專利名稱：一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，屬于對(duì)映體的拆分和檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
建立一種快速且可靠的分離與檢測(cè)方法是制備高純度手性物質(zhì)的前提。目前，常用的手性化合物的分離分析方法有高效液相色譜(或氣相色譜)_手性柱分離法、酶(也包括微生物細(xì)胞)拆分法、化學(xué)衍生與色譜分離相結(jié)合等，但這些方法的成本較高、適用性和效率差、步驟繁瑣，而且不易實(shí)現(xiàn)分析手段的自動(dòng)化。相比之下，高效毛細(xì)管電泳具有效率高、 速度快、所需樣品和試劑少、檢測(cè)模式多且可以和其他技術(shù)聯(lián)用、試劑廉價(jià)易得、能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化的優(yōu)點(diǎn)，近年來廣泛應(yīng)用于各種手性藥物及中間體、以及多肽等樣品的分離分析。此夕卜，相比常規(guī)的高效液相色譜等分離方法，高效毛細(xì)管電泳具有柱效高、有機(jī)溶劑用量少、環(huán)境污染小、能多次循環(huán)使用等特點(diǎn)，與我國(guó)當(dāng)前大力倡導(dǎo)的節(jié)能減排和循環(huán)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展方式相符合。⑷-和⑶-3-羥基戊二酸單酯(包括甲酯、乙酯等)是制備阿托伐他汀(Atorvastatin )、瑞舒伐他汀(Rosuvastatin )等他汀類藥物以及減肥健美類藥物左旋肉堿(L-carnitine)的關(guān)鍵中間體。目前，無論采用化學(xué)合成還是生物合成法，制備得到的都是0 )-和(5)-3-羥基戊二酸單酯的對(duì)映體混合產(chǎn)物。而且，研究人員運(yùn)用了包括高效液相色譜-手性柱等分離手段在內(nèi)的諸多分離分析方法，均不能對(duì)該對(duì)映體混合物進(jìn)行有效分離。因此，迄今為止，無法對(duì)0 )-和(5)-3-羥基戊二酸單酯的光學(xué)純度進(jìn)行有效的分析。通過在高效毛細(xì)管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構(gòu)建合適的手性選擇環(huán)境，利用其與對(duì)映異構(gòu)體之間的作用差異進(jìn)行分離。目前，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)還沒有應(yīng)用毛細(xì)管電泳分離0 )-和C )-3-羥基戊二酸單酯、以及分離檢測(cè)其光學(xué)純度的相關(guān)報(bào)道，本發(fā)明利用該技術(shù)建立了一種分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確性好的分析方法應(yīng)用于0 )-和C )-3-羥基戊二酸單酯的分離分析。
發(fā)明的內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，通過在高效毛細(xì)管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構(gòu)建合適的手性選擇環(huán)境，利用其與對(duì)映異構(gòu)體之間的作用差異進(jìn)行分離，具有分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是
一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，包括如下步驟1)用二次重蒸水配置濃度為O. Γ1. O mg/mL的3-羥基戊二酸單酯樣品溶液；2)配制pH為5^7的緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入濃度為(Γ50 mmol/L的手性選擇劑，超聲脫氣2(T40min，用O. 45 μ m微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續(xù)超聲脫氣l(T20min所得溶液為電泳緩沖液；3)使用高效毛細(xì)管電泳儀將步驟I)配制的3-羥基戊二酸單酯樣品溶液在毛細(xì)管電泳條件下，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使0 )-3-羥基戊二酸單酯和C )-3-羥基戊二酸單酯對(duì)映體實(shí)現(xiàn)基線分離。所述的3-羥基戊二酸單酯采用3-羥基戊二酸甲酯、3-羥基戊二酸乙酯、3-羥基戊二酸丙酯中的一種。所述的步驟2)中的緩沖溶液為磷酸鹽緩沖液。所述的手性選擇劑采用β -環(huán)糊精、羥甲基-β -環(huán)糊精、羥乙基-β -環(huán)糊精、羥丙基-β -環(huán)糊精中的一種。所述的毛細(xì)管電泳采用高效毛細(xì)管電泳儀，其電泳條件為分離電壓為1(T30 kv,柱溫2(T30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為190 250 nm，壓力進(jìn)樣為50 mbaX4S。本發(fā)明的有益效果是通過使用本發(fā)明提供的一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥 基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，通過在高效毛細(xì)管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構(gòu)建合適的手性選擇環(huán)境，利用其與對(duì)映異構(gòu)體之間的作用差異進(jìn)行分離，解決了高效液相色譜-手性柱法等傳統(tǒng)分離方法難以有效分離0 )-和C )-3-羥基戊二酸單酯對(duì)映體的難題，從而能夠?qū)? )-和C )-3-羥基戊二酸單酯的樣品的光學(xué)純度進(jìn)行正確測(cè)定。該方法具有分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、無污染、成本低以及易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。


圖I是本發(fā)明實(shí)施例I中0 )-和(5)-3-羥基戊二酸乙酯樣品的高效毛細(xì)管電泳分離具體實(shí)施例方式實(shí)施例I
下面結(jié)合具體詳細(xì)實(shí)例對(duì)本發(fā)明所采用的分離方法及其帶來的技術(shù)效果作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。I)用二次重蒸水配置濃度為O. 5 mg/mL的3_羥基戊二酸乙酯樣品溶液；2)配制pH為5. O的磷酸鹽緩沖溶液，在所述的磷酸鹽緩沖溶液中加入濃度為30 mmol/L的β -環(huán)糊精作為手性選擇劑，超聲脫氣30min，用O. 45 μ m微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續(xù)超聲脫氣IOmin所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟I)配制的3-羥基戊二酸乙酯樣品溶液在毛細(xì)管電泳條件下，(所用儀器為G1600AX型高效毛細(xì)管電泳儀(美國(guó)Agilent公司))，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使(K)- 3-羥基戊二酸乙酯和C )-3-羥基戊二酸乙酯對(duì)映體實(shí)現(xiàn)基線分離，所述的毛細(xì)管電泳條件為分離電壓為20 kV，柱溫25°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm，壓力進(jìn)樣為50 mbaX4S。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖I所示，⑵-和⑶_3_羥基戊二酸乙酯的保留時(shí)間分別為16. 20和16. 80min，完全達(dá)到了基線分離。通過使用本實(shí)施例的一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸乙酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，在高效毛細(xì)管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構(gòu)建合適的手性選擇環(huán)境，利用其與對(duì)映異構(gòu)體之間的作用差異進(jìn)行分離，解決了高效液相色譜-手性柱法等傳統(tǒng)分離方法難以有效分離0 )-和C )-3-羥基戊二酸乙酯對(duì)映體的難題，從而能夠?qū)? )-和C )-3-羥基戊二酸乙酯的樣品的光學(xué)純度進(jìn)行正確測(cè)定。該方法具有分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、無污染、成本低以及易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)施例2
I)用二次重蒸水配置濃度為I. Omg/mL的3-羥基戊二酸乙酯樣品溶液；2)配制pH為6. O的磷酸鹽緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入濃度為20 mmol/L的β -環(huán)糊精作為手性選擇劑，超聲脫氣40min，用O. 45 μ m微孔濾膜 過濾，過濾完畢繼續(xù)超聲脫氣20min所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟I)配制的3-羥基戊二酸乙酯樣品溶液在步驟3)所述的毛細(xì)管電泳條件下，(所用儀器為G1600AX型高效毛細(xì)管電泳儀(美國(guó)Agilent公司)，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使0 )- 3-羥基戊二酸乙酯和C )-3-羥基戊二酸乙酯對(duì)映體實(shí)現(xiàn)基線分離，分離度1 > 1.5以上。所述的毛細(xì)管電泳條件為分離電壓為25 kV，柱溫30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm，壓力進(jìn)樣為50 mbaX4S。通過使用本實(shí)施例的一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸乙酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，在高效毛細(xì)管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構(gòu)建合適的手性選擇環(huán)境，利用其與對(duì)映異構(gòu)體之間的作用差異進(jìn)行分離，解決了高效液相色譜-手性柱法等傳統(tǒng)分離方法難以有效分離(/ )_和C )-3-羥基戊二酸乙酯對(duì)映體的難題，從而能夠?qū)? )-和C )-3-羥基戊二酸乙酯的樣品的光學(xué)純度進(jìn)行正確測(cè)定。該方法具有分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、無污染、成本低以及易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。實(shí)施例3
I)用二次重蒸水配置濃度為O. 2mg/mL的3-羥基戊二酸甲酯樣品溶液；2)配制pH為
6.O的磷酸鹽緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入濃度為30mmol/L的羥乙基-β -環(huán)糊精作為手性選擇劑，超聲脫氣20min，用O. 45 μ m微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續(xù)超聲脫氣15min所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟I)配制的3-羥基戊二酸甲酯樣品溶液在步驟3)所述的毛細(xì)管電泳條件下，(所用儀器為G1600AX型高效毛細(xì)管電泳儀(美國(guó)Agilent公司))，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使0 )- 3-羥基戊二酸甲酯和C )-3-羥基戊二酸甲酯對(duì)映體實(shí)現(xiàn)基線分離，分離度R > 1.5以上。所述的毛細(xì)管電泳條件為分離電壓為30 kV，柱溫30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，壓力進(jìn)樣為50 mbaX4S。通過使用本實(shí)施例的一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸甲酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，在高效毛細(xì)管電泳緩沖液中加入手性選擇齊U，構(gòu)建合適的手性選擇環(huán)境，利用其與對(duì)映異構(gòu)體之間的作用差異進(jìn)行分離，解決了高效液相色譜-手性柱法等傳統(tǒng)分離方法難以有效分離0 )-和C )-3-羥基戊二酸甲酯對(duì)映體的難題，從而能夠?qū)? )-和C )-3-羥基戊二酸甲酯的樣品的光學(xué)純度進(jìn)行正確測(cè)定。該方法具有分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、無污染、成本低以及易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)施例4
I)用二次重蒸水配置濃度為O. lmg/mL的3-羥基戊二酸丙酯樣品溶液；2)配制pH為
7.O的磷酸鹽緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入濃度為20mmol/L的羥丙基-β -環(huán)糊精作為手性選擇劑，超聲脫氣20min，用O. 45 μ m微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續(xù)超聲脫氣IOmin所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟I)配制的3-羥基戊二酸丙酯樣品溶液在步驟3)所述的毛細(xì)管電泳條件下，(所用儀器為G1600AX型高效毛細(xì)管電泳儀(美國(guó)Agilent公司))，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使0 )- 3-羥基戊二酸丙酯和C )- 3-羥基戊二酸丙酯對(duì)映體實(shí)現(xiàn)基線分離，分離度R > 1.5以上。所述的毛細(xì)管電泳條件為分離電壓為30 kV，柱溫25°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，壓力進(jìn)樣為50 mbaX4S。通過使用本實(shí)施例的一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸丙酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，在高效毛細(xì)管電泳緩沖液中加入手性選擇齊U，構(gòu)建合適的手性選擇環(huán)境，利用其與對(duì)映異構(gòu)體之間的作用差異進(jìn)行分離，解決了高效液相色譜-手性柱法等傳統(tǒng)分離方法難以有效分離O )-和C )-3-羥基戊二酸丙酯對(duì)映體 的難題，從而能夠?qū)? )-和C )-3-羥基戊二酸丙酯的樣品的光學(xué)純度進(jìn)行正確測(cè)定。該方法具有分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、無污染、成本低以及易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。
權(quán)利要求
1.一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，其特征在于包括如下步驟I)用二次重蒸水配置濃度為0. ri. 0 mg/mL的3-羥基戊二酸單酯樣品溶液；2)配制pH為5 7的緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入濃度為(T50 mmol/L的手性選擇劑，超聲脫氣2(T40min，用0. 45 y m微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續(xù)超聲脫氣l(T20min，所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟I)配制的3-羥基戊二酸單酯樣品溶液在毛細(xì)管電泳條件下，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使0 )-3-羥基戊二酸單酯和C )-3-羥基戊二酸單酯對(duì)映體實(shí)現(xiàn)基線分離。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，其特征在于所述的3-羥基戊二酸單酯采用3-羥基戊二酸甲酯、3-羥基戊二酸乙酯、3-羥基戊二酸丙酯中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，其特征在于所述的步驟2)中的緩沖溶液為磷酸鹽緩沖液。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，其特征在于所述的手性選擇劑采用P -環(huán)糊精、羥甲基-P -環(huán)糊精、羥乙基-P -環(huán)糊精、羥丙基-￠-環(huán)糊精中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，其特征在于所述的毛細(xì)管電泳采用高效毛細(xì)管電泳儀，其電泳條件為分離電壓為10 30 kV，柱溫2(T30°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為190 250 nm，壓力進(jìn)樣為50 mbaX4S。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高效毛細(xì)管電泳分離3-羥基戊二酸單酯對(duì)映異構(gòu)體的方法，包括如下步驟1)配置3-羥基戊二酸單酯樣品溶液；2)配制pH為5~7的緩沖溶液，在所述的緩沖溶液中加入手性選擇劑，超聲脫氣，用微孔濾膜過濾，過濾完畢繼續(xù)超聲脫氣，所得溶液為電泳緩沖液；3)將步驟1)配制的3-羥基戊二酸單酯樣品溶液在毛細(xì)管電泳條件下，使用步驟2)制得的電泳緩沖液使(R)-3-羥基戊二酸單酯和(S)-3-羥基戊二酸單酯對(duì)映體實(shí)現(xiàn)基線分離。本發(fā)明通過在高效毛細(xì)管電泳緩沖液中加入手性選擇劑，構(gòu)建合適的手性選擇環(huán)境，利用其與對(duì)映異構(gòu)體之間的作用差異進(jìn)行分離，具有分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N27/447GK102798656SQ20121028700
公開日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2012年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月14日
發(fā)明者董華平, 徐新, 胡六江, 占林軍 申請(qǐng)人:紹興文理學(xué)院