一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，包括將納米粒子與淚液混合后，采用拉曼光譜儀進行檢測，所測淚液與粒子混合物可為液態(tài)，半液態(tài)或干燥結(jié)晶，由此獲取淚液成分拉曼光譜圖。本發(fā)明的為淚液的檢測與分析提供了一種新的，快速，無創(chuàng)，靈敏的方法。
【專利說明】一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物樣品測試方法領(lǐng)域，具體涉及一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法。
【背景技術(shù)】
[0002]淚膜是由瞼板腺分泌的脂質(zhì)、淚腺分泌的水樣液及眼表面上皮細(xì)胞分泌的粘蛋白構(gòu)成。淚腺及附屬腺分泌的淚液可通過瞬目動作擴散至整個眼球表面，以潤滑眼表面及供給眼表上皮細(xì)胞正常代謝所需的物質(zhì)，維持眼表組織的正常功能。正常淚膜成分較復(fù)雜且含量較低，包括溶菌酶，乳鐵蛋白，白蛋白，表皮生長因子，β型轉(zhuǎn)化生長因子，蠟酯，膽固醇酯，極性脂肪，鈉，鉀等。目前，常用的淚液成分的實驗室檢查包括酶聯(lián)免疫法(ELISH)，質(zhì)譜，免疫熒光技術(shù)等。但是對于一些含量極低的物質(zhì)或目標(biāo)檢測為所有淚液成分的同時檢測，上述方法都難以實現(xiàn)。
[0003]1974年，F(xiàn)leishmann等人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)卩比唳分子被吸附在適當(dāng)氧化還原處理過的銀電極表面時，該分子的拉曼散射截面增加106倍,表面增強拉曼光譜(Surface EnhancedRaman Spectroscopy, SERS)由此誕生，它是基于普通拉曼光譜技術(shù)(Normal RamanSpectroscopy)的擴展。由于巨大的SERS增強檢測大多可達ng的量級。目前，SERS已被廣泛應(yīng)用于環(huán)境污染，果蔬農(nóng)藥以及一些生物化學(xué)方面的檢測，總之SERS研究在理論上和應(yīng)用上都取得了令人注目的結(jié)果。SERS技術(shù)擁有以下一些優(yōu)點，包括:檢測靈敏，生物無創(chuàng)性，所需樣品含量少，可一定程度的半定量等。
[0004]因此，將表面增強拉曼光譜技術(shù)應(yīng)用于淚液成分的檢測可克服淚液成分復(fù)雜且含量極低這一難點。本發(fā)明將提供一種新的基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種新的基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0007]—種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，包括:將納米粒子與淚液混合后，采用拉曼光譜儀進行液態(tài)或干燥結(jié)晶檢測，獲取淚液成分拉曼光譜信號。
[0008]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，包括如下步驟:
[0009](I)納米粒子的合成
[0010](2)所測淚液的獲取
[0011](3)將步驟(I)和(2)中獲取納米粒子與淚液成分混合
[0012](4)在上述混合物直接檢測或滴入合適載體干燥處理后檢測
[0013](5)通過拉曼光譜儀獲得所需淚液成分的拉曼光譜圖。
[0014]上述(I)所述納米粒子包括不用種類，不同尺寸的納米粒子，如銀納米粒子，金納米粒子，SHINES粒子等
[0015]上述(2)所述的淚液，可根據(jù)檢測目的的不同獲取，包括:正常生理性的淚液，異常淚液，刺激性淚液，以及只含一部分成分的淚液。
[0016]上述(4)所述的檢測方法，可根據(jù)需要選擇合適的材料和方法獲取所測淚液，用具有吸取功能的工具或者粘附力強的材料獲取，如毛管，濾紙吸取，硝酸纖維素膜等。
[0017]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(2)具體為:根據(jù)需要選擇合適的材料和方法獲取所測淚液，用具有吸取功能的工具或者粘附力強的材料獲取，如毛細(xì)管，濾紙吸取，硝酸纖維素膜等。
[0018]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(4)具體為:根據(jù)需要選擇液態(tài)檢測，采用毛細(xì)管等容器內(nèi)檢測或者置于載體上檢測；或采用干燥結(jié)晶法，將淚液納米粒子混合物滴加在載體半干燥或完全干燥后聚焦檢測。
[0019]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(4)具體為:干燥結(jié)晶法中使用的基底可為任何材料，可為硅片，玻片，金膜，石英片，也可謂錫箔紙，硝酸纖維素膜等。
[0020]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(4)具體為:液態(tài)檢測法可用一定的容器裝入其中或直接滴加在載體表面液態(tài)直接檢測。
[0021]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(5)具體為:所述干燥結(jié)晶檢測法可根據(jù)測試需要，檢測樣品所形成結(jié)晶的各個區(qū)域，如中央結(jié)晶區(qū)，中央非結(jié)晶區(qū)，周邊結(jié)晶區(qū)，周邊結(jié)晶區(qū)，邊緣咖啡環(huán)區(qū)等。
[0022]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(5 )具體為，根據(jù)所需檢測樣本需要，調(diào)節(jié)拉曼光譜儀適合的檢測參數(shù)，如:激發(fā)光波長，曝光時間，功率等
[0023]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(5 )具體為，拉曼光譜儀可為不同型號拉曼光譜儀，如大型拉曼光譜儀，便攜式拉曼光譜儀等。
[0024]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述步驟(5)具體為:根據(jù)測試需要，所采用的拉曼光譜儀可增加其他光學(xué)輔助元件，如鏡頭等。
[0025]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法為淚液的檢測與分析提供了一種新的，快速，無創(chuàng)，靈敏的方法。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]圖1為實施例1中淚液與金納米粒子液態(tài)混合物于毛細(xì)管內(nèi)檢測的拉曼光譜圖，10條光譜為重復(fù)信號采集所得。
[0027]圖2為實施例2中淚液與銀納米粒子混合物于硅片上形成干燥結(jié)晶后檢測的拉曼光譜圖，10條光譜圖為于中央無結(jié)晶區(qū)任意10個點信號采集所得。
[0028]圖3為實施例2中淚液與銀納米粒子混合物于硅片上形成干燥結(jié)晶示意圖，上方為檢測區(qū)域，下方為所對應(yīng)的拉曼光譜圖?？煽闯鲈谥醒霟o結(jié)晶區(qū)域所形成的拉曼光譜圖較中央結(jié)晶區(qū)及邊緣咖啡環(huán)重現(xiàn)性好，性噪比較高。
【具體實施方式】
[0029]以下通過【具體實施方式】對本發(fā)明的技術(shù)方案進行進一步的說明和描述。
[0030]實施例1
[0031](I)納米粒子的合成:采用Frens方法合成55nm的金納米粒子。
[0032](2)所測淚液的獲取:在裂隙燈顯微鏡下，視野放大16X，采用0.3mm孔徑的硅化處理的無菌毛細(xì)管置放于下瞼淚河處，避免刺激眼睛。毛細(xì)管借助虹吸力將淚液吸入毛細(xì)管內(nèi)。使用印pendorf槍將所取淚液吹入1.5ml離心管內(nèi)，所取淚液樣品可立刻使用或者儲存于一80°C冰箱兩周之內(nèi)使用。
[0033](3)將步驟(I)和(2)中獲取納米粒子與淚液成分混合:使用eppendorf槍定量分別取1.5ul淚液和金納米粒子混合，混勻。
[0034](4)在毛細(xì)管內(nèi)直接檢測:用毛細(xì)管將上述已混勻的步驟(3)中淚液與銀納米粒子的混合物吸入內(nèi)。
[0035](5)拉曼光譜儀檢測步驟(4)獲取的:調(diào)節(jié)Renishaw拉曼光譜儀,選擇X50/0.80鏡頭，聚焦，選擇632.8nm激發(fā)光，0.05mW，功率，10秒的曝光時間檢測。采集結(jié)束后可獲取相應(yīng)的淚液的表面增強拉曼光譜譜圖。
[0036](6)采用origin軟件后期處理拉曼光譜圖。
[0037]實施例2
[0038](I)納米粒子的合成:采用Frens方法合成55nm的銀納米粒子。
[0039](2)所測淚液的獲取:在裂隙燈顯微鏡下，視野放大16X，采用0.3_孔徑的硅化處理的無菌毛細(xì)管置放于下瞼淚河處，避免刺激眼睛。毛細(xì)管借助虹吸力將淚液吸入毛細(xì)管內(nèi)。使用印pendorf槍將所取淚液吹入1.5ml離心管內(nèi)，所取淚液樣品可立刻使用或者儲存于一80°C冰箱兩周之內(nèi)使用。
[0040](3)將步驟(I)和(2)中獲取納米粒子與淚液成分混合:使用eppendorf槍定量分別取1.5ul淚液和銀納米粒子混合，混勻。
[0041](4)在毛細(xì)管內(nèi)直接檢測:用毛細(xì)管將上述已混勻的步驟(3)中淚液與銀納米粒子的滴入在硅片上，待樣品干燥后形成圓形結(jié)晶。
[0042](5)拉曼光譜儀檢測步驟(4)獲取的:調(diào)節(jié)ΝΑΝ0ΡΗ0Τ0拉曼光譜儀，選擇X 20/0.45鏡頭，聚焦，選擇532nm激發(fā)光，0.43mW功率，20秒的曝光時間檢測。采集結(jié)束后可獲取相應(yīng)的淚液的表面增強拉曼光譜譜圖。
[0043](6)采用origin軟件后期處理拉曼光譜圖。
[0044]以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實施的范圍，SP依本發(fā)明專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，其特征在于:將納米粒子與淚液混合后，采用拉曼光譜儀進行檢測，所測淚液與粒子混合物為液態(tài)，半液態(tài)或干燥結(jié)晶，由此獲取淚液成分拉曼光譜圖。
2.如權(quán)利要求1所述的一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)納米粒子的合成 (2)所測淚液的獲取 (3)將步驟(1)和(2)中獲取納米粒子與淚液成分混合 (4)在上述混合物直接檢測或滴入合適載體干燥處理后檢測 (5)通過拉曼光譜儀獲得所需淚液成分的拉曼光譜圖。
3.如權(quán)利要求2所述的一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，其特征在于:所述步驟(1)可根據(jù)需要合成不用種類，不同尺寸的納米粒子，如銀納米粒子，金納米粒子或其他種類的納米粒子。
4.如權(quán)利要求2所述的一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，其特征在于:所述步驟(2)具體為:根據(jù)需要選擇合適的材料和方法獲取所測淚液，用具有吸取功能的工具或者粘附力強的材料獲取，所述工具或材料包括毛細(xì)管，濾紙或硝酸纖維素膜。
5.如權(quán)利要求2所述的一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，其特征在于:所述步驟(4)具體為:根據(jù)需要選擇液態(tài)直接檢測，采用毛細(xì)管等容器內(nèi)檢測或者置于載體上檢測；或采用半液態(tài) 或干燥結(jié)晶法，將淚液粒子混合物滴加在載體上部分干燥或完全干燥后聚焦檢測。
6.如權(quán)利要求5所述的一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，其特征在于:所述步驟(4)具體為:干燥結(jié)晶法中使用的基底可為任意載體材料，載體材料包括硅片，玻片，金膜，石英片，錫箔紙或硝酸纖維素膜。
7.如權(quán)利要求5所述的一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，其特征在于:所述步驟(4)具體為:液態(tài)檢測法用一定的容器裝入其中或直接滴加在載體表面液態(tài)直接檢測。
8.如權(quán)利要求5所述的一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試法，其特征在于:所述干燥結(jié)晶檢測法可根據(jù)測試需要，檢測樣品所形成結(jié)晶的各個區(qū)域，包括中央結(jié)晶區(qū)，中央非結(jié)晶區(qū)，周邊結(jié)晶區(qū)，周邊結(jié)晶區(qū)，邊緣咖啡環(huán)區(qū)。
9.如權(quán)利要求2所述的一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，其特征在于:所述步驟(5)具體為，根據(jù)所需檢測樣本需要，調(diào)節(jié)拉曼光譜儀適合的檢測參數(shù)，所述的檢測參數(shù)包括激發(fā)光波長，曝光時間，功率。
10.如權(quán)利要求2所述的一種基于表面增強拉曼光譜技術(shù)的淚液測試方法，其特征在于:根據(jù)測試需要，所采用的拉曼光譜儀可增加其他光學(xué)輔助元件。
【文檔編號】G01N21/65GK103604794SQ201310611707
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月26日
【發(fā)明者】李煒, 任斌, 張麗穎, 胡佩, 鄒篤雷, 劉祖國 申請人:廈門大學(xué)