專利名稱：包括含有胰島素口服固體制劑的試劑盒的制作方法
包括含有胰島素口服固體制劑的試劑盒本發(fā)明專利申請是國際申請?zhí)枮镻CT/US2004/000273 ，國際申請日為2004 年1月6日，進入中國國家階段的申請?zhí)枮?00480005261.7，名稱為"夜間口服胰 島素療法"的發(fā)明專利申請的分案申請。發(fā)明領域本發(fā)明涉及口服輸遞治療有效劑量的胰島素入血，作為糖尿病治療的治療方 案的一部分。本發(fā)明進一步涉及口服輸遞劑和胰島素的組合物，促進治療有效劑 量胰島素的轉(zhuǎn)運入血用于糖尿病的治療。本發(fā)明進一步涉及就寢時或就寢前不久 口服胰島素制劑和一種輸遞劑，用于糖尿病的治療。發(fā)明背景蛋白質(zhì)、多肽和其它生物分子("生物大分子"，即生物聚合物，例如蛋白 質(zhì)和多肽)在許多科學技術領域越來越多地被廣泛應用。例如，蛋白質(zhì)在藥物、 疫苗和獸醫(yī)產(chǎn)品領域中被用作活性劑。不幸的是，在需要活性劑的位置存在通道 的天然吸收屏障嚴重限制了藥物組合物中生物大分子作為活性劑的應用。這種天 然屏障包括皮膚、脂質(zhì)雙層、粘膜、惡劣的pH條件和消化酶。成功地口服輸遞生物大分子有許多障礙。例如，就性質(zhì)而言，生物大分子是 大的且是兩親的。更重要的是，大多生物大分子的活性構(gòu)象可對許多環(huán)境因素敏 感，如溫度、氧化劑、pH、冷凍、震蕩以及剪切力。在設計含有生物大分子的口 服輸遞系統(tǒng)作為藥物開發(fā)的活性劑時，必須考慮這些復雜的結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性因素。 此外， 一般來說，在醫(yī)學和治療的應用中，當生物大分子施用給患者并預期發(fā)揮 其天然生物功能時，輸遞載體可用來促進胃腸道的吸收。這些輸遞載體必須能夠 釋放活性分子，釋放速率與特定病人個體或疾病過程的需要一致。一種特殊的生物大分子激素胰島素，有助于通過由胰腺釋放，更具體地說， 由主要類型的胰腺組織(胰島)(3細胞釋放，正常調(diào)節(jié)血糖水平；這樣葡萄糖又可用 作能量來源。在正常受試者中，胰島素分泌是一個可調(diào)控的過程，斷食或喂入期 間提供穩(wěn)定的血糖濃度。在正常健康人體，胰島素從胰腺分泌入門靜脈，由靜脈再進入肝。肝利用和/或代謝由門循環(huán)得到的大部分的胰島素。在健康人體，血糖濃度是胰島素分泌的主要刺激物。葡萄糖轉(zhuǎn)運進入胰卩細 胞，然后被葡糖激酶磷酸化。葡糖激酶的表達主要限于與葡萄糖代謝調(diào)節(jié)有關的 細胞和組織，如肝和胰卩細胞。糖類經(jīng)歷磷酸化和后續(xù)的糖酵解的能力與它們刺 激胰島素釋放的能力密切相關。值得注意的是，并非所有的組織都依賴于胰島素 攝取葡萄糖。例如，腦、腎和紅細胞是胰島素非依賴型組織，而肝、脂肪和肌肉 是胰島素依賴型組織。糖尿病是一種疾病狀態(tài)，其中胰腺在能控制葡萄糖濃度的水平不釋放胰島素 和/或肌肉、脂肪及肝細胞由于胰島素耐受而對正常的胰島素水平反應差。糖尿 病分為兩種類型l型和2型。大約5-10%診斷的糖尿病屬于1型糖尿病，大約90-95%屬于2型糖尿病。l型糖尿病是胰島素依賴型糖尿病，通常在年輕人中首先出現(xiàn)。在l型糖尿病 中，胰腺的胰島細胞主要由于自身免疫破壞而停止產(chǎn)生胰島素，病人必須自己注 射缺少的激素。2型糖尿病是非胰島素依賴型糖尿病，可能是由于胰島素耐受(或降低的胰島 素敏感性)和在后期階段胰島素分泌不足的聯(lián)合作用引起的。在西方世界，這是 最常見的糖尿病類型。全世界各國，包括美國，接近8%的成年人口患有2型糖尿 病。約30%的患者由于繼發(fā)性胰腺耗盡和最終的胰島素產(chǎn)生的停止，在壽命的某 些時刻需要注射外源性胰島素。胰島素耐受(或降低的胰島素敏感性)也在人群中流行，尤其在超重的個體、 在糖尿病危險個體(例如前驅(qū)糖尿病，血糖水平高于正常但還沒有高到足以被診 斷為糖尿病)和在患有2型糖尿病的個體(產(chǎn)生足夠的胰島素但組織減少對胰島素 作用反應的能力)。為了彌補和克服胰島素耐受，最初胰P細胞增加胰島素的產(chǎn)生 以使胰島素耐受的個體具有高血漿胰島素水平。然而，對這些細胞高要求一段時 間后，細胞開始代謝失調(diào)并耗盡，在糖尿病后期胰島素分泌減少。到病人被診斷 為2型糖尿病時，大約50%的(3細胞由于增加對胰島素產(chǎn)生的需求而死亡。在美國糖尿病是第六主要死亡原因，1997年導致超過193000人死亡。然而， 這是低估的，因為糖尿病的并發(fā)癥是造成發(fā)病的主要原因。糖尿病與大量的發(fā)病 率和死亡率相關，以心血管疾病、中風、消化疾病、感染、代謝并發(fā)癥、眼病癥、 神經(jīng)病、腎病及腎衰竭、外周血管疾病、潰瘍和截肢、口腔并發(fā)癥和抑郁的形式。 因此，基本上由糖尿病造成的許多死亡常最終被歸咎于其他原因?；继悄虿∷劳龅闹饕蚴情L期的微血管和大血管疾病。心血管疾病造成多達80%的2型糖尿病患者死亡；糖尿病患者有2-4倍冠狀動脈疾病的風險增加，相當于幸免于中風和心肌梗死的病人。換句話說，心臟病、高血壓、心臟病發(fā)作和中風在成人糖尿病患者中的發(fā)生比成人非糖尿病患者多2-4倍。這種冠狀動脈疾 病增加的風險結(jié)合高血壓心肌癥的增加本身表明充血性心力衰竭的風險增加。這 些血管并發(fā)癥導致神經(jīng)病、視網(wǎng)膜病和外周血管病。糖尿病性視網(wǎng)膜病(眼后部襯的衰竭)是20-74歲成人失明的主要原因。糖尿病 性腎病，例如腎病(腎臟不能適當過濾內(nèi)毒素)，占末期腎病(腎衰竭)的所有新病 例的40%。而且，在美國，糖尿病也是截肢的主要原因。糖尿病在懷孕期造成特 殊問題，患糖尿病婦女的兒童中先天畸形的比率高5倍。胰島素耐受在2型糖尿病的高血糖癥的發(fā)病機制中起著重要作用，最終誘導 糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生。而且，糖尿病耐受在大血管疾病、心血管疾病和微血管疾 病的發(fā)病機制中表明上也起著作用。血糖控制差導致這些并發(fā)癥的高發(fā)生率，采取嚴密的血糖控制對糖尿病慢性 并發(fā)癥的有益效果在臨床實踐中廣泛接受。然而，最近才牢固地確定，升高的血 糖水平是造成糖尿病長期并發(fā)癥的直接原因。"糖尿病控制和并發(fā)癥試驗"和"英 國糖尿病前瞻性研究"表明盡可能地控制血糖接近正常水平能防止和延緩糖尿病 性視網(wǎng)膜病、腎病、神經(jīng)病和微血管疾病的發(fā)展。在l型糖尿病中，胰島素療法是必需的，其旨在用外源性的胰島素供應代替 缺乏的內(nèi)源性胰島素。在2型糖尿病中，治療方法包括口服抗糖尿病藥物(這些藥 物增加胰島素敏感性和/或胰島素分泌)和胰島素(如果和當口服藥物不起作用 時)。以有用的形式向不斷增加的糖尿病群體提供生物利用的未修飾人胰島素，對 于這一問題醫(yī)生和科學家花費了差不多100年。為了解決這種肽的穩(wěn)定性和生物 輸遞的問題，以作了許多嘗試。因為胰島素是一種肽藥物(分子量大約6000Da)， 它在胃腸道中不吸收，通常需要非胃腸給藥，例如皮下注射。因此，大多數(shù)糖尿 病患者常常要自己一天多次皮下注射胰島素。但是，一天多次注射胰島素的限制， 如不方便、病人接受性差、順應性和餐后胰島素可利用性與餐后需要相匹配的困 難，是胰島素療法一些較好知道的缺點。盡管研究證明嚴格控制血糖對糖尿病的慢性并發(fā)癥的有益效果，臨床醫(yī)師對 侵襲性胰島素療法沒有特別的興趣，尤其在疾病的早期階段，這在臨床實踐中廣泛地接受。取得嚴格控制血糖的不合適的挑戰(zhàn)部分是由于現(xiàn)有的皮下注射胰島素 的缺點和低血糖的憂患。除了如上面討論的一天多次注射的實際限制，通?？傻?到的皮下注射胰島素的缺點造成普遍的不適當?shù)难强刂疲@種不適當?shù)难强?制被認為與許多糖尿病的慢性并發(fā)癥復合病變有關。在與正常生理輸遞途徑不一致的注射部位(途徑)和方式施用胰島素可發(fā)生高 胰島素血癥(胰島素的血濃度升高)。胰島素以游離單體形式在血中循環(huán)，其分布 容積接近細胞外液體。正常健康人在斷食狀態(tài)下，胰島素在門靜脈血中的濃度是，例如大約2-4ng/mL，而全身(外周)胰島素濃度是，例如大約0.5ng/mL，轉(zhuǎn)變比例 為5: 1。在經(jīng)皮下注射接受胰島素的糖尿病患者中，比例轉(zhuǎn)變成月0.75: 1。這 樣，在這種糖尿病患者中，肝臟沒能得到必需的胰島素濃度以足夠控制血糖。全 身胰島素水平的升高可能導致增加葡萄糖攝取、糖原合成、糖酵解、脂肪酸合成、 皮質(zhì)醇合成和三酰甘油合成，導致較大利用葡萄糖的關鍵基因的表達。在胰島素輸遞領域，病人一生中每天需要多次重復施用胰島素，所以希望能 夠產(chǎn)生胰島素組合物，這種組合物既不改變生理臨床活性又不需要注射?；诎?全性和方便的考慮，口服給予胰島素是特別理想的給藥途徑，因為它能最小化或 消除經(jīng)常反復皮下注射所造成的不適。通過口服給予胰島素在門靜脈和全身循環(huán) 中模擬正常胰島素水平，是本領域中一個顯著沒有得到的目標?？诜o予胰島素可具有除方便、接受性和順應性以外的優(yōu)點。胃腸道中吸收 的胰島素與胰腺分泌胰島素的生理學極為相似，因為二者都釋放入門靜脈并在輸 遞入外周循環(huán)之前直接輸遞入肝臟。吸收入門靜脈循環(huán)可維持調(diào)節(jié)胰島素分泌的 外周-門靜脈胰島素梯度。在第一次通過肝臟時，大約60%的胰島素被保留并代謝， 因而降低了外周高胰島素血癥的發(fā)生率， 一種與糖尿病并發(fā)癥有聯(lián)系的因素。一 個并非罕見的、嚴重的、胰島素治療和其它口服抗糖尿病藥物的并發(fā)癥是低血糖 癥。然而，胰島素例證了本領域中設計生物大分子的有效口服給藥系統(tǒng)所面臨的 問題。胰島素分子大小和對酶降解的敏感性大概阻礙了其在胃腸道中的吸收。胰 島素的物化性質(zhì)及其對酶消化的敏感性阻礙了市售可行的口服或另外的輸遞系 統(tǒng)的設計。例如，Emisphere技術有限公司開發(fā)了可口服給藥的胰島素組合物，例如， 以足夠的濃度從胃腸道吸收，這樣口服給藥后胰島素是生物可利用和生物活性 的，并提供足夠的吸收和藥動學/藥效學性質(zhì)以達到所需的療效，例如引起血糖的降低(如在美國專利申請文件號10/237，138,60/346,746,60/347,312， 60/368,617, 60/374,979， 60/389,364, 60/438,195， 60/438,451, 60/438,444, 60/452,660和60/488,465以及國際專利申請出版物號WO03/057170 ， WO03/057650和WO02/02509中公開)，全部授予Emisphere技術有限公司，均引入本文作為參考。Emisphere技術有限公司的新藥輸遞技術是以設計并合成低分子量化合物稱 為"輸遞劑"為基礎的。輸遞劑以優(yōu)選實施方式4-CNAB(N-[4-(4-氯-2-羥苯甲酰 基)氨基]丁酸鈉)；當用胰島素配制時，能增加胰島素的胃腸道吸收。認為此方法 的機制是4-CNAB非共價地與胰島素相互作用，產(chǎn)生更利于吸收的物理化學性質(zhì)。 胰島素一旦通過胃腸壁，快速與4-CNAB解離并回復到其正常的藥理活性狀態(tài)。 4-CNAB不具有任何固有的藥理活性，僅僅是通過促進胰島素轉(zhuǎn)運穿過胃腸壁從 而增加胰島素的口服生物利用度。胰島素的藥理學是所需的療效且已很好鑒定。而傳統(tǒng)皮下胰島素給藥將胰島素進入來自天然部位(門靜脈)的點轉(zhuǎn)到全身性 循環(huán)。由Emisphere技術有限公司開發(fā)的口服給藥方式模擬自然生理學，即在門 靜脈中的未修飾的胰島素的濃度與全身性循環(huán)中的胰島素濃度的比率接近正常 的生理比率，例如從約2: l到約6: 1。這種給藥途徑的效果是兩倍。首先，直接 靶向肝臟可更好地控制血糖。許多研究表明，以低于外周施用所用的輸注速率門 靜脈內(nèi)輸遞胰島素可以類似的控制血糖。因為胰島素在進入全身性循環(huán)之前將經(jīng) 歷基本上首過代謝(50%)，獲得較低血漿濃度和總暴露。這又可減輕胰島素對 非靶組織的任何有害作用。Emisphere技術有限公司通過對小鼠和猴的非臨床規(guī)劃評價了胰島素 /4-CNAB膠囊，臨床規(guī)劃包括藥理篩選、藥動學及代謝分布和毒性評估。這些對 小鼠和猴的研究表明4-CNAB口服給藥后訊速吸收。Emisphere技術有限公司在臨床研究(包括安全性、藥動學、藥效學以及食 物對胰島素吸收的影響)中評估胰島素/4-CNAB膠囊。在這些研究中，糖尿病患 者和健康受試者口服4-CNAB后，表明增加了胰島素的胃腸吸收?？诜o予胰島 素/4-CNAB膠囊，導致胰島素和4-CNAB的迅速吸收，與4-CNAB結(jié)合的口服吸 收的胰島素是藥理活性的，如健康和糖尿病受試者的血糖降低、餐后糖尿病患者 中的葡萄糖偏移的減弱。這些研究提示口服胰島素/4-CNAB制劑耐受性好，且健 康受試者和糖尿病患者中的血糖降低。在正常用對膳食的葡萄糖穩(wěn)態(tài)有眾所周知的效果。第一相胰島素分泌的損失是2型糖尿 病患者在疾病早期中的特征，在前驅(qū)糖尿病狀態(tài)(即糖耐量減低的個體)中也發(fā) 現(xiàn)。在沒有第一相胰島素分泌的情況下，胰高血糖素對糖異生的刺激作用沒有被 抑制，且有助于膳食的高血糖癥的發(fā)生。在基本狀態(tài)或膳食狀態(tài)，血漿葡萄糖濃 度與肝葡萄糖輸出相關。因此，在進食時恢復第一相胰島素分泌應抑制膳食的肝 葡萄糖輸出并接著改善血糖分布。為了證實這種假設，已采取幾種方法。然而，治療方案或者對長期治療太危 險(例如靜脈注射正規(guī)人胰島素)，或者藥理學上不合適(快速作用的胰島素類似 物)。而且，對于有長期糖尿病病史的患者來說，由于他們已經(jīng)喪失了大部分或 全部的內(nèi)源性胰島素分泌能力，恢復第一相胰島素反應似乎是困難的。目前，推薦常規(guī)皮下注射的胰島素在進餐前30-45分鐘給藥。結(jié)果糖尿病患者和其他胰島素使用者必須忙于大量安排進餐及與進餐相關的胰島素施用。不幸 的是，在進餐和胰島素施用之間可能發(fā)生干擾事件，食物的攝入可影響預期的葡 萄糖偏移。而且，如果在不合適的時間(例如由于進食上升的葡萄糖水平已經(jīng)降 低后)施用的胰島素提供療效也有發(fā)生低血糖癥的可能。此外， 一些短效胰島素制劑，因為胰島素提供血糖降低作用的速度在施用胰 島素的時間和進食的時間之間，有助于將血糖降低到從亞臨床低血糖癥到更不良 作用的后果水平。希望提供一種口服胰島素治療早期和晚期糖尿病患者，且用于第一相胰島素 分泌受損的糖耐量減低的患者，治療可以在進餐時或進餐前不久口服施用，并具 有短的作用持續(xù)時間。發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供包含在就寢時或就寢前不久口服給藥的胰島素和輸遞 劑的藥物組合物。本發(fā)明的又一 目的是提供有效的口服胰島素藥物制劑，所述制劑是治療和有效的。本發(fā)明的目的是提供包含在就寢時或就寢前不久口服給藥的胰島素和輸遞 劑的組合物。本發(fā)明的目的是提供一種在就寢時或就寢前口服給藥的，由胰島素和輸遞劑的組合物。該輸遞劑促進治療有效劑量的胰島素轉(zhuǎn)運入血，用于治療糖尿病、治 療葡萄糖耐量減低、達到葡萄糖濃度穩(wěn)態(tài)的目的，治療早期糖尿病、治療晚期糖 尿病、和/或用于l型糖尿病患者的替代治療。本發(fā)明的又一目的是提供方法，用于哺乳動物中預防缺乏胰P細胞功能和防 止卩細胞死亡或功能不良，哺乳動物患有糖耐量減低或早期糖尿病。本發(fā)明的又一目的是提供方法，用于長期保護明顯產(chǎn)生糖尿病或胰島素依賴 性糖尿病的哺乳動物，或用于延緩哺乳動物中明顯發(fā)作或胰島素依賴性糖尿病， 哺乳動物患有糖耐量減低或早期糖尿病。與上述目的和其它一致，本發(fā)明部分地涉及一種治療患有糖尿病的哺乳動物 的方法，該方法包括就寢時或就寢前不久口服一個或多個以上所述和本說明的其 它部分所述的制劑單位劑量。哺乳動物包括但不限于嚙齒動物、水生哺乳動物、家畜(例如狗和貓)、農(nóng)畜 (例如羊、豬、牛和馬)和人。優(yōu)選地，哺乳動物是人。本發(fā)明更是部分地涉及一種治療方法，該方法用于哺乳動物中葡萄糖耐量減 低、早期糖尿病和晚期糖尿病的治療，和獲得葡萄糖穩(wěn)態(tài)，該方法包括在就寢時 或就寢前不久口服一個或多個本說明書所述的制劑的單位劑量。優(yōu)選地，口服胰 島素制劑在慢性基礎上施用給這種病人(例如至少約兩周)和病人可終身給藥。本發(fā)明也部分涉及一種治療方法，該方法用于治療糖尿病和降低與長期服用 胰島素有關的全身性高胰島素血癥的發(fā)生率，該方法包括糖尿病病人在就寢時或 就寢前不久口服一劑量胰島素和一種輸遞劑，其中輸遞劑促進胰島素的胃腸吸 收。這種促進胰島素吸收的作用能有效地降低和/或控制血糖，并且，相對于皮 下注射有效劑量的胰島素提供的全身平均胰島素濃度，降低了糖尿病患者的全身 平均胰島素濃度，以獲得糖尿病患者群體中相等的降低和/或控制。優(yōu)選地，在 慢性基礎上對這種病人施用口服胰島素制劑(例如至少約2周)，病人也可終身給 藥。本領域的一般技術人員都熟知皮下注射胰島素的病人獲得了胰島素濃度測定 的平均值。本發(fā)明更是部分地涉及一種方法，該方法用于預防哺乳動物中缺乏胰e細胞 功能，哺乳動物患有糖耐量減低或早期糖尿病，它包括在夜間(例如就寢時或就 寢前不久)口服治療有效劑量的含有胰島素(如本文所述)的藥物制劑。優(yōu)選地，在 慢性基礎上對這種病人施用口服胰島素制劑(例如至少約兩周)和病人可終身給 藥。本發(fā)明更是部分地涉及一種方法，該方法防止哺乳動物中的e細胞死亡或功能不良，哺乳動物患有糖耐量減低或早期糖尿病，它包括夜間口服治療有效劑量 的含有胰島素的藥物制劑。優(yōu)選地，在慢性基礎上(例如至少約兩周)就寢時或就 寢前不久給這種病人施用口服胰島素制劑。本發(fā)明涉及長期保護哺乳動物的方法，哺乳動物患有糖耐量減低或明顯產(chǎn)生 的早期糖尿病或胰島素依賴性糖尿病，它包括在夜間口服治療有效劑量的含有胰 島素的藥物制劑。優(yōu)選地，在慢性基礎上(例如至少約兩周)就寢時或就寢前不久 給這種病人施用口服胰島素制劑。本發(fā)明又涉及延緩哺乳動物中明顯發(fā)作或胰島素依賴性糖尿病的方法，哺乳 動物患有糖耐量減低或早期糖尿病，該方法包括在夜間口服治療有效劑量的含有 胰島素的藥物制劑。優(yōu)選地，在慢性基礎上(例如至少約兩周)就寢時或就寢前給 這種病人施用口服胰島素制劑。本發(fā)明又涉及一種口服治療有效劑量的非修飾的胰島素的方法，它包括約2-23mg的非修飾的胰島素與大約100-600mg的藥學上可接受的輸遞劑組合在一 起，該輸遞劑促進所述的胰島素的胃腸吸收。就寢時或就寢前不久，糖尿病病人 口服所述單位劑量以提供治療效果。在優(yōu)選的實施方案中，單位劑量的總重量約 為102-800mg。在某些實施方案中，方法包括以下步驟胰島素與所述的輸遞劑接觸，然后 糖尿病病人在就寢時或就寢前口服藥物組合物。另一方面，方法包括用這樣的方 式施用胰島素和輸遞劑，即胰島素和輸遞劑在體內(nèi)互相接觸(如在胃中)，這樣 輸遞劑可用來促進通過胃腸粘膜吸收胰島素和進入門靜脈(即正常生理途徑)。為了本發(fā)明的目的，短語"在夜間"或"在就寢時或就寢前不久"施用指長 時間睡眠、或相對的物理和/或精神不活動及禁食，(例如過夜)前少于約3小時，優(yōu)選少于約2小時，或更優(yōu)選少于約l小時施用。過夜一般指從晚上(p.m.)時間到 早晨(a.m.)時間，它可以指人獲得他/她必需的睡眠過程中睡眠-清醒循環(huán)中的任一 階段。為了本說明書的目的，給藥也應在一天的最后一餐后至少大約l小時，優(yōu) 選至少大約1.5小時，更優(yōu)選至少大約2小時，更加優(yōu)選至少大約2-3小時。與上述目的及其它一致，本發(fā)明部分地涉及一種含有非修飾的胰島素的口服 固體制劑，在就寢時或就寢前不久服用，在給藥后一小時內(nèi)取得最大限度地控制 糖尿病病人的餐后血糖濃度。與上述目的及其它一致，本發(fā)明部分地涉及一種含有非修飾的胰島素的劑量的口服固體制劑，在糖尿病患者中取得的血糖濃度的降低與病人中皮下注射胰島 素相差不大，同時與經(jīng)皮下注射獲得的外周血胰島素濃度相比，在急性、亞急性 和慢性狀態(tài)下提供了在外周血循環(huán)中較低(如20%或更大)總劑量的胰島素。本發(fā) 明還部分地涉及一種含有非修飾的胰島素的劑量的口服固體制劑，口服給藥后能 夠有效降低糖尿病病人的血糖濃度，且維持一個生理(門靜脈/外周)梯度，在某些實施方案中提供門靜脈胰島素濃度與外周血胰島素濃度之比約為2.5 : l至6: 1，優(yōu)選約為4 : l至5 : 1。本發(fā)明還部分地涉及一種含有非修飾的胰島素的劑量的口服制劑，口服后能夠降低糖尿病病人的血糖濃度。所述病人口服這種口服固體制劑后，在約0.25至 1.5小時的時間點提供胰島素Ux， 口服所述制劑2小時內(nèi)，所述劑量的胰島素使 血糖濃度降低至少約80%。在上述本發(fā)明口服制劑的優(yōu)選實施方案中，口服劑型是固體，例如明膠膠囊 或片劑。在某些優(yōu)選的實施方案中，制劑中非修飾的胰島素的劑量約為50U至 600U(即約為2至23mg)，優(yōu)選約為100U(3.8mg)至450U(15.3mg)，更優(yōu)選約為 200U(7.66mg)至350U(13.4mg)，和更加優(yōu)選約300U(11.5mg)，基于可接受的轉(zhuǎn)換 系數(shù)26.11U/mg。在某些優(yōu)選的實施方案中，口服本發(fā)明制劑后，約0.1至1.5小時，更優(yōu)選約 0.25至0.5小時提供胰島素tn^。在某些優(yōu)選的實施方案中，口服本組合物后，在 少于約100分鐘，優(yōu)選少于約45分鐘，更優(yōu)選少于約40分鐘，更加優(yōu)選約22分鐘 出現(xiàn)胰島素t,。在某些優(yōu)選的實施方案中，口服組合物后，約0.25至1.5小時，更優(yōu)選約0.75 至1.25小時提供最大限度控制葡萄糖漂移的tn^。在某些優(yōu)選的實施方案中，口 服本組合物后，少于約120分鐘，更優(yōu)選少于約80分鐘，更加優(yōu)選約45分鐘至60分鐘出現(xiàn)葡萄糖控制的tm^。在某些優(yōu)選的實施方案中，制劑在約30分鐘或更少時間內(nèi)開始輸遞胰島素進 入門靜脈(通過胃粘膜吸收)。在某些上述制劑實施方案中，在沒有輸遞劑的情況下，當口服提供所需效果 時，從胃腸道不足以吸收非修飾的胰島素的劑量。在某些優(yōu)選的實施方案中，在 缺少輸遞劑的情況下，當病人口服提供需要的療效時，不足以吸收胰島素的劑量， 但通過其它給藥途徑施用給所述病人時，上述劑量提供需要的療效。本發(fā)明的這種實施方案又涉及一種含有非修飾的胰島素的劑量和有效量的藥學上可接受的 輸遞劑一起的劑型，促進所述胰島素的吸收，這樣從糖尿病病人的胃腸道中吸收 治療有效劑量的所述胰島素的劑量。在某些優(yōu)選的實施方案中，藥物組合物包含約lmg至800mg的所述輸遞劑， 優(yōu)選約50至600mg，更優(yōu)選約100至400mg，最優(yōu)選約200mg。在某些優(yōu)選的實施 方案中，口服后，組合物提供輸遞劑血漿濃度峰值Cm^約為1000至150000ng/ml， t,約為0.25至1.5小時，更優(yōu)選約0.25至0.75小時，最優(yōu)選0.5小時。為了本說明的目的，優(yōu)選的輸遞劑通過化學命名鑒定為4-(4-氯-2-羥苯甲酰 基)氨基)丁酸。在某些優(yōu)選的實施方案中，輸遞劑是一種鈉鹽，優(yōu)選是單鈉鹽。 或者說，相同化合物通過其它的命名單鈉N-(4-氯水楊酸?；?4 -氨基丁酸鑒定或 通過縮略為"4-CNAB"。下面的術語將在整個申請文件中使用糖尿病人指患有一種糖尿病形式的哺乳動物。 IGT:指糖耐量減低。糖尿病除非另有特別說明，包括1型和2型糖尿病。輸遞劑指在口服輸遞治療劑中有效的載體化合物或載體分子，也可用"載 體"互換使用。治療有效劑量的胰島素指本發(fā)明制劑中包括的一定量的胰島素，此量在給 藥間隔期間，在禁食狀態(tài)或喂食狀態(tài)下都足以在糖尿病患者中達到臨床相關控制 人血糖濃度。有效劑量的輸遞劑指輸遞劑的量，此量促進從胃腸道吸收治療有效劑量的 藥物。有機溶劑指任何非水性來源的溶劑，包括液態(tài)聚合物和它們的混合物。適 合本發(fā)明的有機溶劑包括丙酮、甲醇、甲基異丁基酮、氯仿、l-丙醇、異丙醇、 2-丙醇、乙腈、l-丁醇、2-丁醇、乙醇、環(huán)己垸、二噁烷、乙酸乙酯、酰胺、二 氯乙垸、正己垸、異辛垸、二氯甲垸、叔丁醇、甲苯、四氯化碳或者它們的組合 物。肽指小到中等分子量的多肽，通常2個或多個氨基酸殘基，常常但并不一 定代表較大蛋白質(zhì)的片段。蛋白質(zhì)指含有碳、氫、氧、氮和通常硫的復雜高聚合物，且由肽鍵連接的 氨基酸鏈組成。本專利申請中的蛋白質(zhì)是指糖蛋白、抗體、非酶蛋白質(zhì)、酶、激素和蛋白質(zhì)的亞單位如肽。蛋白質(zhì)的分子量范圍包括1000道爾頓的肽至600-1000千道爾頓的糖蛋白。重建指組合物或在合適的緩沖液中的組合物或藥物組合物的溶解。 單位劑量形式指對人和動物受試者合適的物理離散單位，和本領域已知的 單獨包裝的單位劑量形式?？紤]到本發(fā)明的目的是，本發(fā)明包含治療有效劑量的 胰島素的制劑包括一個或多個單位劑量(例如片劑、膠囊、粉劑、半固體如凝膠 帽或薄膜、口服液體制劑、注射用安瓿或小瓶、載藥注射劑)，以達到治療效果。 進一步考慮到本發(fā)明的目的 一種優(yōu)選劑型的實施方式是口服劑型。非修飾的胰島素指以任何藥學上可接受的方式或從任何藥學上可接受的來源制備的胰島素，此胰島素與如美國專利號No.6,309,633所述的寡聚體不綴合， 禾口/或如美國專利號5,359,030、 5,438,040;和/或5,681,81 l所述的沒有經(jīng)受兩親修 飾的胰島素。以上專利全部引入本文作為參考。 術語"餐"意指標準餐、ADA和/或混合餐。術語"平均值"當先于藥動學值時(例如平均U，除非另有說明，表示藥 動學參數(shù)的數(shù)學平均值。術語"平均基線水平"是指測量、計算或用作比較基礎的某一值的水平，此 均值指超過受試者的統(tǒng)計學顯著數(shù)量的平均值(例如經(jīng)過單次臨床研究或多次臨 床研究的組合)。本文所用術語"Cmax"是指在給藥間隔內(nèi)觀察到的藥物的最高血漿濃度。本文所用術語"tmax"是指給藥后觀察到的C,的時間。本文所用術語"AUC"是指在整個樣品收集間隔，由梯形規(guī)則計算的血漿 藥物濃度-時間曲線下的平均面積。術語"多劑量"是根據(jù)組合物的給藥間隔，病人接受至少兩個劑量的藥物組 合物。術語"單劑量"是指病人接受單劑量的藥物組合物，且藥物血漿濃度未達到 穩(wěn)態(tài)。除非特別稱為"單劑量"或"穩(wěn)態(tài)"，本文所述的藥動學參數(shù)包括單劑量 和穩(wěn)態(tài)條件。本文所用術語"生物利用度"是指吸收或可用于體內(nèi)治療部位的藥物和試劑 的度或比(％)。用下面的公式計算<formula>formula see original document page 14</formula>本文所用術語"生物等效價"是指對體內(nèi)治療部位有效的藥物或試劑的度或 比(％)。用下面的公式計算相對生物等效價(%)= ^X^^扁如本文及所附權(quán)利要求所用，單數(shù)形式"a" 、 "an"和"the"，除非另有 說明，包括復數(shù)關系項。這樣，例如參照"一個分子"包括一個或多個這種分子， "一種試劑"包括一種或多種不同的試劑，參照"一個抗體"包括一個或多個不 同的抗體，參照"一種方法"包括參照本領域一般技術人員所知的相等步驟和方 法，它們可被修飾或取代用于本文所述的方法。除非另有限定，本文所用的所有科學技術術語與本發(fā)明所屬領域中一般技術 人員普遍了解的具有相同的意義。雖然在本發(fā)明的實踐或測試中，可以使用與本 文所述相似或相等的任何方法、組合物、試劑、細胞都可使用，本文描述了優(yōu)選 的方法和材料。本文提及的所有出版物，包括所有圖、圖表、反應式、圖解、圖 畫，用于描述和揭示相關引用的具體信息，均引入本文。提供上面所討論的出版物僅僅是提供在本申請的提交日期之前的公開內(nèi)容。 這里沒任何東西被認為允許本發(fā)明沒有資格借助在先發(fā)明先于這種公開之前。在 本說明中，所述優(yōu)選的實施方式和例子應被認為是范例，而不是對本發(fā)明的限制。附圖簡要說明圖l是與受試者自己的基線水平相比，每個受試者夜間服用胰島素和 4-CNAB后早晨收集的數(shù)據(jù)(血糖、胰島素和C-肽)的表。圖2是每個受試者在夜間服用胰島素和4-CNAB之前晚上收集的數(shù)據(jù)(胰島素 和C-肽)的表。圖3是顯示夜間服用胰島素和4-CNAB對血糖濃度影響的條線圖。圖4是顯示夜間服用胰島素和4-CNAB對血中C-肽濃度影響的條線圖。圖5是顯示夜間服用胰島素和4-CNAB對血中胰島素濃度影響的條線圖。發(fā)明詳述本發(fā)明進一步提供了一種方法，該方法用于治療動物、優(yōu)選是人的糖尿病、 糖耐量減低、早期糖尿病和晚期糖尿病，和一種取得葡萄糖穩(wěn)態(tài)的方法，它包括 在就寢時或就寢前不久給予一個或多個單位劑量的本說明所述的劑型，優(yōu)選在慢性基礎上。本發(fā)明進一步提供了一種用藥物組合物的口服劑型治療動物、優(yōu)選是人的方 法，所述組合物包括胰島素或其藥學上可接受的鹽和有效劑量的輸遞劑或可提供 胰島素口服吸收(例如生物利用)藥學上可接受的鹽，在慢性基礎上，所述動物、 優(yōu)選是人在就寢時或就寢前不久給予所述組合物。本發(fā)明進一步提供了一種方法，該方法用于治療糖尿病和/或降低與長期服 用胰島素有關的全身性胰島素血癥的發(fā)生率，它包括糖尿病病人在就寢時或就寢 前不久，優(yōu)選在慢性基礎上口服一劑量的胰島素和促進從胃腸道吸收胰島素劑量 的輸遞劑。本發(fā)明還涉及一種發(fā)法，該方法用于哺乳動物中預防缺乏e細胞功能，哺乳 動物患有糖耐量減低或早期糖尿病，它包括在就寢時或就寢前不久口服含有胰島 素(如上所述)有效劑量的藥物制劑，在慢性基礎上，例如至少約2周，或病人的終身給藥。本發(fā)明還涉及一種方法，該方法能防止患有糖耐量減低或早期糖尿病的哺乳 動物的卩細胞死亡或功能不良，它包括在就寢時或就寢前不久口服含有胰島素有 效劑量的藥物制劑，在慢性基礎上，例如至少約2周。本發(fā)明還涉及一種方法，該方法能長期保護患有糖耐量減低或早期糖尿病的 哺乳動物明顯發(fā)生糖尿病或胰島素依賴性糖尿病，它包括在就寢時或就寢前不久口服含有胰島素有效劑量的藥物制劑，在慢性基礎上，例如至少約2周。本發(fā)明還涉及一種方法，該方法能延緩哺乳動物中明顯發(fā)作或胰島素依賴性 糖尿病，患有糖耐量減低或早期糖尿病，它包括在就寢時或就寢前不久口服含有胰島素有效劑量的藥物制劑，在慢性基礎上，例如至少約2周。總的來說，本發(fā)明提供了一種服用胰島素和對服用胰島素有用的藥物組合物 的方法，這樣胰島素是生物可利用和生物有效的。輸遞劑能通過胃粘膜口服吸收 胰島素，促進胰島素的立刻吸收，(或者以同一劑型，或者與此同時)，或順序地(無 論哪種順序，只要輸遞劑和胰島素在同一時間、同一部位例如胃內(nèi)施用)。在口 服本發(fā)明的藥物組合物后，輸遞劑通過胃腸道的粘膜屏障，吸收進入血流，在那 里可以檢測受試者的血漿和/或血液。在血漿和/或血液中測量的血流中輸遞劑的 水平是劑量依賴性的。本發(fā)明一種優(yōu)選的藥物組合物包括本領域一般技術人員所理解的在合適的 藥物載體或賦形劑中的胰島素和輸遞劑的組合。本發(fā)明藥物組合物的劑型最好是固體劑型，例如明膠膠囊或片劑。根據(jù)本發(fā)明，糖尿病病人的門靜脈(非修飾)胰島素濃度與全身(非修飾)胰島 素濃度的比值接近于正常健康人中得到的比值。長期口服本發(fā)明的劑型，比皮下 注射等效劑量的胰島素，導致較高門靜脈胰島素濃度和較低全身胰島素濃度(即 提供類似控制的血糖水平)。由于口服本發(fā)明的胰島素出現(xiàn)的胰島素水平的瞬時 峰值不認為與血管疾病有關。如本文所用，"胰島素"指各種來源的胰島素。天然產(chǎn)生的胰島素和結(jié)構(gòu)相 似生物活性等效物(包括短效的胰島素類似物和長效類似物)都可以使用。發(fā)明中 使用的胰島素可以從天然來源，例如不同中的哺乳動物中分離得到。例如可以使 用提取自牛和豬胰腺的動物胰島素制劑。胰島素類似物、片段、模擬物或這些化 合物的聚乙二醇(PEG)修飾衍生物、衍生物和生物等效物在本發(fā)明中也可使用。本發(fā)明使用的胰島素可以化學合成獲得，使用蛋白質(zhì)化學技術例如肽合成或 使用分子生物技術在細菌和真核細胞中產(chǎn)生重組胰島素。胰島素的物理形式可包 括結(jié)晶和/或無定型固體形式。此外，也可使用溶解的胰島素。其它胰島素的合適形式，包括但不限于合成的胰島素，已在美國專利號Nos.4,421,685、 5,474,978 和5,534，488中公開，各專利的披露內(nèi)容全面引入本文作為參考。藥物組合物和本發(fā)明方法中使用的最佳胰島素是人重組胰島素，優(yōu)選具有反 荷離子、鋅、鈉、鈣和銨或它們的任何組合。人重組胰島素可用本領域技術人員 熟知的基因工程技術制備。人重組胰島素在細菌和真核細胞中產(chǎn)生。人重組胰島 素的功能性等效物在發(fā)明中也是有用的。人重組胰島素可獲得自各種商業(yè)來源。 例如，胰島素(鋅，人重組物)可從Calbiochem公司(SanDiego， CA)購買。另夕卜， 人重組物鋅-胰島素晶體USP質(zhì)量胰島素原衍生的(重組DNA來源)可從Eli Lilly 和Company(Indianapolis,IN)得至l」。所有這些形式的胰島素，包括胰島素類似物(包 括但不限于胰島素Lispro,胰島素Aspart，胰島素Glargine和胰島素Detemir)是用 于本說明書的目的，權(quán)利要求被認為由術語"胰島素"所包含。本發(fā)明還提供了 人口服胰島素的重組人鋅胰島素和作為藥物的輸遞劑的組合物。在本發(fā)明其它優(yōu)選的實施方式中，胰島素是一種修飾的胰島素，例如美國專 利號6,309,633所描述的與寡聚物綴合的胰島素和/或美國專利號 5,359， 030、 5,438， 040和5,681, 81 l所述的未經(jīng)兩親修飾的胰島素。這種綴合的(修 飾的)胰島素包摻入本發(fā)明口服制劑中，這種口服制劑也可以含有或不含有上述 任何類型的胰島素以及其它胰島素類似物。在這種實施方案中，口服制劑含有修飾的胰島素，有或沒有藥學上可接受的輸遞劑，該輸遞劑促進從胃腸道吸收的所 述胰島素?？诜┬妥詈煤兄委熡行Я康姆切揎椧葝u素(即藥理或生物有效量或達到 胰島素目的的有效量)。給予胰島素的劑量應最好是這種量，即口服后在正常健 康人受試者中可測量的和統(tǒng)計學顯著降低的血糖水平。然而，當組合物用于劑量單位形式(如片劑)中時，量可以小于藥理或生物 有效量，因為這種劑量單位形式可包含輸遞劑/生物或化學活性劑的組合物的多 樣性，可包含分開的藥理或生物有效量。然后可以以含有藥理、生物或化學活性 總計量的生物或藥理活性劑的累積單位施用總的有效量。本領域的技術人員可以測定胰島素的總量。胰島素的量是實現(xiàn)特定活性劑目 的的有效量。組合物的劑量是治療有效劑量，即藥理或生物有效量。然而，當組 合物以劑量單位的形式(例如膠囊、片劑、液體)使用時，量可以小于藥理或生物 有效量，因為劑量單位形式可包含輸遞劑/生物或化學活性劑組合物的多樣性或 可包含分開的藥理或生物有效量。然后可以以含有藥理、生物或化學活性總計的 生物或藥理活性劑的累積單位施用。然而，驚奇地發(fā)現(xiàn)，使用目前披露的輸遞劑能夠非常有效地輸遞胰島素。當 與所述輸遞劑組合給藥時，優(yōu)選的胰島素劑量約為50至600胰島素單位USP(約為2至23mg)，優(yōu)選約100U(3.8mg)至450U(15.3mg)，更優(yōu)選約200U(7.66mg)至 350U(13.4mg)，最優(yōu)選約300U(11.5mg)，基于可接受的轉(zhuǎn)換因數(shù)是26.11U/Img。進入血流的胰島素產(chǎn)生降低的血漿水平。因此，通過觀察口服組合物后對受 試者血糖的效果證實了胰島素的口服吸收。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明 的口服劑量能促進胰島素的口服輸遞，胰島素吸收入血流后，組合物口服后約20 至60分鐘，最大程度地降低了病人的血糖濃度。在本發(fā)明的另一實施方案中，藥 物組合物口服后約30至50分鐘，最大程度地降低了病人的血糖濃度。更具體的是， 藥物組合物口服后約40分鐘，最大程度地降低了病人的血糖濃度。進入胃腸道后通過胰島素吸收血流所產(chǎn)生的降低血糖的程度隨胰島素的劑 量而不同。在某些本發(fā)明的實施方案中，糖尿病患者口服給藥后l小時內(nèi)血糖濃 度降低最多，至少降低10%。在另一實施方案中，糖尿病患者口服給藥后l小時 內(nèi)血糖濃度降低最多，至少降低20%，或是至少降低30%。正常血糖水平一天內(nèi)有點不同并且與自最后一餐以后的時間有關。本發(fā)明的 一個目的是提供一種口服的胰島素組合物，這種組合物易于取得在整個24小時周期接近正常血糖水平。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，藥物組合物包括作為活性劑 的胰島素或胰島素類似物和有效量的輸遞劑，取得空腹血糖濃度約為90至110mg/dl。在另一優(yōu)選的實施方案中，藥物組合物包括作為活性劑的胰島素或胰 島素類似物和有效量的輸遞劑，以取得空腹血糖濃度約為95至105mg/dl，更優(yōu)選 空腹血糖濃度控制約為100mg/dl。進食后，血糖濃度隨著食物中碳水化合物消化與吸收入血流而上升。本發(fā)明 的胰島素口服組合物能夠防止和控制很高水平的血糖(達到的和持續(xù)的)。更具 體的是，本發(fā)明的組合物易于取得進食后的正常血糖水平，即就餐后。在本發(fā)明 優(yōu)選的實施方案中，藥物組合物包括作為活性劑的胰島素和有效量的輸遞劑，使 餐后血糖濃度約為130至170mg/dl。在本發(fā)明另優(yōu)選一實施方案中，藥物組合物 包括作為活性劑的胰島素和有效量的輸遞劑，使餐后血糖濃度約為140至 160mg/dl，更優(yōu)選空腹血糖濃度小于約160mg/dl。本發(fā)明提供口服給藥的藥物組合物，包括作為活性劑的胰島素或胰島素類似 物和有效量的輸遞劑，使餐前血糖濃度約為95至125mg/dl。在優(yōu)選的實施方案中， 本發(fā)明提供的口服藥物組合物包括作為活性劑的胰島素或胰島素類似物和有效 劑量的輸遞劑，使就餐前血糖濃度約為100至120mg/dl。本發(fā)明提供口服給藥的藥物組合物，包括作為活性劑的胰島素和有效量的輸 遞劑，使傍晚期間血糖濃度約為70至120mg/dl。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提 供的口服藥物組合物包括作為活性劑的胰島素或胰島素類似物和有效劑量的輸 遞劑，使早晨3點血糖濃度約為80至120mg/dl。在某些優(yōu)選的實施方案中，所述方法和藥物組合物提供如美國臨時專利號 60/346,746和60/347,312所述的藥動學參數(shù)，各專利的披露內(nèi)容引入本文作為參 考。對于需要胰島素治療的病人，需要能夠?qū)⒁葝u素輸遞入血流的輸遞劑的量隨 下列一種或幾種因素而變化特定輸遞劑的化學結(jié)構(gòu)、胰島素與輸遞劑相互作用 的性質(zhì)與程度、單位劑量的性質(zhì)(即固體、液體、片劑、膠囊、混懸劑)、胃腸道 中輸遞劑的濃度、受試者的進食狀態(tài)、受試者的飲食、受試者的健康以及輸遞劑 與胰島素的比值。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的口服劑型包含胰島素與輸遞劑的混合物(如 單鈉N-4(氯水楊?；?-4-氨基丁酸，4-CNAB)的混合物，由Emisphere技術有限 公司發(fā)現(xiàn)的一種新型化合物；或者分別含有胰島素和輸遞劑的制劑。在本發(fā)明進一步的實施方案中，這里所述的口服劑型是聯(lián)合其它療法的口服 劑型，用來治療糖尿病、糖耐量減低、或取得葡萄糖穩(wěn)態(tài)，所述其它療法包括例 如其它藥物如磺酰脲、雙胍、a-葡糖苷酶、通過不同途徑輸遞的胰島素(如非胃 腸道給藥的胰島素)和/或胰島素致敏劑。在本發(fā)明進一步的實施方案中，這里所述的口服劑型降低了低血糖癥的可能 性，主要因為兩個原因。第一，因為即使在高胰島素血癥下葡萄糖是不變的，不 能使肝臟高胰島素化。與外周組織不同，肝只是停止刺激胰腺生產(chǎn)內(nèi)源性胰島素， 肝不會隔離附加的葡萄糖。第二，胰島素的短峰(如所附的例子中所示)表明即使 胰島素達到外周組織水平，峰值也會急劇下降。通過觀察口服治療后C-肽濃度的降低，顯示了在服用本發(fā)明的藥物組合物治 療的病人中胰島素吸收的效果。例如，在本發(fā)明的一個實施方案中，藥物組合物 包括作為活性劑的胰島素和能夠促進胰島素口服輸遞的作為輸遞劑的化合物4-CNAB。 口服該組合物后約80至120分鐘，胰島素吸收入血流，治療病人的C-肽濃度降到最低。更具體地說，口服所述組合物后約90至110分鐘治療病人的(:-肽的濃度降到最低。服用本發(fā)明的藥物組合物的病人中，胰島素的吸收可以通過監(jiān)測治療后胰島 素的血漿水平來檢測?；钚詣┰谘髦羞_到峰值所花的時間(tmJ取決于以下許多 因素單位劑量的性質(zhì)(即固體、液體、片劑、膠囊、混懸劑)、胃腸道中活性劑 和輸遞劑的濃度、受試者的進食狀態(tài)、受試者的飲食、受試者的健康以及活性劑 與輸遞劑的比值。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，藥物組合物包括作為輸遞劑化合 物4-CNAB和作為活性劑的胰島素，該組合物口服后約0.1至1小時提供峰血漿胰 島素濃度。在另一實施方案中，所述組合物口服后約0.2至0.6小時提供峰血漿胰 島素濃度。在優(yōu)選的實施方案中，所述組合物口服后約0.3至0.4小時提供峰血漿 胰島素濃度。在另一實施方案中，所述組合物口服后約l小時內(nèi)提供峰血漿胰島 素濃度。在本發(fā)明某些優(yōu)選實施方案中，所述藥物組合物包括作為活性劑的胰島 素和促進胰島素口服吸收的輸遞劑化合物4-CNAB，胰島素吸收入血流后，受治 病人的血漿胰島素水平在口服后約20分鐘達到峰值，在約105分鐘有第二個峰值。在其它優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明所用輸遞劑有以下結(jié)構(gòu)其中，X是一個或多個氫、鹵素、羥基或Q-C3烷氧基；R是取代的或未取代C,-C3 亞垸基、取代的或未取代的C,-C3亞鏈烯基。在某些優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的輸遞劑優(yōu)選含有以下結(jié)構(gòu)其中，X是鹵素、R是取代的或未取代的C,-C3亞烷基、取代的或未取代的Q-C3亞鏈烯基。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，所述藥物組合物包括一種輸遞劑，其中X是氯 R是Q亞烷基。在另一優(yōu)選的實施方案中，所述藥物組合物包括化合物4-((4-氯，2-羥苯甲?；?氨基)丁酸作為口服胰島素的輸遞劑，優(yōu)選單鈉鹽。輸遞劑可以以羧酸或其鹽的形式。合適的鹽包括但不限于有機和無機鹽，例 如堿金屬鹽如鈉、鉀、鋰；堿土金屬鹽如鎂、鈣、或鋇；銨鹽；堿性氨基酸如賴 氨酸、精氨酸；有機胺如二甲胺或吡啶。優(yōu)選地，鹽是鈉鹽。鹽可以是單價或多 價鹽，如單鈉鹽和二鈉鹽。所述鹽也可以是溶劑化物，包括乙醇溶劑化物和水合 物。本發(fā)明中可使用的其它合適的輸遞劑包括在以下美國專利所述的輸遞劑 5,650,386、 5,773,647、 5,776,888、 5,804,688、 5,866,536、 5,876,710、 5,879, 681、 5， 939,381、 5,955,503、 5,965,121、 5,989,539、 5,990,166、 6,001,347、 6，051，561、 6,060，513、 6,090,958、 6,100,298、 5,766,633、 5,643,957、 5，863, 944、 6, 071,510和6,358， 504 ，各專利的公開內(nèi)容引入本文作為參考。其它合適 的輸遞劑還在以下國際出版物中描述WO 94/23767、 WO 95/11690、 WO 95/28920、 WO 95/28838、 WO 96/10396、 W096/09813、 WO 96/12473、 WO 96/12475、 WO 96/30036、 WO 96/33699、 WO 97/31938、 WO 97/36480、 WO98/25589、 WO 98/34632、 WO 98/49135、 WO 98/25589、 WO 99/16427、 WO 00/47188、 WO 00/07979、 WO 00/59863、 WO 00/06534、 WO 00/40203、 WO 00/46182、 WO 00/48589、 WO 00/50386、 WO 00/59480、 WO01/34114、 WO01/21073、 WO01/41985、 WO01/32130、 WO01/32596、 WO01/44199、 WO01/51454、 WO01/25704、 WO01/25679、 WO01/70219、 WO01/92206、 WO 02/02509、 WO 02/15959、 WO 02/16309、 WO 02/070438、 WO 02/02509、 WO 02/20466、 W002/100338、 WO 02/19969和WO 03/026582以及國際專利申請?zhí)?PCT/US02/06610、 PCT/US02/06295、禾口PCT/US02/36552中描述。各專利的公 開內(nèi)容引入本文作為參考?？捎帽绢I域已知方法制備本發(fā)明輸遞劑的鹽類化合物。例如，將輸遞劑化合 物溶解在乙醇中并加入含水氫氧化鈉可制備鈉鹽。本文所述的化合物可以來自氨基酸，本領域技術人員可以根據(jù)已公開的國際 出版物(WO 96/30036、 WO 97/36480、 WO 98/34632和WO 00/07979),以及美 國專利(5,643， 957和5,650, 386)中描述的方法從氨基酸制備，各專利的內(nèi)容引 入本文作為參考。例如單個氨基酸與合適的酰化劑或氨胺改性劑反應，該試劑與 氨基酸存在的游離氨基反應形成酰胺可制備所述化合物。本領域技術人員也可以 使用保護基團以避免不需要的副反應。所述輸遞劑也可以由國際出版物WO 02/02509和WO 03/057650中描述的 方法制備，出版物的公開內(nèi)容引入本文作為參考。可以根據(jù)國際出版物WO 00/46182的方法，以合適的水楊酰胺的垸基化也可制備輸遞劑，出版物的公開 內(nèi)容引入本文作為參考。水楊酰胺可由水楊酸，通過硫酸和氨反應的酯化制備。此外，可使用包含一種或多種所述化合物的聚氨基酸和肽。氨基酸是具有至 少一個游離胺基的任何羧酸，包括天然產(chǎn)生的和合成的氨基酸。聚氨基酸是肽(其 是以肽鍵連接的兩個或多個氨基酸)或是由其它基團形成的鍵連接的兩個或多個 氨基酸(如酯鍵合或酐鍵合)。肽的長度可不相同，從具有兩個氨基酸的雙肽，到 具有幾百個氨基酸的多肽。輸遞劑化合物可以通過重結(jié)晶或在一個或多個固相色譜支持物上分級分離 純化，單獨或一前一后地連接。合適的重結(jié)晶溶劑系統(tǒng)包括但不限于乙醇、水、 庚烷、醋酸、乙腈、甲醇和四氫呋喃或它們的混合物。分級分離在合適的色譜支 持物如鋁，使用甲醇/正丙醇混合液作為流動相來進行；采用三氟乙酸/乙腈混合 液作為流動相的反相色譜；和采用水或合適的緩沖液作為流動相的離子交換色譜。當采用離子交換色譜時，優(yōu)選使用0-500mM的氯化鈉梯度?？诜景l(fā)明的藥物組合物后，輸遞劑通過胃腸道的粘膜屏障，吸收入血流， 在受試者的血漿中可以檢測到輸遞劑。如血槳中檢測到的血流中的輸遞劑的濃度 是劑量依賴的。立刻給予(以同一劑型或與此是同時)，或順序地(無論哪種順序只 要輸遞劑和藥物在同一定時間、同一部位如胃內(nèi)使用)，輸遞劑能促進藥物(活性 劑)的吸收。在本發(fā)明某些優(yōu)選的實施方案中，輸遞劑口服后峰血槳濃度(Cmax)優(yōu)選約 為10至250000ng/ml， 口服后優(yōu)選約IOO至125000ng/ml， 口服后優(yōu)選約1000至 50000ng/ml。優(yōu)選地，本發(fā)明的輸遞劑口服后峰血漿濃度約為5000至15000ng/ml。輸遞劑在血流中達到峰值所花的時間(tmax)取決于以下許多因素單位劑 量的性質(zhì)(即固體、液體、片劑、膠囊、混懸劑)，胃腸道中輸遞劑的濃度，受 試者的進食狀態(tài)，受試者的飲食，受試者的健康以及輸遞劑與活性劑的比值。本發(fā)明的輸遞劑是以即釋劑型口服時，訊速從胃腸道吸收，口服后約0.1至8小時內(nèi) 優(yōu)選提供峰血漿濃度，優(yōu)選口服后約0.1至3小時。在優(yōu)選的實施方案中，輸遞劑在口服后約0.3至1.5小時出現(xiàn)tmax。在某些優(yōu)選的實施方案中，優(yōu)選輸遞劑在約在口服后約2小時內(nèi)獲得tm^最優(yōu)選在口服后約l小時內(nèi)。本發(fā)明輸遞劑的量是輸遞有效量，它可以由本領域技術人員已知的方法來確 定。對于需要活性劑療效的病人，需足夠?qū)⒒钚詣┹斶f入血流的輸遞劑的量隨以下一種或幾種因素而變化活性劑的化學性質(zhì)，特定輸遞劑的化學結(jié)構(gòu)，活性劑與輸遞劑相互作用的性質(zhì)和程度，單位劑量的性質(zhì)如固體、液體、片劑、膠囊、 混懸劑，輸遞劑在胃腸道中的濃度，受試者的進食狀態(tài)，受試者的飲食，受試者 的健康以及輸遞劑與活性劑的比值。在本發(fā)明某些優(yōu)選的實施方案中，藥物組合物中輸遞劑的量最好從約lmg至2000mg，更優(yōu)選從約lmg至800mg，更優(yōu)選從約 50mg至700mg，甚至更優(yōu)選約70mg至700mg，最優(yōu)選100mg至600mg。輸遞劑優(yōu)選4-CNAB。因為輸遞特定活性劑所需的輸遞劑的量可不同，且產(chǎn) 生理想療效所需的活性劑的量也可不同，所以，活性劑與輸遞劑的比值對于不同 的活性成分/輸遞劑組合可不同。在本發(fā)明某些優(yōu)選的實施方案中，口服藥物組 合物包括作為活性劑胰島素和輸遞劑化合物4-CNAB，藥物組合物中包括的輸遞 劑的量約為100mg至600mg。在本發(fā)明某些優(yōu)選的實施方案中，藥物組合物包括作為活性劑的胰島素和輸遞劑是4-CNAB的單鈉鹽，胰島素(U)與輸遞劑(mg)的比值從lO : 1(U/mg)至 l:10(U/mg)，優(yōu)選胰島素(U)與輸遞劑(mg)的比值從5 : 1(U/mg)至0.5 : 1(U/mg)。單次給藥胰島素的劑量最好從約5至1000U，優(yōu)選從約50至400U，更優(yōu)選從 約150至400U，最優(yōu)選從約150至300U。胰島素與輸遞劑的最佳比值隨輸遞劑而不同。胰島素與輸遞劑的最佳比值在 本領域技術人員的知識范圍內(nèi)。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，其中藥物組合物包括作為輸遞劑的化合物 4-CNAB和作為活性劑的胰島素，該組合物口服后在約0.1至3小時內(nèi)提供峰血槳 輸遞劑濃度。在某些優(yōu)選的實施方案中，藥物組合物包括作為輸遞劑的化合物 4-CNAB和作為活性劑的胰島素，達到的輸遞劑的峰血漿濃度約為8000至 37000ng/ml。4-CNAB促進胰島素胃腸吸收的機制尚未完全闡明。當前的工作假設是 4-CNAB與胰島素非共價地相互作用，產(chǎn)生更有利于吸收的物理化學性質(zhì)。這種 工作假設僅僅是提供解釋的目的而不打算以任何方式限制本發(fā)明或所附的權(quán)利要求。在以前的專利申請中，例如那些已引入本文作為參考的以上列舉的專利申 請，Emisphere技術有限公司公開了許多輸遞劑的結(jié)構(gòu)，它們的吸收效力和輸遞 效力的比較，優(yōu)選的輸遞劑4-CNAB的制備，用于人硏究的制劑以及有關包括輸 遞劑4-CNAB的以前非臨床和臨床研究的數(shù)據(jù)。輸遞劑可以在給藥前，以干粉或濕粒形式與非修飾胰島素一起混合直接使 用。可向這種混合物中加入其它藥學上可接受的賦形劑?；旌衔锶缓笾瞥善瑒┗?放入含有單位劑量活性劑和輸遞劑的凝膠膠囊。輸遞劑/胰島素混合物也可以制成口服溶液或混懸劑。在某些優(yōu)選的實施方案中，輸遞劑和胰島素并不需要在給 藥前一起混合，口服所述不含有本發(fā)明輸遞劑的單位劑量的胰島素(有或沒有藥 學上可接受的賦形劑)，之前、之后或同時分別口服含胰島素的所述輸遞劑(有或 沒有藥學上可接受的賦形劑)。在某些優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的口服劑型是固體。干粉形式的非修飾胰 島素是穩(wěn)定的，在某些優(yōu)選的實施方案中，僅僅混合所需比例的遞劑。然后，干 粉混合物填充入明膠膠囊，有或沒有任選的藥學上可接受的賦形劑。另外，干粉 形式的非修飾胰島素也可與輸遞劑及任選的藥學上可接受的賦形劑一起混合，根 據(jù)本領域一般技術人員已知的標準壓片步驟將混合物制成片劑。本發(fā)明的劑型可以通過在一種溶液或各個溶液中溶解胰島素和輸遞劑而產(chǎn) 生。溶劑最好是水溶液，但是當必需溶解輸遞劑時，有機溶劑或水性有機混合溶 劑也可使用。如果使用兩種溶液，各自需要提供組合胰島素或輸遞劑的正確量的 比例，并通過凍干或相等方法干燥所得的溶液。在本發(fā)明一個實施方案中，口服 劑型在口服前可以干燥和再水合。給藥混合物可以通過，例如將輸遞劑的水溶液與胰島素的水溶液給藥前混合 而制得。另外，輸遞劑和胰島素可以在生產(chǎn)過程中混合。所述溶液優(yōu)選含有添加 劑如磷酸緩沖鹽、擰檬酸、醋酸、明膠和阿拉伯膠。輸遞劑溶液中可以摻入穩(wěn)定的添加劑。對于一些藥物，這些添加劑的存在促 進溶液中藥劑的穩(wěn)定性和可分散性?？墒褂梅€(wěn)定添加劑的濃度約為0.1至5%(重量 /體積)，優(yōu)選約0.5%(重量/體積)。合適的穩(wěn)定添加劑的離子包括但不限于阿拉伯 膠、明膠、甲基纖維素、聚乙二醇、羧酸及其鹽和聚賴氨酸。優(yōu)選的穩(wěn)定添加劑 劑是阿拉伯膠、明膠和甲基纖維素。本發(fā)明組合物中輸遞劑的量是輸遞有效量，可用本領域一般技術人員已知的 方法來測定任一特定輸遞劑/活性劑組合物。本發(fā)明的口服劑型可包括本領域技術人員所知的用作藥學上可接受的輔料的附加材料，這種口服劑型含有胰島素與輸遞劑如4-CNAB的混合物、或分別含 有胰島素和輸遞劑。任何輔料或成分，包括藥學上可接受的成分和輔料。這種藥 學上可接受的輔料包括，例如酸化劑(醋酸、冰醋酸、檸檬酸、延胡索酸、鹽酸、 稀鹽酸、蘋果酸、硝酸、磷酸、稀磷酸、硫酸、酒石酸)；氣霧推進劑(丁垸、二氯二氟甲垸、二氯四氟乙垸、異丁垸、丙垸、三氯一氟甲垸)；排氣(二氧化碳、氮氣)；酒精變性劑(地那銨苯甲酸鹽、甲基異丁基酮、蔗糖辛乙酸鹽)；堿化劑(濃 氨溶液、碳酸銨、二乙醇胺、二異丙醇胺、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、硼酸鈉、碳酸 鈉、氫氧化鈉、特羅拉明)；防結(jié)塊劑(見助流劑)；去泡劑(二甲聚硅氧垸、二甲 基硅油)；抗微生物防腐劑(苯扎氯銨、苯扎氯銨溶液、氯化芐氧乙銨、苯甲酸、 苯甲醇、對羥基苯甲酸丁酯、十六烷基氯化吡啶鎗、氯代丁醇、氯甲酚、甲酚、 脫氫醋酸、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸甲酯鈉、苯酚、 苯乙醇、醋酸苯汞、硝酸苯汞、苯甲酸鉀、山梨酸鉀、對羥基苯甲酸丙酯、對 羥基苯甲酸丙酯鈉、苯甲酸鈉、脫水醋酸鈉、丙酸鈉、山梨酸、硫柳汞、麝香草 酚)；抗氧化劑(抗壞血酸、菖蒲基棕櫚酸鹽、丁基化羥基茴香醚、丁基化羥基甲 苯、次磷酸、單硫甘油、榕酸丙酯、甲醛合次硫酸氨鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、二氧化硫、生育酚、生育酚賦形劑)；緩沖劑(醋酸、碳酸銨、磷酸銨、硼酸、 檸檬酸、乳酸、磷酸、檸檬酸鉀、偏磷酸鉀、磷酸氫鉀、醋酸鈉、檸檬酸鈉、乳 酸鈉溶液、二堿基磷酸、磷酸氫鈉)；膠囊潤滑劑(見片劑和膠囊潤滑劑)；鰲合劑 (二乙胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸及其鹽、乙二胺四乙酸)；包衣劑(羧甲基纖維 素鈉、乙酸纖維素、鄰苯二甲酸乙酸纖維素、乙基纖維素、明膠、藥用釉、羥苯 基纖維素、羥丙甲纖維素、鄰苯二甲酸羥苯甲基纖維素、甲基丙烯酸共聚物、甲 基纖維素、聚乙二醇、鄰苯二甲酸聚乙酸乙烯酯聚合物、蟲膠、蔗糖、二氧化鈦、 巴西棕櫚蠟、微晶蠟、玉米醇溶蛋白)；著色劑(焦糖、紅、黃、黑或混合物、氧 化鐵)；絡合劑(乙二胺四乙酸和鹽EDTA、乙二胺四乙酸、龍膽酸乙醇酰胺、羥 基喹啉硫酸鹽)；干燥劑(氯化鈣、硫酸鈣、二氧化硅)；乳化劑或增溶劑(阿拉伯 膠、膽固醇、二乙醇胺(附加的)、單硬脂酸甘油酯、毛脂醇、卵磷脂、甘油一酯 或甘油二酯、單乙醇胺(附加的)、油酸(附加的)、油醇(穩(wěn)定劑)、泊洛沙姆、 聚氧乙烯50硬脂酸、聚氧35蓖麻油、聚氧40氫化蓖麻油、聚氧10油醚、聚氧20 鯨脂醚、聚氧40硬脂酸、聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80、 雙醋酸丙二醇、單硬脂酸丙二醇、十二垸基硫酸鈉、硬脂酸鈉、單月桂酸山梨聚 糖、單油酸山梨聚糖、單棕櫚酸山梨聚糖、單硬脂酸山梨聚糖、硬脂酸、特羅拉 明、乳化蠟)；過濾助劑(粉末狀纖維素、純化的硅土)；矯味劑與芳香劑(茴香腦、 苯甲醛、乙基香蘭素、薄荷醇、甲基水楊酸、谷氨酸一鈉、橙花油、薄荷、薄荷 油、薄荷醇、玫瑰油、濃玫瑰水、麝香草酚、妥魯香脂酊、香草、香草酊、香蘭 素)；助流劑或防結(jié)塊劑(硅酸鈣、硅酸鎂、膠體二氧化硅、滑石粉)；潤濕劑(甘 油、己二醇、丙二醇、山梨醇)；增塑劑(蓖麻油、二乙酰化甘油一酯、二鄰苯二 甲酸二乙酯、甘油、單或雙乙?；视鸵货?、聚乙二醇、丙二醇、甘油三乙酸酯、 擰檬酸三乙酯；聚合物(例如醋酸纖維素、烷基纖維素、羥烷基纖維素、丙烯酸 聚合物和共聚物)；溶劑(丙酮、乙醇、稀釋的乙醇、水合戊烯、苯甲酰芐基鹽、 丁醇、四氯化碳、氯仿、玉米油、棉子油、乙酸乙酯、甘油、己二醇、異丙醇、 甲醇、二氯甲烷、甲基異丁基酮、礦物油、花生油、聚乙二醇、碳酸異丙烯酯、 丙二醇、芝麻油、注射用水、注射用無菌水、灌注用無菌用水、純水)；吸著劑(粉 末狀纖維素、木炭、純化的硅土)； 二氧化碳吸著劑(氫氧化鋇石灰、蘇打石灰)； 硬化劑(氫化蓖麻油、鯨酯醇、十六醇、十六烷基酯蠟、硬脂肪、石蠟、聚乙烯 輔料、硬酯醇、乳化蠟、白蠟、黃蠟)；懸浮劑和/或增粘劑(阿拉伯膠、瓊脂、藻 酸、單硬脂酸鋁、膨潤土、醇化的膨潤土、巖衆(zhòng)膨潤土、卡波姆934p、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈉12、角叉膠、微晶和羧甲基纖維素鈉、 右旋糖酐、明膠、瓜爾膠、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙甲纖維素、硅酸 鋁鎂、甲基纖維素、果膠、聚環(huán)氧乙垸、聚乙烯醇、聚維酮、丙二醇海藻酸鹽、 二氧化硅、膠體二氧化硅、藻酸鈉、西黃蓍膠、黃原膠)；甜味劑(阿斯帕坦、葡 萄糖結(jié)合劑、右旋糖、賦形劑右旋糖、果糖、甘露糖醇、糖精、糖精鈣、糖精鈉、 山梨糖醇、山梨糖醇溶液、蔗糖、可壓縮糖、糖果劑、糖漿)；片劑粘合劑(阿拉 伯膠、藻酸、羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、糊精、乙基纖維素、明膠、液體葡 萄糖、瓜爾膠、羥丙甲纖維素、甲基纖維素、聚環(huán)氧乙烷、聚維酮、預膠化淀粉、 糖漿)；片劑和/或膠囊稀釋劑(碳酸,丐、二堿基磷酸氫鈣、三堿基磷酸鈣、硫酸鈣、 微晶纖維素、粉末纖維素、葡萄糖結(jié)合劑、糊精、右旋糖賦形劑、果糖、高嶺土 乳糖、甘露糖醇、山梨糖糖、淀粉、預膠化淀粉、蔗糖、可壓縮糖、糖果劑)； 片劑崩解劑(藻酸、微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、鉀型保拉 利林、羥乙酸淀粉鈉、淀粉、預膠化淀粉)；片劑和/或膠囊潤滑劑(硬脂酸鈣、山 崳酸甘油酯、硬脂酸鎂、輕礦物油、聚乙二醇、硬脂酰延胡索酸鈉、硬脂酸、純 化的硬脂酸、滑石粉、氫化植物油、硬脂酸鋅)；滲透劑(右旋糖、甘油、甘露糖 醇、氯化鉀、氯化鈉)；載體矯味和/或甜味劑(芳香酏劑、復方苯甲醛酏劑、異 乙醇酏劑、薄荷水、山梨糖醇溶液、糖漿、妥魯香脂糖漿)；載體含油的(杏仁 油、玉米油、棉子油、油酸乙酯、豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、礦物油、輕礦 物油、豆蔻酰醇、辛基十二烷醇、橄欖油、花生油、桃仁油、芝麻油、大豆油、 角鯊垸)；載體固體載體(糖球體)；載體無菌(注射用抑菌水、注射用抑菌氯 化鈉)、增粘劑(見懸浮劑)；防水劑(環(huán)甲基硅酮、二甲聚硅氧垸、二甲基硅油)； 潤濕和/或增溶劑(苯扎氯銨、氯化芐乙氧銨、十六垸基氯化吡啶鐵、多庫酯鈉、壬 苯醇醚9、壬苯醇醚10、辛苯昔醇9、泊洛沙姆、聚烴氧35蓖麻油、聚烴氧40、 氫化蓖麻油、聚烴氧50硬脂酸鹽、聚烴氧10油烯醚、聚烴氧20、鯨脂醚、聚烴 氧40硬脂酸鹽、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、 十二垸基硫酸鈉、單月桂酸山梨聚糖、單油酸山梨聚糖、單棕櫚酸山梨聚糖、單 硬脂酸山梨聚糖、四丁酚醛)。所述列表不是排他性的，而僅僅是代表輔料種類 以及本發(fā)明的口服劑型中可使用的特定輔料。給藥后，劑量單位形式中的胰島素吸收進入循環(huán)。胰島素的生物利用度易通 過測量血中已知藥理學活性評估，例如血糖的降低。胰島素進一步的生理效果可 采用試驗方法測，例如測量血漿C-肽濃度。也可直接測量胰島素本身的循環(huán)水平。相似地，可測量血中4-CNAB或其它輸遞劑的水平。為了更好地理解本發(fā)明，我們舉了以下的例子。這些例子是說明的目的，而 不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。具體實施方案為了更好地理解本發(fā)明，我們舉了以下的例子。這些例子是說明的目的，而 不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。 例l輸遞劑4-CNAB的制備 如下所述制備符合以下結(jié)構(gòu)的化合物OH O4-氯水楊酸(10.0克、0.0579摩爾)加入到含有約50ml二氯甲烷的250ml單頸圓 底燒瓶中。開始攪拌并繼續(xù)反應的剩余部分。偶合劑l， l-羰基二咪唑(9.39克、 0.0579摩爾)作為固體部分加入到燒瓶中。添加所有偶合劑后，室溫下攪拌約20 分鐘，然后邊攪拌邊加入乙基-4-氨基丁酸鹽酸鹽(9.7克、0.0579摩爾)。然后， 通過漏斗逐滴加入三乙胺(10.49ml、 0.0752摩爾)。漏斗用二氯甲烷潤洗。反應 在室溫下攪拌過夜。反應物倒入分液漏斗，用2當量鹽酸洗，形成乳劑。乳劑放置2天，然后在 熔結(jié)玻璃漏斗中濾過硅藻土。濾液放回在分液漏斗中分層。用硫酸鈉干燥有機層， 然后濾掉，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮所得。固體物用2當量氫氧化鈉水化，冰箱儲存過 夜，然后水解。溶液用2當量鹽酸酸化，分離形成的固體，真空干燥，用甲醇/水 重結(jié)晶兩次。過夜沉淀出固體，分離并干燥。固體溶解于2當量氫氧化鈉，2當量 鹽酸調(diào)節(jié)至pH5。收集固體，HPLC顯示單峰。這些固體在甲醇/水中重結(jié)晶，分 離，然后真空干燥，產(chǎn)生4.96克(33%)的4- (4氯-2-輕基苯甲酰)氨基丁酸， (ChHI2CIN04、分子量257. 67)。熔點131-133°C。燃燒分析顯示以下含量％ C:51.27(計算)，51.27(理論)；％ H: 4.69 (計算)，4.55 (理論)；。/。N:5.44(計算)， 5.30 (理論)。質(zhì)子H核磁共振顯示(d6-DMSO) : d 13.0, s,1H (COOH); d 12,1，s，1H(OH); d 8.9， t,1H (NH); d 7.86， d， 1H (H鄰位到酰胺)；d6.98，d，1H(H 鄰位到苯酚OH); d6.96，d，1H，(H間位到酰胺);d 3,33，m， 2H (CH2接近NH); d 2.28, t， 2H(CH2接近COOH); d 1.80,m, 2H (脂族CH2 (3到NH和CH2 (3到 COOH).人研究用的4-CNAB制備物人服用的4-CNAB(單鈉N- (4-氯水楊?；?-4-氨基-丁酸鹽)是在優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)規(guī) 范(GMP)條件下，根據(jù)國際出版物WO00/46182的方法，由Regis Technologies, Inc. (Morton Grove， IL)制成的。除了所用的起始材料是4-氯水楊酸(從lhara Chemical Industry Co. Inc, Ltd., Tokyo, Japan and Aapin Chemicals Ltd.， Oxfordshire, UK購買)，使用甲醇中0.14當量硫酸，通過甲酯轉(zhuǎn)化成酰胺，然后 約4當量氨水在甲醇。所用的烷化劑是乙基-4-溴丁酸鹽。根據(jù)下述方法制得40kg級的4-CNAB的單鈉鹽。4-CNAB游離酸(500克、 1.91摩爾、FW:257.67)置于22升的5頸圓底燒瓶中。所述燒瓶裝有架空攪拌器、 熱電偶溫度讀出、回流冷凝器和加熱裝置并且置于氮氣下。反應器中加入試劑級 丙酮(13升)，攪拌混合物。所述4-CNAB/丙酮混合物加熱至50。C，溶解任何固體。 得到深褐色溶液。所述50。C溶液用泵通過熱壓過濾器(Whatman #1濾紙，-5微米，18.5平方英寸面積)至干凈的22升反應器以除去氯化鈉和其它不溶物。在過濾結(jié)束時滴過 濾器的壓力約20psig。攪拌并加熱反應器中的澄清黃色濾液。于50。C反應器停 止加熱。澄清濾液在劇烈攪拌下盡可能快速加入50%氫氧化鈉溶液(155克、1.94摩 爾)。(過量裝載會導致不合乎需要形成不溶性二鈉鹽。最好稍微裝載不變，因為 在最終的過濾步驟中將除去游離酸)。反應混合物放熱至大約52。C。形成沉淀并 在再次變得清晰前形成膠體產(chǎn)物。在加入堿并升高溫度后，溶液變得稠厚、粘度增加。在60。C劇烈攪拌下反 應回流2小時。反應混合物繼續(xù)變厚，形成固體塊。所述漿狀物變成淺粉色并起 泡沫。反應物冷卻至室溫超過3至4小時。室溫下放置30分鐘。沉淀的固體由分 液漏斗分離。不洗滌分離的產(chǎn)物。所得4-CNAB單鈉鹽于40至50 。C下真空干燥 16-24小時，得到490克(1.75摩爾、產(chǎn)率90%、 FW = 279.65)。皮下注射所用胰島素是從曰i Lilly and Company (Indianapolis, IN)公司購買的HUMULIN③R注射用胰島素。所有膠囊含有200mg4-CNAB和150U的胰島素，由下述方法制備。首先， 稱取3160克4-CNAB作為總量的輸遞劑，用于填充只含有輸遞劑的膠囊和輸遞劑 加上胰島素組合物膠囊。3160克4-CNAB在Quadrocomil，型號197S研磨機、篩 號2A050 G 037 19 136 (1270微米)中研磨。然后，1029克研磨的4-CNAB通過 #35目篩網(wǎng)。篩過物轉(zhuǎn)移入4夸脫殼，使用(例如V型摻合器，25rpm摻合10.2分鐘)。 所得摻合物用來填充膠囊。在這種情況中，使用具有3個快帽包囊盤的快帽膠囊 填充機。每個空白膠囊大約重48mg，裝入平均重205.6mg的4-CNAB。這樣，單 獨含有輸遞劑的膠囊劑量為205.6mg。胰島素組合物的制備，首先將來自Eli Lilly and Company (Indianapolis, IN) 公司的31.8克人重組鋅胰島素結(jié)晶(效價26.18U/mg)(重組DNA來源的胰島素原， USP質(zhì)量)分散入合適大小的塑料袋中。然后，依次加入30克研磨并過篩的 4-CNAB至塑料袋中，直至加入約有510克。在振搖和翻轉(zhuǎn)下，加每入30克 4-CNAB后使得袋中物質(zhì)完全混合。為了再次加入并混合532.5克4-CNAB， 541.8 克胰島素與4-CNAB的混合物被轉(zhuǎn)移入V型摻合器中，再25rpm混合10.2分鐘。 再加入剩余的4-CNAB至摻合器中，整個混合物在摻合器中25rpm混合10.2分鐘。 最后，所得的組合物如上所述分裝入空膠囊中。最終的膠囊含有平均5.7mg胰島 素(相當于150U胰島素)和200.5mg4-CNAB，或者胰島素4-CNAB之比為1 : 57.3。最終摻合的多樣品在HPLC上展開以證實一致性，發(fā)現(xiàn)一致。例24-CNAB和胰島素/4-CNAB的非臨床研究對本發(fā)明包含胰島素和輸遞劑4-CNAB的組合物，評價了其非臨床規(guī)劃中的 安全性和毒性，包括小鼠和猴中的藥理篩選、藥動學分布以及毒性的評價。 一般 來說，動物對單獨的4-CNAB的生理反應和對胰島素/4-CNAB的生理反應是可以 比較的。小鼠、大鼠和猴的藥動學研究表明，4-CNAB口服后快速吸收，隨后從 體內(nèi)清除。受體結(jié)合篩選測定中，在任何第一分子耙，4-CNAB并不顯示潛在的 活性。四個用4-CNAB進行的遺傳毒性研究沒有發(fā)現(xiàn)陽性?；?4天口服反復給 藥毒性研究中，Sprague-Dawley大鼠的NOAEL(無副作用水平)估計為 500mg/kg， rhesus猴為400mg/kg。在毒性研究中，評價了劑量從400mg至2000mg的4-CNAB。在小鼠和猴14天口服反復給藥毒性研究中，Sprague-Dawley大鼠的4-CNAB的無副作用水平 (NOAEL)估計為500mg/kg， rhesus猴為400mg/kg;因此，猴似乎是最敏感的 種類。建議人用的最高劑量2000mg4-CNAB(〈30mg/kg)低于猴的NOAEL12-16 倍(即單用NOAEL二400mg/kg4-CNAB和與15U/kg胰島素聯(lián)用)。猴中胰島素的絕對生物利用度大約是1%或更低。在毒性研究中，沒有發(fā)現(xiàn)大鼠口服劑量水平為 15U/kg的胰島素與高達2000mg/kg的CNAB聯(lián)用。在猴中，。、 一只猴中胰島素 劑量為15U/kg與聯(lián)合1200mg/kg的4-CNAB中的劑量單次低血糖癥發(fā)作有關。 15U/kg胰島素與較低劑量聯(lián)合則無效。小鼠及猴的非臨床研究表明，在所測試的范圍內(nèi)，胰島素吸收隨著4-CNAB 劑量的增加而增加。相似地，對于固定的口服4-CNAB劑量，胰島素吸收隨著胰 島素劑量的增加而增加。評價了大鼠在不同劑量的胰島素和4-CNAB口服胰島素 的吸收。固定的4-CNAB劑量(200mg/kg)存在下，施用胰島素劑量4.55、 6.5、 9.75和13U/kg后，觀察到血漿胰島素濃度明顯增加。平均峰血漿胰島素水平分別 為31、 44、 85和132nU/ml。胰島素水溶液吸收是劑量依賴的并隨著胰島素劑量 的增加而增加。單獨口服給予胰島素水溶液(13U/kg)或單獨給予 4-CNAB(200mg/kg)，血清胰島素水平?jīng)]有明顯的增加。在固定的胰島素劑量 (13U/kg)存在下，給予50、 100、 200和300mg/kg劑量的4-CNAB后，血清胰島 素濃度明顯增加。平均峰血清胰島素水平分別為9、 39、 103和157u U/ml。胰島 素吸收是劑量依賴的，并隨著4-CNAB劑量的增加而增加。基于上述的非臨床信息，選擇胰島素的起始劑量為150胰島素U USP(大約 比猴中無效劑量15U/kg低7倍)。例3本例描述了制備胰島素/4-CNAB膠囊的方法。如上述制備的4-CNAB首先通 過35篩目篩選。稱重篩選的4-CNAB的所需量并置于覆蓋的稱量盤中。稱重所需 的胰島素量置于覆蓋的稱量盤中。上述的胰島素通過35篩目篩選至同一研缽上，大約2.0克的4-CNAB用相同 35篩目篩選至胰島素之上。用玻璃研缽輕輕研磨混合研缽的內(nèi)容物3分鐘，必要 時用刮刀刮。上述4-CNAB以相當于研缽中物質(zhì)的體積的小部分繼續(xù)通過35篩目 網(wǎng)篩選。每次加入后，研缽的內(nèi)容物混合約3分鐘。最后加入后，用玻璃研缽輕輕研磨混合研缽的內(nèi)容物3分鐘，必要時用刮刀刮。最終的摻合物轉(zhuǎn)入稱重盤，手工充入膠囊。 例4在本例中，本文所述胰島素口服膠囊給20位患有糖尿病的受試者在夜間就 寢前服用。夜間給藥的基本原則如下。2型糖尿病病人口服胰島素的臨床研究證明有短 持續(xù)時間的降血糖效果。這可能表明口服胰島素提供全身性循環(huán)胰島素的半衰期 短以影響外周血糖處置。假設由于口服胰島素的門輸遞，口服胰島素對肝胰島素 產(chǎn)生(導致空腹血糖水平)具有更深遠的影響。因而，本研究用于確定口服胰島素 的代謝作用是否比血漿中胰島素的實際半衰期更長。在2型糖尿病中，血糖水平通常在一夜的禁食后升高，大概是因為胰島素耐受和胰島素分泌不足的聯(lián)合，肝無限制的產(chǎn)生葡萄糖的結(jié)果，這是此疾病的標志。 血糖水平的升高可導致惡性循環(huán)以維持糖尿病病人的情況的嚴重性，如果血糖長 時間的升高，在分泌胰島素以調(diào)節(jié)血糖濃度的胰腺中對細胞可能產(chǎn)生"損耗"。這 樣，如果治療是為了節(jié)省胰島素產(chǎn)生細胞功能，對細胞的這種"休息"可提供長 時間的保護以免產(chǎn)生明顯的糖尿病或從非胰島素依賴性糖尿病進展到胰島素依 賴性糖尿病。因此，提出了研究就寢時口服胰島素對肝葡萄糖產(chǎn)生和空腹血糖的 影響。與上述一致，本例報道了公開標簽、單劑量、交叉研究的結(jié)果，比較了2組 患有2型糖尿病的病人口服胰島素/4-CNAB制劑的安全性。一組病人在禁食狀態(tài)， 一組給予標準餐。目的是(1)比較禁食的2型糖尿病病人口服胰島素/4-CNAB的安 全性、藥動學和藥效學(2)比較標準飲食或血糖的常規(guī)藥物治療后胰島素和C-肽 水平，用胰島素/4-CNAB及標準進餐后胰島素和C-肽濃度。本例的核心是評價2型糖尿病病人就寢時口服胰島素/4-CNAB的安全性、藥 動學及藥效學。本研究的目的是確定就寢時口服胰島素是否對整夜禁食葡萄糖穩(wěn) 態(tài)和胰島素分泌有作用。假設的作用機制(例如抑制肝產(chǎn)生葡萄糖和防止P細胞 損傷或甚至死亡，導致加重胰島素生產(chǎn)的功能不良)是設計本研究的基礎。在研究的第一部分，年齡35-70歲的24位糖尿病病人參與了研究，并且研究 在整夜禁食狀態(tài)(兩種時機)下進行，每種時機之間的間隔至少7天。這些病人 的血糖水平升高，但根據(jù)其病史、體檢以及臨床實驗室研究顯示一般健康良好。 給予抗糖尿病藥物如阿卡波糖或二甲雙胍的受試者在試驗開始前24小時不服藥。研究了以下治療情況組1 : 12位2型糖尿病病人(a)口服胰島素/4-CNAB-禁食 受試者，(b)空膠囊-禁食受試者；組2 : 12位糖尿病病人(a)標準餐常規(guī)治療(b) 標準餐前口服人胰島素/4-CNAB。在本研究的第二部分，使24位受試者中的20位參加了關于就寢時口服胰島 素/4-CNAB的安全性研究，其余的4人由于邏輯考慮沒有包括在內(nèi)。這20為受試 者在夜間就寢前給予口服胰島素膠囊。試驗在受試者的家里進行，在病人自己的 環(huán)境進行試驗的基本理由是，根據(jù)在熟悉的環(huán)境進行時最佳反映葡萄糖穩(wěn)態(tài)且住 院期間葡萄糖穩(wěn)態(tài)顯著地變化。連續(xù)3天早晨7: OO測量空腹血糖、胰島素和C-肽水平以建立基線。在服膠 囊前連續(xù)2個晚上和早晨，受試者用血糖儀(提供的)測量自身葡萄糖水平。如果 在最初2天早晨受試者的空腹葡萄糖水平;H20mg/dl，受試者在第三天晚上服用 胰島素膠囊。如果在最初連續(xù)2個早晨，受試者的空腹血糖不大于120mg/dl，那 么此受試者排除在研究之外，所有最終的研究步驟按照方案進行。受試者在每天傍晚7:00至8: OO之間，在家照常吃晚餐。如果受試者通常在傍晚服用糖尿病治療藥物(如二甲雙胍或阿卡波糖)，他們服常規(guī)劑量。晚上11: 00(至少晚餐后2小時)，受試者服用口服一個胰島素劑量，該劑量含有以下成分300mg4-CNAB根據(jù)劑量(200-400U)的胰島素，即在試驗的第一期中受試者接受 的劑量。如果受試者在試驗的第一期接受了200U胰島素，血糖水平?jīng)]有下降(降 低<15%)，那么受試者現(xiàn)在接受300U胰島素。如果受試者在試驗的第一期接受 了300U胰島素，血糖水平并沒有下降(降低<15%)，那么受試者現(xiàn)在接受400U 胰島素。所有受試者不接受超過400U的胰島素。膠囊是由AAI制備的且該膠囊顯 示穩(wěn)定性。在給藥前用血糖儀測定受試者的血糖水平。此外，取血以進一步測定血糖水 平、胰島素和C-肽。還準備了橘子汁用于治療不太可能出現(xiàn)的低血糖癥。睡覺期 間，受試者帶一個葡萄糖手表(Glucowatch)(用于在常規(guī)間隔時監(jiān)測血糖和測 量及記錄血糖水平)，該手表裝警報器，當血糖水平到達病人或研究者確定的預 定血糖水平(低血糖癥水平)時發(fā)出警報。早晨(例如早上7: 00)，用血糖儀測量受 試者的血糖水平，取附加的血樣進一步測量血糖水平、胰島素和C-肽。從晚上前 所取的血樣儲存在家里的冰箱中，早晨由護士將血樣(晚上和早上的)帶到實驗室 作分析。夜間口服胰島素的研究結(jié)果(大約在早晨7: OO測量空腹血糖、胰島素和C-肽并與病人自己的基線水平比較)在

圖1-5中列出。由病人所報告的結(jié)果在圖1和2(uU/ml)中以數(shù)值的形式列出，并在圖3-5中以圖表的形式列出。圖1顯示了每個 受試者夜間口服胰島素/4-CNAB后，早上收集的血糖、胰島素和C-肽與受試者自 己的基線相比的數(shù)據(jù)。圖2顯示了每個受試者夜間口服胰島素和4-CNAB前在夜 間收集的胰島素和C-肽的數(shù)據(jù)。圖3-5顯示了夜間口服胰島素/4-CNAB分別對血 糖濃度、血C-肽濃度和血胰島素濃度的影響?？诜z囊后10-30分鐘胰島素水平增加，且在葡萄糖水平降低之前。所述 4-CNAB顯示快速吸收，其濃度峰值約為給藥后30分鐘。在研究過程中沒有發(fā)現(xiàn) 嚴重的副作用且4-CNAB的耐受性好。過夜的研究證明單劑量口服胰島素的代謝作用在早晨仍明顯，即給藥后約8 小時。傍晚給藥的結(jié)果是，肝輸出的血糖減少。如圖2所示(對血糖的影響)，夜 間口服胰島素膠囊后，病人的基線血糖水平與血糖水平之間沒有統(tǒng)計學顯著性差 異。服藥后早上測量的血糖從基線水平減少6%，即從133.78±40.53 mg/dl到 125.78±42.99(p=0.017)。標準餐條件下，接受胰島素/4-CNAB膠囊的受試者表 明具有常規(guī)藥物治療(如阿卡波糖或二甲雙胍)的病人標準餐后血糖水平相同。另一方面，在所有的病人中，早上檢測的C-肽和胰島素顯著降低(而葡萄糖 水平?jīng)]有統(tǒng)計學顯著性改變)。0肽水平從基線一致的補償性降低平均24%，即 從2.69土0. 88ng/ml到2.04土0.71 (p< 0.001)，表明分泌內(nèi)源性地產(chǎn)生的胰島素 的P細胞的活性不大。血漿胰島素水平平均降低33。/。，即從13.90 ±6. 44 uU/ml到 9.35±4.52(p< 0. 001)。這些結(jié)果分別在圖3和圖4中以圖表的形式顯示。這樣， 胰島素的吸收使C-肽水平顯著降低，表明由于肝葡萄糖輸出的減少使胰島素需求 降低，而減少了內(nèi)源性胰島素分泌。這樣，與當受試者來到診所進行第一階段試驗時兩個早上的測量相比，就寢 時服用胰島素使攝取胰島素/4-CNAB膠囊后早上的血漿胰島素水平降低。夜間口 服胰島素能抑制過夜的禁食胰島素需求，并可改善胰島素敏感性(隨著全身性高 胰島素血癥的減少，空腹性血糖不變)。這些結(jié)果的解釋是夜間外源性胰島素的"加強"使病人的P細胞休息，且產(chǎn) 生較少胰島素以取得相同的血糖水平。提出的臨床推斷是，如果單獨給予這種治 療(就寢時口服胰島素)，可能缺乏P細胞的功能，因為這些細胞由于耗竭和/或葡 萄糖毒性而功能不良(最終死亡)。 一些已報道的研究支持了此重要性，這些研究 顯示通過在疾病早期(例如IGT或是"糖耐量減低階段")用胰島素"侵襲性地"干預，即使給予胰島素的時間較短例如2周持續(xù)時間，對細胞的這種"休息"能 提供長期的保護以免產(chǎn)生明顯的糖尿病。本研究進一步顯示，盡管在空腹狀態(tài)給藥和繼續(xù)禁止給病人施用胰島素，也 沒有病人具有臨床意義的低血糖癥發(fā)作。這一結(jié)果支持結(jié)論，即本文所述口服胰島素制劑比通過非口服(門靜脈)途徑施用胰島素在低血糖癥方面更安全。在上述的說明書中，已參照具體的示范性實施方案和其離子描述了本發(fā)明。 然而明顯的是，在不背離權(quán)利要求中所述的本發(fā)明廣泛的精神和范圍，可以進行 各種各樣的修飾和改變。因而，說明書和圖被認為是說明的方式而非限制的意思。 在上文我們描述了許多本發(fā)明的實施方案，明顯的是，利用本發(fā)明的過程和 組合物，可以改變我們的基本結(jié)構(gòu)以提供其它的實施方案。因此，應理解的是， 本發(fā)明的范圍是由下文的權(quán)利要求限定的，而不是由通過例子所給出的具體實施 方案限定。
權(quán)利要求
1.一種試劑盒，包括包含治療有效劑量的胰島素的口服固體制劑，和指導在就寢時或就寢前不久給予所述制劑的說明書。
2. 如權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中所述的胰島素是未修飾的胰島素。
3. 如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其中所述制劑中的胰島素劑量為50單位到600單位。
4. 如權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中所述制劑中的胰島素劑量為100單位到 400單位。
5. 如權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中所述制劑中的胰島素劑量為150單位到 300單位。
6. 如權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中，所述的口服制劑還包含有效量的藥學 上可接受的輸遞劑，以促進所述胰島素在所述哺乳動物胃腸道中的吸收。
7. 如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其中，所述藥學上可接受的輸遞劑包含 4-CNAB。
8. 如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其中，所述藥學上可接受的輸遞劑包含約 300mg 4-CNAB。
9. 如權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中，所述的說明書包括指示在慢性基礎上 口服給予所述的制劑。
10. 如權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中，所述的說明書包括指示在夜間口服 所述的制劑持續(xù)至少兩周。
11. 如權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中，所述的試劑盒用于預防哺乳動物中 缺乏胰P細胞功能，所述的哺乳動物患有糖耐量減低或早期糖尿病。
12. 如權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中，所述的試劑盒用于防止哺乳動物中 的e細胞死亡或功能不良，所述的哺乳動物患有糖耐量減低或早期糖尿病。
13. 如權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中，所述的試劑盒用于長期保護哺乳動 物，所述的哺乳動物患有糖耐量減低或明顯產(chǎn)生的早期糖尿病或胰島素依賴性糖 尿病
14. 如權(quán)利要求l所述的試劑盒，其中，所述的試劑盒用于延緩哺乳動物中明顯發(fā)作或胰島素依賴性糖尿病，所述的哺乳動物患有糖耐量減低或早期糖尿病。
15. 胰島素在制備如權(quán)利要求l所述的試劑盒中的應用。
16. 藥學上可接受的輸遞劑在制備如權(quán)利要求6所述的試劑盒中的應用。
全文摘要
一種用于保護患有葡萄糖耐量減低或早期糖尿病的哺乳動物以免產(chǎn)生明顯糖尿病或胰島素依賴型糖尿病的方法，包括夜間(例如就寢時或就寢前不久)口服有效劑量的含胰島素的藥物制劑。
文檔編號A61K38/28GK101219210SQ200710188739
公開日2008年7月16日 申請日期2004年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月6日
發(fā)明者E·阿維特, M·戈爾德貝格 申請人:埃米斯菲爾技術公司