專利名稱：植物提取液中單寧含量的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹寧含量的檢測(cè)方法，具體涉及植物提取液中單寧含量的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
單寧是多酚中高度聚合的化合物，含有許多酚羥基結(jié)構(gòu)，相對(duì)份子質(zhì)量為500 4000，可以和蛋白質(zhì)、生物堿、多糖及多種金屬離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、制革、日用化學(xué)品、水處理等領(lǐng)域。單寧具有較強(qiáng)的化學(xué)和生理活性，對(duì)生物體的影響具有雙重性，食物中的單寧過(guò)量會(huì)產(chǎn)生比如減少蛋白質(zhì)、維生素的有效吸收等抗?fàn)I養(yǎng)的作用。因此，檢測(cè)食物中單寧的含量具有非常重要的意義。 目前，應(yīng)用于單寧檢測(cè)的方法主要有皮粉法、滴定法、干酪素法和比色法等傳統(tǒng)經(jīng)典方法及色譜法、熒光法和流動(dòng)注射法等現(xiàn)代檢測(cè)方法，但這些檢測(cè)方法均具有缺陷，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面1、現(xiàn)有單寧檢測(cè)方法中，向待測(cè)檢測(cè)樣品中加入的物質(zhì)，容易與單寧份子量發(fā)生反應(yīng)，從而在計(jì)算待測(cè)樣品中單寧含量時(shí)，往往誤差會(huì)比較大，從而檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確；2、整個(gè)檢測(cè)過(guò)程容易受外界溫度，待檢測(cè)樣品的選擇等其他因素的影響，檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性差；3、檢測(cè)結(jié)果易受提取液中色素的影響；4、整個(gè)檢測(cè)過(guò)程操作繁瑣，耗時(shí)耗力；5、檢測(cè)需要大型儀器和專業(yè)的操作人員，對(duì)操作人員的要求較高，應(yīng)用范圍窄。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何提供一種簡(jiǎn)單，且重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好的檢測(cè)植物提取液中單寧含量方法。解決該技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的植物提取液中單寧含量的檢測(cè)方法，具體步驟如下
步驟I :制備顯色液，將O. I mol/L的氯化鐵水溶液和O. 3mol/L的硫氰酸胺水溶液按照I :1的體積混合；
步驟2 :取單寧標(biāo)準(zhǔn)品溶于蒸餾水中得到濃度為O. 2mg/mL的單寧水溶液作為單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液；
步驟3 :取I. OmL步驟2中的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液至最大刻度為IOml的容量瓶中，并往所述單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液中依次加入O. I O. 5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至該容器的最大刻度后搖勻，并室溫避光靜置10 20min ;然后以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)加入所述顯色液、氫氧化鈉水溶液和二甲基甲酰胺水溶液后的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)波長(zhǎng)在400 700nm范圍的光波的光譜曲線，并確定在該范圍內(nèi)單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液的最大吸收波長(zhǎng)；
步驟4 :取步驟2中的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液O. O mL, O. 5 mL, I mL, I. 5 mL, 2. O mL, 2. 5 mL和
3.OmL分別置于7只最大刻度為IOmL的容量瓶中，往7只容量瓶中分別依次加入O. I O.5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至各個(gè)容器最大刻度得到7份單寧濃度c各不相同的混合溶液，分別將7份混合溶液搖勻，并室溫避光靜置10 20min ;然后以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)所述各份混合溶液對(duì)步驟3中確定的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)波長(zhǎng)在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長(zhǎng)的吸光度A ;然后以各份混合溶液中單寧的濃度c為橫坐標(biāo)，各份混合溶液對(duì)步驟3中確定的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)波長(zhǎng)在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長(zhǎng)的吸光度A為縱坐標(biāo)制圖，該圖作為單寧標(biāo)準(zhǔn)曲線；
步驟5 :取I. Oml待測(cè)單寧樣品溶液置于最大刻度為IOmL的容量瓶中，往所述待測(cè)單寧樣品溶液中依次加入O. I O. 5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至該容器的最大刻度得到待測(cè)單寧樣品混合溶液，將待測(cè)單寧樣品混合溶液搖勻，并室溫避光靜置10 20min，以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)單寧樣品溶液 對(duì)步驟3中確定的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)波長(zhǎng)在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長(zhǎng)的吸光度A’ ；
步驟6 :根據(jù)式(I)計(jì)算待測(cè)單寧樣品溶液中單寧的含量
權(quán)利要求
1.植物提取液中單寧含量的檢測(cè)方法，其特征在于，具體步驟如下 步驟I :制備顯色液，將O. I mol/L的氯化鐵水溶液和O. 3mol/L的硫氰酸胺水溶液按照I :1的體積混合； 步驟2 :取單寧標(biāo)準(zhǔn)品溶于蒸餾水中得到濃度為O. 2mg/mL的單寧水溶液作為單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液； 步驟3 :取I. OmL步驟2中的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液至最大刻度為IOml的容量瓶中，并往所述單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液中依次加入O. I O. 5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至該容器的最大刻度后搖勻，并室溫避光靜置10 20min ;然后以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)加入所述顯色液、氫氧化鈉水溶液和二甲基甲酰胺水溶液后的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)波長(zhǎng)在400 700nm范圍的光波的光譜曲線，并確定在該范圍內(nèi)單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液的最大吸收波長(zhǎng)； 步驟4 :取步驟2中的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液O. O mL, O. 5 mL, I mL, I. 5 mL, 2. O mL, 2. 5 mL和.3.OmL分別置于7只最大刻度為IOmL的容量瓶中，往7只容量瓶中分別依次加入O. I .O.5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至各個(gè)容器最大刻度得到7份單寧濃度c各不相同的混合溶液，分別將7份混合溶液搖勻，并室溫避光靜置10 20min ;然后以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)所述各份混合溶液對(duì)步驟3中確定的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)波長(zhǎng)在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長(zhǎng)的吸光度A ;然后以各份混合溶液中單寧的濃度c為橫坐標(biāo)，各份混合溶液對(duì)步驟3中確定的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)波長(zhǎng)在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長(zhǎng)的吸光度A為縱坐標(biāo)制圖，該圖作為單寧標(biāo)準(zhǔn)曲線； 步驟5 :取I. Oml待測(cè)單寧樣品溶液置于最大刻度為IOmL的容量瓶中，往所述待測(cè)單寧樣品溶液中依次加入O. I O. 5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至該容器的最大刻度得到待測(cè)單寧樣品混合溶液，將待測(cè)單寧樣品混合溶液搖勻，并室溫避光靜置10 20min，以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)單寧樣品溶液對(duì)步驟3中確定的單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)波長(zhǎng)在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長(zhǎng)的吸光度A’ ； 步驟6 :根據(jù)式(I)計(jì)算待測(cè)單寧樣品溶液中單寧的含量
全文摘要
本發(fā)明涉及植物提取液中單寧含量的檢測(cè)方法，該方法的步驟主要是制備顯色液；制備單寧標(biāo)注溶液；確定單寧標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)波長(zhǎng)在400～700nm范圍的光波的最大吸收波長(zhǎng)；制備單寧標(biāo)準(zhǔn)曲線，該標(biāo)準(zhǔn)曲線以各份混合溶液中單寧的濃度c為橫坐標(biāo)，以各份混合溶液對(duì)前述最大吸收波長(zhǎng)的吸光度A為縱坐標(biāo)制圖；檢測(cè)待測(cè)單寧待測(cè)單寧樣品溶液對(duì)步驟3中確定的最大吸收波長(zhǎng)的吸光度A’；通過(guò)公式計(jì)算待測(cè)單寧樣品溶液中單寧的含量。本方法的檢測(cè)結(jié)果受外界因素的干擾較小，且該方法的重現(xiàn)性好，對(duì)多種植物中單寧含量的檢測(cè)具有普遍性。
文檔編號(hào)G01N21/78GK102830114SQ20121029005
公開日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月15日
發(fā)明者霍丹群, 張宿義, 周榮靈, 張良, 侯長(zhǎng)軍, 蔡小波, 邱登榮 申請(qǐng)人:瀘州老窖股份有限公司, 重慶大學(xué)