快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的試劑盒及其使用方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的試劑盒及其使用方法；所述試劑盒包括：C酶瓶、T酶瓶、C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯，所述C酶瓶、T酶瓶均用酶瓶密封蓋密封，且裝有酶凍干的三酶混合劑；所述C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯均設(shè)有含有乙酰膽堿、魯米諾及二甲基聯(lián)苯胺的凍干吸水墊。本發(fā)明還涉應(yīng)用前述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法。本發(fā)明利用乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶及過氧化物酶為催化體系，將氯化乙酰膽堿水解氧化后的產(chǎn)物與魯米諾產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光效應(yīng)。建立靈敏地測試農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥的方法。本發(fā)明有具檢測速度快、操作過程簡單、穩(wěn)定性及重復(fù)性好、不需要昂貴儀器等優(yōu)點(diǎn)，非常適合于在農(nóng)貿(mào)市場進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥的現(xiàn)場監(jiān)測。
【專利說明】快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的試劑盒及其使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種快速檢測食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，具體是涉及一種快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的試劑盒及其使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002]農(nóng)產(chǎn)品、食品及藥品中的農(nóng)藥殘留仍是危脅人類身體健康的重要潛在因素之一。在中國的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中，農(nóng)藥年使用量上仍居世界首位，且有機(jī)磷農(nóng)藥的使用量占全部農(nóng)藥用量的70%以上。據(jù)近些年的資料報(bào)道，中國省級(jí)大城市的農(nóng)貿(mào)市場中第一季度所銷售的蔬菜、水果有機(jī)磷農(nóng)藥不合格率占到14%以上，尤其來自于大棚種植蔬菜的農(nóng)藥殘留量更高。在農(nóng)藥抽樣監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)，甲胺磷、敵百蟲、氧化樂果、敵敵畏的檢出率更高。當(dāng)前檢測有機(jī)磷農(nóng)藥的方法主要有:①光譜法，主要包括分光光度法、化學(xué)發(fā)光法、紅外及熒光光譜法色譜分析法，主要包括薄層色譜分析法、氣相色譜法、液相色譜法、超臨界流體色譜法及色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)；③免疫學(xué)分析方法，主要包括酶聯(lián)免疫吸附分析法、納米金免疫試紙條法、免疫熒光分析法等；④傳感器法，主要包括壓晶生物傳感器法、光導(dǎo)纖維型酶傳感器、有機(jī)磷水解酶生物傳感器、膽堿酯酶傳感器及基于分子印跡技術(shù)的仿生傳感器。⑤快速檢測法，主要包括速測卡法及速測儀法。光譜法及色譜法是國家確證性地檢測農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)方法，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的特點(diǎn)，其不足之處是需要利用較為昂貴的儀器及專門的測試人員，且操作過程相當(dāng)復(fù)雜，不適合于現(xiàn)場大量檢測農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留。免疫學(xué)檢測方法的靈敏度高及特異性較強(qiáng)，但只能檢測單個(gè)或數(shù)種有機(jī)磷農(nóng)藥，且相應(yīng)抗體的研發(fā)時(shí)間長而成本高。免疫學(xué)檢測方法的另一缺點(diǎn)是其重復(fù)性及穩(wěn)定性較差。傳感器方法是近些年發(fā)展起來的新型檢測技術(shù)，其中有關(guān)利用膽堿酯酶的電流型及電位型傳感器方面的報(bào)道非常多。傳感技術(shù)的特點(diǎn)是靈敏、操作簡單，但研究成果仍在實(shí)驗(yàn)室階段，仍存在著重復(fù)性及穩(wěn)定性差的缺陷?，F(xiàn)有速測卡技術(shù)是利用膽堿酯酶能夠水解乙酰膽堿的類似物2，6- 二氯靛酚乙酸酯而生成藍(lán)色的2，6- 二氯靛酚乙酸，從而根據(jù)速測卡顏色的變化來判定有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留情況。其優(yōu)點(diǎn)是檢測速度快，操作簡單。但該方法仍是簡單的定性方法，靈敏度低，對(duì)一些種類的有機(jī)磷及氨基甲酸酯農(nóng)藥的檢測限高出蔬菜、水果的國家限量標(biāo)準(zhǔn)，另外樣品中的有機(jī)色素會(huì)嚴(yán)重干擾測定而造成假陰性結(jié)果。而現(xiàn)有的速測儀仍是一種便攜式的分光光度計(jì)，需要配合較為復(fù)雜的檢測試劑，且在現(xiàn)場不易實(shí)施。
[0003]經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)的檢索發(fā)現(xiàn)，專利申請(qǐng)?zhí)枮?005100741791.3，名稱為“化學(xué)發(fā)光有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析儀及其檢測方法”。其關(guān)鍵技術(shù)是，在過硫酸鉀及二氧化鈦納米離子存在的條件下，利用紫外光催化作用使蔬菜或水果上的有機(jī)磷農(nóng)藥轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷酸鹽，然后與鑰酸及釩酸鹽形成磷鑰釩雜多酸，該物質(zhì)氧化魯米諾后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，并用化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行測定。但其缺陷是反應(yīng)體系易受外界磷酸鹽的干擾，而使結(jié)果出現(xiàn)假陰性。另外該檢測方法的缺陷是重復(fù)性、穩(wěn)定性仍不夠理想，不能滿足定性及定量檢測的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供了一種快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的試劑盒及其使用方法。
[0005]本發(fā)明是通過以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0006]第一方面，本發(fā)明涉及一種快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的試劑盒，所述試劑盒包括:C酶瓶、T酶瓶、C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯，所述C酶瓶、T酶瓶均用酶瓶密封蓋密封，且裝有酶凍干的三酶混合劑；所述C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯均設(shè)置含有氯化乙酰膽堿、魯米諾及二甲基聯(lián)苯胺的凍干吸水墊。
[0007]第二方面，本發(fā)明還涉及前述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，包括以下步驟:
[0008]第I步:酶冷凍保護(hù)劑的制備:將蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、甘油加入氯化鈣溶液中，攪拌至完全溶解，冷凍保存待用；
[0009]第2步:反應(yīng)酶液的配制:將所述酶冷凍保護(hù)劑分別稀釋乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶、過氧化物酶，混合，冷凍干燥后，分別裝入C酶瓶和T酶瓶中；
[0010]所述膽堿酯酶是商品化的乙酰膽堿酯酶，其來源可以是從昆蟲、動(dòng)物肝臟、魚腦、植物或基因工程技術(shù)生產(chǎn)的乙酰膽堿酯酶，本申請(qǐng)優(yōu)選昆蟲來源的乙酰膽堿酯酶。所述膽堿氧化酶也為商品化的膽堿氧化酶，其來源于產(chǎn)堿菌、土壤球形節(jié)桿菌或基因工程技術(shù)生產(chǎn)的膽堿氧化酶，本申請(qǐng)優(yōu)選產(chǎn)堿菌來源的膽堿氧化酶。所述過氧化物酶是市售的辣根過氧化物酶。
[0011]第3步:底物反應(yīng)杯的制備:將反應(yīng)底物墊片放入魯米諾、氯化乙酰膽堿、二甲基聯(lián)苯胺混合溶液中，浸泡浙干，并冷凍干燥后，放入聚氯乙烯塑料反應(yīng)杯，標(biāo)記為C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯；
[0012]第4步:樣品的測試:分別向C、T酶瓶內(nèi)滴加純凈水，搖勻后，用塑料滴管向所述T酶瓶中滴加待檢樣品溶液，向C酶瓶中滴加純凈水或磷酸鹽緩沖液，搖勻，靜置，用滴管從所述C、T酶瓶中吸取反應(yīng)產(chǎn)物，分別滴加到C、T底物反應(yīng)杯中，在2?8分鐘內(nèi)于便攜式化學(xué)發(fā)光儀上測定C、T底物反應(yīng)杯的發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)發(fā)光強(qiáng)度的相對(duì)抑制率，確定有機(jī)磷的濃度。
[0013]優(yōu)選地，第I步中，酶冷凍保護(hù)劑中包括如下含量的各組分:5?15mmol/L氯化鈣溶液100毫升，蔗糖I?3克，甘氨酸I?3克，甘油5?15毫升，牛血清白蛋白I?3克。
[0014]優(yōu)選地，第2步中，所述乙酰膽堿酯酶稀釋3000?8000倍，所述膽堿氧化酶稀釋200?800倍，所述過氧化物酶稀釋200?800倍。
[0015]優(yōu)選地，第3步中，所述C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯的底面內(nèi)徑為8?20mm，高度為10?25mm。
[0016]優(yōu)選地,第3步中,所述反應(yīng)底物墊片的厚度為3?6mm。
[0017]優(yōu)選地，第3步中，所述魯米諾的濃度為1.0\10_4?3.0父10_411101/1、氯化乙酰膽堿的濃度為3.0X10—3?15.0X10_3mol/L、二甲基聯(lián)苯胺的濃度為2.0X10—3?
10.0X10_3mol/L。
[0018]優(yōu)選地，第4步中，所述向C、T酶瓶內(nèi)滴加純凈水為50?200微升，所述待檢樣品溶液為50?200微升，所述C酶瓶中純凈水為50?200微升，磷酸鹽緩沖液為0.lmol/L,且pH為7.0。[0019]優(yōu)選地，第4步中，所述C、T底物反應(yīng)杯中的反應(yīng)產(chǎn)物100?300微升。
[0020]本發(fā)明具有如下的有益效果:
[0021](I)檢測靈敏度高:本發(fā)明選用了含有乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶及過氧化物酶的三酶體系，并建立了基于增敏劑及魯米諾的化學(xué)發(fā)光技術(shù)，其靈敏度高出數(shù)十倍及上千倍，且檢測線性范圍顯著增寬。本發(fā)明檢測敵敵畏及敵百蟲的最低檢測限達(dá)0.078ppm;檢測苯線磷的最低檢測限達(dá)0.035ppm ;對(duì)丁硫克百威的檢測限達(dá)0.039ppm ；
[0022](2)本發(fā)明試劑盒使用方便，操作簡單，在測試中不需要復(fù)雜的配制試劑過程，非專業(yè)人員按照試劑盒說明書便可輕易完成檢測；
[0023](3)檢測快速:本發(fā)明可在半小時(shí)內(nèi)完成樣品的前處理過程及檢測過程，對(duì)蔬菜、水果樣品前處理只需要3?5分鐘，用試劑盒測試過程需要10?25分鐘。
[0024](4)可檢測的有機(jī)磷范圍廣:本發(fā)明可檢測包括涕滅威、氧化樂果、樂果、乙酰甲胺磷、西維因、敵百蟲、呋喃丹、丁硫克百威、二嗪農(nóng)、敵敵畏、百治磷、硫線磷、乙基對(duì)硫磷、苯線磷、馬拉硫磷、甲胺磷、甲基對(duì)硫磷、久效磷、殺線威、亞胺硫磷、辛硫磷、毒死蜱、水胺硫磷、甲基異硫磷、谷硫磷等在內(nèi)的數(shù)幾十種有機(jī)磷農(nóng)藥。本發(fā)明同時(shí)也可檢測出一些重金屬包括鎘、銅、鉛、汞及鋅等物質(zhì)在蔬菜、水果上的殘留。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]通過閱讀參照以下附圖對(duì)非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得更明顯:
[0026]圖1為本發(fā)明快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的試劑盒的模式圖；
[0027]其中，I為含有對(duì)照及測試用的三酶試劑瓶組，包括C酶瓶、T酶瓶；2為酶瓶密封蓋，3為三酶試劑瓶體；4為酶凍干的三酶混合劑；5為底物反應(yīng)杯杯體；6為含有氯化乙酰膽堿、魯米諾及二甲基聯(lián)苯胺的凍干吸水墊；7為對(duì)照及測試用二聯(lián)底物反應(yīng)杯組，包括C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯。
【具體實(shí)施方式】
[0028]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。以下實(shí)施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)。這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0029]實(shí)施例1
[0030]本實(shí)施例涉及一種利用試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，包括以下步驟:
[0031]本實(shí)施例檢測市售油菜中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留。
[0032]1、樣品前處理，將重量在10克之內(nèi)的市售油菜葉10份，放置于一帶有螺旋蓋的塑料及玻璃容器中，也可以用常用的罐頭瓶。加入約10毫升的純凈水，搖晃3分鐘后，靜置2分鐘后，取上清可直接用于測試；
[0033]2、酶冷凍保護(hù)劑的制備:本實(shí)施例的配制方法如下:先配制5mmol/L氯化鈣溶液100毫升，然后加入蔗糖I克，甘氨酸I克，甘油5毫升，牛血清白蛋白I克，對(duì)以上成分邊加入邊攪拌，直至所有的粉狀試劑全部溶解，然后在_15°C條件下冷凍保存待用；[0034]3、反應(yīng)酶液的配制:將上述三種酶液用上述酶冷凍保護(hù)劑進(jìn)行稀釋，即將每毫克含有425國際酶活性單位的乙酰膽堿酯酶稀釋3000倍，將每毫克含有10國際酶活性單位的乙酰膽堿酯酶稀釋200倍，將每毫克含有113國際酶活性單位的辣根過氧化物酶稀釋200倍。然后各取上述酶液100微升混合于一起，分裝在棕色的安瓿瓶中，放在冷凍干燥機(jī)上冷凍干燥后，上蓋后密封，放置于鋁箔袋中，室溫保存；
[0035]4、底物反應(yīng)杯的制備:在本實(shí)施例中，用聚氯乙烯塑料反應(yīng)杯，底面內(nèi)徑為8mm，高度為10mm，所述反應(yīng)底物墊片的厚度為3mm，將此墊片放入含有濃度為1.0X 10_4mol/L魯米諾、3.0X 10_3mol/L氯化乙酰膽堿及2.0 X 10_3mol/L 二甲基聯(lián)苯胺的混合溶液中，浸泡3分鐘后浙干，并冷凍干燥后，放入反應(yīng)杯中，分別標(biāo)記為C及T杯，封入包裝袋中，室溫保存待用；
[0036]5、樣品的測試:分別向C及T酶瓶滴加50微升純凈水，輕輕搖勻后，向T酶瓶中用定量塑料滴管滴加50微升待檢樣品溶液，向C酶瓶中用定量塑料滴管滴加50微升純凈水，輕輕搖勻后，放置15分鐘，然后用滴管從上述C及T的酶瓶吸取反應(yīng)產(chǎn)物100微升，分別滴加到C及T底物反應(yīng)杯中，在2分鐘內(nèi)于便攜式化學(xué)發(fā)光儀上測定C及T底物反應(yīng)杯的發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)發(fā)光強(qiáng)度的相對(duì)抑制率，確定有機(jī)磷的濃度。
[0037]結(jié)果表明，在10份被檢油菜樣品中，有2份油菜樣品的化學(xué)發(fā)光抑制率分別為16%及33%，判定為陽性。其余8份油菜樣品的化學(xué)發(fā)光抑制率均小于15%。對(duì)照測試陽性樣品為5ppm的氧化樂果。
[0038]實(shí)施例2
[0039]本實(shí)施例涉及一種利用試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，包括以下步驟:
[0040]本實(shí)施例檢測市售菠菜中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留。
[0041]1、樣品前處理，步驟同實(shí)施例1的步驟I ;
[0042]2、酶冷凍保護(hù)劑的制備:本實(shí)施例的配制方法如下:先配制lOmmol/L氯化鈣溶液100毫升，然后加入蔗糖2克，甘氨酸2克，甘油10毫升，牛血清白蛋白2克。對(duì)以上成分邊加入邊攪拌，直至所有的粉狀試劑全部溶解，然后在_25°C條件下冷凍保存待用；
[0043]3、反應(yīng)酶液的配制:將上述三種酶液用上述酶冷凍保護(hù)劑進(jìn)行稀釋，即將每毫克含有425國際酶活性單位的乙酰膽堿酯酶稀釋5000倍，將每毫克含有10國際酶活性單位的乙酰膽堿酯酶稀釋500倍，將每毫克含有113國際酶活性單位的辣根過氧化物酶稀釋500倍。然后各取上述酶液200微升混合于一起，分裝在棕色的安瓿瓶中，放在冷凍干燥機(jī)上冷凍干燥后，上蓋后密封，放置于鋁箔袋中，室溫保存。
[0044]4、底物反應(yīng)杯的制備:在本實(shí)施例中，用聚苯乙烯塑料反應(yīng)杯。底面內(nèi)徑為12mm，高度為15mm。所述反應(yīng)底物墊片的厚度為4mm。將此墊片放入含有濃度為2.0 X 10_4mol/L魯米諾、8.0 X 10_3mol/L氯化乙酰膽堿及6.0 X 10_3mol/L 二甲基聯(lián)苯胺的混合溶液中，浸泡3分鐘后浙干，并冷凍干燥后，放入反應(yīng)杯中，分別標(biāo)記為C及T杯，封入包裝袋中，室溫保存待用；
[0045]5、樣品的測試:分別向C及T酶瓶滴加100微升純凈水，輕輕搖勻后，向T酶瓶中用定量塑料滴管滴加100微升待檢樣品溶液。向C酶瓶中用定量塑料滴管滴加100微升純凈水，輕輕搖勻后，放置20分鐘。然后用滴管從上述C及T的酶瓶吸取反應(yīng)產(chǎn)物200微升，分別滴加到C及T底物反應(yīng)杯中。然后在5分鐘內(nèi)于便攜式化學(xué)發(fā)光儀上測定C及T底物反應(yīng)杯的發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)發(fā)光強(qiáng)度的相對(duì)抑制率，確定有機(jī)磷的濃度。
[0046]結(jié)果表明，在10份被檢菠菜樣品中，有1份油菜樣品的化學(xué)發(fā)光抑制率分別為21%，判定為陽性。其余9份菠菜樣品的化學(xué)發(fā)光抑制率均小于15%。對(duì)照測試陽性樣品為IOppm的久效磷。
[0047]實(shí)施例3
[0048]本實(shí)施例涉及一種利用試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，包括以下步驟:
[0049]本實(shí)施例檢測市售水晶梨中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留。
[0050]1、樣品前處理:先將水晶梨切取八分之一大小，放置于一干凈的罐頭瓶中。其余步驟同實(shí)施例1的步驟I;
[0051]2、酶冷凍保護(hù)劑的制備:本實(shí)施例的配制方法如下:先配制15mmol/L氯化鈣溶液100毫升，然后加入蔗糖3克，甘氨酸3克，甘油15毫升，牛血清白蛋白3克。對(duì)以上成分邊加入邊攪拌，直至所有的粉狀試劑全部溶解，然后在_40°C條件下冷凍保存待用；
[0052]3、反應(yīng)酶液的配制:將上述三種酶液用上述酶冷凍保護(hù)劑進(jìn)行稀釋，即將每毫克含有425國際酶活性單位的乙酰膽堿酯酶稀釋8000倍，將每毫克含有10國際酶活性單位的乙酰膽堿酯酶稀釋800倍，將每毫克含有113國際酶活性單位的辣根過氧化物酶稀釋800倍。然后各取上述酶液300微升混合于一起，分裝在棕色的安瓿瓶中，放在冷凍干燥機(jī)上冷凍干燥后，上蓋后密封，放置于鋁箔袋中，室溫保存。
[0053]4、底物反應(yīng) 杯的制備:在本實(shí)施例中，用聚碳酸酯塑料反應(yīng)杯。底面內(nèi)徑為20mm，高度為25mm。在制備反應(yīng)底物墊片時(shí)。所述的反應(yīng)底物墊片時(shí)，所用的厚度為6mm。然后將此墊片放入含有濃度為3.0父10_4!1101/1魯米諾、15.0\10_311101/1氯化乙酰膽堿及
10.0X 10_3mol/L 二甲基聯(lián)苯胺的混合溶液中，浸泡3分鐘后浙干，并冷凍干燥后，放入反應(yīng)杯中，分別標(biāo)記為C及T杯，封入包裝袋中，室溫保存待用；
[0054]5、樣品的測試:分別向C及T酶瓶滴加200微升純凈水，輕輕搖勻后，向T酶瓶中用定量塑料滴管滴加200微升待檢樣品溶液。向C酶瓶中用定量塑料滴管滴加200微升純凈水，輕輕搖勻后，放置25分鐘。然后用滴管從上述C及T的酶瓶吸取反應(yīng)產(chǎn)物300微升，分別滴加到C及T底物反應(yīng)杯中。然后在8分鐘內(nèi)于便攜式化學(xué)發(fā)光儀上測定C及T底物反應(yīng)杯的發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)發(fā)光強(qiáng)度的相對(duì)抑制率，確定有機(jī)磷的濃度。
[0055]結(jié)果表明，10份被檢水晶梨樣品的化學(xué)發(fā)光抑制率均小于15%，結(jié)果判定為均為陰性。對(duì)照測試陽性樣品為15ppm的甲胺磷。
[0056]本發(fā)明利用乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶及過氧化物酶為催化體系，將氯化乙酰膽堿水解氧化后的產(chǎn)物與魯米諾產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光效應(yīng)。由于有機(jī)磷農(nóng)藥會(huì)抑制這種反應(yīng)體系的三種酶的活性，尤其是乙酰膽堿酯酶的活性，從而可建立靈敏地測試農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥的方法，并利用此原理研制出檢測有機(jī)磷農(nóng)藥的化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒。本發(fā)明有具檢測速度快、操作過程簡單、穩(wěn)定性及重復(fù)性好、不需要昂貴儀器等優(yōu)點(diǎn)，非常適合于在農(nóng)貿(mào)市場進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥的現(xiàn)場監(jiān)測。
[0057]以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容。
【權(quán)利要求】
1.一種快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括:c酶瓶、T酶瓶、C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯，所述C酶瓶、T酶瓶均用酶瓶密封蓋密封，且裝有酶凍干的三酶混合劑；所述C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯均設(shè)置含有氯化乙酰膽堿、魯米諾及二甲基聯(lián)苯胺的凍干吸水墊。
2.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，包括以下步驟: 第I步:酶冷凍保護(hù)劑的制備:將蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、甘油加入氯化鈣溶液中，攪拌至完全溶解，冷凍保存待用； 第2步:反應(yīng)酶液的配制:將所述酶冷凍保護(hù)劑分別稀釋乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶、過氧化物酶，混合，冷凍干燥后，分別裝入C酶瓶和T酶瓶中； 第3步:底物反應(yīng)杯的制備:將反應(yīng)底物墊片放入魯米諾、氯化乙酰膽堿、二甲基聯(lián)苯胺混合溶液中，浸泡浙干，并冷凍干燥后，放入聚氯乙烯塑料反應(yīng)杯，標(biāo)記為C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯； 第4步:樣品的測試:分別向C、T酶瓶內(nèi)滴加純凈水，搖勻后，用塑料滴管向所述T酶瓶中滴加待檢樣品溶液，向C酶瓶中滴加純凈水或磷酸鹽緩沖液，搖勻，靜置，用滴管從所述C、T酶瓶中吸取反應(yīng)產(chǎn)物，分別滴加到C、T底物反應(yīng)杯中，在2~8分鐘內(nèi)于便攜式化學(xué)發(fā)光儀上測定C、T底物反應(yīng)杯的發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)發(fā)光強(qiáng)度的相對(duì)抑制率，確定有機(jī)磷的濃度。
3.如權(quán)利要求2所述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，第I步中，酶冷凍保護(hù)劑中包括如下含量的各組分:5~15mmol/L氯化鈣溶液100毫升,鹿糖I~3克，甘氨酸I~3克，甘油5~15毫 升，牛血清白蛋白I~3克。
4.如權(quán)利要求2所述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，第2步中，所述乙酰膽堿酯酶稀釋3000~8000倍，所述膽堿氧化酶稀釋200~800倍，所述過氧化物酶稀釋200~800倍。
5.如權(quán)利要求2所述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，第3步中，所述C底物反應(yīng)杯、T底物反應(yīng)杯的底面內(nèi)徑為8~20mm，高度為10~25mm。
6.如權(quán)利要求2所述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，第3步中，所述反應(yīng)底物墊片的厚度為3~6_。
7.如權(quán)利要求2所述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，第3步中，所述魯米諾的濃度為1.0X 10_4~3.0X 10_4mol/L、氯化乙酰膽堿的濃度為3.0X 10_3~15.0X10_3mol/L、二甲基聯(lián)苯胺的濃度為 2.0Χ10-3 ~10.0 X l(T3mol/L。
8.如權(quán)利要求2所述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，第4步中，所述向C、T酶瓶內(nèi)滴加純凈水為50~200微升，所述待檢樣品溶液為50~200微升，所述C酶瓶中純凈水為50~200微升，磷酸鹽緩沖液為0.lmol/L，且pH為7.0。
9.如權(quán)利要求2所述的試劑盒快速檢測有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于，第4步中，所述C、T底物反應(yīng)杯中的反應(yīng)產(chǎn)物100~300微升。
【文檔編號(hào)】G01N21/76GK104007104SQ201410219923
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年5月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月22日
【發(fā)明者】劉國艷, 柴春彥, 王藝如, 管毓渝, 任慧鵬 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)