采用毛細管電泳分離-二極管陣列檢測技術(shù)拆分外消旋2-氯丙酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種化合物的外消旋體的拆分方法，具體涉及一種采用毛細管電泳分離-二極管陣列檢測技術(shù)拆分外消旋2-氯丙酸的方法；本方法能從外消旋2-氯丙酸中拆分出R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸單體。
【背景技術(shù)】
[0002]2_氯丙酸(2-chloroprop1nic acid or 2-chloro- panoic acid)是合成農(nóng)藥、染料和農(nóng)林化學(xué)品的重要原料，它的應(yīng)用涉及國民經(jīng)濟的許多部門和人們的日常生活，是一種重要的精細化工產(chǎn)品。2-氯丙酸一直是大量除草劑的重要組成部分，這些除草劑從19世紀50年代以來就在農(nóng)業(yè)上廣泛使用。2-氯丙酸還用于生產(chǎn)消炎解熱鎮(zhèn)痛藥布洛芬、醫(yī)藥中間體2-丙氨酸以及農(nóng)藥中間體氯丙酸甲酯、氯丙酸乙酯等低級醇酯，也可用于生產(chǎn)乳酸。然而，由2-氯丙酸及其酯外消旋體為原料合成的農(nóng)藥和醫(yī)藥中間體，由于其含有低效或無效或有毒副作用的對映異構(gòu)體，可能以競爭性抑制劑的形式起作用，不僅會降低藥效，而且會加劇環(huán)境污染，降低農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量，還可能產(chǎn)生毒副作用，導(dǎo)致藥害或抗藥性的產(chǎn)生。
[0003]手性藥物的拆分目前常用的方法是色譜分離法，其中薄層色譜法簡便易普及，但其準確度較差；氣相色譜法分離效率高，檢測靈敏度高，但不足是待測物需具有易揮發(fā)且熱穩(wěn)定的性質(zhì)，目前手性毛細管柱種類少、成本高、涂層易水解；高效液相色譜法為目前占主導(dǎo)地位的手性分離方法，但手性液相色譜柱價格貴，柱效較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的是提供一種采用毛細管電泳分離-二極管陣列檢測技術(shù)拆分外消旋2-氯丙酸的方法；本方法可以達到基線分離R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸單體。本方法具有分離度好、成本低，操作簡便的特點。同時根據(jù)拆分得到的色譜圖峰面積可計算對映體過量值；并根據(jù)該值的大小對產(chǎn)品質(zhì)量進行監(jiān)控。
[0005]本發(fā)明采用的技術(shù)方案包括下述步驟:
Cl)緩沖溶液的配制:將濃度為100-150 mmol/L的磷酸溶液，用0.2-0.4 mo I/L的Tris緩沖液調(diào)節(jié)至pH 6.0-8.0，即得;
(2)電泳運行緩沖溶液配制:將手性拆分劑、有機溶劑和陽離子表面活性劑分別加入到步驟(I)所配制的緩沖溶液中，超聲混勻，即得毛細管電泳運行緩沖溶液；所述手性拆分劑為環(huán)糊精或2-ΗΡ-β-⑶，其濃度在緩沖溶液中分別為β-環(huán)糊精25 mmol/L或
2-HP-f3-CD 110 mmol/L;所述有機溶劑為甲醇、無水乙醇或乙腈中的一種，在緩沖溶液中的體積分數(shù)為3%-10% ;所述的陽離子表面活性劑為CTAB，其在緩沖溶液中的濃度為0.2mmol /I,；
(3)R/S-氯丙酸的標準儲備液:用超純水分別配制R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸標準儲備液，濃度為20-50 mmol/ L，儲存于-5°C冰箱中備用；
(4)待拆分樣品的前處理:取外消旋2-氯丙酸粗品50ml，減壓蒸餾得2-氯丙酸純品，-5 0C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> (5)R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸保留時間的測定:取步驟(3)所配制的R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸標準儲備液，稀釋至1.0 mmol/ L，分別進樣進行分離，即得到R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸保留時間參數(shù)；
(6)拆分外消旋2-氯丙酸產(chǎn)品:取步驟(4)所得2-氯丙酸純品稀釋至1.0 mmol/ L，以步驟(2)配制的電泳運行緩沖溶液作為電泳介質(zhì)進樣拆分，可得R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸單體；根據(jù)色譜圖峰面積可計算對映體過量值；并根據(jù)該值的大小對產(chǎn)品質(zhì)量進行監(jiān)控。
[0006]上述步驟中，優(yōu)選磷酸濃度為150 mmol/L ;優(yōu)選Tris緩沖液的濃度為0.33 mol/L，優(yōu)選緩沖溶液的pH值為7.0。
[0007]優(yōu)選手性拆分劑為羥丙基環(huán)糊精，其在緩沖溶液中的濃度為110 mmol/L ;優(yōu)選有機溶劑為乙腈，在緩沖溶液中其體積分數(shù)為5%。所述的陽離子表面活性劑為CTAB，其在緩沖溶液中的濃度為0.2 mmol/L ；
步驟(3)中所配制的R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸標準儲備液，濃度為30mmol/ L。
[0008]步驟(4)中所述的減壓蒸餾的壓力為1.6 Kpa，收集2-氯丙酸純品的溫度為82-85。。。
[0009]所述電泳運行緩沖溶液使用前用0.22 μπι濾膜過濾；所述毛細管為未涂層熔融硅膠石英毛細管，總長度為63 cm，到檢測窗的有效長度為55 cm，毛細管內(nèi)徑75 μ m，外徑375 μ m;檢測波長202 nm，進樣壓力0.5psi，進樣時間5秒，分離電壓25千伏，柱溫20°C，連續(xù)進樣期間毛細管分別用1.0 mol/ L的氫氧化鈉沖洗5分鐘，蒸餾水沖洗3分鐘，電泳緩沖液沖洗10分鐘。
[0010]本發(fā)明綜合考察實驗條件對R/S-2-氯丙酸兩種型體分離度，以及保留時間、峰面積重現(xiàn)性等參數(shù)的影響，對實驗條件進行優(yōu)選。試驗證明，在優(yōu)選條件下分離效果最好。
[0011]本發(fā)明方法優(yōu)選的步驟如下:
(I)緩沖溶液的配制:將150 mmol/L的磷酸溶液，用0.33 mol/L的Tris調(diào)節(jié)至pH值為 7.0o
[0012](2)電泳運行緩沖溶液配制:將手性拆分劑2-ΗΡ-β -CD，有機溶劑乙腈和陽離子表面活性劑CTAB加入到步驟(I)所配緩沖溶液中，超聲混勻，使得2-ΗΡ- β -CD在緩沖溶液中濃度為110 mmol/L,乙腈在緩沖溶液中體積分數(shù)為5%，CTAB在緩沖溶液中濃度為0.2mmol /I,；
(3)R/S-氯丙酸的標準儲備液:用超純水分別配制R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸標準儲備液，濃度為30 mmol/ L，儲存于-5°C冰箱中備用；
(4)待拆分樣品的前處理:取外消旋2-氯丙酸粗品，減壓蒸餾得2-氯丙酸純品，-50C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> (5)R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸保留時間的測定:取步驟(3)所配制的R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸標準儲備液，稀釋至1.0 mmol/ L，分別進樣進行分離，即得到R-2-氯丙酸和
S-2-氯丙酸保留時間參數(shù)； (6)拆分外消旋2-氯丙酸產(chǎn)品:取步驟(4)所得2-氯丙酸純品稀釋至1.0 mmol/ L，以步驟(2)配制的電泳運行緩沖溶液作為電泳介質(zhì)進樣拆分，可得R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸單體；根據(jù)色譜圖峰面積可計算對映體過量值；并根據(jù)該值的大小對產(chǎn)品質(zhì)量進行監(jiān)控。
[0013](7)拆分使用未涂層熔融硅膠石英毛細管，毛細管的總長度為63 cm，到檢測窗的有效長度為55 cm，毛細管內(nèi)徑75 ym，外徑375 μ m，(新毛細管要依次用甲醇，蒸餾水，0.1 mol/ L的鹽酸，蒸餾水，1.0 mol/ L的氫氧化鈉，蒸餾水各沖洗10分鐘)檢測波長202nm,進樣壓力0.5psi,進樣時間5秒，分離電壓25千伏，柱溫20°C，連續(xù)進樣時，兩實驗中間毛細管分別用1.0 mol/ L的氫氧化鈉沖洗5分鐘，蒸餾水沖洗3分鐘，電泳緩沖液沖洗10分鐘。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，主要特點體現(xiàn)在:本發(fā)明首次采用毛細管電泳拆分外消旋2-氯丙酸；毛細管電泳技術(shù)通常采用構(gòu)建手性環(huán)境實現(xiàn)手性分離。而毛細管電泳中構(gòu)建手性環(huán)境主要通過添加手性選擇劑的方法來實現(xiàn)。只需將優(yōu)選的手性選擇劑加入到緩沖體系中，通過優(yōu)化分離條件，達到手性分離，該方法操作簡單、方便、快速、高效。采用二極管陣列檢測技術(shù)，可以依據(jù)其吸收光譜曲線對化合物結(jié)構(gòu)作定性判斷。
[0015]本方法可以達到基線分離R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸單體，具有分離度好、成本低，操作簡便的特點，為藥物生產(chǎn)中控及藥物產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)控提供了保障。
【附圖說明】
[0016]圖1為R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸拆分色譜圖。
【具體實施方式】
[0017]實施例1
(I)緩沖溶液的配制:將濃度為150 mmol/L的磷酸溶液，用0.33 mol/L的Tris緩沖液調(diào)節(jié)至pH 7.0，即得；
(2)電泳運行緩沖溶液配制:將手性拆分