專利名稱：一種羧酸酯酶的活性和羧酸酯酶抑制劑的活性的檢測方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及一種羧酸酯酶的活性和羧酸酯酶抑制劑的活性的檢測方法。
背景技術：
配位聚合物(Coordination polymer)通常是指金屬離子和有機配體通過自組裝而形成的具有周期性網(wǎng)絡結(jié)構(gòu)的金屬有機材料。例如，巰基配體-SR，氨基酸，氨基配體和金屬離子M (M :Cu, Ag, Au等過度金屬離子)可以通過有序自組裝形成配位聚合物。結(jié)構(gòu)通式
如下
權(quán)利要求
1.一種羧酸酯酶的活性的檢測方法，其特征在于，具體步驟如下 步驟一將底物分子和不同濃度羧酸酯酶反應，得到水解產(chǎn)物； 步驟二 將步驟一得到的水解產(chǎn)物、重金屬鹽溶液、聚陰離子溶液和帶正電荷的小分子探針溶液混合，對羧酸酯酶的活性進行熒光檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種羧酸酯酶的活性的檢測方法，其特征在于，所述的羧酸酯酶為膽堿酯酶或脂肪酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種羧酸酯酶的活性的檢測方法，其特征在于，所述的底物分子為硫代乙酰膽堿。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種羧酸酯酶的活性的檢測方法，其特征在于，所述的步驟一中水解反應體系為400 u L總體系，包括濃度為6. 875mM pH值為7. 4的Tris-HAc緩沖溶液，濃度為0. 06875mM底物分子，0_0. 0004U/ u L的羧酸酯酶，余量為無菌水。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種羧酸酯酶的活性的檢測方法，其特征在于，所述的聚陰離子為聚乙烯磺酸鈉或單鏈DNA。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種羧酸酯酶的活性的檢測方法，其特征在于，帶正電荷的小分子探針為3，4，9，10-四-(4-三甲基胺丁基氧-羰基)-茈，其結(jié)構(gòu)式為 OO O
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種羧酸酯酶的活性的檢測方法，其特征在于，所述的檢測體系為550 ii L總體系，包括400ii L水解反應體系,濃度為IOOii M重金屬鹽,濃度為60 ii M聚陰離子，濃度為IOOii M小分子探針,余量為無菌水。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種羧酸酯酶的活性的檢測方法，其特征在于，所述的熒光檢測條件為442nm熒光激發(fā)，460_650nm熒光檢測。
9.一種羧酸酯酶抑制劑的活性的檢測方法，其特征在于，具體步驟如下 步驟一將不同濃度的羧酸酯酶抑制劑和羧酸酯酶混合，再和底物分子反應，得到水解產(chǎn)物； 步驟二 將步驟一得到的水解產(chǎn)物、重金屬鹽溶液、聚陰離子溶液和帶正電荷的小分子探針溶液混合，對羧酸酯酶抑制劑的活性進行熒光檢測。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種羧酸酯酶抑制劑的活性的檢測方法，其特征在于，帶正電荷的小分子探針為3，4，9，10-四-(4-三甲基胺丁基氧-羰基)-茈，其結(jié)構(gòu)式為 0O O
全文摘要
一種羧酸酯酶的活性和羧酸酯酶抑制劑的活性的檢測方法，屬于生物技術領域。解決現(xiàn)有的酶活性檢測方法靈敏度比較低、易出現(xiàn)假陽性信號、方法復雜、價格昂貴和耗時長的問題。該羧酸酯酶活性的檢測方法是將底物分子和不同濃度羧酸酯酶反應，得到水解產(chǎn)物；將得到的水解產(chǎn)物、硝酸銀溶液、聚陰離子溶液和帶正電荷的小分子探針溶液混合，對羧酸酯酶的活性進行熒光檢測。本發(fā)明還提供一種羧酸酯酶抑制劑的活性的檢測方法。該方法具有更高的靈敏度，檢測限為0.05mU/mL，比現(xiàn)有的某些檢測方法低1或2個數(shù)量級，同時實驗證明該方法具有很好的選擇性、簡便、成本低。
文檔編號G01N21/64GK102788776SQ20121028267
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月9日
發(fā)明者于聰, 周會鵬, 廖冬麗, 陳健 申請人:中國科學院長春應用化學研究所