/L的 亞硫酸鈉溶液中，待測樣品與混合液按體積比，待測樣品：混合液=1:15的比例混合，得到 的懸濁液在630nm波長下檢測吸光度A#，然后與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度A# 比濁，計算待測樣品的纖維蛋白原濃度，公式為樣品FBG濃度（g/L)=標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度XA# /A標(biāo)。
[0054] 實施例3 :本發(fā)明所述檢測纖維蛋白原的方法
[0055] 將AMP緩沖液與中性分散劑組成混合液（AMP濃度為60mmol/L，中性分散劑為3g/ L的PEG6000、0. 3g/L的聚乙烯醇和lml/L的鈉米銀膠體，pHll. 0)，在濃度為9g/L的氯化 納和800mmol/L的亞硫酸納溶液中，待測樣品與混合液按體積比，待測樣品：混合液=1:15 的比例混合，得到的懸濁液在630nm波長下檢測吸光度A#，然后與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn) 溶液的吸光度A#比濁，計算待測樣品的纖維蛋白原濃度，公式為樣品FBG濃度（g/L)=標(biāo) 準(zhǔn)溶液濃度XAtt/A&
[0056] 實施例4 :本發(fā)明所述方法的準(zhǔn)確度分析
[0057] 試驗儀器：日立7080全自動生化分析儀；
[0058] 檢測樣品：20名體檢者血樣；
[0059] 對比方法試劑盒：市售進口 FIB試劑盒（免疫比濁法）；
[0060] 采用實施例1至實施例3的檢測方法分別待測20例樣品，其中，實施例1檢測方 法的檢測結(jié)果見表1。
[0061] 表1分析結(jié)果(g/L)
[0062]

【權(quán)利要求】
1. 一種檢測纖維蛋白原的方法，其特征在于，待測樣品與亞硫酸鹽和強堿性緩沖液混 合，然后加入中性分散劑，在620-630nm波長下檢測吸光度，與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液 比濁，計算待測樣品的纖維蛋白原濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述中性分散劑為聚乙二醇、聚乙烯吡咯 烷酮、聚乙烯醇、納米銀溶膠、明膠或瓊脂中的一種或兩種以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述強堿性緩沖液為2氨基-2甲基-1丙 醇緩沖液。
4. 一種檢測纖維蛋白原的試劑盒，其特征在于，包括亞硫酸鹽、強堿性緩沖液、中性分 散劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其特征在于，所述亞硫酸鹽為亞硫酸鈉。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其特征在于，所述強堿性緩沖液為2氨基-2甲基-1丙 醇（AMP)緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其特征在于，所述中性分散劑為聚乙二醇（400、600和 6000)、聚乙烯吡咯烷酮（50、70和90)、聚乙烯醇、納米銀溶膠、明膠或瓊脂中的一種或兩種 以上。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其特征在于，還包括氯化鈉。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述試劑盒，其特征在于，所述氯化鈉的工作濃度為0. 9%。
【文檔編號】G01N21/31GK104049089SQ201410310372
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年7月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月1日
【發(fā)明者】董理 申請人:長春匯力生物技術(shù)有限公司