專利名稱：通過毛細(xì)管電泳分離蛋白質(zhì)的方法和毛細(xì)管電泳用的緩沖組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過毛細(xì)管電泳分離蛋白質(zhì)和肽的方法和用于這種分離的含一種添加劑的緩沖組合物。
為了診斷目的而分析生物液如血清中的蛋白質(zhì)，尤其是經(jīng)常通過電泳，或者凝膠電泳或者毛細(xì)管電泳，分離蛋白質(zhì)。毛細(xì)管電泳的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于分析時(shí)僅需要微量的生物液。而且，由于可以使用高電壓，并且在分離期間樣品不用加熱到太高溫度，因此使用該技術(shù)可以非?？焖俚剡M(jìn)行分離。
為了分離血液蛋白，常用堿性緩沖液進(jìn)行毛細(xì)管電泳。通常，獲得的蛋白質(zhì)圖譜含有5或6種成分，即白蛋白成分、α1和α2球蛋白成分、β球蛋白成分或β1和β2球蛋白成分、和γ球蛋白成分。
可以借助于例如美國再授權(quán)專利US-Re-36011或歐洲專利EP-A-0518475中所述的那些緩沖體系和技術(shù)使用毛細(xì)管電泳進(jìn)行這種分離。
然而，時(shí)至今日，通過毛細(xì)管電泳分離白蛋白和α1球蛋白還不太令人滿意。
本申請(qǐng)人現(xiàn)已證實(shí)，提高分離，尤其是白蛋白/α1球蛋白分離，可以通過將一種添加劑用于所述緩沖體系中實(shí)現(xiàn)，所述添加劑含有pH大于9的陰離子極和疏水部分。這種添加劑能夠與一種或多種蛋白質(zhì)組分疏水相互作用并且還能夠使所述蛋白質(zhì)組分具有1個(gè)或多個(gè)負(fù)電荷并且能夠改進(jìn)電泳遷移率。
因此，本發(fā)明涉及一種堿性pH、自由溶液毛細(xì)管電泳分析含蛋白質(zhì)組分的樣品的方法，其中將所述樣品加入到含有緩沖體系的毛細(xì)管中，所述緩沖體系還含有至少一種添加劑，所述添加劑能夠與一種或多種蛋白質(zhì)組分疏水相互作用并且能夠使所述蛋白質(zhì)組分具有1個(gè)或多個(gè)負(fù)電荷并且能夠改進(jìn)電泳遷移率。該步驟之后通過遷移分離蛋白質(zhì)組分并測(cè)定這些組分。
本發(fā)明還涉及一種在緩沖體系中電泳分離含有白蛋白和以下成分α1、α2、β(或β1和β2)、和γ球蛋白的樣品中的蛋白質(zhì)組分的方法，其中所述緩沖體系含有另外一種添加劑，所述添加劑至少能夠與所述白蛋白疏水相互作用。
本發(fā)明還涉及一種通過堿性pH、自由溶液毛細(xì)管電泳進(jìn)行電泳分離液體樣品中的蛋白質(zhì)組分的方法，在該方法中將含有所述組分的樣品通過含緩沖體系的毛細(xì)管，所述緩沖體系還含有至少一種添加劑，所述添加劑是一種含有pH大于9的陰離子極和疏水部分的化合物。
能夠用作本發(fā)明毛細(xì)管電泳緩沖體系中的添加劑的化合物能夠與白蛋白疏水相互作用；這些化合物例如可以是陰離子表面活性劑如用于MECC(膠束動(dòng)電毛細(xì)管色譜法)中的那些，但是濃度低于其臨界膠束濃度。在本發(fā)明中，我們以自由溶液CE使用這些化合物通過白蛋白的疏水殘基與這些化合物的疏水部分之間的疏水相互作用所述化合物使白蛋白帶負(fù)電荷，因此與其它蛋白質(zhì)的遷移率相比白蛋白的遷移率降低。結(jié)果提高了從α1成分中分離白蛋白。
最后，本發(fā)明涉及用于毛細(xì)管電泳的電解組合物，所述組合物是在適宜載體中含有至少一種緩沖液和一種能夠與白蛋白疏水相互作用的添加劑。
從這些實(shí)施例中將清楚地看到，使用本發(fā)明的添加劑使得白蛋白和α1球蛋白成分的分離提高。與常規(guī)緩沖液相比還提高了這兩種成分之間的基線返回。
由參照附圖和實(shí)施例的以下詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將顯而易見。


圖1顯示了使用甘氨酸緩沖液通過毛細(xì)管電泳分析正常人血清的電泳圖譜。
圖2顯示了使用含有本發(fā)明添加劑的相同甘氨酸緩沖液通過毛細(xì)管電泳分析正常人血清的電泳圖譜。
圖3顯示了使用硼酸鹽緩沖液通過毛細(xì)管電泳分析正常人血清的電泳圖譜。
圖4顯示了使用含有本發(fā)明添加劑的相同硼酸鹽緩沖液通過毛細(xì)管電泳分析正常人血清的電泳圖譜。
圖5顯示了通過瓊脂糖凝膠電泳獲得的正常人血清的電泳圖譜。
圖6顯示了使用甘氨酸緩沖液通過毛細(xì)管電泳獲得的來自急性炎性綜合癥患者的血清的電泳圖譜。
圖7顯示了使用含有本發(fā)明添加劑的甘氨酸緩沖液通過毛細(xì)管電泳獲得的來自急性炎性綜合癥患者的血清的電泳圖譜。
圖8顯示了使用硼酸鹽緩沖液通過毛細(xì)管電泳獲得的來自急性炎性綜合癥患者的血清的電泳圖譜。
圖9顯示了使用含有本發(fā)明添加劑的硼酸鹽緩沖液通過毛細(xì)管電泳獲得的來自急性炎性綜合癥患者的血清的電泳圖譜。
圖10顯示了通過瓊脂糖凝膠電泳獲得的來自急性炎性綜合癥患者的血清的電泳圖譜。
圖11顯示了相對(duì)于加入到硼酸鹽緩沖液的不同碳鏈長度的烷基磺酸鹽的α1球蛋白成分和白蛋白成分的遷移率。
可以引用的能夠與白蛋白的疏水部分相互作用的本發(fā)明緩沖液的添加劑是含有pH大于9的陰離子極和疏水部分的化合物。所述疏水部分可以由至少一個(gè)烷基鏈組成，它可以經(jīng)過支化或者可以不經(jīng)支化，含有4-22個(gè)碳原子，尤其是4-20個(gè)碳原子，和/或至少1-10個(gè)環(huán)的組合，所述環(huán)可以是芳香環(huán)或者可以不是芳香環(huán)。優(yōu)選使用1-4個(gè)環(huán)的組合。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易地理解，該疏水部分例如可以含有基本上不改變其疏水性能的殘基或官能團(tuán)，例如一個(gè)或多個(gè)羥基或胺官能團(tuán)。
所述陰離子極可以由來自以下的一個(gè)或多個(gè)化學(xué)基團(tuán)或官能團(tuán)構(gòu)成磺酸鹽、羧酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽。
尤其可以引用以下的膽酸鹽型陰離子表面活性劑、C6-C22烷基單、二或三磺酸鹽、十四碳烯磺酸鹽、萘磺酸鹽、C6-C22烷基單、二或三羧酸鹽、萘羧酸鹽、C6-C22烷基羧基硫酸鹽、C4-C14烷基硫酸鹽、苯磺酸鹽、C4-C14烷基碳酸鹽、苯甲酸鹽和兩性離子生物緩沖液。
上述二和三羧酸鹽、二和三磺酸鹽與在羧基磺酸鹽因此是一或多個(gè)羧酸根或磺酸根官能團(tuán)與C6-C22烷基鏈的組合形式。作為非限制性實(shí)例，可以列舉含有3個(gè)羧酸根官能團(tuán)和一個(gè)C19鏈的1，2，3-十九烷三羧酸、含有一個(gè)羧酸根官能團(tuán)一個(gè)磺酸根官能團(tuán)和一個(gè)C18鏈的2-甲基-2-磺基十八烷酸以及含有2個(gè)羧酸根官能團(tuán)和一個(gè)C12鏈的1，12-十二烷二羧酸。
更確切地，可以列舉選自C6-C22烷基單、二或三烷基磺酸鹽的C6-C10烷基磺酸鹽與選自C6-C22烷基單、二或三羧酸鹽的C6-C14烷基羧酸鹽。
在上面的名稱中，烷基殘基優(yōu)選為直鏈。
可以引用作為添加劑的具體的兩性離子生物緩沖液是CAPS(3-環(huán)己基氨基-1-丙磺酸)和CHES(2-(N-環(huán)己基氨基)乙磺酸)，但是也可以將其它兩性離子生物緩沖液用于本發(fā)明上下文中。
按照本發(fā)明，其它兩性離子生物緩沖液也適用于本發(fā)明。氨基酸緩沖液卻不構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
上面引用的添加劑中優(yōu)選是C6-C10烷基磺酸鹽，并且C6-C10烷基磺酸鹽中優(yōu)選辛磺酸鹽。
這些化合物本身為已知并且可以商購獲得。它們可以是酸或鹽形式。
術(shù)語“本發(fā)明的樣品”意思是待分析的生物樣品，例如用適宜的稀釋溶液或緩沖體系稀釋過，或者是純的。
分析用的樣品可以是來自健康人或患者的任何生物液體。人生物液可以是正?；虍惓Ｑ?，并且還可以是溶血的血清、血漿、尿、或者腦脊液。除了人生物樣品之外，還可以分析動(dòng)物源的樣品。樣品也可以是合成蛋白質(zhì)，并且例如本發(fā)明的方法計(jì)劃用于生產(chǎn)對(duì)照。
本發(fā)明的添加劑具體用于分析血清，并用于分離來自人的樣品中的血液蛋白。
在血樣中，待分離的血液蛋白主要是白蛋白和α1、α2、β(或β1和β2)、和γ球蛋白成分。
所述緩沖體系可以是適用于所需分離的任何已知緩沖體系，用于一般電泳并且具體地說是毛細(xì)管電泳。可以引用的實(shí)例是硼酸鹽、磷酸鹽和碳酸鹽緩沖液、以氨基酸為基礎(chǔ)的緩沖液和已知為生物緩沖液的緩沖液。
可以引用的生物緩沖液的實(shí)例是如下已知的那些雙-TRIS(2-二[2-羥基乙基]氨基-2-羥基甲基-1，3-丙二醇)、ADA(N-[2-乙酰氨基]-2-亞氨二醋酸)、ACES(2-[2-乙酰氨基]-2-氨基乙磺酸)、PIPES(1，4-哌嗪二乙磺酸)、MOPSO(3-[N-嗎啉基]-2-羥基丙磺酸)、雙-TRIS PROPANE(1，3-二[三(羥基甲基)甲基氨基丙烷])、BES(N，N-二[2-羥基乙基]-2-氨基乙磺酸)、MOPS(3-[N-嗎啉基]丙磺酸)、TES(2-[2-羥基-1，1-二(羥基甲基)乙基氨基]乙磺酸)、HEPES(N-[2-羥基乙基]哌嗪-N’-(2-乙磺)酸)、DIPSO(3-N，N-二[2-羥基乙基]氨基-2-羥基丙磺酸)、MOBS(4-N-嗎啉基丁磺酸)、TAPSO(3[N-三-羥基甲基-甲基氨基]-2-羥基丙磺酸)、TRIS(2-氨基-2-[羥基甲基]-1，3-丙二醇)、HEPPSO(N-[2-羥基乙基]哌嗪-N’-[2-羥基丙磺]酸)、POPSO(哌嗪-N，N’-二[2-羥基丙磺]酸)、TEA(三乙胺)、EPPS(N-[2-羥基乙基]-哌嗪-N’-[3-丙磺]酸)、TRICINE(N-三[羥基甲基]甲基甘氨酸)、GLY-GLY(二甘氨酸)、BICINE(N，N-二[2-羥基乙基]甘氨酸)、HEPBS(N-[2-羥基乙基]哌嗪-N’-[4-丁磺]酸)、TAPS(N-三[羥基甲基]甲基-3-氨基丙磺酸)、AMPD(2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇)、TABS(N-三[羥基甲基]甲基-4-氨基丁磺酸)、AMPSO(3-[(1，1-二甲基-2-羥基乙基)氨基]-2-羥基丙磺酸)、CHES(2-(N-環(huán)己基氨基)乙磺酸)、CAPSO(3-[環(huán)己基氨基]-2-羥基-1-丙磺酸)、AMP(2-氨基-2-甲基-1-丙醇)、CAPS(3-環(huán)己基氨基-1-丙磺酸)和CABS(4-[環(huán)己基氨基]-1-丁磺酸)，優(yōu)選AMPD、TABS、AMPSO、CHES、CAPSO、AMP、CAPS或CABS。
含有所述添加劑的生物液體的緩沖體系中的pH可以是2-12。然而，就堿性pH毛細(xì)管電泳而言，其pH是8-12，優(yōu)選9-11，更優(yōu)選是約10。
本發(fā)明的緩沖體系也可以含有至少一種pH調(diào)節(jié)化合物。所述pH調(diào)節(jié)化合物可以是選自以下的化合物氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銣、氫氧化銫、氫氧化鈁、或在烷基部分中含有1-8個(gè)碳原子的氫氧化一、二、三或四烷基銨。
根據(jù)本發(fā)明，所述生物緩沖液在常規(guī)條件下以緩沖體系的濃度級(jí)別為10-500mM，優(yōu)選20-400mM下使用。
本發(fā)明的添加劑以0.1mM-500mM的濃度使用，然而不超過其在緩沖體系中的臨界膠束濃度。
臨界膠束濃度的值可用于為表面活性劑的添加劑。
當(dāng)使用辛磺酸鹽時(shí)，其在緩沖液中的濃度是1-5mM，優(yōu)選1-4mM，更優(yōu)選其濃度是約2.5mM。
在本發(fā)明的方法中，緩沖體系也可以含有硫酸鈉。
本發(fā)明的緩沖組合物是以制備緩沖體系組合物時(shí)為正常的方式下制備的，即通過將這些組分以液體形式加入，或者作為待稀釋的固體加入到可接收的載體中。通常，所述載體是經(jīng)過蒸餾的或者經(jīng)過軟化的水。
用于毛細(xì)管的材料是日常用于毛細(xì)管電泳的那些?？梢允褂脙?nèi)徑為5-2000μm的熔融二氧化硅毛細(xì)管。優(yōu)選使用內(nèi)徑低于200μm，更優(yōu)選低于100μm的毛細(xì)管。優(yōu)選使用內(nèi)表面未處理過的毛細(xì)管。熟練人員能夠使用與分析需要相適應(yīng)的毛細(xì)管的性能和大小。
實(shí)施例材料和方法A)毛細(xì)管電泳(方法A)使用配備有內(nèi)徑為25μm的熔融二氧化硅毛細(xì)管的CE設(shè)備對(duì)臨床樣品進(jìn)行毛細(xì)管電泳。在200nm下進(jìn)行測(cè)定。將這些樣品放置在設(shè)備的樣品交換器中并通過液體動(dòng)力注射自動(dòng)注射(50mbar，7秒鐘)。在10分鐘內(nèi)通過施加約400V/cm的電場(chǎng)將樣品分離。在每次分析之前將毛細(xì)管用0.5M氫氧化鈉洗滌，然后用緩沖體系洗滌。
緩沖體系
使用分析級(jí)化學(xué)物質(zhì)。
150mM甘氨酸緩沖液是通過將11.26g的甘氨酸(摩爾質(zhì)量75.07g/mol)溶于1升(1)軟化水中制備的。最終濃度是150mM并通過加入氫氧化鈉顆粒(摩爾質(zhì)量40.0g/mol)將其pH調(diào)整至10.0。
150mM硼酸鹽緩沖液是通過將9.3g的硼酸(摩爾質(zhì)量61.83g/mol)溶于1升軟化水和5.1g的氫氧化鈉(摩爾質(zhì)量40.0g/mol)中制備的。最終濃度是150mM并且其pH是10.0。
B)瓊脂糖凝膠電泳(方法B)使用瓊脂糖凝膠進(jìn)行血液蛋白質(zhì)的對(duì)比分析。將10μl血清載入歐洲專利EP-A-0493996、US-A-5464515和US-A-5405516中所述膜敷料器的每一孔中。然后將負(fù)荷的敷料器施加到瓊脂糖凝膠的表面上持續(xù)30秒鐘。在20W的功率下使用能夠?qū)囟日{(diào)節(jié)到20℃的儀器將涂敷到該瓊脂糖凝膠上的樣品通過電泳分離約7.5分鐘。遷移之后，將凝膠干燥并用酸性黑染色。染色之后，將凝膠脫色并且再次干燥。然后通過測(cè)光密度術(shù)分析這些凝膠以產(chǎn)生蛋白質(zhì)圖譜。
C)臨床樣品就該CE而言，在緩沖體系中將人血清稀釋至1/10倍。
實(shí)施例1(對(duì)比)如上所述制備甘氨酸緩沖體系。分析正常血清。
使用上面的方法A進(jìn)行電泳。
從圖1可以看出，獲得的電泳圖譜呈現(xiàn)5個(gè)連續(xù)峰，從左至右讀取分別屬于γ、β、α2、α1球蛋白和白蛋白成分。
實(shí)施例2將辛磺酸鹽以2.5mM的濃度加入到實(shí)施例1的緩沖體系中。
如實(shí)施例1中所述進(jìn)行電泳。
從圖2可以看出，獲得的電泳圖譜呈現(xiàn)5個(gè)連續(xù)峰，分別屬于γ、β、α2、α1球蛋白和白蛋白成分。與實(shí)施例1的結(jié)果比較后顯示在兩個(gè)成分-α1球蛋白和白蛋白之間的分離大大提高，并且向基線的返回提高。
實(shí)施例3(對(duì)比)按照實(shí)施例1的步驟，緩沖體系是如上所述制備的硼酸鹽緩沖液。
如實(shí)施例1所述進(jìn)行電泳。
從圖3可以看出，獲得的電泳圖譜呈現(xiàn)6個(gè)連續(xù)峰，分別屬于γ、β2、β1、α2、α1球蛋白和白蛋白成分。
實(shí)施例4將辛磺酸鹽以2.5mM的濃度加入到實(shí)施例4的緩沖體系中。
如實(shí)施例1中所述進(jìn)行電泳。
從圖4可以看出，獲得的電泳圖譜呈現(xiàn)6個(gè)連續(xù)峰，分別屬于γ、β2、β1、α2、α1球蛋白和白蛋白成分。在兩個(gè)成分-α1球蛋白和白蛋白之間的分離大大提高，并且向基線的返回提高。
實(shí)施例5(對(duì)比)圖5的電泳圖譜是使用上面的方法B通過分析與前面實(shí)施例中相同的血清獲得的。與實(shí)施例2和4中獲得的結(jié)果比較后顯示，這些實(shí)施可以產(chǎn)生大體上與用瓊脂糖凝膠獲得的分辨率相類似的分辨率。
實(shí)施例6(對(duì)比)制備150mM甘氨酸緩沖體系。
對(duì)具有高α1和α2球蛋白含量的血清進(jìn)行分析。
如實(shí)施例1中所述進(jìn)行電泳。
從圖6可以看出，獲得的電泳圖譜呈現(xiàn)5個(gè)連續(xù)峰，分別屬于γ、β、α2、α1球蛋白和白蛋白成分。
實(shí)施例7將辛磺酸鹽以2.5mM的濃度加入到實(shí)施例7的緩沖體系中。
如實(shí)施例6中所述進(jìn)行電泳。
從圖7可以看出，獲得的電泳圖譜呈現(xiàn)5個(gè)連續(xù)峰，分別屬于γ、β、α2、α1球蛋白和白蛋白成分。與實(shí)施例6的結(jié)果比較顯示，在兩個(gè)成分-α1球蛋白和白蛋白之間的分離大大提高，并且向基線的返回提高。
實(shí)施例8(對(duì)比)
按照實(shí)施例6的步驟，緩沖液是150mM硼酸鹽緩沖液。
如實(shí)施例6所述進(jìn)行電泳。
從圖8可以看出，獲得的電泳圖譜呈現(xiàn)6個(gè)連續(xù)峰，分別屬于γ、β2、β1、α2、α1球蛋白和白蛋白成分。
實(shí)施例9將辛磺酸鹽以2.5mM的濃度加入到實(shí)施例8的緩沖體系中。
如實(shí)施例6中所述進(jìn)行電泳。
從圖9可以看出，在相同條件下獲得的電泳圖譜呈現(xiàn)6個(gè)連續(xù)峰，分別屬于γ、β2、β1、α2、α1球蛋白和白蛋白成分。在兩個(gè)成分-α1球蛋白和白蛋白之間的分離大大提高，并且向基線的返回提高。所述α1成分可以看到是由2個(gè)峰組成的，其中一個(gè)相應(yīng)于血清類粘蛋白，并且在沒有辛磺酸鹽的情況下與白蛋白峰合并。
實(shí)施例10(對(duì)比)圖10的電泳圖譜是使用上面的方法B通過分析與實(shí)施例6-9中相同的血清獲得的。與實(shí)施例7和9中獲得的結(jié)果比較后顯示，這些實(shí)施可以產(chǎn)生大體上與用瓊脂糖凝膠獲得的分辨率類似的分辨率。
實(shí)施例11α1球蛋白和白蛋白的比較的遷移率(mn-1)是使用上面的方法A在pH為10的硼酸鹽緩沖液(150mM)中測(cè)定的。將烷基鏈長度(n)增加的烷基磺酸鹽(n代表4、6、8和10，分別相應(yīng)于C4、C6、C8和C10，并且n＝0相應(yīng)于緩沖液中沒有烷基磺酸鹽)以2.5mM的濃度加入硼酸鹽緩沖液中。計(jì)算α1成分和白蛋白成分的遷移率并顯示在圖11的圖形上。超過C6鏈可以看到，與α1成分(◆)相比白蛋白(■)的遷移率大大下降。
權(quán)利要求
1.一種堿性pH、自由溶液毛細(xì)管電泳分析含蛋白質(zhì)組分的樣品的方法，其特征在于它包括至少一個(gè)步驟，其中將所述樣品加入到含有分析緩沖體系的毛細(xì)管中，所述分析緩沖體系還含有至少一種添加劑，所述添加劑能夠與一種或多種蛋白質(zhì)組分疏水相互作用并且能夠使所述蛋白質(zhì)組分具有1個(gè)或多個(gè)負(fù)電荷并且能夠改進(jìn)電泳遷移率。
2.如權(quán)利要求1的方法，其特征在于它還包括通過遷移分離蛋白質(zhì)組分并測(cè)定這些組分。
3.如權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于所述樣品是生物樣品。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述樣品是血清、溶血的血液、血漿、尿或腦脊液。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述組分是血液蛋白。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述組分是白蛋白和α1、α2、β、或β1、β2和γ球蛋白成分。
7.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述添加劑含有pH大于9的陰離子極和疏水部分。
8.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述添加劑含有一疏水部分和陰離子極，所述疏水部分由至少一個(gè)含有4-22個(gè)碳原子的支鏈或非支鏈烷基鏈，和/或至少一種1-10個(gè)環(huán)的組合組成，所述環(huán)可以是芳香環(huán)或者可以不是芳香環(huán)，所述陰離子極由來自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)構(gòu)成磺酸根、羧酸根、硫酸根、磷酸根和碳酸根。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述添加劑選自膽酸鹽型陰離子表面活性劑、C6-C22烷基單、二或三磺酸鹽、十四碳烯磺酸鹽、萘磺酸鹽、C6-C22烷基單、二或三羧酸鹽、萘羧酸鹽、C6-C22烷基羧基硫酸鹽、C4-C14烷基硫酸鹽、苯磺酸鹽、C4-C14烷基碳酸鹽、苯甲酸鹽和兩性離子生物緩沖液。
10.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述添加劑選自膽酸鹽型陰離子表面活性劑、C6-C22烷基單、二或三磺酸鹽、十四碳烯磺酸鹽、萘磺酸鹽、C6-C22烷基單、二或三羧酸鹽、萘羧酸鹽、C6-C22烷基羧基硫酸鹽、C4-C14烷基硫酸鹽、苯磺酸鹽、C4-C14烷基碳酸鹽、苯甲酸鹽。
11.如權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述添加劑是C6-C10烷基磺酸鹽。
12.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述添加劑是辛磺酸鹽。
13.如權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述添加劑在緩沖液中的濃度是0.1mM-500mM，如果適當(dāng)?shù)脑挷怀^所述添加劑在所述緩沖液中的臨界膠束濃度。
14.如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述添加劑在所述緩沖液中的濃度是1-5mM。
15.如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述添加劑在所述緩沖液中的濃度約為2.5mM。
16.如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述分析緩沖體系的pH是9-11。
17.如權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述毛細(xì)管是熔融二氧化硅。
18.如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述分析緩沖體系還含有至少一種pH調(diào)節(jié)劑。
19.如權(quán)利要求18的方法，其特征在于所述pH調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銣、氫氧化銫、氫氧化鈁、或在烷基部分中含有1-8個(gè)碳原子的氫氧化一、二、三或四烷基銨。
20.一種在緩沖體系中電泳分離含有白蛋白和以下成分α1、α2、β或β1和β2、和γ球蛋白的樣品中的蛋白質(zhì)組分的方法，在該方法中將含有所述組分的所述樣品通過含分析緩沖體系的毛細(xì)管，所述緩沖體系還含有至少一種能夠與所述白蛋白疏水相互作用的添加劑。
21.一種通過堿性pH、自由溶液毛細(xì)管電泳以電泳分離液體樣品中的蛋白質(zhì)組分的方法，在該方法中將含有所述組分的樣品通過含分析緩沖體系的毛細(xì)管，所述分析緩沖體系還含有至少一種添加劑，所述添加劑是一種含有pH大于9的帶有負(fù)電的陰離子極和疏水部分的化合物。
22.如權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述分析緩沖體系還含有硫酸鈉。
23.一種用于毛細(xì)管電泳的電解組合物，其特征在于它是在適宜載體中含有至少一種緩沖液和至少一種能夠與白蛋白疏水相互作用的添加劑。
24.一種用于毛細(xì)管電泳的組合物，其特征在于它含有至少一種分析緩沖體系和添加劑，所述添加劑含有一疏水部分和陰離子極，所述疏水部分由至少一個(gè)含有4-22個(gè)碳原子的支鏈或非支鏈烷基鏈和/或至少一種1-10個(gè)環(huán)的組合組成，所述環(huán)可以是芳香環(huán)或者可以不是芳香環(huán)，所述陰離子極由來自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)構(gòu)成磺酸根、羧酸根、硫酸根、磷酸根和碳酸根。
25.如權(quán)利要求24的用于毛細(xì)管電泳的組合物，其特征在于所述添加劑選自膽酸鹽型陰離子表面活性劑、C6-C22烷基單、二或三磺酸鹽、十四碳烯磺酸鹽、萘磺酸鹽、C6-C22烷基單、二或三羧酸鹽、萘羧酸鹽、C6-C22烷基磺酸鹽、C4-C14烷基碳酸鹽、C4-C14烷基硫酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽和兩性離子生物緩沖液。
26.如權(quán)利要求24的用于毛細(xì)管電泳的組合物，其特征在于所述添加劑選自膽酸鹽型陰離子表面活性劑、C6-C22烷基單、二或三磺酸鹽、十四碳烯磺酸鹽、萘磺酸鹽、C6-C22烷基單、二或三羧酸鹽、萘羧酸鹽、C6-C22烷基磺酸鹽、C4-C14烷基碳酸鹽、C4-C14烷基硫酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽。
27.如權(quán)利要求23-26中任一項(xiàng)的組合物，其特征在于所述添加劑是C6-C10烷基磺酸鹽。
28.如權(quán)利要求23-27中任一項(xiàng)的組合物，其特征在于所述添加劑是辛磺酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種堿性pH、自由溶液毛細(xì)管電泳分析含蛋白質(zhì)組分的生物樣品的方法。所述方法其特征在于它包括至少一個(gè)步驟，其中將所述樣品加入到含有分析緩沖液的毛細(xì)管中，所述分析緩沖液還含有至少一種添加劑，所述添加劑能夠與一種或多種蛋白質(zhì)組分疏水相互作用并且能夠使所述蛋白質(zhì)組分具有1個(gè)或多個(gè)負(fù)電荷并且能夠改進(jìn)其電泳遷移率。本發(fā)明還涉及用于進(jìn)行這種方法的分析緩沖液組合物。
文檔編號(hào)G01N27/447GK1630816SQ02800134
公開日2005年6月22日 申請(qǐng)日期2002年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月19日
發(fā)明者G·諾瓦德耶, F·羅伯特 申請(qǐng)人:莎碧亞公司