專利名稱：Eddp膠體金檢測試劑盒及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及膠體金檢測領域，具體涉及一種EDDP膠體金檢測試劑盒及其制備方法。
背景技術：
美沙酮(methadone)為阿片類藥物，在第二次世界大戰(zhàn)時期由德國科學家合成， 一般作為嗎啡的代替藥物用于癌癥晚期等病人的鎮(zhèn)痛治療，其藥物作用持續(xù)時間長、鎮(zhèn)痛效力強、口服有效，在使用充分劑量時可以減少或消除依賴者對阿片類藥物的渴求；與同類藥物間具有交叉耐受性，使得隨后使用的阿片類藥物的作用降低或不能發(fā)揮作用。然而，據有關調查顯示，90%以上的美沙酮服用者會出現不良反應，不良反應的臨
床表現和發(fā)生率具體如下
權利要求
1.一種EDDP膠體金檢測試劑盒，包括試劑條,所述試劑條包括襯底、濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙；所述濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙依次首尾銜接并固定于所述襯底上，其特征在于，所述免疫膠體金紙片上包被有膠體金標記的抗EDDP單克隆抗體，所述免疫硝酸纖維素膜上設有包被有EDDP-牛血清白蛋白復合物的檢測線和包被有羊抗鼠IgG的質控線。
2.如權利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述膠體金的顆粒大小為39 42nm，所述膠體金是由兩步還原法制備獲得。
3.如權利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述免疫膠體金紙片是經過預處理的玻璃纖維紙,所述預處理的預處理液包括O. 5 O. 8v% Tween-20,12 18w/v%鹿糖,溶劑為水。
4.如權利要求1-3任一權利要求所述的EDDP膠體金檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟1)兩步還原法制備膠體金；2)用步驟I)制備的膠體金標記抗EDDP單克隆抗體，獲得膠體金標記的抗EDDP單克隆抗體；3)免疫膠體金紙片的制備預處理玻璃纖維紙；稀釋步驟2)獲得的膠體金標記的抗 EDDP單克隆抗體，得到免疫膠體金溶液；用所述免疫膠體金溶液包被預處理過的玻璃纖維紙，獲得免疫膠體金紙片；4)將EDDP-牛血清白蛋白復合物和羊抗鼠IgG分別噴在硝酸纖維素膜檢測線和質控線的位置上，烘干備用，制得免疫硝酸纖維素膜；5)將濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜、吸水紙依次粘貼在膠板上，切裁制得試劑條；6)將試劑條裝入塑料盒，即獲得EDDP膠體金檢測試劑盒。
5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述兩步還原法為a.第一次還原氯金酸溶液制備濃度為O.0004-0. 0005mol/L的HAuCl4水溶液，加熱煮沸20-30分鐘，之后邊攪拌邊加入檸檬酸三鈉水溶液，HAuCl4與檸檬酸三鈉的摩爾比為 I 8 9，超聲振蕩2-3分鐘后冷卻至室溫，即制得14 16nm粒徑的膠體金原溶液；b.第二次還原氯金酸溶液將第一步制得的膠體金原溶液放置于4.(TC水浴中保持溫度恒定，隨后按膠體金原溶液與HAuCl4水溶液體積比I : I. 9 2. O加入4. (TC的O.003-0. 004mol/L HAuCl4水溶液，隨后立即邊攪拌邊滴加4. (TC的抗壞血酸與PVP的混合水溶液，加入的抗壞血酸與本步驟加入的HAuCl4的摩爾比為25 26 1，加入的PVP與本步驟加入的HAuCl4的重量比為I : 2. O 2.1，反應中保持溫度恒定，攪拌至反應完全，溶液呈透明的酒紅色，制得39-42nm粒徑的膠體金溶液；兩步還原法中，配置各種水溶液均采用雙蒸水。
6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟a中，加入的檸檬酸三鈉水溶液的濃度為O. 01-0. 02mol/L，超聲震蕩的頻率為20-30KHZ。
7.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟b中，所述抗壞血酸與PVP的混合水溶液中，抗壞血酸的濃度為O. 017-0. 019mol/L, PVP的濃度為O. 137-0. 139g/L。
8.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3)免疫膠體金紙片的制備為A.用噴金緩沖液稀釋膠體金標記的抗EDDP單克隆抗體，獲得OD54tl值為I.5的免疫膠體金溶液；B.用預處理液浸泡玻璃纖維紙，干燥后，再用免疫膠體金溶液噴涂預處理后的玻璃纖維紙，干燥，制得免疫膠體金紙片。
9.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述步驟A中的噴金緩沖液配方如下 8 12v% I. OM Tris液，O. 2 O. 4界八％聚乙二醇20000，O. 15 O. 25w/v%牛血清白蛋白，O. I O. 3w/v %脫脂牛奶，O. 25 O. 35w/v %酪蛋白，和O. 02 O. 08w/v %疊氮化鈉，用鹽酸調節(jié)pH至8. 5 ±O. 05，余量為水。
10.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述步驟B中的預處理液包括O.5 O. 8v% Tween-20,12 18w/v%鹿糖，溶劑為水。
11.權利要求1-3任一權利要求所述的試劑盒在制備EDDP檢測試劑中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及膠體金免疫層析領域，具體公開了一種EDDP膠體金檢測試劑盒，包括試劑條，所述試劑條包括襯底、濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙，濾樣紙、免疫膠體金紙片、免疫硝酸纖維素膜和吸水紙依次首尾銜接并固定于襯底上；所述免疫膠體金紙片上包被有膠體金標記的抗EDDP單克隆抗體，所述免疫硝酸纖維素膜上設有包被有EDDP-牛血清白蛋白復合物的檢測線和包被有羊抗鼠IgG的質控線。本發(fā)明的EDDP膠體金檢測試劑盒，具有具有特異性強、靈敏度高、簡單快速、易于操作、結果容易判讀，無需附加儀器設備等優(yōu)點。
文檔編號G01N33/577GK102590520SQ201210045429
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月27日 優(yōu)先權日2012年2月27日
發(fā)明者張國華 申請人:上海凱創(chuàng)生物技術有限公司