專利名稱：一種胰島素檢測試劑盒及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術領域，具體地說涉及一種檢測人胰島素的檢測試劑盒。
背景技術：
胰島素是由胰島β細胞受內源性或外源性物質如葡萄 糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的ー種蛋白質激素。胰島素是機體內唯一降低血糖的激素，同時促進糖原、脂肪、蛋白質合成。外源性胰島素主要用來治療糖尿病，胰島素注射不會有成癮和依賴性。胰島素檢查，可以判定糖尿病患者是I型患者還是2型患者。主要適合于沒有使用胰島素治療的患者，可在空腹及餐后2小時抽血進行測定，而餐后水平應比空腹高出4 5倍。如果胰島素水平明顯降低，就稱之為絕對缺乏，可見于I型糖尿??；如果并沒有明顯減少，而表現為血糖升高，就稱為相對缺乏，是因為胰島素發(fā)揮作用的環(huán)節(jié)出現故障，常見于存在胰島素抵抗的2型糖尿病。血清胰島素檢測，包括空腹和餐后胰島素分泌水平檢測。一般常與糖耐量試驗(OGTT)同步進行檢測。通過檢測血清胰島素水平，可以更清楚地了解糖尿病病情的嚴重程度，并有助于判別預后，制定相應的治療方案。幾種病情類型
首先是胰島素抵抗型(分泌增高型)，表現為空腹胰島素水平正常和高于正常，進食后胰島素峰值明顯高于正常。表明胰島素分泌功能正常和偏高，提示體內存在胰島素抵抗。此型多見于肥胖的糖尿病人。治療主要以平衡飲食或增加運動量為主，不用藥或僅用胰島素增敏劑即可，以最大限度減輕胰島負擔，有利血糖長期穩(wěn)定的控制。其次是胰島素釋放障礙型，表現為胰島素反應曲線呈遲緩上升，高峰后移，病人多為消瘦或40歲以上的中年人，胰島病變大多輕微，為β細胞功能障礙型，此型病人除平衡飲食和増加運動量外，應用胰島素增敏劑為主，適當加用刺激胰島分泌胰島素的藥物，可以改善胰島素高峰時間，使胰島素釋放趨于正常。再次是胰島素分泌缺乏型，多見于青少年或2型糖尿病后期，胰島素分泌曲線低下，應接受胰島素治療，在治療中還應適時進行血胰島素分泌水平測定，以監(jiān)護病情發(fā)展。另外，還可表現為胰島素缺乏和胰島素抵抗同時存在，多見于2型糖尿病中后期，此類病人早期雖是胰島素抵抗，但卻長期應用刺激胰島素的藥物，致使胰島素功能逐步衰竭，最終可導致體內胰島素的缺乏。此類病人應加用胰島素增敏劑或α-葡萄糖苷酶抑制齊U，以減輕胰島負擔，待血糖控制后，再逐步減少刺激胰島產生胰島素的藥物。胰島素測定方法很多，包括免疫電泳法、補體結合法、凝結試驗法、免疫沉淀法、凝膠過濾法和放射免疫法。這些方法具有操作繁瑣、耗時長、過度浪費資源的缺點，不適于常規(guī)檢驗
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種胰島素的檢測試劑盒。該試劑盒可直接應用于全自動生化分析儀上，結果準確性強、試劑穩(wěn)定性好、使用方便、便于大規(guī)模推廣。本發(fā)明的另一目的是提供上述檢測試劑盒的生產制備及使用方法。為實現上述目的，本發(fā)明提供的試劑盒組成為
試劑Rl :緩沖液、聚こニ醇、疊氮鈉、こニ胺四こ酸鈉、牛血清白蛋白；
試劑R2:緩沖液、結合有胰島素單克隆抗體的乳膠粒子、吐溫-20、疊氮鈉、こニ胺四こ酸鈉、牛血清白蛋白。本發(fā)明提供的上述試劑盒的制備方法及操做步驟如下
(a)按下列比例配制好試劑 試劑Rl
Tris 緩沖液 200-220mmol/L聚こニ醇5-10 mmol /I,
疊氮鈉1-5 mmol/L
こニ胺四こ酸鈉l_5mmol/L牛血清白蛋白 l-5mmol/L ;
試劑R2
Tris 緩沖液 200-220mmol/L
結合有胰島素單克隆抗體的乳膠粒子 3.5-5% (v/v)
吐溫-20l-5mmol/L
疊氮鈉O. 5-3 mmol/L
こニ胺四こ酸鈉l_5mmol/L牛血清白蛋白 l-5mmol/L ;
(b)將試劑與待測樣本按一定比例混合，使其完全反應；
(c)用半/全自動生化分析儀測定吸光度變化值；
Cd)根據吸光度變化值計算出樣本中胰島素的濃度。
具體實施例方式下述實施例是為了更詳細的解釋本發(fā)明，但不應理解為本發(fā)明局限于此。實施例I :
本發(fā)明的試劑盒舉例是雙試劑，其中
試劑Rl
Tris 緩沖液 200mmol/L聚こニ醇8 mmol /I,
疊氮鈉5 mmol/L
こニ胺四こ酸鈉5mmol/L牛血清白蛋白 5mmol/L ;
試劑R2
Tris 緩沖液 200mmol/L
結合有胰島素單克隆抗體的乳膠粒子 5% (v/v)吐溫 _20Smmol /I,
疊氮鈉3 mmol/L
こニ胺四こ酸鈉5mmol/L牛血清白蛋白 5mmol/L。實施例2 :試劑盒使用方法
I.試劑準備，試劑為液體雙試劑，開瓶即用，其中 試劑Rl
Tris 緩沖液 200mmol/L聚こニ醇8 mmol /I,
疊氮鈉5 mmol/L
こニ胺四こ酸鈉5mmol/L牛血清白蛋白 5mmol/L ;
試劑R2
Tris 緩沖液 200mmol/L
結合有胰島素單克隆抗體的乳膠粒子 5% (v/v)
吐溫 _20Smmol /I,
疊氮鈉3 mmol/L
こニ胺四こ酸鈉5mmol/L牛血清白蛋白 5mmol/L。2.全自動生化儀參數設置
(a)檢測溫度37°C
(b)檢測波長主波長為600nm；
(c)反應時間10分鐘。3.檢測步驟(全部在全自動生化分析儀中完成)
(a)取120μ L試劑I和15 μ L血清樣本混勻；
(b)將混勻后的溶液在37°C溫育5分鐘；
(c)再添加60μ L試劑2，反應30秒后，讀取吸光度Al，再孵育270秒后，讀取吸光度
Α2 ；
(d)計算ΛA= Α2 - Al。4.通過吸光度變化值計算出胰島素的濃度。本發(fā)明具有的優(yōu)點
該試劑盒結果準確性強、試劑穩(wěn)定性好、使用方便、便于大規(guī)模推廣。所需檢測儀器(生化分析儀)在各大醫(yī)院和檢測中心普遍使用。
權利要求
1.一種胰島素檢測試劑盒，其組成為試劑R1、試劑R2，其中 a、試劑Rl 包括200-220mmol/L Tris 緩沖液、5-10 mmol/L 聚乙二醇、1_5 mmol/L 疊氮鈉、l-5mmol/L乙二胺四乙酸鈉、l_5mmol/L牛血清白蛋白； b、試劑R2200-220mmol/L Tris緩沖液、結合有胰島素單克隆抗體的乳膠粒子、l_5mmol/L 吐溫 _20、0. 5-3 mmol/L 疊氣納、l_5mmol/L 乙二胺四乙酸納、l-5mmol/L 牛血清白蛋白。
2.權利要求I的試劑盒，其特征在于試劑R2中的胰島素單克隆抗體的乳膠粒子的制備方法為10. 5mg/ml的胰島素單克隆抗體與10%的乳膠顆粒(直徑50_100nm),加入到200-220mmol/L Tris緩沖液中，震蕩反應4小時，離心去上清，再用200-220mmol/L Tris緩沖液稀釋至O. 5%，并加入O. 1-0. 3 mmol/L疊氮鈉。
3.上述試劑盒的制備和操作方法，主要步驟為 (a)按下列比例配制好試劑 試劑Rl Tris 緩沖液 200-220mmol/L 聚乙二醇5-10 mmol /I, 疊氮鈉1-5 mmol/L 乙二胺四乙酸鈉l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ; 試劑R2 Tris 緩沖液 200-220mmol/L 結合有胰島素單克隆抗體的乳膠粒子 3.5-5% (v/v) 吐溫-20l-5mmol/L 疊氮鈉0. 5-3 mmol/L 乙二胺四乙酸鈉l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ; (b)將試劑與待測樣本按一定比例混合，使其完全反應； (c)用半/全自動生化分析儀測定吸光度變化值； Cd)根據吸光度變化值計算出樣本中胰島素的濃度。
4.權利要求3的方法，其特征在于，被測樣品與試劑比例應控制在I: 10到I :15之間。
5.權利要求3的方法，其特征在于，反應溫度為37(±1) °C。
6.權利要求3的方法，其特征在于，反應時間為10分鐘。
7.權利要求3的方法，其特征在于，用半/全自動生化分析儀檢測的波長為600nm。
全文摘要
一種胰島素的檢測試劑盒。試劑盒盒體內包括試劑R1緩沖液、聚乙二醇、疊氮鈉、乙二胺四乙酸鈉、牛血清白蛋白；試劑R2緩沖液、結合有胰島素單克隆抗體的乳膠粒子、吐溫-20、疊氮鈉、乙二胺四乙酸鈉、牛血清白蛋白。通過將樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發(fā)生一系列反應，再將反應物置于半/全自動生化分析儀下，檢測主波長600nm處吸光度變化的速度，從而測算出胰島素的濃度大小。本試劑盒具有準確、穩(wěn)定、方便的優(yōu)點。
文檔編號G01N33/577GK102818902SQ20121029164
公開日2012年12月12日 申請日期2012年8月16日 優(yōu)先權日2012年8月16日
發(fā)明者謝兵 申請人:北京恩濟和生物科技有限公司