一種平消片有效成分含量測定方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及平消片有效成分的含量測定方法，包括對照品溶液、供試品溶液的制備、高效液相色譜條件的制定，其中柚皮苷含量不低于2.26mg/片，新橙皮苷含量不低于1.33mg/片，該方法簡單、安全可靠，能夠真實反映產品的含量及質量，適合產業(yè)化的日常生產檢驗。
【專利說明】一種平消片有效成分含量測定方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，尤其是涉及有效成分的含量測定方法。
【背景技術】[0002]現有中成藥平消片，是一種常用抗腫瘤中成藥。在藥典及部頒標準記載的平消片的【含量測定】取本品30片，除去包衣，精密稱定，研細，取粉末約4g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入氯仿20ml與濃氨溶液1ml，密塞，稱定重量，冷浸48小時，或超聲提取40分鐘，稱重，用氯仿補足損失的重量，充分振搖，濾過，精密量取濾液10ml，置分液漏斗中，以硫酸溶液(0.5mol/L)提取4次，每次10ml，提取液均以硫酸溶液(0.5mol/L)預先濕潤的濾紙濾入50ml量瓶中，并以硫酸溶液(0.5mol/L)適量洗滌濾器，洗液并入量瓶中，再加硫酸溶液(0.5mol/L)至刻度，搖勻，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加硫酸液(0.5mol/L)至刻度，搖勻照分光光度法，在262nm及300nm波長處測定吸收度，平均片重本品每片含馬錢子以士的寧(C12H22N2O2)計，應為0.25~0.35mg。
[0003]平消片處方為郁金54g仙鶴草54g五靈脂45g白礬54g硝石54g干漆(制)18g枳殼(麩炒)90g馬錢子粉36g，枳殼的含量最多，是最主要的組分，上述藥典中含量測定方法只測定馬錢子中士的寧的含量，不能真實反映產品的質量，以至于產品的穩(wěn)定性無法控制，給生產及患者帶來隱患。

【發(fā)明內容】

[0004]為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種平消片有效成分的含量測定方法，該方法準確、可靠、能夠真實反映產品的質量。
[0005]本發(fā)明是通過以下技術方案實現的:
[0006]一種平消片中有效成分的含量測定方法，包括如下步驟:
[0007](I)對照品的制備:取柚皮苷、新橙皮苷對照品適量；
[0008](2)供試品的制備:取樣品用甲醇或乙醇提取后至于容量瓶中備用；
[0009](3)高效液相色譜條件:C184.6 X 250mm, 5 μ m色譜柱、流動相乙腈-水、流速
0.5-1.2ml.mirT1 檢測波長 245_360nm ；
[0010](4)測定法:精密吸取對照品及供試品溶液注入液相色譜儀即得。
[0011]上述步驟⑴所述柚皮苷對照品濃度為80ug/lml，新橙皮苷對照品濃度60ug/lml。上述步驟(2)中所述的供試品用甲醇超聲提取后至于容量瓶中備用。優(yōu)選步驟
(2)中所述的供試品加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
[0012]上述步驟(3)中流動相的pH值為2.0-5.0，流動相乙腈-水15_30: 85-70.所述流動相用酸調節(jié)PH值，優(yōu)選為pH值3.0，流動相乙腈-水=20: 80;所述的酸包括但不限于為磷酸、醋酸、甲酸、檸檬酸、酒石酸、硫酸氫納、硫酸氫鉀、鹽酸、硫酸、碳酸、高氯酸、蘋果酸、枸椽酸、水楊酸、咖啡酸等，優(yōu)選磷酸、醋酸、甲酸、檸檬酸、酒石酸、硫酸氫納、硫酸氫鉀等，最佳為磷酸。所述磷酸濃度為5-20%，優(yōu)選濃度為10%。本發(fā)明中優(yōu)選10%磷酸能夠使平消片中各色譜峰有很好的分離，改善峰拖尾現象。
[0013]上述步驟⑶中所述的優(yōu)選流動相乙腈-水=20: 80,流速為1.0ml.mirT1,檢測波長283nm
[0014]上述步驟(4)中所述測定，優(yōu)選柚皮苷含量不低于2.26mg/片，新橙皮苷含量不低于 1.33mg/ 片。
[0015]本發(fā)明最佳的平消片有效成分含量測定方法，包括如下步驟:
[0016](I)對照品的制備:精密稱取柚皮苷對照品適量，加甲醇制成每Iml含柚皮苷SOug的溶液；精密稱取新橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每Iml含新橙皮苷60ug的溶液；
[0017](2)取本品20片，置研缽中研細過四號篩，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；
[0018](3)高效液相色譜條件
[0019]色譜柱:WatersC18柱 4.6X 250mm, 5 μ m,流動相:乙腈-水=20: 80,用10%磷酸調節(jié)PH值3.0 ;檢測波長為283nm ;柱溫:室溫；流速:1.0ml.mirT1 ;進樣方式:自動進樣；
[0020]⑷測定法
[0021]分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0022]本發(fā)明所述的平消片的處方為:重量份藥材郁金1-5份、仙鶴草1-5份、五靈脂1-5份、白礬1-5、硝石1-5、制干漆0.5-3份、麩炒枳殼3_7份、馬錢子粉0.5-4份。優(yōu)選重量份藥材郁金2-4份、仙鶴草2-4份、五靈脂2-4份、白礬2-4、硝石2_4份、制干漆0.5-2份、麩炒枳殼4-6份、馬錢子粉1-3份。最佳重量份藥材郁金3份、仙鶴草3份、五靈脂2.5份、白礬3份、硝石3份、制干漆I份、麩炒枳殼5份、馬錢子粉2份。
[0023]本發(fā)明平消片的制備方法按照藥典制備，優(yōu)選下述方法制備:
[0024]以上8味藥材，取干漆、五靈脂、白礬、硝石粉碎成細粉，取郁金、麩炒枳殼粉碎，用乙醇為溶劑進行滲漉，收集滲漉液；滲漉后的藥渣與仙鶴草加水煎煮二次，濾過，合并煎液；滲漉液回收乙醇后，與上述濾液合并，減壓濃縮成稠膏，干燥，粉碎成細粉，加入馬錢子粉、上述細粉及輔料適量，混勻，制粒，干燥，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0025]最佳地，本發(fā)明所述的制備方法，包括如下步驟:
[0026]以上八味，干漆、五靈脂、白礬、硝石粉碎成細粉；郁金、麩炒枳殼粉碎成最粗粉，用70%乙醇為溶劑，進行滲漉，收集滲漉液；藥渣與仙鶴草加水煎煮二次，濾過，合并煎液；滲漉液回收乙醇后，與上述濾液合并，減壓濃縮成稠膏，干燥，粉碎成細粉，加入馬錢子粉、上述細粉及輔料適量，混勻，制粒，干燥，壓片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0027]為了更好的證明本發(fā)明的含量測定的安全可靠，本發(fā)明通過下述方法學加以驗證。
[0028]試驗例方法學驗證
[0029]1、儀器與試藥
[0030]試劑:乙腈(色譜純)，甲醇、磷酸均為分析純。[0031]樣品:西安正大制藥有限公司提供。
[0032]對照品:柚皮苷對照品(批號:110722-200309)、新橙皮苷對照品(批號:111857-201001)均由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用。
[0033]儀器:高效液相色譜儀(Agilentl200) ； ；DELTA 320PH計(梅特勒-托利多儀器有限公司);AL-204型電子分析天平(Max = 210g、d = 0.0OOlg、梅特勒-托利多儀器有限公司)；TG332A型微量分析天平(Max = 20g、d = 0.01mg) ；HQ-500DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。
[0034]2、色譜條件:見實施例一
[0035]3、對照品溶液制備:見實施例一
[0036]4、供試品溶液制備:見實施例一
[0037]5、缺枳殼的陰性供試品溶液的制備
[0038]按處方組成十分之一份量，取除去枳殼的其余藥味一起，按工藝要求制得不含枳殼的陰性樣品，取該陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備缺枳殼的陰性供試品溶液。
[0039]6、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0040]7、缺枳殼的陰性樣品干擾性測定:
[0041]分別精密吸取上述對照品溶液，供試品溶液及缺枳殼的陰性供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，供試品溶液在與對照品溶液保留時間相同處有相應的色譜峰，缺枳殼的陰性供試品溶液在與對照品溶液保留時間相同處沒有相應的色譜峰，但與供試品溶液其它色譜峰保留時間一致，色譜峰信息豐富，陰性樣品無干擾。
[0042]8、線性關系的考察
[0043]分別精密吸取柚皮苷對照品溶液(濃度分別為，每Iml含柚皮苷8.48ug、25.44ug、42.4ug、59.36ug、84.8ug)各IOul，新橙皮苷對照品溶液(濃度分別為，每Iml含新橙皮苷
7.95ug、23.85ug、39.75ug、55.65ug、79.5ug)各10ul，分別注入液相色譜儀，測定。以對照品濃度為橫坐標(X)，以峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸，得柚皮苷與新橙皮苷線性回歸方程。柚皮苷線性范圍在8.48~84.Syg范圍內呈良好的線性關系。線性回歸方程為Y=15.819X-3.3008 ；R2 = 0.9999。結果分別見表1和圖1。新橙皮苷線性范圍在7.95~79.5μ8范圍內呈良好的線性關系。線性回歸方程為Y= 17.518X-1.9234;R2= I。結果分別見表2和圖2。
[0044]表1柚皮苷線性關系考察結果
[0045]
【權利要求】
1.一種平消片中有效成分的含量測定方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)對照品的制備:取柚皮苷、新橙皮苷對照品適量； (2)供試品的制備:取平消片除去包衣，用甲醇或乙醇提取后至于容量瓶中備用； (3)高效液相色譜條件:C184.6Χ250.ι，5μπι色譜柱、流動相乙腈-水、流速0.5-1.2ml.mirT1 檢測波長 245_360nm ； (4)測定法:精密吸取對照品及供試品溶液注入液相色譜儀即得。
2.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于:所述的步驟(I)柚皮苷對照品濃度為80ug/ml,新橙皮苷對照品濃度60ug/ml。
3.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于:步驟(2)中所述的供試品用甲醇超聲提取后至于容量瓶中備用。
4.如權利要求3所述的含量測定方法，其特征在于:步驟(2)中所述的供試品加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
5.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于:所述的步驟(3)中流動相的pH值為 2.0-5.0，流動相乙腈-水=15-30: 85-70。
6.如權利要求4所述的含量測定方法，其特征在于:所述的步驟(3)中流動相用酸調節(jié)PH值為3.0，所述的酸為磷酸、醋酸、甲酸、檸檬酸、酒石酸、硫酸氫納、硫酸氫鉀中的一種。
7.如權利要求5所述的含量測定方法，其特征在于:所述的步驟(3)中酸為磷酸，濃度為 5-20% ο
8.如權利要求1或5所述含量測定方法，其特征在于:步驟(3)中所述的流動相乙腈-水=20: 80，流速為1.0ml.mirT1，檢測波長283nm
9.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于:步驟(4)中所述測定，柚皮苷含量不低于2.26mg/片，新橙皮苷含量不低于1.33mg/片。
10.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在，包括如下步驟: (1)對照品的制備:精密稱取柚皮苷對照品適量，加甲醇制成每Irnl含柚皮苷SOug的溶液；精密稱取新橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每Iml含新橙皮苷60ug的溶液； (2)供試品的制備:取平消片20片，出去包衣，置研缽中研細過四號篩，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得； (3)高效液相色譜條件 色譜柱:WatersC18柱4.6X 250mm, 5 μ m,流動相:乙腈-水=20: 80,用10%磷酸調節(jié)PH值3.0 ;檢測波長為283nm ;柱溫:室溫；流速:1.0ml.mirT1 ;進樣方式:自動進樣； (4)測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，即得。
【文檔編號】G01N30/02GK103543213SQ201210240969
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2012年7月12日 優(yōu)先權日:2012年7月12日
【發(fā)明者】宋強, 杜宏偉, 何莉, 李鵬, 安毅, 葛亞寧, 孫艷霞 申請人:西安正大制藥有限公司