一種負(fù)載胰島素的納米微粒的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物納米技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種負(fù)載胰島素的納米微粒的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]糖尿病是一種以血糖增高為特征的代謝疾病。糖尿病的代謝紊亂可導(dǎo)致全身各個(gè)器官的功能及結(jié)構(gòu)異常，甚至可導(dǎo)致病人的死亡。全球糖尿病患者遍布世界各個(gè)地區(qū)，尤其在發(fā)展中國(guó)家快速增長(zhǎng)。2010年由糖尿病及其相關(guān)疾病引起的死亡人數(shù)已經(jīng)達(dá)到396萬(wàn)，而且在2030年全球糖尿病患者預(yù)計(jì)達(dá)到4.39億之多。
[0003]目前皮下注射胰島素給藥是臨床治療糖尿病的主要手段。但是皮下注射常引起患者局部不適(疼痛、癢、皮下脂肪萎縮和感染)，且一日多次注射的低順從性、不方便性以及偶然的藥劑瞬間過(guò)量引起的低血糖在糖尿病患者中常有發(fā)生，給病人帶來(lái)極大的經(jīng)濟(jì)、身體以及心理負(fù)擔(dān)。
[0004]因此，每日多次注射胰島素非常不方便，而且不符合人體生理代謝模式。而胰島素口服給藥可有效克服注射胰島素的缺點(diǎn)，是胰島素的理想替代給藥方式。但現(xiàn)有技術(shù)制備的口服胰島素的應(yīng)用效果不甚理想。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種負(fù)載胰島素的納米微粒的制備方法。
[0006]本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下:
[0007]一種負(fù)載胰島素的納米微粒的制備方法，包括如下步驟:
[0008](I)將胰島素溶解于稀鹽酸水溶液中，制得濃度為I?15mg/mL的胰島素溶液；
[0009](2)將上述胰島素溶液加入到有機(jī)溶液中，超聲處理形成W/0初乳，上述胰島素溶液與上述有機(jī)溶液的體積比為1:3?8，上述有機(jī)溶液中含有濃度為10?45mg/mL的聚合物、濃度為I?15mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?15mg/mL的大豆卵磷脂，上述聚合物包括聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚原酸酯、聚己內(nèi)酯；
[0010](3)將上述W/0初乳加入到去離子水中，超聲處理形成W/0/W復(fù)乳，攪拌過(guò)夜，得納米懸浮液；
[0011](4)將凍干保護(hù)劑加入到上述納米懸浮液中，使凍干保護(hù)劑的濃度達(dá)到0.5?5%，得原料液；
[0012](5)將上述原料液通過(guò)單線微射流霧化器(為CN 202823728 U所公開(kāi))霧化后噴入到盛有液氮的保溫灌中，該單線微射流霧化器的參數(shù)為:進(jìn)樣流量2.5?8g/min、共振頻率14?16kHz、噴嘴大小50?60 μπι，且該單線微射流霧化器的噴嘴距離液氮液面高度為10?20cm，液氮處于不斷攪拌之中；
[0013](6)將上述保溫罐轉(zhuǎn)移到真空冷凍干燥機(jī)中，凍干48?56h，得到粒徑為100?200nm的所述負(fù)載胰島素的納米微粒，于O?4°C密封保存。
[0014]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述胰島素溶液的濃度為I?10mg/mL。
[0015]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述步驟(2)為:將上述胰島素溶液加入到有機(jī)溶液中，超聲處理形成W/0初乳，，上述胰島素溶液與上述有機(jī)溶液的體積比為1:4?7，上述有機(jī)溶液中含有濃度為10?40mg/mL的聚合物、濃度為I?10mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?10mg/mL的大豆卵磷脂。
[0016]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，步驟(2)中所述有機(jī)溶液的溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、二氯甲烷-丙酮混合有機(jī)溶劑或二氯甲烷-乙腈混合有機(jī)溶劑。
[0017]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述凍干保護(hù)劑為PVA。
[0018]本發(fā)明的有益效果是:
[0019]1、本發(fā)明所制備的納米微粒在胃腸條件下穩(wěn)定，保護(hù)所負(fù)載的胰島素；
[0020]2、本發(fā)明所制備的納米微粒的外層為大豆卵磷脂，可增加該納米微粒對(duì)細(xì)胞親和力進(jìn)而增強(qiáng)細(xì)胞攝取率、改善納米微粒的理化性質(zhì)(如zeta電位)、以及藥物體外釋放性能(如緩釋觸發(fā)釋放和控釋)；
[0021]3、本發(fā)明所制備的納米微粒表面容易通過(guò)靶向修飾或小分子吸附方式進(jìn)行表面改性；
[0022]4、本發(fā)明的制備方法簡(jiǎn)單、反應(yīng)條件溫和，所制備的納米微粒的包封率達(dá)到92 %以上，粒徑分布均一，復(fù)溶于水后的粒徑變化不大，長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性好，整個(gè)制備過(guò)程不影響納米微粒的穩(wěn)定性、胰島素的活性和體外釋放。
【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1為本發(fā)明實(shí)施例8所制得的負(fù)載胰島素的納米微粒透射顯微鏡表征圖。
[0024]圖2為本發(fā)明實(shí)施例8所制得的負(fù)載胰島素的納米微粒粒徑表征圖。
[0025]圖3為本發(fā)明實(shí)施例8制得的載有胰島素微粒的光學(xué)顯微鏡表征圖。
[0026]圖4為本發(fā)明實(shí)施例8制得的負(fù)載胰島素的納米微粒的復(fù)溶后的體外釋放和新制的體外釋放對(duì)比圖。
[0027]圖5為本發(fā)明實(shí)施例8所制得的負(fù)載胰島素的納米微粒復(fù)溶于水后得到的納米粒透射電鏡圖。
【具體實(shí)施方式】
[0028]以下通過(guò)【具體實(shí)施方式】結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步的說(shuō)明和描述。
[0029]下述實(shí)施例制備的納米微粒的包封率達(dá)到92%以上，粒徑分布均一，復(fù)溶于水后的粒徑變化不大，長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性好，整個(gè)制備過(guò)程不影響納米微粒的穩(wěn)定性、胰島素的活性和體外釋放。
[0030]實(shí)施例1
[0031](I)將胰島素溶解于300 μ L稀鹽酸水溶液中，制得濃度為I?10mg/mL的胰島素溶液；
[0032](2)將上述胰島素溶液加入到ImL有機(jī)溶液中，超聲處理Imin形成W/0初乳，，上述有機(jī)溶液中含有濃度為10?40mg/mL的聚合物、濃度為I?10mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?10mg/mL的大豆卵磷脂，上述聚合物為聚乳酸，有機(jī)溶液的溶劑為二氯甲烷；
[0033](3)將上述W/0初乳加入到6mL去離子水中，超聲處理Imin形成W/0/W復(fù)乳，攪拌過(guò)夜，得納米懸浮液；
[0034](4)將PVA加入到上述納米懸浮液中，使PVA的濃度達(dá)到0.5 %，得原料液；
[0035](5)將上述原料液通過(guò)單線微射流霧化器(為CN 202823728 U所公開(kāi))霧化后噴入到盛有液氮的保溫灌中，該單線微射流霧化器的參數(shù)為:進(jìn)樣流量2.5g/min、共振頻率14kHz、噴嘴大小50 μ m，且該單線微射流霧化器的噴嘴距離液氮液面高度為10cm，液氮處于不斷攪拌之中；
[0036](6)將上述保溫罐轉(zhuǎn)移到真空冷凍干燥機(jī)中，凍干48h，得到粒徑為100?200nm的所述負(fù)載胰島素的納米微粒，于4°C密封保存。將得到的納米微粒復(fù)溶于水，等到的溶液用動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定后與干燥前的粒徑比值為?1.3。
[0037]實(shí)施例2
[0038](I)將胰島素溶解于300 μ L稀鹽酸水溶液中，制得濃度為I?10mg/mL的胰島素溶液；
[0039](2)將上述胰島素溶液加入到ImL有機(jī)溶液中，超聲處理Imin形成W/Ο初乳，，上述有機(jī)溶液中含有濃度為10?40mg/mL的聚合物、濃度為I?10mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?10mg/mL的大豆卵磷脂，上述聚合物為聚羥基乙酸，有機(jī)溶液的溶劑為三氯甲烷；
[0040](3)將上述W/Ο初乳加入到6mL去離子水中，超聲處理Imin形成W/0/W復(fù)乳，攪拌過(guò)夜，得納米懸浮液；
[0041 ] (4)將PVA加入到上述納米懸浮液中，使PVA的濃度達(dá)到I %，得原料液；
[0042](5)將上述原料液通過(guò)單線微射流霧化器霧化后噴入到盛有液氮的保溫灌中，該單線微射流霧化器的參數(shù)為:進(jìn)樣流量2.5g/min、共振頻率14kHz、噴嘴大小50 μ m，且該單線微射流霧化器的噴嘴距離液氮液面高度為15cm，液氮處于不斷攪拌之中；
[0043](6)將上述保溫罐轉(zhuǎn)移到真空冷凍干燥機(jī)中，凍干48h，得到粒徑為100?200nm的所述負(fù)載胰島素的納米微粒，于4°C密封保存。將得到的納米微粒復(fù)溶于水，等到的溶液用動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定后與干燥前的粒徑比值為?1.1o
[0044]實(shí)施例3
[0045](I)將胰島素溶解于300 μ L稀鹽酸水溶液中，制得濃度為I?10mg/mL的胰島素溶液；
[0046](2)將上述胰島素溶液加入到ImL有機(jī)溶液中，超聲處理Imin形成W/Ο初乳，，上述有機(jī)溶液中含有濃度為10?40mg/mL的聚合物、濃度為I?10mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?10mg/mL的大豆卵磷脂，上述聚合物為聚乳酸-羥基乙酸共聚物，有機(jī)溶液的溶劑為二氯甲烷-丙酮混合有機(jī)溶劑；
[0047](3)將上述W/Ο初乳加入到6mL去離子水中，超聲處理Imin形成W/0/W復(fù)乳，攪拌過(guò)夜，得納米懸浮液；
[0048](4)將PVA加入到上述納米懸浮液中，使PVA的濃度達(dá)到1.5%，得原料液；
[0049](5)將上述原料液通過(guò)單線微射流霧化器霧化后噴入到盛有液氮的保溫灌中，該單線微射流霧化器的參數(shù)為:進(jìn)樣流量2.5g/min、共振頻率14kHz、噴嘴大小50 μ m，且該單線微射流霧化器的噴嘴距離液氮液面高度為20cm，液氮處于不斷攪拌之中；
[0050](6)將上述保溫罐轉(zhuǎn)移到真空冷凍干燥機(jī)中，凍干48h，得到粒徑為100?200nm的所述負(fù)載胰島素的納米微粒，于4°C密封保存。將得到的納米微粒復(fù)溶于水，等到的溶液用動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定后與干燥前的粒徑比值為?1.1o
[0051]實(shí)施例4
[0052](I)將胰島素溶解于300 μ L稀鹽酸水溶液中，制得濃度為I?10mg/mL的胰島素溶液；
[0053](2)將上述胰島素溶液加入到2mL有機(jī)溶液中，超聲處理Imin形成W/Ο初乳，，上述有機(jī)溶液中含有濃度為10?40mg/mL的聚合物、濃度為I?10mg/mL的DSPE-PEG和濃度為I?10mg/mL的大豆卵磷脂，上述聚合物為聚原酸酯，有機(jī)溶液的溶劑為二氯甲烷-乙腈混合有機(jī)溶劑；
[0054](3)將上述W