一種測(cè)定長(zhǎng)春西汀含量的hplc方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種長(zhǎng)春西汀含量測(cè)定的HPLC方法，色譜柱：Thermo-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇：乙腈：乙酸銨溶液（0.1M）=20：45：35（體積比）；檢測(cè)溫度：35℃；流速：1.0ml/min；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；分別在250nm和280nm波長(zhǎng)下測(cè)定對(duì)照品溶液和供試品溶液并記錄色譜圖。該方法具有檢測(cè)靈敏度高，分離效果好，分析方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，同時(shí)能最大限度檢測(cè)到長(zhǎng)春西汀的相關(guān)物質(zhì)等技術(shù)特點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】一種測(cè)定長(zhǎng)春西汀含量的HPLC方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種測(cè)定長(zhǎng)春西汀含量的HPLC方法。
【背景技術(shù)】
[0002]長(zhǎng)春西汀(Vinpocetine)即阿撲長(zhǎng)春胺酸乙酯(結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附圖1)，是從夾竹桃科小蔓長(zhǎng)春花中萃取得到的一種天然藥物，屬于吲哚類生物堿。長(zhǎng)期以來(lái)，臨床上用于腦梗塞后遺癥、腦出血后遺癥、腦動(dòng)脈硬化等的治療和預(yù)防，近年來(lái)研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)春西汀不僅對(duì)預(yù)防和治療缺血性腦血管疾病、腦動(dòng)脈硬化癥、高血壓、冠心病的高粘血癥以及卒中后遺癥有很好的療效，而且還對(duì)改善老年性記憶障礙和健康人群的精神活動(dòng)等有一定的生理活性價(jià)值。另外，對(duì)思維混亂、注意力不集中、易怒、視覺(jué)和聽(tīng)覺(jué)異常、情緒波動(dòng)等有一定的效果。隨著我國(guó)人口老齡化的增加，心腦血管疾病也日益劇增，由于長(zhǎng)春西汀對(duì)心腦血管疾病具有良好的臨床療效，應(yīng)用范圍也日益廣泛。該藥30年前首先由匈牙利GedeonRichter公司開(kāi)發(fā)成功，目前世界兩大長(zhǎng)春西汀生產(chǎn)商為西班牙Covex和瑞士 Linnea,其市場(chǎng)占有量為世界用量的90%以上，每年銷售額在10億美元左右。中國(guó)國(guó)內(nèi)注冊(cè)生產(chǎn)長(zhǎng)春西汀口服制劑和注射劑的廠家有60多家，其中95%以上的長(zhǎng)春西汀原料來(lái)源于國(guó)外，中國(guó)國(guó)內(nèi)只東北制藥和江蘇勤奮藥業(yè)有生產(chǎn)文號(hào)。
[0003]長(zhǎng)春西汀雖然是老藥，但是目前研究的團(tuán)隊(duì)比較多，有關(guān)長(zhǎng)春西汀研究報(bào)道的文獻(xiàn)近十年也有近900篇，多為國(guó)外報(bào)道。但是有關(guān)長(zhǎng)春西汀含量測(cè)定的HPLC檢測(cè)方法卻鮮有報(bào)道，藥典EP7.5和BP2010及USP36-31中有關(guān)長(zhǎng)春西汀含量測(cè)定方法均采用滴定法，滴定分析的專屬性差，如原料純度不夠，結(jié)果會(huì)出現(xiàn)較大的差異。為解決以上缺陷，將發(fā)明創(chuàng)造采用HPLC法測(cè)定長(zhǎng)春西汀含量，采用甲醇-乙腈-乙酸銨混合溶液作為系統(tǒng)檢測(cè)的流動(dòng)相，檢測(cè)靈敏度高，分離效果好，分析方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，同時(shí)能最大限度檢測(cè)到長(zhǎng)春西汀的相關(guān)物質(zhì)，為該產(chǎn)品的穩(wěn)定性提供了檢測(cè)依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種長(zhǎng)春西汀含量測(cè)定的HPLC方法，所述測(cè)定方法采用HPLC法在雙波長(zhǎng)下對(duì)長(zhǎng)春西汀及其有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，方法操作簡(jiǎn)便快捷、分離效果好、靈敏度高，重現(xiàn)性好。為達(dá)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案:
一種長(zhǎng)春西汀含量測(cè)定的HPLC方法，其特征在于包括下述步驟:
1)分別制備長(zhǎng)春西汀對(duì)照品(中國(guó)藥檢所，批號(hào)100947-201102)溶液和供試品溶液，長(zhǎng)春氨酸乙酯和阿樸長(zhǎng)春胺對(duì)照品溶液；
2)利用HPLC法在雙波長(zhǎng)下同時(shí)檢測(cè)長(zhǎng)春西汀的含量；
色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物，本發(fā)明選用流動(dòng)相中甲醇的體積百分比由10%遞增至35% ;乙腈的體積百分比由30%遞增至50% ;乙酸銨溶液(0.1M)的體積百分比由60%遞減至15% ;柱溫25V?40。。;體積流量0.8?1.5ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm和280nm ;進(jìn)樣量Ιμ1? 15μ1 ;理論塔板數(shù)按長(zhǎng)春西汀峰計(jì)算不得低于5000 ；3)根據(jù)高效液相色譜分析結(jié)果計(jì)算長(zhǎng)春西汀的含量。
進(jìn)一步地，本發(fā)明HPLC方法的色譜條件為:色譜柱為T(mén)hermo-C18 ( 250mmX 4.6mm，5Mm)，流動(dòng)相為甲醇:乙腈:乙酸銨溶液(0.1M) =20:45:35 (體積比)；柱溫35°C ;體積流量1.0ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm和280nm ;進(jìn)樣量ΙΟμΙ。
[0005]進(jìn)一步地，本發(fā)明HPLC分析方法中，長(zhǎng)春西汀對(duì)照品溶液和供試品溶液、長(zhǎng)春氨酸乙酯和阿樸長(zhǎng)春胺對(duì)照品溶液制備方法包括:分別取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品和供試品、長(zhǎng)春氨酸乙酯對(duì)照品和阿樸長(zhǎng)春胺對(duì)照品適量，精密稱定，加0.01mol/L鹽酸溶液適量，分別用乙腈稀釋配置成濃度為50、50、100和lOOPg/ml的長(zhǎng)春西汀對(duì)照品溶液和供試品及雜質(zhì)對(duì)照品溶液。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】[0006]圖1為長(zhǎng)春西汀的結(jié)構(gòu)式。
[0007]圖2為本發(fā)明長(zhǎng)春西汀含量測(cè)定的HPLC檢測(cè)圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0008]在下面的實(shí)施例中進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的詳細(xì)分析方法，但本發(fā)明并不局限于下述詳細(xì)分析方法。
[0009]實(shí)施例1長(zhǎng)春西汀對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備
分別取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品和供試品適量，精密稱定，加0.01mol/L鹽酸溶液適量，分別用乙腈稀釋制成濃度為5(^g/ml的長(zhǎng)春西汀對(duì)照品溶液和供試品溶液，搖勻，微孔濾膜(0.45Mm)濾過(guò)，即得。
[0010]實(shí)施例2篩選長(zhǎng)春西汀含量測(cè)定的條件。
[0011]長(zhǎng)春西汀對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備:按照實(shí)施例1所述的方法制備
色譜條件的篩選:采用美國(guó)Agilent-1260高效液相色譜儀，Chemstation Edition色
譜工作站
色譜柱的選擇:依次考察 Thermo C18 柱、Phenomenex Luna C18 柱、Kromasil C18 柱、Agilent C18柱,結(jié)果經(jīng)試驗(yàn)比較，Thermo C18 ( 250mmX4.6mm，5Mm)分離效果最佳。
[0012]流動(dòng)相:分別考察了乙腈一乙酸銨溶液、甲醇一乙酸銨溶液、甲醇一乙腈一乙酸銨溶液(0.1M)、乙腈一甲醇一磷酸水溶液等流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果經(jīng)試驗(yàn)比較，優(yōu)選甲醇一乙腈一乙酸銨(0.1M)溶液作為系統(tǒng)檢測(cè)的流動(dòng)相進(jìn)行長(zhǎng)春西汀的含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)附圖2。
[0013]檢測(cè)溫度:考察了25°〇、351:、401:不同柱溫，以及0.8、1.0、1.2、1.51111/1^11不同流速對(duì)長(zhǎng)春西汀分離效果的影響，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)比較，優(yōu)選柱溫35°C,流速1.0ml/min時(shí)分離效果最佳。
[0014]檢測(cè)器:選用全波長(zhǎng)掃描，對(duì)長(zhǎng)春西汀、長(zhǎng)春氨酸乙酯和阿樸長(zhǎng)春胺對(duì)照品溶液全波長(zhǎng)紫外掃描(19(T400nm)，結(jié)果測(cè)得幾種成分的最大吸收波長(zhǎng)不等，例如，長(zhǎng)春西汀在250和280nm處有最大吸收,長(zhǎng)春氨酸乙酯在245nm、276nm處有最大吸收，阿樸長(zhǎng)春胺在230、250、280nm處有最大吸收。為了同時(shí)進(jìn)行幾種成分的含量測(cè)定，選擇最佳檢測(cè)波長(zhǎng)，采用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行多波長(zhǎng)檢測(cè)，分別使其在最大吸收波長(zhǎng)附近進(jìn)行檢測(cè)。
[0015]真空泵:SHB-m循環(huán)水式真空泵電子天平:梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司提供，規(guī)格為十萬(wàn)分之一。
[0016]實(shí)施例3長(zhǎng)春西汀含量測(cè)定的色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性。
[0017]色譜條件:采用美國(guó)Agilent-1260高效液相色譜儀，Chemstation Edition色譜
工作站
色譜柱:Thermo C18 ( 250mm X 4.6mm, 5Mm)
流動(dòng)相:甲醇:乙腈:乙酸銨溶液(0.1M)=20:45:35 (體積比);體積流量1.0ml/min ;進(jìn)樣量10μL
檢測(cè)溫度:35°C 檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器 檢測(cè)波長(zhǎng):250nm和280nm 真空泵:SHB-m循環(huán)水式真空泵 電子天平:梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司提供，規(guī)格為十萬(wàn)分之一流動(dòng)相的制備:流動(dòng)相按照甲醇:乙腈:乙酸銨溶液(0.1M) =20:45:35 (體積比)配置好，0.2 μ m孔徑過(guò)濾器過(guò)濾，SCQ-250W超聲波超聲脫氣。
[0018]對(duì)照品溶液的制備:分別取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品、長(zhǎng)春氨酸乙酯對(duì)照品和阿樸長(zhǎng)春胺對(duì)照品適量，精密稱定，加0.01mol/L鹽酸溶液適量，分別用乙腈稀釋配置成濃度為50、50、100和lOOPg/ml的對(duì)照品溶液。
[0019]供試品溶液的制備:取長(zhǎng)春西汀供試品，精密稱定，加0.01mol/L鹽酸溶液適量，用乙腈稀釋配置成濃度為5(^g/ml供試品溶液，搖勻，微孔濾膜(0.45Mffl)濾過(guò)，即得。
[0020]精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μΙ，在上述色譜條件下分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果樣品中各待測(cè)組分與相鄰峰的分離度均大于2.0，理論塔板數(shù)按照長(zhǎng)春西汀計(jì)算大于5000。
[0021]實(shí)施例4長(zhǎng)春西汀的含量測(cè)定
長(zhǎng)春西汀供試品溶液的制備:取3批長(zhǎng)春西汀供試品，按照實(shí)施例1所述方法制得，批號(hào)分別為1、2、3。
[0022]色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性:
色譜條件:采用美國(guó)Agilent-1260高效液相色譜儀，Chemstation Edition色譜工作
站
色譜柱:Thermo C18 ( 250mm X 4.6mm, 5Mm)
流動(dòng)相:甲醇:乙腈:乙酸銨溶液(0.1M)=20:45:35 (體積比);體積流量1.0ml/min ;進(jìn)樣量10μL
檢測(cè)溫度:35°C 檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器 檢測(cè)波長(zhǎng):250nm和280nm 真空泵:SHB-m循環(huán)水式真空泵
電子天平:梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司提供，規(guī)格為十萬(wàn)分之一流動(dòng)相的制備:流動(dòng)相按照甲醇:乙腈:乙酸銨溶液(0.1M) =20:45:35 (體積比)配置好，0.2 μ m孔徑過(guò)濾器過(guò)濾，SCQ-250W超聲波超聲脫氣。
[0023]對(duì)照品溶液的制備:分別取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品、長(zhǎng)春氨酸乙酯對(duì)照品和阿樸長(zhǎng)春胺對(duì)照品適量，精密稱定，加0.01mol/L鹽酸溶液適量，分別用乙腈稀釋配置成濃度為50、50、100和lOOPg/ml的對(duì)照品溶液。
[0024]供試品溶液的制備:取長(zhǎng)春西汀供試品，精密稱定，加0.01mol/L鹽酸溶液適量，用乙腈稀釋配置成濃度為5(^g/ml供試品溶液，搖勻，微孔濾膜(0.45Mffl)濾過(guò)，即得。
[0025]樣品測(cè)定:取長(zhǎng)春西汀供試品(批號(hào)1、2、3)按上述供試品溶液制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算長(zhǎng)春西汀百分含量，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0026]表1 3個(gè)批次長(zhǎng)春西汀含量測(cè)定表:
【權(quán)利要求】
1.一種測(cè)定長(zhǎng)春西汀含量的高效液相色譜(HPLC)方法，其特征在于色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物，以甲醇-乙腈-乙酸銨溶液(0.1M)的混合溶液為流動(dòng)相；柱溫25°C~40°C;體積流量0.8~1.5ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm和280nm，進(jìn)樣量?μL~15μ1 ；理論塔板數(shù)按長(zhǎng)春西汀峰計(jì)算不得低于5000。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于色譜柱是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物的反相色譜柱。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于甲醇體積分?jǐn)?shù)為10%~35%，乙腈的體積分?jǐn)?shù)為30%~50%，乙酸銨溶液的體積分?jǐn)?shù)為15%飛0%。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于優(yōu)選甲醇體積分?jǐn)?shù)20%，乙腈體積分?jǐn)?shù)45%，乙酸銨溶液體積分?jǐn)?shù)35%。
5.如權(quán)利要求1所述的方法， 其特征在于柱溫25°C~40°C;體積流量0.8^1.5ml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm和280nm ;進(jìn)樣量1μL~15μ1。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于使用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm和280nm ;柱溫為35°C ;體積流量為1.0ml/min ;進(jìn)樣量為10μl。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103926337SQ201410071143
【公開(kāi)日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年3月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月1日
【發(fā)明者】彭學(xué)東, 張梅, 趙金召, 申造 申請(qǐng)人:江蘇斯威森生物醫(yī)藥工程研究中心有限公司