專利名稱：一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種液相色譜分離系統(tǒng)，特別是關(guān)于一種多維分離復(fù)雜組分的全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
氣相色譜(GC)、高效液相色譜(HPLC)和毛細(xì)管電泳(CE)等分離技術(shù)及其與質(zhì)譜儀(MS)的聯(lián)用已在復(fù)雜樣品的分離分析中發(fā)揮了積極的作用。隨著生命科學(xué)(蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)等)、食品安全、環(huán)境污染、重大疾病和藥物篩選分析(中藥現(xiàn)代化等)等領(lǐng)域研究的迅速開展，一維分離模式所能提供的有限的分辨率和峰容量很難滿足對(duì)極端復(fù)雜體系樣品進(jìn)行全組分分析的要求。多維色譜技術(shù)能極大地提高整個(gè)系統(tǒng)的峰容量和分離選擇性，在解決成分復(fù)雜、含量不均、干擾嚴(yán)重、組分未知樣品方面，具有獨(dú)特的不可替代的作用，已迅速成為色譜科學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一，日益受到重視。應(yīng)用多維色譜技術(shù)，將分離機(jī)理不同而又互相獨(dú)立的色譜柱耦聯(lián)在一起，并配合采用質(zhì)譜分析等鑒定手段，為解決這一問題提供了新的研究和應(yīng)用思路。
組成多維色譜必須滿足兩個(gè)基本條件，一是兩種或多種色譜模式的分離機(jī)理不同，即滿足正交的要求，二是后續(xù)的分離不能降低前一維的分辨率。作為最簡單的多維色譜模式，二維液相色譜由兩種不同分離機(jī)理的液相色譜模式通過一定的切換接口構(gòu)成，樣品經(jīng)過第一維色譜柱后進(jìn)入切換接口，繼續(xù)由第二維色譜柱進(jìn)行分離。目前主要有兩種二維色譜構(gòu)建方式，其一為傳統(tǒng)的采用“中心切割”技術(shù)的二維色譜，將第一維色譜柱所分離出的組分中某些感興趣的部分離線或在線切入第二維色譜柱進(jìn)行進(jìn)一步的分離。這種模式比較適合目標(biāo)組分分析，流路相對(duì)簡單，但峰容量的增加有限，在分析未知組分樣品時(shí)容易丟失樣品信息，甚至無法完成分析任務(wù)。
另一種為在此基礎(chǔ)上發(fā)展出的全二維色譜技術(shù)，它采用正交的兩維色譜柱構(gòu)成分離系統(tǒng)，通過閥切換技術(shù)，把第一維色譜柱分離出的所有組分都在線引入第二維色譜柱中進(jìn)行再分離，得到的數(shù)據(jù)一般被處理為包含所有分離信息的三維圖像或等高線圖，或處理成不間斷的一維模式，利于與質(zhì)譜儀等檢測(cè)器聯(lián)機(jī)。與傳統(tǒng)的中心切割技術(shù)相比，全二維液相色譜模式使第一維洗脫的產(chǎn)物全部進(jìn)入第二維中繼續(xù)分析，能得到樣品全部組分的信息。同時(shí)避免了中心切割技術(shù)中收集一維洗脫產(chǎn)物再進(jìn)樣造成的樣品污染與浪費(fèi)，也縮短了分析時(shí)間，實(shí)現(xiàn)兩種不同模式色譜同時(shí)分析。
目前全二維色譜模式主要有全二維氣相色譜(GC×GC)、全二維液相色譜(HPLC×HPLC)和全二維液相色譜毛細(xì)管電泳(HPLC×CE)等分離模式。由于全二維液相色譜(HPLC×HPLC)適于分析非揮發(fā)性組分或熱不穩(wěn)定物質(zhì)，可根據(jù)不同的分離目的，采用尺寸排阻色譜(SEC)、離子交換色譜(IEC)、反相色譜(RP)、疏水作用色譜(HIC)、親和色譜(AC)等色譜柱，構(gòu)建二維液相色譜系統(tǒng)，在理論和應(yīng)用領(lǐng)域方面具有廣闊的應(yīng)用發(fā)展空間。由于全二維液相色譜的構(gòu)建涉及到流動(dòng)相的變化，需綜合考慮分析對(duì)象、柱系統(tǒng)、緩沖液、流速、閥切換的頻率等多個(gè)因素間的匹配，流路的設(shè)計(jì)相對(duì)較為復(fù)雜，因此，有效的組合并不多。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是提供一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，通過全二維液相色譜閥柱間界面和接口技術(shù)，達(dá)到超強(qiáng)的分離能力。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所提供的一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，其包括進(jìn)樣單元與分離單元，進(jìn)樣單元包括一個(gè)進(jìn)樣器與一個(gè)第一梯度泵，所述第一梯度泵的輸出端連接所述進(jìn)樣器的輸入端，所述分離單元包括一第一維色譜柱、一個(gè)兩位十通閥、兩根第二維色譜柱及一個(gè)第二梯度泵，所述第一維色譜柱的輸入端連接所述進(jìn)樣器，輸出端連接所述兩位十通閥，二所述第二維色譜柱的兩端分別與所述兩位十通閥連接，所述第二梯度泵的輸出端連接所述兩位十通閥。
所述第一維色譜柱為離子交換色譜柱或尺寸排阻色譜柱中的一種，其柱長為0.5～20米，內(nèi)徑為75～320微米，填料粒度為20～150微米；所述第二維色譜柱為反相柱，其柱長為0.1～0.3米，內(nèi)徑為75～320微米，填料粒度為5～10微米。
所述第一維色譜柱為尺寸排阻色譜柱或疏水作用色譜柱或親和色譜柱中的一種，柱長為0.2～5米，內(nèi)徑為75～320微米，填料粒度為10～90微米；所述第二維色譜柱為反相柱，柱長為0.1～0.3米，內(nèi)徑為75～320微米，填料粒度為5～10微米。
所述第一維色譜柱與所述兩位十通閥之間連接一富集柱。
所述進(jìn)樣器與所述第一維色譜柱之間連接一流動(dòng)轉(zhuǎn)向閥。
由于采用了以上技術(shù)方案，使本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)第一維使用長柱，可以使樣量負(fù)載量增加，可以很好地滿足第二維短柱分析的要求；第一維使用長柱，對(duì)于大分子分離復(fù)雜樣品分離，使用大顆粒、大孔徑填料時(shí)，柱壓降不會(huì)很高(一般小于50巴)，并且可以獲得較好的分離效果，提高了分離能力和分離選擇性，而且色譜出峰時(shí)間適當(dāng)延長了，色譜峰展寬，這些分離上的劣勢(shì)，卻可以很好地和第二維分離分析速度匹配，降低了第二維短柱的分離時(shí)間要求。
本發(fā)明適合于復(fù)雜體系組分的分離分析，特別是對(duì)蛋白組學(xué)、中藥和植物提取液、代謝組學(xué)、環(huán)境等領(lǐng)域的分析提供了一種強(qiáng)有力的技術(shù)支持。


圖1為本發(fā)明處于第一種狀態(tài)時(shí)的流路示意2為本發(fā)明處于第二種狀態(tài)(進(jìn)樣)時(shí)的流路示意3是本發(fā)明的第一維色譜4A～圖4D是本發(fā)明的第二維色譜圖具體實(shí)施方式
如圖1、圖2所示，為本發(fā)明所提供的全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，其包括進(jìn)樣單元1與分離單元2，進(jìn)樣單元1包括一個(gè)自動(dòng)進(jìn)樣器11、一個(gè)第一梯度泵12與一個(gè)流動(dòng)轉(zhuǎn)向閥13，其中自動(dòng)進(jìn)樣器11中還包含一個(gè)六通閥14，導(dǎo)入第一維色譜流動(dòng)相。六通閥14具有兩種導(dǎo)通狀態(tài)，如圖1所示，為其采樣或進(jìn)樣后又恢復(fù)采樣狀態(tài)，準(zhǔn)備下一次進(jìn)樣。如圖2所示，為六通閥14的進(jìn)樣狀態(tài)。
分離單元2包括一第一維色譜柱21、一根組分富集柱22、一個(gè)兩位十通閥23、兩根第二維色譜柱24、25及一個(gè)第二梯度泵26。其中，第一維色譜柱21使用長柱，其長度在0.5～20米；第二維色譜柱24、25使用短柱，其長度0.1～0.3米，并優(yōu)先選用整體柱。這是由于在蛋白組學(xué)等分離研究中主要涉及到大分子分離，需要選擇大顆粒、大孔徑填料，選擇使用長柱柱壓降不會(huì)很高，但是可以獲得較好的分離效果，提高了分離能力和分離選擇性。且使用長柱使色譜出峰時(shí)間延長，色譜峰展寬，可以很好地和第二維分離分析速度匹配，更好的完成全組分分離。兩位十通閥23也具有兩種導(dǎo)通狀態(tài)，可采用手動(dòng)或自動(dòng)方式切換，將從第一維色譜柱21流出的組分分別導(dǎo)入兩根第二維色譜柱24、25中的一根。
樣品通過自動(dòng)進(jìn)樣器11進(jìn)樣，通過流體轉(zhuǎn)向閥13進(jìn)入第一維色譜柱21中分離分析，第一維色譜流動(dòng)相由梯度泵12驅(qū)動(dòng)進(jìn)入自動(dòng)進(jìn)樣器11。通過第一維色譜柱21分離流出的組分，經(jīng)過組分富集柱22富集后，由兩位十通閥23連續(xù)地交替切換導(dǎo)入第二維的兩根色譜柱24、25中進(jìn)行第二維的分離，第二維色譜的流動(dòng)相由梯度泵26驅(qū)動(dòng)進(jìn)入兩位十通閥23。梯度泵12與梯度泵26均采用可根據(jù)流速自動(dòng)調(diào)節(jié)或手動(dòng)調(diào)節(jié)的二元梯度泵，以根據(jù)對(duì)實(shí)際需要分析選擇是否梯度洗脫。
本發(fā)明的流路有兩種狀態(tài)，詳細(xì)描述如下
當(dāng)本發(fā)明處于第一種狀態(tài)時(shí)，如圖1所示，自動(dòng)進(jìn)樣器11中的六通閥14將樣品導(dǎo)入第一維色譜柱21，第一維色譜流動(dòng)相由梯度泵12驅(qū)動(dòng)經(jīng)流體轉(zhuǎn)向閥13進(jìn)入第一維色譜柱21，使樣品分離。從第一維色譜柱21流出的組分通過組分富集柱22富集后進(jìn)入兩位十通閥23，此時(shí)兩位十通閥23處于第一位狀態(tài)，將從第一維色譜柱21流出的組分導(dǎo)入第二維色譜柱，同時(shí)第二維色譜流動(dòng)相由梯度泵26驅(qū)動(dòng)進(jìn)入兩位十通閥23。由二維色譜柱25對(duì)樣品進(jìn)行洗脫分離，并通過兩位十通閥23將組分送入檢測(cè)器3進(jìn)行檢測(cè)，再進(jìn)入質(zhì)譜儀4進(jìn)行定性分析。另一個(gè)二維色譜柱24對(duì)一維柱21的洗脫樣品進(jìn)行上樣、脫鹽或進(jìn)一步富集平衡柱子，上樣后的廢液導(dǎo)入廢液池。
手動(dòng)或自動(dòng)切換兩位十通閥23后，本發(fā)明處于第二種狀態(tài)，如圖2所示，第一維的流出組分通過組分富集柱22富集后進(jìn)入兩位十通閥23，此時(shí)兩位十通閥23處于第二位狀態(tài)，將從第一維色譜柱21流出的組分導(dǎo)入第二維色譜柱，同時(shí)第二維色譜流動(dòng)相由梯度泵26驅(qū)動(dòng)進(jìn)入兩位十通閥23。由二維色譜柱24對(duì)樣品進(jìn)行洗脫分離，并通過兩位十通閥23將組分送入檢測(cè)器3進(jìn)行檢測(cè)，再進(jìn)入質(zhì)譜儀4進(jìn)行定性分析。另一個(gè)二維色譜柱25則對(duì)一維柱21的洗脫樣品進(jìn)行脫鹽或進(jìn)一步富集平衡柱子，并導(dǎo)入廢液池。如此循環(huán)完成樣品的全組分分離。通過匹配適合的一維色譜柱21和二維色譜柱24、25的類型和分離時(shí)間，恰當(dāng)切換兩位十通閥23，就能實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜樣品的高效分析。
本發(fā)明中的流體轉(zhuǎn)向閥13起了流動(dòng)轉(zhuǎn)向增加儀器靈活性的作用，也可以不設(shè)置流體轉(zhuǎn)向閥13，第一維液體流動(dòng)相由梯度泵12驅(qū)動(dòng)進(jìn)入六通閥14后直接導(dǎo)入一維柱21進(jìn)行分離，同樣可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。連接在一維柱21的出口端與兩位十通閥23入口端之間的組分富集柱22起了濃縮富集的作用，同樣也可不設(shè)置。另外，也可以從一維色譜柱21的輸出端27將洗脫液直接引入檢測(cè)器3，用于檢測(cè)一維色譜柱21。
綜上所述，本發(fā)明具有分離、平衡、檢測(cè)高度集成的特點(diǎn)，在二維色譜柱中的一根色譜柱分離的同時(shí)，另一根色譜柱采樣、富集、平衡，實(shí)現(xiàn)對(duì)第一維色譜柱的全組分分離。
要最大限度地發(fā)揮全二維液相色譜分離系統(tǒng)分析復(fù)雜樣品的潛力，就必須正確地選擇色譜分離模式、柱系統(tǒng)及其匹配和優(yōu)化分離條件?；谡环蛛x特性所要求的柱系統(tǒng)和規(guī)律，在多維系統(tǒng)中，考慮到選擇性、分離能力、峰容量、樣品負(fù)載量、生物兼容性和分離速度等因素，在全二維液相色譜平臺(tái)的柱類型選擇上，針對(duì)不同的分析對(duì)象及其結(jié)構(gòu)組分的出峰規(guī)律，選擇相應(yīng)的匹配類型，一般搭配如下a)蛋白組學(xué)領(lǐng)域中大分子蛋白質(zhì)和多肽的分離分析鑒定第一維選擇離子交換色譜(IEC)或尺寸排阻色譜(SEC)，柱長0.5～20米，內(nèi)徑75～320微米，填料粒度20～150微米，為第二維色譜柱提供足夠的樣品量和樣品通道間隙；第二維采用反相柱(RPLC)，柱長0.1～0.3米，內(nèi)徑75～320微米，填料粒度5～10微米；整體柱的柱壓降小，柱制備和與閥連接方便，并且可以高流速分離，保證第二維的分析速度，避免分離效率的損失，因此優(yōu)先選用整體柱。
第一維和第二維之間必要時(shí)，可以增加富集柱。
IEC/RP和SEC/RP模式提供兩種不同的分離機(jī)理，滿足正交的要求。同時(shí)，該類模式具有溶劑匹配、易與質(zhì)譜在線聯(lián)用對(duì)組分的定性分析、可以采用大進(jìn)樣量及方便實(shí)現(xiàn)快速分析等。
b)復(fù)雜體系如體液、中藥、植物提取液、食品、微生物代謝物和環(huán)境樣品等的分離分析鑒定第一維選擇尺寸排阻色譜柱(SEC)、疏水作用色譜柱(HIC)、親和色譜柱(AC)。一般地，柱長在0.2～5米，內(nèi)徑在75～320微米，填料粒度為10～90微米，為第二維色譜柱提供足夠的樣品量和適當(dāng)?shù)耐ǖ篱g隙。
第二維采用反相柱(RPLC)，柱長在0.1～0.3米，內(nèi)徑在75～320微米，填料粒度為5～10微米，優(yōu)先選用整體柱。
第一維和第二維之間必要時(shí)，可以增加富集柱。
正交的實(shí)現(xiàn)也可以通過流動(dòng)相的改變實(shí)現(xiàn)，上述多維柱系統(tǒng)可以針對(duì)組分性質(zhì)通過流動(dòng)相的調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)全二維分析。
在本發(fā)明的全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)中，毛細(xì)管柱對(duì)流路死體積的要求嚴(yán)格，要求盡可能地減少死體積、減小峰展寬。一般采用適當(dāng)內(nèi)徑的連接管路進(jìn)行連接，將全二維高效液相色譜儀的死體積控制在不影響二維系統(tǒng)的分離能力的范圍內(nèi)。假定色譜柱長度L＝0.25米，理論塔板數(shù)N＝10,000，孔隙率ε＝0.7，k＝0。其指標(biāo)如表1所示，一般選用0.05毫米連接管或0.10毫米的連接管。
表1各種直徑色譜柱的連接管參數(shù)


本發(fā)明的全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)還可與質(zhì)譜儀聯(lián)用，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用即可實(shí)現(xiàn)正交，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的定性分析。質(zhì)譜檢測(cè)不僅有利于定性分析，而且與全二維毛細(xì)管液相色譜組成了三維分析系統(tǒng)，提高了全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)的分離分析能力。在質(zhì)譜或多級(jí)質(zhì)譜(MS/MS)檢測(cè)器前可以使用紫外檢測(cè)，或二極管陣列(PDA)、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)等多種檢測(cè)器，為質(zhì)譜檢測(cè)提供信息，可以保證質(zhì)譜的定性分析高質(zhì)量運(yùn)行。
主要的連接方式有多維質(zhì)譜(MS/MS)和飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOFMS)兩種，即HPLC×HPLC-TOF-MS和HPLC×HPLC-MS/MS。針對(duì)不同的分析對(duì)象，根據(jù)其極性選用不同的質(zhì)譜離子源(大氣壓化學(xué)電離APCI，電噴霧離子ESI，納噴霧)。依據(jù)各類化合物的特征結(jié)構(gòu)單元(如核苷中的共有核糖單元)，結(jié)合不同的質(zhì)譜掃描模式，如母離子掃描、中性丟失、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)等，消除復(fù)雜體系中基質(zhì)和其它共存組分的干擾，提高信噪比，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)化合物的多水平、高靈敏度、高選擇性檢測(cè)。
在連接質(zhì)譜進(jìn)行分析時(shí)，液相色譜的第二維分離流動(dòng)相流速和質(zhì)譜檢測(cè)所需要的流速是匹配的，可以直接聯(lián)機(jī)，不需要特殊的設(shè)計(jì)。
應(yīng)用本發(fā)明進(jìn)行分析之前，首先考察分析對(duì)象，確定色譜和質(zhì)譜條件即選定第一維離子交換色譜(IEC)或尺寸排阻色譜(SEC)的柱長、內(nèi)徑、填料粒度等，預(yù)分離，確定流動(dòng)相流速、等度或梯度等條件；第二維反相柱(RPLC)的柱長、填充床長度、內(nèi)徑、填料粒度和孔徑等，預(yù)分離，確定流動(dòng)相條件，包括流動(dòng)相組成、流速和等度或梯度洗脫條件。根據(jù)分析對(duì)象，確定質(zhì)譜條件。
其次，考察全二維液相色譜的匹配條件。第二維色譜分析采用平行柱交替捕集分析形式作切換接口，要求兩只色譜柱有相同的色譜性能，實(shí)驗(yàn)比較兩只反相柱在相同條件下的運(yùn)行情況及同一色譜柱多次運(yùn)行的情況，考察柱重復(fù)性，消除兩柱間的誤差。設(shè)第二維色譜流速為v2(μL/min)下，第二維色譜的分析時(shí)間及柱平衡為t2(min)。第一維的色譜柱的死體積為v1(μL)，在t1(μL/min)流速下對(duì)應(yīng)的死時(shí)間為v1/t1(min)，因此實(shí)驗(yàn)中將第一維的色譜柱前(v1/t1)+t2(min)的洗脫產(chǎn)物捕集在一個(gè)反相柱中，同時(shí)在(v1/t1)+t2(min)進(jìn)行閥切換，之后每t2min切換一次，由反相柱交替捕集分析一維洗脫產(chǎn)物。當(dāng)系統(tǒng)處于位置1時(shí)(參見圖1)，第一維的色譜柱的流出組分，進(jìn)入第二維，一個(gè)二維柱25洗脫分析，并將組分帶入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相攜帶組分可以直接進(jìn)入MS檢測(cè)；另一個(gè)二維柱24從一維柱脫鹽平衡柱子，直接導(dǎo)入廢液池。切換兩位十通閥，系統(tǒng)處于位置2時(shí)(參見圖1)，第一維的流出組分，進(jìn)入第二維，一個(gè)二維柱24洗脫分析，并將組分帶入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，流動(dòng)相攜帶組分可以直接進(jìn)入MS檢測(cè)；另一個(gè)二維柱25從一維柱脫鹽平衡柱子，直接導(dǎo)入廢液池。如此循環(huán)完成樣品的全組分分析。為了和質(zhì)譜儀聯(lián)機(jī)，一般需要連續(xù)一維譜圖，并實(shí)現(xiàn)了對(duì)復(fù)雜樣品的高效分析?？梢愿鶕?jù)需要選擇是否需要組分富集柱等。
下面以蛋白質(zhì)分析為例，舉例說明。
實(shí)施例1分離豬心胰蛋白酶切混合樣品色譜和質(zhì)譜條件第一維選擇離子交換色譜柱(IEC)(TOYOPEARL SP-650S，日本)，柱長200厘米，內(nèi)徑320微米，填料粒度20～50微米，流動(dòng)相選用10mmol/L醋酸胺溶液，流速為2μL/min等度洗脫；第二維采用反相柱(RPLC)(ChrmatorexSMB-300A-C18，5微米)，柱長15厘米，填充床長度6厘米，內(nèi)徑320微米，填料粒度5微米，孔徑300納米；流動(dòng)相選用乙腈/水(70/30，V/V)，流速為8μL/min等度洗脫；第一維和第二維的檢測(cè)方式均采用可變波長紫外檢測(cè)，選定檢測(cè)波長210nm。十通切換接口采用EV750-102peek10通切換閥(Rheodyne公司)。所有流動(dòng)相均經(jīng)過超聲儀超聲除氣。質(zhì)譜儀采用安捷倫的LC-MSD TOF系統(tǒng)。
樣品為豬心胰蛋白酶切混合樣品，進(jìn)樣2μL。實(shí)驗(yàn)比較了兩只反相柱在相同條件下的運(yùn)行情況及同一色譜柱多次運(yùn)行的情況，發(fā)現(xiàn)柱重復(fù)性良好，消除了兩柱之間的誤差。流速8μL/min下，第二維色譜地分析時(shí)間及柱平衡為2min。第一維的IEC色譜柱的死體積為140μL，在2μL/min流速下對(duì)應(yīng)的死時(shí)間為70min，因此實(shí)驗(yàn)中將IEC前72min的洗脫產(chǎn)物捕集在一個(gè)反相柱中，同時(shí)在72min進(jìn)行閥切換，之后2min切換一次，由反相柱交替捕集分析一維洗脫產(chǎn)物。如此循環(huán)進(jìn)行閥切換完成樣品的全組分分析，得到樣品的定量信息。如圖3所示，為本發(fā)明的第一維色譜圖，圖4A～圖4D所示為本發(fā)明的第二維色譜圖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，第一維色譜中沒有出現(xiàn)的信號(hào)，可以在第二維色譜中清楚完整的表現(xiàn)出來，將第二維色譜與質(zhì)譜儀聯(lián)機(jī)，即可以得到樣品的定性信息，能實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜樣品的高效分析。本發(fā)明的全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)可以顯著地增加色譜峰容量，特別適合于微量復(fù)雜樣品的分離分析。
綜上所述，本發(fā)明提供了一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，通過長柱全二維液相色譜閥柱間界面和接口技術(shù)的構(gòu)建，并采用質(zhì)譜分析，提高全二維液相色譜的選擇性和分辨率，實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜組分體系的難揮發(fā)化合物的分離分析。
權(quán)利要求
1.一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，其包括進(jìn)樣單元與分離單元，所述進(jìn)樣單元包括一個(gè)進(jìn)樣器與一個(gè)第一梯度泵，所述第一梯度泵的輸出端連接所述進(jìn)樣器的輸入端，其特征在于所述分離單元包括一第一維色譜柱、一個(gè)兩位十通閥、兩根第二維色譜柱及一個(gè)第二梯度泵，所述第一維色譜柱的輸入端連接所述進(jìn)樣器，輸出端連接所述兩位十通閥，二所述第二維色譜柱的兩端分別與所述兩位十通閥連接，所述第二梯度泵的輸出端連接所述兩位十通閥。
2.如權(quán)利要求1所述的一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，其特征在于所述第一維色譜柱為離子交換色譜柱或尺寸排阻色譜柱中的一種，其柱長為0.5～20米，內(nèi)徑為75～320微米，填料粒度為20～150微米；所述第二維色譜柱為反相柱，其柱長為0.1～0.3米，內(nèi)徑為75～320微米，填料粒度為5～10微米。
3.如權(quán)利要求1所述的一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，其特征在于所述第一維色譜柱為尺寸排阻色譜柱或疏水作用色譜柱或親和色譜柱中的一種，柱長為0.2～5米，內(nèi)徑為75～320微米，填料粒度為10～90微米；所述第二維色譜柱為反相柱，柱長為0.1～0.3米，內(nèi)徑為75～320微米，填料粒度為5～10微米。
4.如權(quán)利要求1或2或3所述的一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，其特征在于所述第一維色譜柱與所述兩位十通閥之間連接一富集柱。
5.如權(quán)利要求1或2或3所述的一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，其特征在于所述進(jìn)樣器與所述第一維色譜柱之間連接一流動(dòng)轉(zhuǎn)向閥。
6.如權(quán)利要求4所述的一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，其特征在于所述進(jìn)樣器與所述第一維色譜柱之間連接一流動(dòng)轉(zhuǎn)向閥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種全二維毛細(xì)管液相色譜分離系統(tǒng)，其包括進(jìn)樣單元與分離單元，進(jìn)樣單元包括一個(gè)進(jìn)樣器與一個(gè)第一梯度泵，第一梯度泵的輸出端連接進(jìn)樣器的輸入端，分離單元包括一第一維色譜柱、一個(gè)兩位十通閥、兩根第二維色譜柱及一個(gè)第二梯度泵，第一維色譜柱的輸入端連接進(jìn)樣器，輸出端連接兩位十通閥，二第二維色譜柱的兩端分別與兩位十通閥連接，第二梯度泵的輸出端連接兩位十通閥。本發(fā)明通過長柱全二維液相色譜閥柱間界面和接口技術(shù)的構(gòu)建，提高了全二維液相色譜的選擇性和分辨率，實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜組分體系的難揮發(fā)化合物的分離分析。
文檔編號(hào)B01D15/08GK1785476SQ20041009844
公開日2006年6月14日 申請(qǐng)日期2004年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月10日
發(fā)明者羅國安, 陳令新, 劉科輝, 任康寧, 王義明 申請(qǐng)人:清華大學(xué)